TEMA 12

Vista previa del material en texto

TEMA 12: OPTICA Y MICROSCOPIA 
PARTES DEL MICROSCOPIO 
 
Parte mecánica: Corresponde a todos los elementos que sirven para sujetar la parte óptica y el 
microscopio en sí. 
 
Base o pie. También llamado soporte del microscopio está destinado a darle estabilidad al 
microscopio. Puede tener distintas formas, en Y, U, V, rectangular, circular, etc. 
 
Columna o pilar. Es un vástago metálico que se encuentra entre la base y el bastidor. 
Asa o limbo. Es la parte del microscopio que soporta el dispositivo porta ocular, el revólver 
porta objetivos, la platina y elementos de la subplatina. Sirve también para sujetar en el 
traslado del aparato. 
 
Platina. Es la pequeña mesa del microscopio, es una superficie plana, de color negro mate para 
evitar la reflexión de la luz; en ella se coloca el portaobjetos que contiene la muestra. En la 
platina se encuentra el guía portaobjetos y la pinza de sujeción. 
 
Subplatina. Es el espacio que existe por debajo de la platina, donde se encuentran la porta 
condensador el diafragma y aro porta filtros. 
 
Tubo. Llamado dispositivo porta ocular, es un tubo simple (de color negro mate en su interior), 
de una dimensión de l6 a l7 mm. Los oculares se pueden desplazar de acuerdo a la distancia 
que exista entre las dos pupilas (regulador de la distancia interpupilar). 
 
Además, uno de los oculares es móvil sobre su eje para corregir las diferencias de convergencia 
entre los dos ojos (corrector de dioptrías). 
 
Revólver porta objetivos. Consta de dos casquetes superpuestos de tal forma que el superior 
está fijo al tubo y la inferior gira sobre su propio eje. Se ensamblan desde tres hasta seis 
objetivos. 
 
Sistema de enfoque. Está constituido por dos tornillos, micrométrico que sirve para el enfoque 
grueso o grosero y el micrométrico para ajuste lento, fino y de precisión. 
 
Carro de movimiento. Es un dispositivo que nos permite desplazar con gran precisión el 
portaobjetos en las direcciones X e Y, tiene una escala llamada Nonius o Vernier. 
 
Parte óptica: Llamada también parte noble. Está destinada a lograr una imagen aumentada del 
objeto. Consta de tres partes. Objetivos, Oculares y Sistema de Iluminación. 
 
Objetivos. Sistema de lentes dispuestos en un cilindro hueco, que estando muy cerca del 
objeto, toma la luz que viene de éste y forma la imagen primaria que debe terminar de ampliar 
el ocular. 
 
Objetivo a seco. Se denomina así cuando entre la lente frontal de éste y el preparado, se 
interpone el aire, puede ser de 4x, 6x, 10x y 40x. Los aumentos de 6x y de 4x son 
prácticamente una lupa llamados de muy débil aumento, el de 10x llamado de débil aumento, 
débil a seco y el de 40x se denomina fuerte a seco. 
 
Objetivo a inmersión. Es aquel en el cual se interpone un líquido transparente (aceite de 
inmersión) con un índice de refracción similar al del vidrio, gracias a este líquido los rayos 
luminosos no sufren reflexión, dando una luminosidad mayor y mejor poder resolutivo. Es el 
objetivo más largo, el de mayor aumento, tiene la menor distancia focal y la mayor abertura 
numérica. 
La distancia a la que queda el objetivo con relación a la muestra es muy pequeña, dando lugar 
a accidentes por choque o golpe al enfocar, para evitar ésta, actualmente se diseñan con un 
sistema de muelle o resorte. 
 
Oculares. Se denominan así porque están en relación con el ojo del observador. Están 
constituidos por dos lentes simples o compuestos montados en los dos extremos del tubo. La 
lente inferior llamada colectora, aplana la imagen y la superior la agranda. 
 
Sistema de iluminación. Las partes de un sistema moderno de iluminación son: 
 
Fuente de luz. - Generalmente es una lámpara incandescente que puede tener de 6 a 12 voltios 
o ser directos para 110 ó 220 V. La mayoría de las lámparas son de tungsteno o de halógeno; 
otras lámparas son las de mercurio y las de xenón, estas requieren de una buena ventilación 
por lo tanto llevan un sistema anexo al microscopio. 
 
Espejo. - Presenta dos caras, una plana y la otra cóncava esta última concentra mayor cantidad 
de rayos luminosos. 
 
Colector. - Es un lente que se encuentra inmediatamente después de la lámpara. Su función es 
colectar los rayos luminosos que luego pasan al condensador, esto debido a que los filamentos 
de la lámpara despiden rayos (fotones) en todas direcciones. En algunos casos sobre la fuente 
de luz, se encuentra un diafragma llamado de campo o de base, sirve para regular la entrada 
de rayos luminosos al condensador. Además, en esta parte se encuentra también el vidrio 
dispersador (vidrio esmerilado). 
 
Filtros. - Son láminas de vidrio de diferentes colores que se emplean para dar color a la luz de 
acuerdo a las necesidades. Se coloca por debajo del condensador. 
 
Diafragma. - Pueden ser de disco (disco con orificios de distinto diámetro), también es llamado 
anular, el de diafragma iris que presenta varias laminillas sobrepuestas y deslizables, de 
manera que conforman un orificio central que puede ser ampliada a gusto. El diafragma sirve 
para eliminar rayos periféricos y de esta forma producir un contraste en la imagen, dando 
contornos muy definidos. 
 
Condensador. - Inicialmente llamado “concentrador” en forma apropiada. Está constituido por 
dos lentes, un superior plano convexa (lente frontal) y una inferior biconvexa (lente colectríz). 
Su función es la de concentrar los rayos luminosos. 
FORMACIÓN DE IMÁGENES EN EL MICROSCOPIO ÓPTICO: 
 
Cuarto caso. Este caso se presenta en el lente frontal del objetivo, la imagen es real, invertida, 
de mayor tamaño y se halla más allá del centro de curvatura del otro lado de la lente. 
 
 
Sexto caso. Este caso se presenta en el ocular del microscopio, el objeto se encuentra entre el 
foco principal y el punto nodal. La imagen es virtual, derecha y de mayor tamaño, situada en el 
mismo lado de la lente, detrás del objeto. 
 
PODERES DEL MICROSCOPIO. 
 
Poder de resolución. Es la capacidad del microscopio de poder distinguir los más finos detalles. 
 
Poder de penetración. Llamado también poder de profundidad, es la capacidad de distinguir 
varios planos del preparado, sin variar el enfoque. Así a mayor aumento, menor poder de 
penetración y a menor aumento, mayor poder de penetración. 
 
Poder de definición. Es la capacidad del microscopio de formar imágenes claras, nítidas, de 
contornos definidos. 
 
 
DEFECTOS DEL MICROSCOPIO O ABERRACIONES. 
 
De esfericidad. Se produce porque los rayos luminosos que inciden sobre los bordes de la 
lente se desvían más que los centrales, dando así una imagen difusa. 
 
Cromática. Se produce porque los rayos luminosos de menor longitud de onda se refractan 
más que los rayos de mayor longitud, como consecuencia, se produce varias imágenes de 
bordes coloreados. 
 
Astigmatismo. Se produce por defecto en la curvatura de la lente. 
Curvatura de Campo. Es producida por la mala construcción de las lentes, hace que el objeto 
plano se vea curvo. 
 
OTROS MICROSCOPIOS DE IMPORTANCIA. 
 
Microscopio de campo oscuro. Llamado también ultramicroscopio, se denomina así por la 
forma de iluminación y su poder de resolución. Se observa la muestra en un fondo oscuro, 
teniendo mayor nitidez. Es un microscopio común donde la luz que viene directamente de la 
lámpara se tapa completamente con una superficie opaca situada en el condensador. 
 
Microscopio de contraste de fases. Se basa en el fenómeno de la interferencia, este 
microscopio presenta un diafragma anular que proyecta un cono luminoso que al pasar por la 
muestra origina dos haces de luz, uno que no sufre desvío y otro que al atravesar la muestra se 
refracta y se retrasa respecto al primero. En síntesis, es un microscopio común con algunas 
variantes. 
Microscopio de interferencia. Se basa en principios similares, pero tiene la ventaja de dar 
resultados cuantitativos. En verdad es un microscopio doble, se utilizan dos condensadores y 
dos objetivos, los rayos luminosos se juntan para formar una sola imagen.Microscopio de luz polarizada. Se emplea para determinar si los objetos son mono o 
birrefringentes. Es similar al microscopio corriente con la diferencia que posee dos prismas de 
Nicol. Uno situado debajo del condensador llamado prisma polarizador y otro situado por 
encima del objetivo llamado analizador. 
 
Microscopio de fluorescencia. Se basa en el fenómeno de la fluorescencia. Este microscopio 
presenta una fuente luminosa especial que emite rayos ultravioletas. Para utilizar este 
microscopio se tiñe la muestra con un tinte especialmente seleccionado, que presenta 
características fluorescentes. En este microscopio se utilizan para iluminar la muestra 
generalmente lámparas de mercurio de alta presión, las cuales trabajan por descarga eléctrica. 
En la ampolla que generalmente es de cuarzo se usa una substancia tal como el óxido de 
níquel, que sirve para filtrar todas las otras radiaciones que no sea la ultravioleta. Estas 
lámparas normalmente se calientan mucho y deben ser enfriadas por medio de un sistema a 
base de ventilador y usando incluso refrigeración. No se deben confundir estos microscopios 
con los llamados de luz ultravioleta, estos últimos producen la imagen usando directamente 
dicha luz. 
 
Microscopio estereoscópico. Forma imágenes estereoscópicas, presenta un efecto de tercera 
dimensión, es decir los objetos se ven en bulto ó levantado a distintos planos. El sistema de 
objetivos es especial y complejo, por lo general no rebasan de los 25x (aumentos). 
 
Microscopio de luz ultravioleta. Presenta muchos problemas de diseño e incluso riesgo para el 
operador (por la intensa radiación ultravioleta), por este motivo a caído en desuso. 
 
Microscopio de platina caliente. Es un microscopio común con una platina especial para 
graduar la temperatura. Tiene su aplicación en estudios especiales de laboratorio. 
 
Microscopio de caja caliente. La idea es la misma que la anterior, con la diferencia de que en 
éste se introduce todo el microscopio en una caja caliente de la cual sólo asoman los oculares. 
 
Microscopio electrónico. Desarrollado para lograr mayor poder de resolución. Actualmente se 
tiene de dos variedades: de transmisión convencional y de barrido, rastreador o scanning. 
 
Microscopio digitalizado. En este caso las imágenes se captan por una cámara de vídeo y se 
ven en un monitor de televisión de alta resolución. 
 
 
MANEJO DEL MICROSCOPIO. 
 
1. Colocamos el microscopio en un lugar sólido donde no haya vibraciones. 
1. Revisamos que todos los componentes de la estructura del aparato estén 
dispuestos y en perfecto estado. 
 
 
1. La posición descansada del cuerpo es requisito indispensable para el trabajo cómodo 
con el microscopio. En el caso de que el observador utilice lentes, debe quitar las 
conchas oculares (sí es que las tuviera). 
 
1. Sujetar el portaobjetos sobre la platina, con las dos pinzas o con la palanca del guía 
portaobjetos (uña de agarre). 
 
 
1. Dependiendo que tipo muestra se quiere observar, para la primera observación es 
conveniente usar el objetivo 4x ó 6x, se trata del objetivo panorámico, con la mayor 
distancia entre la lente frontal y el objeto (distancia libre de trabajo). 
 
1. A continuación, se seleccionará la iluminación correcta. Si su microscopio está 
equipado con un espejo, deberá usted mover éste hasta que la luz difusa del día, o de 
la lámpara de mesa, ilumine uniformemente el campo de la imagen. En el equipo con 
lámpara, la bombilla está pre-centrada quedando garantizada la óptima iluminación de 
todo el campo microscópico. 
 
1. Según la preparación que se esté observando, el condensador debe ubicarse 
correctamente, abra usted el diafragma de apertura. En muchos casos cuando no hay 
buena iluminación, es necesario centrar el condensador para que todos los rayos 
luminosos lleguen en forma correcta. 
 
1. En el caso de que el microscopio sea binocular, ajuste el tubo a su distancia 
interpupilar, empleando ambas manos, esto se debe realizar mientras observa la 
preparación, desplazando ambos tubos porta oculares, hasta que se aprecie solamente 
una imagen. 
 
1. Se busca el enfoque de la imagen, girando el mando de acomodación (tornillo macro 
métrico), luego buscar o ajustar la nitidez, con el tornillo micrométrico. 
 
1. Para observar con el objetivo (100x) o de inmersión; se debe colocar una gota de 
aceite de inmersión en la preparación para que luego haga contacto con la lente 
frontal del objetivo. Es bueno recordar que el enfoque se debe realizar observando 
lateralmente la preparación, hasta que el aceite haga contacto con el objetivo, recién 
ajuste la imagen con el tornillo micrométrico y observando por el ocular. Nunca 
presionar hasta el tope del resorte de seguridad, puede causar la rotura del 
portaobjetos y dañar la lente frontal del objetivo o la del condensador, este último 
está casi al ras del orificio de la platina. 
 
1. Una vez terminado el trabajo, en lo posible el microscopio debe quedar en el mismo 
lugar, limpiar el aceite sobrante del objetivo, desenchufar y cubrir con la funda de 
protección. 
CUIDADO Y CONSERVACION DE LOS MICROSCOPIOS. 
 
Cuidados: De los elementos que componen el microscopio, los sistemas de lentes son las 
partes que más exigen de cuidados especiales. Los componentes mecánicos y de iluminación 
pueden ser remplazados y ajustados sin mucho esfuerzo. En cambio, el deterioro de un 
componente óptico es un hecho lamentable cuyo costo es considerable y no puede 
compararse al de los otros tipos de fallas. 
 
Consecuencia de lo anterior es el hecho de que debemos manejar los medios ópticos 
(oculares, objetivos, condensadores, colectores y prismas) con la mayor precaución posible en 
el momento de su uso y limpieza. 
 
Conservación del microscopio: Los objetivos de inmersión se deben limpiar siempre después 
de usar, de quedar aceite en la lente, éste puede secarse y ocasionar un daño mayor. 
 
Extraiga el objetivo y apoye la cara bañada en aceite en un papel especial para limpieza de 
lentes, luego tomar un trozo de gamuza humedecido en gasolina y pase sobre la lente, si el 
aceite ya está seco, deberá seguir estas instrucciones: humedezca un trozo de tela de lino o 
gamuza fina con xilól o tolueno y páselo en las zonas afectadas hasta eliminar totalmente el 
aceite. 
 
En el caso de los objetivos secos, la conservación se realiza de la siguiente manera: 
 
• Se quita el objetivo, y con una pera de goma se va eyectando aire para quitar el polvo. 
 
• En el caso de los oculares, la superficie exterior es la que en general debe limpiarse, 
tanto los párpados como nuestras pestañas tiene grasa, por lo tanto, las lentes 
oculares pueden ensuciarse; en este caso limpiar con una gamuza seca. 
 
Mantener bien lubricada la parte mecánica del microscopio, con un lubricante adecuado. 
 
Realizar la limpieza superficial diariamente, quitando todo tipo de suciedad que pueda 
adherirse al equipo. Mantener el microscopio en un lugar seguro y lejos de los agentes 
corrosivos y de la humedad. Nunca limpiar con alcohol las partes esmaltadas (deteriora el 
esmalte). 
 
No tocar con los dedos las partes internas de los oculares, objetivos ni del condensador. 
 
No dejar demasiado tiempo con gasolina, xilól o tolueno el objetivo de inmersión. 
SINOPTICO 
OPTICA 
 
Definición. 
 
Lentes. 
 
Tipos de lentes. 
 
Convergentes. 
 
Divergentes: 
Espejo. 
 
MICROSCOPIA. 
 
Definición. 
 
Microscopio simple. 
 
Microscopio compuesto. 
 
PARTES DEL MICROSCOPIO 
 
FORMACIÓN DE IMÁGENES EN EL MICROSCOPIO ÓPTICO DEFECTOS DEL MICROSCOPIO O 
ABERRACIONES. OTROS MICROSCOPIOS DE IMPORTANCIA. 
Microscopio de campo oscuro 
 
Microscopio de contraste de fases 
 
Microscopio de interferencia. 
 
Microscopio de luz polarizada. 
 
Microscopio de fluorescencia. 
 
Microscopio estereoscópico. 
 
Microscopio de luz ultravioleta. 
 
Microscopio de platina caliente. 
 
Microscopio de caja caliente. 
 
 Microscopio electrónico. 
 
Microscopiodigitalizado.