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1 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE MEDICINA HOSPITAL GENERAL DE MEXICO DR. EDUARDO LICEAGA DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO MEDIDAS NORMALES DEL ESPESOR DE LA MEMBRANA BASAL GLOMERULAR EN POBLACIÓN MEXICANA NO NEFROPATA. T E S I S PARA OBTENER EL GRADO DE ESPECIALISTA EN ANATOMIA PATOLÓGICA PRESENTA: DRA. ERIKA BLANCAS GARCIA MARZO 2015 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. 2 CONTENIDO I Resumen 3 II Introducción 5 III Metodología 11 IV Resultados 15 V Discusión 17 VI Conclusiones 18 VII Bibliografía 33 3 Resumen Dentro de la gran variedad de enfermedades renales existentes, aquellas que afectan la ultra estructura de los glomérulos y específicamente de sus membranas basales glomerulares son numerosas. La gran mayoría de estas son de naturaleza genética y afectan a la población infantil o a adultos jóvenes; algunas de este grupo que afectan con mayor frecuencia a la población mexicana son: glomeruroesclerosis focal y segmentaria secundaria, síndrome de Alport, hematúria benigna recurrente, enfermedad de membranas basales delgadas y síndrome nefrótico congénito. Para llegar al correcto diagnóstico de estas nefropatías, es necesario el apoyo con métodos de diagnóstico como microscopia de luz, de inmunofluorescencia directa y microscopía electrónica. Esta última es indispensable pues es preciso conocer el valor del espesor de las membranas basales glomerulares así como si existen otros cambios morfométricos en la ultraestructura. Para diagnosticar adecuadamente este tipo de nefropatías, se toman mediciones del espesor de la membrana basal glomerular con ayuda del microscopio electrónico de transmisión las cuales son comparadas posteriormente con valores estandarizados obtenidos de publicaciones extranjeras que basaron sus estudios en poblaciones sajonas o no latinas. En México los valores de referencia más utilizados son de tablas comparativas publicadas por la literatura anglo sanjona las cuales no tienen precisamente los mismos que la 4 población latina o mexicana. La carencia de una base de datos sustentada en población mexicana, es el impulso para realizar este estudio. El principal objetivo general del presente trabajo es conocer el valor numérico del espesor de la MBG normal de la población mexicana. Se utilizará un método de estudio (analisis) descriptivo en el que la muestra poblacional será de origen y nacionalidad mexicana. Las muestras se obtendrán de casos autopsias realizadas en el Hospital General de México durante el periodo de marzo 2013 a febrero 2014. Cada caso será sometido a un proceso de selección con la finalidad de obtener grupos de muestras poblacionales representativos de los diferentes grupos de edad y de ambos géneros. En cada una de las muestras se realizaran mediciones del espesor de las membranas basales glomerulares en varias asas capilares para promediar y estandarizar los valores de acuerdo a grupos de edad y género. Los datos podrán ser utilizados como rangos referenciales de diferentes grupos etarios de y de ambos géneros de la población mexicana con nefropatías que afecten la MBG y así mismo, servirá como apoyo para futuros proyectos de investigación. PALABRAS CLAVE Membrana Basal Glomerular; México; medición normal. 5 II INTRODUCCIÓN Antecedentes. En los últimos veinte años las estadísticas epidemiológicas de México muestran que las enfermedades renales se encuentran dentro de los tres primeros lugares de morbilidad generalizada y en el décimo en cuanto a mortalidad (16)(17)(18)(19). Debe tomarse en cuenta que en nuestro país, la principal causa de insuficiencia renal es la diabetes mellitus; esta y sus comorbilidades, es considerada como la primer causa de mortalidad en mujeres, con un porcentaje 13.4% y la segunda en hombres con 8.2% (5). Los tratamientos médicos que generan costos monetarios más elevados, son recibidos por aquellos pacientes que se encuentran hospitalizados debido a complicaciones en la microvasculatura, como es el caso del daño glomerular por nefropatía diabética (3). Del 20 al 40% de estos pacientes progresan a nefropatía crónica y de estos, un 20% progresaran a insuficiencia renal con necesidad de tratamiento sustitutivo (4). La posibilidad de desarrollar una nefropatía, que pueda o no llegar a etapas terminales, se debe a la integración de factores genéticos biológicos y socioculturales (8). La insuficiencia renal en etapa terminal, es un ejemplo claro de las disparidades raciales y étnicas en la salud (8). Se ha comprobado que en la población mexicana 6 y afroamericana, se tienen las tasas más altas de esta entidad, en comparación con otros grupos raciales como en la población alemana. Las discrepancias en el tema, ha conducido a investigar el posible involucro de mutaciones genéticas así como las afecciones secundarias a estas. Hasta el momento se conocen pocos cambios genéticos relacionados directamente con diversas formas de nefropatías y con diabetes mellitus. Se ha concluido poco acerca del tema, pero la detección del involucro de varios loci en 3q, 10q y 18q (11) y de genes de importancia etiopatogénica como COL4A3 o COL4A4, es aceptada. Existes variables demográficas como el género y la edad que son relacionadas estrechamente con la presencia de nefropatías. En la edad adulta se presenta una disminución fisiológica del número de nefronas. Esta es inversamente proporcional a la progresión de la edad lo que origina un decremento en la tasa de filtración glomerular y por lo tanto en la función renal. Este fenómeno se presenta mayormente en población de origen africano seguido de la población de origen mexicano y por último en blancos (13). Aun no existe una clara y completa explicación de los factores implicados para este fenómeno (8). Sin embargo se conoce que la Diabetes Mellitus y en especial la Hipertensión Arterial Sistémica, tienen mayor prevalencia en estas poblaciones. En México también se considera a la pobreza y al 7 bajo nivel educativo como un factor de riesgo para la enfermedad renal y patologías asociadas (8)(9)(10). Un estudio con roedores se señaló que los machos son más susceptibles a glomeruloesclerosis que las hembras, esto se atribuye al efecto androgénico en los especímenes afectados. En humanos es contradictorio. Se ha visto que en el género masculino existe una peor progresión hacia la enfermedad renal terminal, así como una mayor incidencia del número de fallecimientos por nefropatía (13). En la población infantil se ha observado una mayor probabilidad de desarrollar una enfermedad renal cuando existen antecedentes familiares de esta como es el caso de la enfermedad de Alport, con forma de herencia ligada al cromosoma X la cual evoluciona a insuficiencia renal terminal. Otro ejemplo es la enfermedad por membranas basales delgadas o también llamada hematuria familiar benigna, que está considerada como la nefropatía hereditaria más frecuente, su forma de herencia es autosómica dominante y afortunadamente no suele estar asociada a la insuficiencia renal terminal. La glomeruloesclerosis ha llegado a ser un tema importante por su alta incidencia en la población infantil; se correlaciona con bajo peso alnacer (menos de 2 500gr) y con disminución en el número y tamaño de las nefronas 8 lo cual está influenciado por factores maternos como tabaquismo, desnutrición y es frecuente en países en vías de desarrollo (13)(14). En los países de Centro y Sudamérica las enfermedades renales primarias más frecuentes que alteran la MBG en orden de frecuencia son: glomeruloesclerosis focal y segmentaria (5.6%), glomerulonefritis proliferativa mesangial no IgA (5.6%), glomerulonefritis pos infecciosa que representa el 10.7% de glomerulopatías primarias y la nefritis lúpica corresponde al 17.8% de todos los casos. En pacientes adultos el orden de frecuencia es: glomeruloesclerosis focal y segmentaria, glomérulo esclerosis proliferativa mesangial no IgA, glomerulonefritis mesangial, glomerulonefritis extracapilar y por último glomerulonefritis mesangial endocapilar difusa. De la misma manera que en la población afroamericana, en México la glomeruloesclerosis focal y segmentaria es la glomerulopatía más frecuente (14). 9 Planteamiento del problema. En la actualidad, los valores de medición del espesor de la membrana basal glomerular tomados como rango de normalidad, están basados en estudios realizados con población sajona. Sin embargo estas mediciones no necesariamente tienen que coincidir con las de la población mexicana o no latina. Se conocen factores que determinan las variaciones entre mediciones como la edad, género, etnia, patologías perinatales e incluso artefactos de fijación. (1)(2) Por su dificultad y rango de variabilidad, hasta el momento no hay valores numéricos estandarizados que definan el espesor normal de la MBG. Según los autores, se estiman rangos que oscilan entre 150 nm al nacimiento; 200 nm hasta el primer año de vida; 208 a 245 del primero al sexto año de edad; de 244 a 307 nm de 6 a 11 años y posteriormente en la mayoría de literatura es considerado como medición de la edad adulta. En hombres adultos los valores normales del espesor de la membrana basal glomerular se estiman entre 320 +- 50nm y en mujeres de 370+- 50 nm. La OMS estima 250nm para adultos y 180 nm para niño entre 1 y 11 años. 10 Existe una carencia de información documentada que especifique los rangos numéricos del espesor de la MBG en la población mexicana, lo cual es el impulso principal para realizar este estudio. Objetivos El principal objetivo de este estudio es conocer las cifras de los valores numéricos de normalidad del espesor de la MBG en la población mexicana sin compromiso de la función renal y de acuerdo a grupos de edad y género. Los datos obtenidos podrán ser tomados como valores numéricos de normalidad en población mexicana y como una herramienta fiable durante el proceso de elaboración de diagnósticos con mayor certeza. La difusión de este trabajo da pie a que sean tomados como fuente bibliográfica y como base de datos para futuros proyectos de investigación. a) hipótesis Debido a que este es in trabajo descriptivo no se plantea hipótesis 11 III METODOLOGIA Material y método Se trata de un estudio descriptivo, transversal. Los datos obtenidos fueron descritos en el momento de realizar cada medición. El universo de la muestra comprende de 40 casos, los cuales están distribuidos por género y grupos de edad de la siguiente manera: Cinco hombres y cinco mujeres de cero a doce meses cumplidos. Cinco mujeres y cinco hombres de trece meses a cinco años con once meses cumplidos. Cinco hombres y cinco mujeres de seis años a diez años con once meses cumplidos. Cinco hombres y cinco mujeres de once años en adelante. La muestra de estudio se seleccionó en base a los criterios de exclusión, eliminación e inclusión de todos los casos de autopsia realizadas en el Hospital General de México durante el periodo comprendido de marzo de 2013 a febrero de 2014. La primera etapa del estudio se desarrolló en el departamento de postmortem de la unidad de patología del Hospital General de México. El expediente clínico de cada caso de autopsia fue valorado en base a los criterios de selección, una vez que el caso era seleccionado y con previa firma de consentimiento informado por el o los familiares 12 responsables del cuerpo se realizaba el estudio de autopsia bajo la técnica por técnica habitualmente realizada en la unidad de patología (20). Se descartaban aquellos riñones que contaran con alteraciones macroscópicas visibles. En aquellos riñones con rangos de normalidad en cuanto a su morfología macroscópica se tomaba un fragmento de corteza renal sin cápsula de Bowman en forma de cuña con medidas de 1x1x1cm y preferentemente de riñón izquierdo, el cual inmediatamente debía de ser fragmentado para obtener una muestra de 1x1x1mm el cual debía ser sumergido en fijador buffer fosfatado de glutaraldehido al 3% y conservado en refrigeración a una temperatura de 4 a 8 grados centígrados; en un tiempo no mayor a 24 hrs el fragmento sería procesado conforme al método utilizado para microscopia electrónica(21). En el momento de obtener cortes histológicos visibles en microscopía de luz se evaluaba la posibilidad de continuar con el proceso de corte para su visualización por el método de microscopía electrónica de transmisión. Posteriormente una vez que se obtenían las imágenes de microscopia electrónica se realizaban las mediciones del espesor de la MBG en 3 o hasta 5 fragmentos de asas glomerulares lineales y con características de homogeneidad tomadas de un solo glomérulo. Los valores obtenidos fueron registrados en una base de datos generales (ver base de datos generales), y posteriormente graficados de acuerdo a grupos de género y edad. Finalmente la base de datos y características de las gráficas fueron analizadas. 13 La manera de resumir su valor fue cuantitativa, la unidad utilizada fue continua y expresada en nanómetros. CRITERIOS DE INCLUSION A) Hombres y mujeres en quienes la causa de muerte sean todas aquellas entidades patológicas que no comprenden o involucren el adecuado funcionameinto glomerular. B) Hombres y mujeres con nacionalidad mexicana. CRITERIOS DE EXCLUSIÓN A) Hombres y mujeres con diagnóstico de enfermedades que propicien alteraciones en la morfometría de glomerular. B) Hombres y mujeres ci toxicomanías o antecedentes perinatales de toxicomanías en los menores de 6 años. C) Hombres y mujeres que no tengan historia clínica asentada en el expediente clínico o que no sea conocida por sus familiares. D) Antecedentes de bajo peso al nacer o prematuréz. E) Hombres y mujeres con diagnóstico de alguna cromosomopatía o dismorfismo. F) Hombres y mujeres con ascendencia extranjera directa. 14 CRITERIOS DE ELIMINACION A) Diagnóstico de entidades patológicas que se caracterizan por alteraciones en el espesor de la membrana basal glomerular. Hombres y mujeres de nacionalidad extranjera Recolección de datos. Se vaciaran los datos de las hojas de recolección de datos en una base de datos y se realizara y graficará el análisis estadístico.(ver tablas). Definición de variables Sexo: cualitativa Edad: cualitativa Medida del espesor de la membrana basal glomerular: cuantitativa Análisis estadístico Se utilizaron variables de tendencia central para las variables cuantitativas y proporcionales para las cualitativas. 15 IV RESULTADOS Durante el periodo de abril de 2013 a febrero de 2014, se realizaron 451 autopsias en el Hospital General de México. En todos los casos se evaluó el expediente clínico y se aplicaron criterios de selección (cuadro1), con la finalidad de obtener el universo de la muestra, el cual se compone de 40 casos distribuidos como se describe en el cuadro 2. Durante el procedimiento de autopsia de los casos seleccionados, se tomó un fragmento de tejido de corteza renal, de un milímetro cuadrado, para ser fijado posteriormente en 3 ml de glutaraldehidofosfatado al 3% por 12 hrs y a una temperatura de 4 a 8 grados centígrados. Los fragmentos de tejido fueron procesados para su revisión mediante microscopía electrónica de transmisión con el equipo JEOL JEM-1011 con software de análisis de imagen. En cada caso se eligió un glomérulo y de este, se tomaron mediciones en cuando menos siete asas de capilares directamente del espesor de la MBG y en zonas paramesangiales más rectas. Se fotografió cada medición y los negativos fueron obtenidos en una magnificación de 20,000X. Todas las imágenes diagnósticas de microscopía electrónica fueron evaluadas por un nefropatólogo 16 V DISCUSIÓN Desde hace décadas, se han realizado numerosos estudios que cuantifiquen el espesor de la MBG de población infantil y adulta [1,2,3-4]. Sin embargo, estos estudios no son basados en población latina. Se han encontrado diferencias en el espesor de la MBG, refiriéndose principalmente incrementos graduales en los primeros 10 años de la infancia [5] para finalmente permanecer estable durante toda la vida con un espesor promedio para hombres y mujeres de 284 nm [6]. Nuestros resultados sugieren diferencias del espesor de la MBG entre hombre y mujeres. El crecimiento del espesor de la MBG es mas notorios en el grupo de 5 a los 10 años de edad. El incremento es regular y progresivo en varones, en las mujeres se observa un incremento regularmente abrupto entre los 5 y 10 años de edad para después parearse con el grupo de varones después de los 11 años de edad En todos los grupos de edad se pueden observar valores que se incrementan desde 190 a 367 en varones y de 198 a 376 en mujeres. Los cambios morfometricos continúan activos hasta el rango de edad de 10 a 15 años y posteriormente se estabilizan e en ambos géneros alrededor de 359 +/- 59nm en hombres y 346 +/-52nm en mujeres. 17 En comparación con otros grupos poblacionales estudiados, nuestros resultados generales presentan mínimas diferencias, hay rangos numéricos del espesor de la MBG levemente mayores en en nuestra población, sin embargo estas diferencias no son perceptibles en todos los grupos de edad y si mayormente en población femenina. Todas las muestras incluidas en este estudio son de personas de origen mexicano, sin nefropatías diagnosticadas y fueron tomadas durante estudios de autópsias. 230 235 240 245 250 255 260 265 0 100 200 300 400 500 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Gráfica 1. Evolución del espesor de la MBG en diferentes grupos etários y en ambos géneros. Media general Mediana Varones Mujeres Desviacion estandar 18 VI CONCLUSION De acuerdo a los valores obtenidos en nuestro estudio, podemos concluir que existen diferencias raciales mínimas en el espesor de la MBG, estas son más evidentes en la población femenina. Las mujeres mexicanas superan las medidas del espesor de sus MBG en comparación con las medidas observadas en mujeres de origen caucásico u oriental. En nuestro grupo de estudio se observó un aumento progresivo en el espesor de la membrana basal glomerular que se correlaciona con la edad. El crecimiento del espesor es más evidente a partir de los 5 años hasta los 10 años y se presenta en ambos géneros. En esta etapa de crecimiento, los valores resultantes de las mediciones de la población femenina superan levemente a los de la población masculina Los valores se equilibran después de los 11 años de edad e incrementan su pareamiento progresivamente sin presentar nuevamente alteraciones en su espesor. Los resultados obtenidos por este estudio cimentan una base de datos de normalidad del espesor de la membrana basal glomerular de población mexicana que podrá ser de utilidad en futuros proyectos de investigación en torno a la materia. Las mediciones podrán ser utilizadas como herramienta diagnóstica en nefropatías que incluyan alteraciones en el espesor de la membrana basal glomerular 19 BASE DE DATOS GENERALES Caso 1: niño de 1 mes Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 134 218 120 217 131 182 173 129 173 165 218 170 102 175 137 120 182 155 169 153 167 123 162 186 125 145 145 |63 196 164 176 131 121 168 137 Caso2: niño de 3 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 152 144 122 314 214 123 136 142 321 187 145 122 191 189 199 148 142 121 187 162 100 122 212 235 155 145 132 145 176 145 132 154 134 213 153 Caso: niño de 6 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 208 199 234 235 253 251 245 284 255 212 234 191 251 227 221 263 276 255 259 235 240 252 230 186 226 190 262 221 292 265 224 213 234 203 198 20 Caso10: niño de 9 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 154 177 211 208 207 200 255 164 209 240 282 162 186 178 161 340 224 160 150 205 160 321 224 203 214 127 166 220 196 203 201 167 123 196 189 224 178 199 198 196 211 219 251 198 187 179 201 169 203 Caso11: niño de 12 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 135 189 156 180 218 220 187 193 150 227 206 190 160 188 232 176 201 191 216 218 188 215 184 227 188 150 210 176 190 186 176 198 206 230 211 Caso: 13 hombre de 18 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 180 254 281 226 170 220 222 265 253 189 190 287 255 120 203 210 254 219 187 188 198 236 265 170 195 234 251 190 188 205 210 308 199 170 211 21 Caso 12: niño de 2 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 288 215 198 198 170 219 197 217 264 189 250 312 246 231 197 276 231 311 272 214 243 204 314 219 289 199 186 294 304 218 190 193 268 310 229 Caso13 niño de 3 Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 230 108 231 230 301 352 202 221 214 276 273 218 252 222 221 245 224 250 265 260 276 256 253 231 216 272 224 199 265 221 269 289 189 227 256 Cas14 niño de 4 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 310 258 240 218 197 287 287 240 229 219 303 265 222 254 229 316 278 213 235 276 287 280 201 256 254 301 224 191 250 222 311 286 188 230 289 22 Caso 15 niño de 5 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 298 289 289 320 298 301 278 270 336 299 333 307 310 318 297 342 317 319 330 319 310 319 310 322 386 311 285 333 387 368 316 286 380 310 380 Caso 16 niño de 6 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 330 319 311 367 289 329 345 321 322 311 369 252 238 279 234 365 299 345 376 240 319 311 270 314 400 290 289 312 356 322 298 272 Caso 17nino de 7 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 267 134 178 275 176 250 234 213 270 254 234 265 170 256 189 267 254 265 256 231 254 167 214 245 265 245 254 256 236 247 245 222 265 270 249 23 Caso 18 niño d8 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 276 234 287 216 127 234 289 214 260 214 213 176 221 289 213 254 216 178 210 189 167 221 219 267 254 290 213 216 278 211 185 256 279 260 215 Caso 14: niño de 9 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 290 178 287 186 232 198 237 279 267 260 213 221 267 218 267 289 256 216 242 276 298 213 196 217 250 289 289 260 267 216 264 238 193 219 286 260 299 Caso 15: niño 10 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 310 290 219 220 214 265 289 287 321 331 198 318 298 331 276 199 278 296 217 305 329 317 318 329 287 376 307 222 264 251 300 176 210 354 251 280 293 231 199 321 321 210 24 Caso 16: niño de 11 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 317 315 316 310 298 187 217 317 287 320 298 226 243 217 240 177 215 206 254 320 350 345 287 310 316 300 284 256 278 300 278 278 194 213 217 Caso 17: hombre de 22 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 380 278 310 277 304 270 376 321 302 311 289 409 316 341 322 278 312 271 220 310 350 341 324 360 315 356 324 326 358 367 278 315 347 457 402 Caso 18: hombre de 32 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 365 450 328 399 410 431 410 398 376 411 395 325 389 389 431 392 389 412 376 413 380 387 411 377 278 368 419 380 402 299 320 363 396 390 319 25 Caso 19: hombre de 42 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 396 390 389 402 403 375 408 367 431 390 365 433 377 413 392 322 421 358 416 390 404 423 361 387 410 356 398 379 398 422 403 416 401 385 429 Caso 20: hombre de 60años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 425 493 344 431 458 514 506 343 422 503 383 438 506 367 451 333 461 478 303 434 356 501 436 342 453 364 461 410 390 423 365 389 397 421 467 Caso 21 mujer de 1 mes Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 152 146 197 133 261 180 168 133 143 161 158 208 164 186 137 187 188 183 142 150 212 156 159 151 167 229 134 153 172 134 167 180 156 120 142 26 Caso 21 mujer de 3 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 165 126 147 168 197 214 167 241 133 189 163 146 368 279 269 285 175 184 146 137 152 210 211 241 231 213 211 205 206 211 216 261 275 216 177 158 177 Caso 22 mujer de 6 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 178 187 187 190 186 128 136 230 216 178 188 172 217 202 170 291 219 200 217 163 204 144 218 216 217 216 215 217 184 200 218 214 188 199 218 266 155 Caso 24 mujer de 9 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 253 311 216 256 213 221 321 216 169 219 246 214 283 187 221 256 245 236 274 243 261 215 216 253 276 276 250 216 277 216 263 318 279 259 200 27 Caso 25 mujer de12 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 187 241 218 185 165 271 231 186 179 187 218 221 215 167 187 286 217 215 156 187 217 265 219 210 176 221 211 217 219 198 197 288 286 189 211 Caso26 mujer de 18 meses Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 278 265 189 273 250 189 189 256 254 278 145 276 235 276 245 187 221 256 276 178 200 218 254 250 187 217 226 276 218 218 218 216 176 218 217 Caso27 niña de 2 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 165 165 159 187 176 210 176 219 217 188 210 199 218 222 189 198 217 227 218 184 176 179 178 199 165 221 221 187 165 210 176 167 156 178 188 28 Caso 28 niña de 3 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 210 176 165 165 154 220 176 165 123 227 178 187 132 151 176 165 267 166 154 132 112 221 156 201 152 200 167 218 156 165 176 187 165 216 207 176 116 154 210 230 210 205 Caso 29:vniña DE 4 AÑOS Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 210 187 165 165 134 200 218 270 205 167 178 217 230 219 140 178 204 214 167 189 157 217 230 189 208 213 189 156 196 190 200 230 178 206 230 CASO 30: NIÑA DE 5 AÑOS Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 207 187 205 227 243 162 193 198 166 232 167 161 234 167 210 145 174 167 230 235 198 189 215 210 234 217 176 215 178 265 204 200 177 190 149 29 CASO 31: NIÑA DE 6 AÑOS Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 210 189 210 176 201 217 179 219 189 200 218 270 167 217 241 204 203 187 190 217 205 216 200 178 190 189 221 218 218 216 176 231 215 213 219 CASO 32 niña de 7 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 175 301 212 156 210 190 352 132 114 221 160 187 142 137 145 145 125 208 122 123 204 180 145 154 144 215 130 132 |89 156 211 209 156 230 134 CASO 33: NIÑA DE 8 AÑOS Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 321 317 327 312 227 276 289 287 267 312 345 310 312 244 324 343 289 304 315 315 313 311 325 356 288 316 322 312 327 313 299 300 311 214 317 319 292 274 295 298 318 311 30 Caso 34: NIÑA DE 9 AÑOS Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 266 287 327 263 299 310 311 376 288 317 316 306 315 311 310 296 321 319 318 310 371 322 315 364 278 287 266 264 286 211 235 211 276 290 281 Caso 35 NIÑA DE 10 AÑOS Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 318 317 350 270 260 219 288 288 210 310 289 179 318 290 179 320 353 365 278 319 363 287 257 318 322 345 368 365 373 320 389 329 365 378 351 Caso 36 NIÑA DE 11 AÑOS Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 363 312 346 311 217 289 299 310 328 315 325 386 234 216 318 388 235 269 276 286 289 286 218 275 366 345 319 244 248 278 376 286 217 354 277 318 365 31 Caso 37 mujer de 22 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 350 371 342 287 314 356 325 378 322 320 325 342 333 345 312 354 289 365 376 278 364 277 365 312 370 346 376 344 344 380 364 322 355 402 310 Caso 38 mujer de 32 años Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 376 378 329 379 328 289 376 388 355 277 378 308 375 386 375 288 373 368 377 317 276 398 387 317 369 376 318 386 298 396 329 319 366 276 305 Caso 39 mujer de 42 Asa1 Asa2 Asa3 Asa4 Asa5 Asa6 Asa7 380 384 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