4 -MICROSCOPÍA

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LABORATORIO BIOLOGÍA I 
Práctica 4 
MICROSCOPÍA 
(Elaborado por L. Spencer, V. Sandoya y E. Zacarias) 
 
1. INTRODUCCIÓN 
El microscopio es un instrumento de laboratorio que sirve para observar y 
amplificar objetos que son muy pequeños e imperceptibles a simple vista. Los primeros 
registros de instrumentos para amplificar imágenes datan desde hace 1000 AD, con el uso 
de esferas de vidrio. Sin embargo, fue en 1590 cuando Zacharias Janssen y su hijo Hans 
Janssen experimentaron con múltiples lentes colocados en un tubo, observando que los 
objetos vistos frente al tubo aparecían muy ampliados, creando de esta forma al precursor 
del microscopio compuesto. 
En 1665, el físico inglés Robert Hooke creó el primer microscopio compuesto, 
el cual utilizaba dos sistemas de lentes, oculares y objetivos, y gracias a este sistema pudo 
observar “poros” o “celdas” en astillas de corcho. En 1674, Anton Van Leeuwenhoek 
construyó un microscopio simple con solamente un lente para examinar muestras de 
sangre, levaduras, insectos y otros objetos pequeños; inventó nuevos métodos para 
mejorar las lentes del microscopio y fue la primera persona en describir bacterias. 
En el siglo XVIII estos instrumentos mejoraron gracias a 
las innovaciones técnicas, y la microscopia se volvió más popular 
entre los científicos. Se combinaron lentes para reducir el efecto 
cromático que resulta de la refracción de la luz. Es así que en 1830, 
Joseph Jackson Lister inventó un microscopio que redujo las 
aberraciones esféricas o el efecto cromático, mostrando que varias 
lentes delgadas usadas juntas a ciertas distancias mejoraban la 
ampliación sin deformar la imagen. 
En 1872, Ernst Abbe escribió una fórmula matemática para 
permitir máxima resolución en los microscopios. 
Aunque no se tiene la certeza de quién realmente invento el microscopio, los 
aportes de varios modelos y modificaciones, que surgieron a través del tiempo, sirvieron 
para desarrollar el microscopio óptico compuesto actual, basado en un sistema de lentes 
y fuentes de iluminación que nos permite amplificar la imagen de objetos hasta 1000 veces 
su tamaño original. 
En la actualidad, además del microscopio óptico 
compuesto, existen otros tipos de microscopios. El microscopio 
electrónico (ME), creado por los científicos alemanes Ernst 
Ruska y Max Knoll, 1931, utiliza electrones en lugar de la luz para 
ver un objeto. Los electrones son acelerados en el vacío hasta que 
su longitud de onda es extremadamente más corta que la de los 
fotones visibles. Tiene una resolución entre 1 mm y 1 nm, ideal 
para determinar estructuras a nivel molecular y atómico. 
 
Existen dos tipos de ME: el ME de transmisión, fue el primero en desarrollarse, 
obtiene imágenes mediante un haz de electrones dirigido hacia la muestra a través de un 
electroimán; y el ME de barrido, que obtiene imágenes topográficas en 3D mediante un 
haz de electrones que choca con un metal conductor que cubre la muestra (generalmente 
oro coloidal). 
Otro tipo de microscopio es el llamado estereoscópico o 
estereoscopio, útil para la observación de objetos muy pequeños 
a simple vista y demasiado grandes para ser observados con un 
microscopio compuesto. Su magnificación puede ir de 5X a 60X. 
Es un instrumento que genera imágenes en tres dimensiones, 
consta de cuatro pequeños espejos, ubicados de forma que al verse 
montadas una sobre otra dan el efecto estereoscópico o 
tridimensional. 
El microscopio de luz polarizada o polarizador, utiliza un campo claro al que 
se le aplica diferentes filtros para modificar la luz. Se denomina también microscopio 
petrográfico o metalúrgico, por su uso para el estudio de minerales. Esta técnica emplea 
tanto la luz transmitida como la luz incidente para obtener imágenes birefrectantes. 
Por otro lado, el microscopio de contraste de fase, creado por Frits Zernike, en 
1930, se basa en crear interferencias de luz para aumentar el contraste entre las partes 
claras y oscuras del objeto observado; por lo tanto, las variaciones en el índice de 
refracción de la muestra permiten visualizar detalles finos de su estructura. Este 
microscopio ha sido una herramienta muy útil en el estudio de la biología celular. 
El microscopio epifluorescente, se basa en la propiedad de los fluoróforos o 
fluorocromos, los cuales absorben luz a una longitud de onda dada y emiten otra luz en 
una longitud de onda larga. Los fluoróforos son moléculas que tienen la propiedad de 
emitir fluorescencia a cierta longitud de onda. Los fluorocromos son marcadores 
colorantes fluorescentes utilizados para detectar el objeto observado en el microscopio 
epifluorescente. La Tabla 1 muestra algunos de los fluorocromos más utilizados. 
 
Tabla 1. Longitud de onda de absorción y emisión de diferentes fluorocromos. 
 
Fluorocromo 
Longitud de onda de 
absorción (nm) 
Longitud de onda de 
emisión (nm) 
DAPI 359 461 
Fluoresceína (FITC) 494 520 
Rodamina (TRITC) 540 570 
Naranja de acridina 460–502 526–650 
Yoduro de propidio 536 617 
 
Por último, el microscopio confocal o láser de barrido está basado en el 
microscopio fluorescente y fue inventado por el científico estadounidense Marvin 
Minsky, en 1955, para estudiar el tejido neuronal. Permite observar cortes ópticos finos 
seriados en 3D, de planos definidos del objeto en observación, eliminando la 
fluorescencia de otras regiones que no estén en el plano de enfoque. 
 
 
 
 
1.1 Microscopio compuesto y estereoscopio 
Están compuestos de partes mecánicas y partes ópticas. 
 
1.1.1 Partes mecánicas 
 Base o pie: Soporte donde reposa el instrumento. Da estabilidad al microscopio. 
 Columna: Une el pie con la platina y la cabeza. Sostiene además el condensador y el 
diafragma. 
 Tubo: Porta el ocular y los objetivos. 
 Platina: Superficie que sostiene el portaobjeto con su cubreobjetos, el cual contiene 
las preparaciones a ser observadas. 
 Cabezal: Proporciona soporte a los lentes oculares y los objetivos. 
 Tornillos macrométrico y micrométrico: Permiten los movimientos para un ajuste 
fino del enfoque, para obtener una imagen clara. 
 Revólver: Sistema giratorio conectado con el tubo, porta los lentes objetivos para 
diversos aumentos. 
 Pinzas: Par de piezas rectangulares ubicadas sobre la platina, sostienen al portaobjeto 
en una posición fija. 
 
1.1.2. Partes ópticas 
 Oculares: Son lentes dispuestos en la parte superior del tubo, a los cuales el 
observador puede acercar su ojo. Su aumento puede ser de: 6X, 10X, 15X. 
 Objetivos: Son lentes de diferentes aumentos situados en el revólver, que se 
encuentra en el otro extremo del tubo. Existen objetivos de: escaneo (3.2X, 4X), 
menor aumento, que son cortos (8X, 10X), y mayor aumento, que son largos (40X, 
44X). Puede existir además el objetivo de inmersión (100X a 150X), su uso 
obligatoriamente requiere la aplicación de una gota de aceite de inmersión. 
 Condensador: Lente que concentrar el haz luminoso hacia la preparación. 
 Diafragma: Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparación. 
Permite controlar la apertura del haz de luz. 
 Espejo o luz incorporada: Proporciona la luz que llega hasta la muestra y al sistema 
óptico del microscopio. Existe un espejo plano por un lado y cóncavo por el otro, 
para ser usados cuando se disponga de abundante o escasa luz, respectivamente. La 
luz incorporada corresponde a un foco de luz eléctrica adaptado en el lugar que ocupa 
el espejo. 
1.1.3 Funciones de los componentes 
 Amplificación: Esta función permite incrementar el 
tamaño aparente de un pequeño objeto observado por el 
sistema de lentes. Se trabaja con un sistema de dos 
lentes, donde la imagen real formada por el lente 
objetivo es aumentada por los oculares; por lo tanto, la 
imagen final alcanzada por el ojo presenta un aumento 
total que es el producto de las amplificaciones o 
aumentos de las dos lentes que han sidousadas. Por 
ejemplo, la amplificación total de una imagen 
observada con un objetivo 40X y un ocular 10X, es 
igual al aumento del objetivo multiplicado por el 
aumento del ocular (40X*10X=400X); significa que la 
imagen original aumentó su tamaño 400 veces. 
 
 Resolución: La segunda función del microscopio es aumentar la resolución de la 
imagen. Se entiende por resolución a la capacidad de distinguir dos puntos como 
objetos separados. Podemos mejorar la resolución usando aceite de inmersión. 
 
 
 
 
 
 
 
 
1.1.4 Cuidados generales 
 Bajo ninguna circunstancia usted debe remover alguna de sus partes o intentar 
repararlo. 
 Si usted tiene alguna dificultad operativa, pregunte a su instructor. Nunca fuerce las 
partes mecánicas. 
 Si su microscopio presenta daño, perdida o mal funcionamiento de algunas de sus 
partes, repórtelo inmediatamente. 
 El microscopio está protegido por un cobertor que lo protege del polvo. Remueva 
con cuidado el cobertor de forma vertical. 
 Para incrementar el tiempo de vida del foco, evite encender y apagar frecuentemente 
el microscopio. 
 Los lentes deben limpiarse UNICAMENTE con papel para lentes (evita rayarlos). 
 Use papel toalla sólo para limpiar la platina, pinzas y las láminas o placas sobre las 
cuales colocará la muestra, pero NUNCA PARA LOS LENTES. 
 Asegúrese de que el objetivo de 100X NO mantenga aceite de inmersión al finalizar 
la práctica. 
 Cuando transporte el microscopio hágalo con ambas manos, una colocada en la base 
y la otra sosteniendo el brazo del microscopio. 
 Antes de colocar el microscopio en la mesa de trabajo, verificar que tenga un espacio 
amplio. 
 
1.1.5. Forma de uso 
 Mantener ambos ojos abiertos cuando se aproxime a los oculares. 
 Enchufe el cable de alimentación a una toma de corriente y encienda el microscopio. 
 Inicie siempre las observaciones con el objetivo de escaneo (4X). 
 Antes de colocar la placa, verificar que se encuentre limpia, de lo contrario limpiar 
suavemente la superficie con papel toalla. 
 Tratar de colocar la placa preparada con la muestra ubicada en el centro del área 
del campo visual. Asegurarse que la placa quede bien ajustada en la platina. 
 Mientras observa a través del ocular, mueva la platina hacia arriba utilizando el 
tornillo macrométrico (macro), hasta poder visualizar claramente la muestra. Si no 
puede verlo, vuelve a centrar la lámina y repita el procedimiento. Manipule el macro 
lentamente para no perder el enfoque. 
 
 Un enfoque más nítido se logra girando la perilla micrométrica (micro) lentamente. 
 Para cambiar de objetivo, siempre colocar la muestra en el centro del área de campo 
visual, de lo contrario se perderá la visualización al pasar a un aumento superior, ya 
que este campo se hará más pequeño. Girar el revólver hacia el siguiente objetivo 
superior, siguiendo la secuencia (10X, 40X). 
 Para utilizar el objetivo a 100X, primero alejar la muestra bajando la platina hasta 
el tope utilizando el macro (NO MOVER LA MUESTRA), colocar una gota de 
aceite de inmersión en el centro de la muestra, girar el revólver hacia el objetivo a 
100X y subir la platina lentamente hasta tocar, ligeramente, el aceite con el objetivo. 
Después de usar, limpiar con papel para lentes. 
 Para observar otra placa, primero gire el revólver hacia el objetivo 4X, luego baje 
la platina hasta el tope y sólo en ese momento cambie de preparación microscópica. 
 Para guardar el microscopio, siguiendo el procedimiento anterior, retire la placa y 
limpie la platina y lentes (con el respectivo papel). Asegúrese de siempre dejar el 
microscopio en el objetivo de escaneo. Enrolle el cable de electricidad siguiendo su 
curvatura normal, sin forzarlo. 
 
1.1.6. Problemas y soluciones comunes 
 
 ¡La imagen es muy oscura!: Puedes ajustar el diafragma. También asegúrese de que 
su luz esté encendida. 
 ¡Hay una mancha en mi campo de visión!: Su lente está sucio. Utilice un papel para 
lentes y limpie cuidadosamente el objetivo y la lente ocular. El lente ocular se puede 
retirar para limpiar su interior. ¡Pida ayuda al profesor! 
 ¡No puedo ver nada con el lente de mayor aumento!: Recuerde los pasos, si no puede 
enfocar nada con el lente de escaneo (4X), peor aún podrá enfocar la muestra con el 
de mayor aumento. 
 ¡Solo la mitad de mi campo de visión está iluminado, parece que hay una media luna 
en mi campo visual!: Es probable que el lente objetivo no se encuentre 
completamente en su lugar. (escuche un clic! al ajustar los lentes objetivos). 
 ¡Veo mis pestañas!: Estás demasiado cerca de los lentes oculares. Mueve tu cabeza 
un poco. 
 
 
2. OBJETIVOS 
 Conocer las partes mecánicas y ópticas del microscopio óptico y del estereoscopio y 
sus respectivas funciones. 
 Aprender a utilizar adecuadamente el microscopio óptico y el estereoscopio. 
 Enfocar varias muestras en el microscopio óptico y en el estereoscopio. 
 
 
3. MATERIALES 
 Microscopio óptico compuesto Leica DM300 
 Estereoscopio Leica EZ4 
 Aceite de inmersión 
 Papel para lentes 
 Papel toalla 
 Muestras de hojas y flores colectadas fuera del laboratorio 
 
 
 Láminas fijas de: 
- Zea mays (stem) 
- Cucurbita sp. (stem) 
- Allium cepa (epidermis) 
- Amoeba proteus 
- Paramecium sp. (in fussion) 
- Euglena viridis 
- Penicillium sp. 
- Saccharomyces sp. 
- Volvox sp. 
- Human-Homme sperm 
- Human-Homme blood 
 
4. PROCEDIMIENTO 
 Realizar el trabajo grupal indicado en el Anexo 1; para lo cual, deberá previamente 
identificar las partes mecánicas y ópticas del microscopio óptico y del estereoscopio. 
 
 
5. BIBLIOGRAFÍA 
1. Lodish H., Kaiser C.A., Bretscher A., Amon A., Berck A., Krieger M., Ploegh 
H. and Scott M. P. (2014). Molecular Cell Biology. 6th edition. 
2. Reece, J. B., Taylor, M. R., Simon, E. J. & Dickey, J. L. (2012). Biology: 
concepts & connections, 7th edition. Pearson, IL, USA. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
6. ANEXOS 
 
1. ACTIVIDAD GRUPAL 
 
Fecha: Paralelo: 
Nombres: 
1. 
2. 
3. 
4. 
5. 
 
Desarrolle: 
1.- Escriba los nombres de las partes del microscopio óptico (Leica DM30) y 
estereoscopio (Leica EZ4). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Microscopio óptico Leica DM30 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Estereoscopio Leica EZ4 
 
2.- Observe en el microscopio óptico tres muestras de láminas fijas, con los objetivos: 
4X, 10X, 40X y 100X, y realice los respectivos dibujos. Coloque la información 
necesaria para identificar cada muestra, incluyendo: procedencia de la muestra, 
especie, objetivo, ocular y cálculo de la amplificación total de cada imagen). 
3.- Colecte tres muestras de distintas partes de una planta (e.g. flores, hojas, 
semillas), colóquelas en el estereoscopio, observe, y realice los respectivos dibujos. 
Coloque la información necesaria para identificar cada muestra, incluyendo: 
procedencia de la muestra, especie, objetivo, ocular y cálculo de la amplificación 
total de cada imagen). 
4.- Describa todos los pasos necesarios para observar una lámina preparada, desde 
que se retira el microscopio del estante hasta que se lo regresa a su lugar.