Practica_microbiologia_no 1_PADILLA_VITELA4C

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 INSTITUTO TECNÓLOGICO DE ESTUDIOS 
SUPERIORES DE ZAMORA 
 
 
 INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS 
 
 
REPORTE DE PRÁCTICA No. 1 
¨USO DEL MICROSCOPIO¨ 
 
 
Materia: 
MICROBIOLOGÍA 
 
Docente: Ricardo Oropeza 
 
 
Alumna: Padilla Vitela Andrea Trinidad 
 
 
 
4° C 
 
 
 
A martes 22 de marzo del 2022. 
 
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INDICE 
 
INTRODUCCIÓN…………………………………………………3-4 
OBJETIVO…………………………………………………………4 
MARCO TEORICO……………………………………………….5-8 
METODOLOGIA………………………………………………….9-12 
RESULTADOS Y DISCUSIÓN………………………………….13-17 
CUESTIONARIO………………………………………………….18 
CONCLUSION…………………………………………………….19 
REFERENCIAS……………………………………………………19 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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INTRODUCCIÓN 
 
El instrumento básico para el estudio de células y tejidos vegetales es el 
MICROSCOPIO DE LUZ, su poder resolutivo es la capacidad de hacer que aquellos 
objetos que están muy juntos aparezcan separados; para que nos demos una idea el poder 
resolutivo del ojo humano es de aproximadamente 0.1 mm, de modo que si dos líneas 
están separadas entre si por menos de 0.1 mm, dichas líneas aparecerán como una sola 
línea, no importa cuánto se acerque el observador a ellas; para tener un ejemplo, la 
mayoría de las células tienen un diámetro inferior a 0.1 mm es decir sin ayuda de lentes la 
vemos como una sola estructura. 
Los microscopios empleados en microscopia común son de tipo óptico o compuesto y el 
estereoscopico o de disección; se disponen de una gran variedad de modelos en su 
construcción; básicamente, los microscopios ópticos se caracterizan por tener un tubo que 
lleva dos sistemas de lentes: el ocular en el extremo superior y el objetivo en el extremo 
inferior; la imagen se forma por el objetivo y se magnifica por el ocular. 
Los microscopios equipados con un solo ocular se llaman monoculares; aquellos con dos 
oculares, binoculares; dependiendo de su tipo, un microscopio puede estar equipado con 
varios objetivos intercambiables, los más comunes son 2.5x (lupa), 10x, 40x y 100x. 
Un accesorio indispensable en los microscopios es el condensador, el cual es un tercer 
sistema de lentes que ayuda a regular el contraste de la imagen y la intensidad de la 
iluminación; los condensadores no se encuentran en los microscopios de disección o 
estereomicroscopios. 
Con el microscopio óptico pueden lograrse aumentos de hasta 2000x. El aumento total es 
el producto de poder de aumento del ocular multiplicado por el poder de aumento del 
objetivo y por el poder de aumento del condensador. El poder resolutivo del microscopio de 
luz, está limitado por la longitud de onda de la luz visible que utiliza, a esto se le denomina 
campo brillante; sin embargo ciertas técnicas de la microscopia de luz, han ayudado a 
aumentar el alcance de éste instrumento; una de éstas técnicas se conoce como 
microscopia de campo obscuro, en éste método se utilizan lentes que desvían los rayos de 
luz de manera que sólo la luz que pasa a través del espécimen llega hasta el ojo del 
observador, esto hace que el objeto parezca brillante sobre un fondo obscuro. 
Detalles referentes a la construcción, uso y cuidado del microscopio se dan en la literatura 
y se incluyen en el manual de instrucciones que acompañan al microscopio. 
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Otro método se conoce con el nombre de microscopia de contraste de fase, en ésta 
técnica las ondas de luz se desvían y reflejan de tal manera que los objetos adyacentes en 
el campo microscópico se distinguen unos de los otros. Por otra parte el microscopio 
electrónico ha permitido hacer mayores descubrimientos debido a que realiza un aumento 
en unas 3,000,000 veces. 
 
 
 
 
Microscopio óptico 
 
OBJETIVO 
Conocer el funcionamiento, componentes, cuidados y limpieza del microscopio óptico y el 
microscopio estereoscópico. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Microscopio estereoscópico 
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MARCO TEORICO 
 
 ¿QUÉ ES? 
El microscopio de micro-, pequeño, y scopio, σκοπεω, observar, es un instrumento cuya 
función es permitir observar la imagen de un objeto u organismo que son demasiado 
pequeños para ser vistos a simple vista. 
El microscopio es un sistema de amplificación de dos niveles, en el cual el espécimen es 
amplificado primeramente por un complejo sistema de lentes del objetivo y de nuevo por 
una segunda lente en el ocular. La capacidad de amplificación total del instrumento es el 
producto de las amplificaciones logradas por el objetivo y el ocular. 
¿QUÉ PARTES LO COMPONEN? 
Fue utilizado por primera vez, como tal, por el holandés Anton van Leeuwenhoek el año 
1675. Tiene dos partes: una óptica, para observar, y otra mecánica, que sostiene a la 
primera. 
 Parte optica: 
- Ocular, lente situada cerca del ojo del observador. 
- Objetivo, lente situada cerca del objeto que se quiere observar. 
- Diafragma, dispositivo para graduar la entrada de luz. 
- Condensador, dispositivo para concentrar la luz sobre el objeto. 
- Foco de luz o espejo, para iluminar el objeto. 
 Parte mecánica: 
- Columna, parte que sostiene el tubo óptico. 
- Tubo óptico, donde se encuentra ubicado el ocular. 
- Revólver, parte móvil que sostiene los objetivos. 
- Platina, que soporta el portaobjetos. 
- Pié, sostiene todo el microscopio. 
- Tornillo macro métrico, que permite desplazamientos rápidos de las lentes. 
- Tornillo micro métrico, que permite desplazamientos suaves de las lentes. 
TIPOS DE MICROSCOPIOS 
Existen distintos tipos de microscopios y se pueden clasificar de acuerdo a muchos 
criterios como lo puede ser de acuerdo al sistema de iluminación, según el número de 
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lentes, según la transmisión de la luz, el número de oculares y según la configuración de 
los elementos. De acuerdo al: 
- Sistema de iluminación. 
1) Microscopio óptico 
En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto significa que 
existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del 
objetivo y del ocular hasta llegar a formar la imagen en el ojo del observador. Este es el 
tipo de microscopio más habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz. 
El aumento máximo que se puede obtener con este tipo de microscopio alcanza alrededor 
de 1500x. 
2) Microscopio electrónico 
En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino que se utilizan 
electrones. Los electrones impactan contra la muestra dentro de una cámara de vacío. 
Existen diferentes tipos de microscopio electrónico pero su principio de funcionamiento se 
basa siempre en capturar los electrones dispersados u omitidos por la muestra y así poder 
reconstruir una imagen. 
3) Microscopio de luz ultravioleta 
Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre indica, con luz 
ultravioleta. Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que la luz visible utilizada 
en los microscopios ópticos. 
4) Microscopio de luz polarizada 
También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es en realidad un tipo 
de microscopio óptico al que se la han añadido dos polarizadores. Esto significa que la 
onda de luz utilizada para observar la muestra tiene una dirección de oscilación concreta. 
Este tipo de microscopio es muy útil para observar estructuras cristalinas de rocas y 
minerales. 
5) Microscopio de fluorescencia 
Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de 
fluorescencia para generar una imagen de la muestra. Este microscopio permite observar 
sustancias que emiten luz propia cuando son iluminadas con una longitud de onda 
determinada. 
- Numero de lentes. 
1) Microscopio simple 
Este tipo de microscopio dispone de una única lente y es más habitualmente conocido 
como lupa. Aun así, con un microscopio simple pueden conseguirse grandes aumentos. 
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2) Microscopio compuesto 
Este tipo de microscopioes aquél que dispone de por lo menos dos lentes. Este es el caso 
más habitual en todos los microscopios modernos. 
- Transmisión de la luz 
1) Microscopio de luz reflejada 
2) Microscopio de luz transmitida. 
- Numero de oculares 
1) Monocular 
2) Binocular 
3) Trinocular 
- La configuración de los elementos 
- Digital 
Son aquellos que capturan una imagen digital de la muestra. Esto se consigue conectando 
una cámara digital en lugar del ocular. Existen microscopios digitales con distintas 
configuraciones. 
- Estereoscópico 
Es un tipo de microscopio que permite observar la muestra de forma tridimensional. Estos 
microscopios están equipados siempre con dos oculares. La imagen de la muestra que 
llega a cada ocular es ligeramente distinta de modo que cuando se combinan se consigue 
el efecto 3D. 
 
¿QUÉ ES LA CAJA DE PETRI? 
La placa o caja de petri es un instrumento de laboratorio que consta de una base circular y 
sus paredes son de una altura baja, aproximadamente de 1 cm. Posee una cubierta de la 
misma forma pero algo más grande de diámetro, para que se pueda colocar encima y 
cerrar el recipiente, aunque no de forma hermética, para proteger el cultivo de agentes 
externos que lo podrían contanimar. 
Este instrumento es de cristal o plástico transparente, lo que permite observar el 
crecimiento de los cultivos. Las cápsulas de plástico se desechan una vez que se han 
utilizado. Las de vidrio, por su parte, se pueden reutilizar después de haber sido 
descontaminadas y esterilizadas. 
 
 
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¿PARA QUE SE UTILIZA? 
Las cápsulas de petri suelen ser empleadas en los laboratorios. El uso más común de 
estos instrumentos es el de ser contenedores para el cultivo de células, bacterias, mohos y 
otros tipos de microorganismos. 
 
¿CÓMO SE UTILIZA? 
Para el cultivo de microorganismos, se comienza por esterilizar la cápsula de petri. Esto se 
puede hacer calentándola en un horno o lavándola con diversas sustancias (por ejemplo, 
cloro). Este proceso eliminará los agentes presentes en la superficie, los cuales podrían 
dañar el cultivo. 
 
A continuación, se procede a crear un ambiente propicio dentro de la cápsula. Por lo 
general, se llena la mitad del instrumento con un líquido caliente a base de goma agar, 
nutrientes, sales, carbohidratos, aminoácidos, antibióticos, indicadores y otras sustancias 
necesarias para el estudio. 
Las cápsulas de petri con la mezcla de goma agar se almacenan boca abajo en un 
refrigerador. Después de un tiempo, la goma agar se enfría y se solidifica, lo que significa 
que la cápsula ya está lista para ser utilizada. 
Se debe sacar la cápsula del refrigerador y esperar hasta que esté a temperatura 
ambiente. 
Se introducen los microorganismos en la mezcla. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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METODOLOGÍA 
1. MANEJO DE MICROSCOPIOS 
A. Transporte. 
i. El microscopio debe ser transportado utilizando LAS DOS MANOS A LA VEZ, con la 
mano izquierda se sujeta por el brazo y con la mano derecha se sujeta por la parte inferior. 
ii. Antes de trasladarlo asegúrese de que todas las piezas que lo componen están 
aseguradas a él; asegúrese sobre todo objetivos, platina, espejo, lámpara y cable de luz 
enrollado. 
B. Sitio de utilización. 
i. La superficie de uso debe ser firme, plana, estar LIMPIA, sin ningún objeto 
ii. El contacto tomacorriente debe estar a una distancia para que el cable no quede ni muy 
tenso ni muy holgado, el cable debe estar ubicado de tal manera que durante su uso no 
estorbe ni puedan atorarse los usuarios. 
Uso del microscopio. 
i. Durante su uso, POR NINGÚN MOTIVO debe ser movido de su lugar, como el uso del 
microscopio es común, los usuarios son los que deben moverse para hacer las 
observaciones. 
ii. La intensidad de la luz debe ser regulada de tal manera que NO SOBREPASE la mitad 
de graduación máxima, lo ideal es un tercio, esto con varias finalidades: no calentar 
demasiado los microscopios, no dañar los reguladores, no sobre calentar los focos y con 
ello fundirlos y sobre todo no perjudicar la retina del usuario. 
iii. Por ningún motivo deben ponerse al microscopio material de cristalería que este 
húmedo o que contenga alguna substancia (colorante, solvente, reactivo, agua); 
únicamente debe hacer contacto con el microscopio material de cristalería: portaobjetos, 
cajas petri, vidrios de reloj, portaobjetos escavados. NO poner material directamente sobre 
la platina o la placa de observación. 
2. LIMPIEZA OPTICA. 
A. Para evitar la contaminación de las superficies ópticas. 
i. Mantener el microscopio cubierto con su funda cuando no está en uso. 
ii. No toque los lentes con ningún objeto, sobre todo ponga atención en párpados, 
pestañas, dedos, aceite de inmersión o jalea de glicerol, etc. Los ojos del usuario no deben 
contener ninguna pintura, polvo, etc. 
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iii. No frote los lentes con objetos que pudiera tener abrasivos o partículas que pudieran 
dañarlos (batas, pañuelos, papel absorbente, camisas, etc.). 
iv. No ponga en el microscopio portaobjetos que contengan en la superficie inferior: agua, 
aceite, resina, jalea, o cualquier medio de montaje, etc. 
B. Para remover contaminación de las lentes. 
i. Es mejor examinar la lente con lupa o estereomicroscopio que a simple vista, la luz 
reflejada es preferible. 
ii. Se pueden remover partículas sueltas por medio de soplar con una perilla de aire. 
iii. Otros contaminantes se quitan con disolventes como agua o xileno; antes de usar un 
disolvente, cerciórese de que lo que va hacer no es perjudicial al microscopio; estos se 
aplican con frotación con papel de lentes, papel seda o con algodón limpio. Estos 
materiales no se vuelven a usar, porque podrían acarrear abrasivos, huellas digitales u 
otras películas delgadas de grasa pueden quitarse con disolventes según el paso ii. (en 
caso de que estén los lentes sucios, el técnico responsable del laboratorio es quien deberá 
realizar esta operación). 
iv. Después de usar disolventes, los últimos restos del contaminante se remueven con 
papel de lentes, algodón seco o espuma de poliestireno (unicel). El poliestireno es soluble 
en xileno y etanol, así que es importante que no esté en contacto con éstos, sobre todo, 
sobre los lentes. La espuma de poliestireno se corta en barras de 10 a 15 mm de diámetro, 
con una navaja se recortan puntas sucesivas para crear superficies limpias, las cuales se 
usan para frotar los lentes. 
v. Consulte con los técnicos del laboratorio en caso de cualquier duda de la limpieza del 
microscopio. 
AJUSTE DEL MICROSCOPIO ÓPTICO O DE LUZ TRANSMITIDA 
La microscopia de luz transmitida, conocida también como campo claro es el método de 
microscopia óptica más usual, ya que con su ayuda se puede observar sin complicaciones 
y mayores esfuerzos las preparaciones biológicas ya sea con o sin tinción. 
Para obtener la resolución óptima cuando se ilumina por completo el campo visual, es 
indispensable ajustar el condensador, el diafragma de campo luminoso y el diafragma de 
apertura según el principio de KÖHLER para ajustar correctamente la iluminación. Para 
lograr esto el cono luminoso de la iluminación se adapta al cono de abertura del objetivo, 
de esta manera se aprovecha la apertura numérica de la óptica y se evita esa luz 
“innecesaria” que se manifiesta como luz difusa perturbante. 
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Para realizar esos ajustes se sigue el siguiente procedimiento: 
1. Colocar en la platina una preparación fija bien contrastada. 
2. Graduar la luminosidad de la imagen con el regulador de intensidad de iluminación en el 
estativo del microscopio. 
3. Desplazar hasta el tope superior con el botón de mando y colocar en posición central la 
palanca para regular el diafragma de apertura. 
4. Intercalar el objetivo 10x en la trayectoria de rayos de luz con el anillo moleteado 
(hexagonal) del revolver porta objetivos. 
5. Mirar en el tubo binocular por el ocular fijo (es importante quesolo por este ocular) y 
enfocar nítidamente la preparación con el mando de enfoque, usando tanto el 
macrométrico como el micrométrico. 
6. Graduar la nitidez de la imagen para el otro ojo con el ocular enfocable hasta que la 
imagen se vea perfectamente nítida. 
7. Cerrar el diafragma del campo luminoso hasta el punto en que se pueda ver el campo 
visual sin importar la nitidez (fig. 4.A). 
8. Graduar el condensador con el botón de mando del condensador hasta enfocar 
nítidamente el borde del diafragma del campo luminoso (fig. 4.B). 
9. Centrar perfectamente este diafragma con ambos tornillos de centraje del condensador 
(fig. 4.C). 
10. Abrir el diafragma hasta el punto en el que el borde desaparezca suficientemente del 
campo visual (que desaparezca del campo el hexágono) (fig. 4.D). 
11. Regular el diafragma de apertura (contraste) para el efecto de sacar un ocular del porta 
oculares y mirar (preferentemente sacar el ocular fijo). Graduar el diafragma de apertura de 
2/3 a 4/5 del diámetro de la pupila de salida del objetivo con la palanca (fig. 4.E). 
12. Colocar de nuevo el ocular en el porta oculares. 
 
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AJUSTE DE LA DISTANCIA INTERPUPILAR 
Otro aspecto importante a considerar es que cada persona tiene una distancia interpupilar 
específica, para ello deberá realizarse el ajuste alejando o juntando los oculares de tal 
manera que al estar observando atreves de ellos se vean los dos círculos superpuestos de 
tal manera que solo se distinga uno solo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN 
 
Lo que principalmente se hizo, fue elegir nuestra preparación que en este caso se eligió 
branquia de almeja, C.S. misma que ya se encontraba lista en un respectivo porta objetos 
y cubre objetos. 
Después se colocó en el microscopio óptico, sobre la platina y se sujetó con las pinzas, 
una vez hecho esto se comenzó a hacer la observación donde, se desplazó la platina y se 
centró la preparación, una vez llegamos a este punto la preparación aún no se enfocaba y 
por lo tanto no se podía observar, por lo que se tuvo que continuar ajustando el 
condensador y de igual manera el objetivo que se eligió fue de 10x, donde demás se 
regulo la entrada de luz. De tal forma que con los tornillos macrométrico y micrométrico 
para poder llegar al enfoque necesario y poder observar la preparación. 
Una vez se pudo observar la preparación se retiró y se llevó a su lugar, para después 
practicar como es que se debe manipular la caja de Petri, misma que se tiene que tomar 
con la mano izquierda y colocar el dedo meñique, anular y medio debajo de la caja, 
mientras que el índice y el pulgar nos permitían abrir la caja o cerrarla, para esto se utilizó 
un matraz Erlenmeyer donde de la caja Petri se vacío simple agua hacia el matraz, lo cual 
nos sirvió de práctica para saber el correcto manejo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
A continuación se muestran las preparaciones que eligieron mis compañeros 
y como es que se ven desde el microscopio. 
 
Branquia de almeja C.S. 
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Imagen de la preparación fija Nombre de la preparación fija 
 
 
Boca de abeja 
 
 
Ala de abeja 
 
 
Hirudo Nipponia Sec 
 
 
Musculo cardiaco 
 
 
Pulmón 
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Testículo sección 
 
 
Boca de mariposa 
 
 
Medula ósea 
 
 
Sección del intestino delgado 
Vena 
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Sección del intestino delgado 
 
 
Arteria 
 
 
Sangre humana 
 
 
Pteridium prothallium (helecho) Espórofito 
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Vena S.C 
 
 
Neurona 
 
 
Sangre de rana 
 
Ascarid, parasito x.s. 
 
 
 
 
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CUESTIONARIO 
 
1. ¿Cuál es la función de cada parte del microscopio? 
Oculares. Formar una imagen vitual y amplificada de la imagen real creada por el objetivo. 
Revolver con objetivos. Al girar el revolver las lentes/ objetivos si que se desenfoque la 
preparación. 
Platina. Superficie donde se coloca la preparación que se observara. 
Macrométrico. Tornillo que hace descender o ascender el tubo de observación co 
movimientos largos. Permite el enfoque rápido de la preparación. 
Micrométrico. Produce un movimiento imperceptible que permite un enfoque preciso. 
Condensador. Se utiliza para la corrección de la divergencia de los rayos de luz. 
Toma de corriente. Se conecta permitiendo el paso constante de la corriente eléctrica. 
Encendido. Interruptor es el mecanismo para encender o apagar. 
Regulación de lu. Se encarga de regular la luz. 
 
2. ¿Cuál es el objetivo de tener orden, cuidado, limpieza del microscopio? 
Para evitar que se dañe el equipo, ya que al ser un equipo delicado debe encontrarse bajo 
ciertas especificaciones o condiciones que aseguren que continuara funcionando de 
manera adecuada y concreta, ya que si por el contrario no se siguen dichas 
especificaciones este se puede dañar y entonces incluso se tendrán resultados erróneos. 
 
3. Explica cuál es la utilidad de tener un correcto ajuste en el microscopio. 
Si se tiene un correcto ajuste la imagen que observaremos será clara y podremos definir 
claramente que es lo que vemos, así como también distinguirlo y de igual forma será mas 
sencillo y rápido obtener resultados o respuestas. 
4. Discute a que se puede deber que se obtenga poca resolución y mal contraste 
de la imagen 
Esto se deberá a la mala calibración del microscopio, así como también el personal que lo 
esté utilizando no esté capacitado o no conozca cómo es que se debe de usar. O a 
mismos errores que puede llegar a presentar el microscopio causando una imagen 
distorsionada. 
 
 
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CONCLUSIÓN 
 
Finalmente a manera de conclusión me gustaría agregar que aprendí como debe ser e 
correcto uso y manipulación de un microscopio así como también como es que debemos 
prestar atención en ciertas especificaciones de su manejo como almacenamiento ya que 
de ello también dependerá la calidad de imagen que obtendremos. Y también como es que 
cada pequeña parte del microscopio cumple una función esencial que sin ella podría 
desencadenar errores, e incluso que debemos de tener paciencia ya que al ser nuestra 
primera vez utilizando el microscopio te puede resultar un poco confuso más no difícil. 
 
De igual forma el aprender como es el correcto manejo de la caja de Petri y los cuidados 
que debemos tener con ella. 
 
 
 
 
REFERENCIAS 
Laboratorio de ciencias. (s.f.). Caja de Petri. 
https://kitlab.exa.unicen.edu.ar/caja_de_petri.html# 
Mundo microscópico. (2022). Tipos de microscopios. 
https://www.mundomicroscopio.com/tipos-de-microscopios/ 
F. Gómez, Giovan. (2021). El microscopio: fundamentos para su uso. 
https://dspace.tdea.edu.co/bitstream/handle/tdea/1467/El%20microscopio%20fundamentos
%20para%20su%20uso.pdf?sequence=1&isAllowed=y 
Carmona, Tomas. (2016). Protocolo uso del microscopio. 
 
https://kitlab.exa.unicen.edu.ar/caja_de_petri.html
https://www.mundomicroscopio.com/tipos-de-microscopios/
https://dspace.tdea.edu.co/bitstream/handle/tdea/1467/El%20microscopio%20fundamentos%20para%20su%20uso.pdf?sequence=1&isAllowed=y
https://dspace.tdea.edu.co/bitstream/handle/tdea/1467/El%20microscopio%20fundamentos%20para%20su%20uso.pdf?sequence=1&isAllowed=y