Niveles-de-expresion-del-VEGF-y-PEDF-en-un-modelo-porcino-tras-la-aplicacion-de-crioterapia-y-fotocoagulacion

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE MEDICINA
DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO
ASOCIACION PARA EVITAR LA CEGUERA EN MEXICO, 
 “HOSPITAL DR. LUIS SANCHEZ BULNES”,IAP
TESIS DE POSGRADO PARA OBTENER EL TITULO DE ESPECIALISTA EN OFTALMOLOGIA
“NIVELES DE EXPRESIÓN DEL VEGF Y PEDF EN UN MODELONIVELES DE EXPRESIÓN DEL VEGF Y PEDF EN UN MODELO 
PORCINO TRAS LA APLICACIÓN DE CRIOTERAPIA YPORCINO TRAS LA APLICACIÓN DE CRIOTERAPIA Y 
FOTOCOAGULACIÓN”FOTOCOAGULACIÓN”
PRESENTA Dr. Efraín Romo García
 
UNAM – Dirección General de Bibliotecas 
Tesis Digitales 
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__________________________
Dr. Daniel Ochoa Contreras
Jefe de Enseñanza
Asociación para Evitar la Ceguera en México
Hospital “Dr. Luis Sánchez Bulnes”
TUTOR DE TESIS
Dr. Abelardo Rodríguez Reyes
Jefe del servicio de Patología
PRESIDENTE
Dr. Abelardo Rodríguez Reyes
Jefe del servicio de Patología
SECRETARIO
 DR. JAIME VILLASEÑOR SOLARES
Jefe del servicio de Estrabismo
VOCALES
 DR. JAIME VILLASEÑOR SOLARES
 
 DR. MAURICIO CEDILLO LEY
DR. MATILDE RUBIO LEZAMA
DR. JORGE PACHECO GARCÍA
TÍTULO:
NIVELES DE EXPRESIÓN DEL VEGF Y PEDF EN UN MODELONIVELES DE EXPRESIÓN DEL VEGF Y PEDF EN UN MODELO 
PORCINO TRAS LA APLICACIÓN DE CRIOTERAPIA YPORCINO TRAS LA APLICACIÓN DE CRIOTERAPIA Y 
FOTOCOAGULACIÓNFOTOCOAGULACIÓN
Dr. Efraín Romo García
Residente de tercer año de Oftalmología
Asociación para Evitar la Ceguera en México
Hospital Dr. Luis Sánchez Bulnes
Dirección: Vicente García Torres No 46, Col. San Lucas Coyoacán 04030. México, D.F.
Tel. 04455-32-25-46-26
Email: efrainromo@hotmail.com
Tutor de Tesis:
 Dr.Abelardo Rodríguez Reyes
 Jefe del Servicio de Patología
Este trabajo fue realizado en el Hospital Dr. Luis Sánchez Bulnes de la Asociación para 
Evitar la Ceguera en México, ubicado en Vicente García Torres No 46, Col. San Lucas 
Coyoacán 04030. México, D.F., con número telefónico 1084-1400.
mailto:efrainromo@hotmail.com
AGRADECIMIENTOS
 A MIS PADRES
Por su comprensión, apoyo incondicional, amor, dedicación y ejemplo, 
sin duda nada hubiera sido posible sin ustedes.
A MIS HERMANAS
 Gracias por su apoyo.
INDICE PÁGINA
AGRADECIMIENTOS…………………………………………………………..6
RESUMEN……………………………………………………………………….8
INTRODUCCIÓN………………………………………………………………..9
JUSTIFICACIÓN……………………………………………………………….12
HIPOTESIS……………………………………………………………………..12
OBJETIVOS…………………………………………………………………….13
DISEÑO DEL ESTUDIO………………………………………………………13
MATERIAL Y METODOS…………………………………………….............13
RESULTADOS………………………………………………………………….18
DISCUSIÓN……………………………………………………………………..23
CONCLUSIONES………………………………………………………………24
BIBILIOGRAFIA………………………………………………………………...25
RESÚMEN 
La DMRE es una de la principales causas la perdida de la visión en individuos de 
edad avanzada ya que se desarrolla un estado de neovascularización coroidea al haber 
una ruptura en la membrana de Bruch. Los diferentes tratamientos utilizados no han sido 
completamente satisfactorios, debido a la recurrencia de la enfermedad, la cual está 
relacionada con el incremento de los factores angiogénicos meses después del tratamiento. 
El presente estudio pretende demostrar que la crioterapia podría ser utilizada como 
tratamiento alternativo para esta patología. Para relacionar el efecto del tratamiento con la 
neovascularización se midieron los niveles de expresión de VEGF y PEDF mediante 
RT-PCR semicuantitativo. Por inmunohistoquímica se analizo la relación entre el área de 
tratamiento con la localización de las proteínas VEGF y PEDF en la capas celulares de 
coriodes y retina en ojos de cerdos raza landras tras la aplicación de crioterapia moderada 
y aplicación de láser de argón.
INTRODUCCIÓN
La neovascularización coroidea (NVC) es la principal causa de la pérdida severa 
de visión en pacientes mayores de 60 años de edad con degeneración macular relacionada 
con la edad (DMRE). La neovascularización se origina desde los vasos sanguíneos coroideos 
hasta la membrana de bruch, dentro del espacio del epitelio pigmentado de la retina (EPR). 
Las enfermedades oculares como degeneración macular relacionada con la edad (DMRE), 
retinopatía diabética y retinopatía del prematuro son caracterizadas por la formación anormal 
de nuevos vasos de capilares preexistentes, causando la pérdida de la visión por la formación 
de una membrana fibrovascular , hemorragia vítrea y desprendimiento de retina o de células 
del epitelio pigmentado (Green WR, 1999). En la patogénesis de neovascularización se han 
identificado varios factores de crecimiento angiogénicos (Wang F, 2003, Sivalingam A, 1990, 
Grant M, 1986; Meyer-Schwickerath R, 1993, Elner SG, 1998; Yoshida A, 1998, Khaliq A, 
1998 y Katsura Y, 1998) y antiangiogénicos (PEDF, integrinas NF-kB) distribuidos en las 
diferentes capas celulares de la coroides, retina y en vítreo. El factor de crecimiento endotelial 
vascular (VEGF) es la molécula angiogénica mas importante porque es la principal formadora 
de NVC. Este factor es una proteína mitógena de 46 kDa cuyo gen es procesado alternativamente 
formando variantes de la proteína codificada (Tischer E, 1991), se ha visto expresada en diferentes 
tipos de células endoteliales tumorales como melanoma, gliomas, neuroblastomas y cáncer de 
mama (Costa C, 2004), e incluso, su alto nivel de expresión está relacionada con la progresión de 
tumores. 
La inhibición de los procesos de NVC está relacionada con los factores anti-angiogénicos 
biológicos (PEDF, integrinas NF-kB) y farmacológicos (dexametasona, indometacina, 
dialtezem y lisinopril) (Rosen LS, 2002); pero ninguno de estos últimos son capaces de inhibir 
completamente el crecimiento de vasos aberrantes. Solo los inhibidores de la tirosina kinasa, 
CGP 441251 (Fabbro D, 1999) y PTK787 (Maier P, 2005; Bilenker JH, 2004) han sido efectivos 
como el factor derivado del epitelio pigmentado (PEDF) (Gao G, 2002; Ozaki H, 2000). 
El PEDF es una glicoproteína de 50 kDa miembro de la familia serina proteasa (serpina) que 
fue originalmente aislado de las células epiteliales pigmentarias de la retina y actualmente puede 
estar presente en las capas celulares de la coriodes y retina (Nahoko Ogata, Mitsumasa wada 
expression of pigment). PEDF estimula la apoptosis de células endoteliales vasculares, por lo 
que se considera ser una molécula antimitógena (Stellmach V, 2001). 
Otros estudios de neovascularización e inhibición de los mismos han mostrado que el factor 
VEGF y PEDF son expresados en contrabalance, es decir, la expresión elevada de cualesquier 
factor afecta negativamente la expresión del otro (Gao, 2002). Se ha observado que en ojos 
tratados con diferentes dosis de PEDF disminuye paulatinamente el nivel de ARNm de 
VEGF en las células de la capa de la retina, así como el nivel de la proteína en vítreo. 
Sugiriendo que ambos factores son de gran importancia para la regulación de la 
angiogénesis en patologías como DMRE, RDP y que el PEDF podría ser 
utilizado en el tratamiento de una variedad de vasculopatias retinales.
La terapia fotodinámica es uno de los tratamientos utilizados para patologíascomo DMRE 
ya que conduce a la citotoxicidad selectiva de células endotelial vasculares con la producción de 
radicales oxidativos, que se limita a una localización confinada y a un intervalo exacto del tiempo. 
Esto lo hace ideal para el tratamiento de neovascularización coroidea (NVC), permitiendo la 
alteración de la estructura neovascular sin interferencia de las capas neuronales extravasculares. La 
ventaja funcional de este tratamiento está correlacionada con la respuesta anatómica que reduce 
significativamente el crecimiento NVC y la resolución progresiva de enfermedad. Sin embargo se 
ha demostrado que la terapia fotodinámica induce un incremento en la expresión de VEGF y PEDF 
en el sitio específico del tratamiento, sugiriendo ser el sitio principal de estimulación angiogénica, 
concluyendo que el tratamiento puede ser combinado con la aplicación de otras estrategias 
antiangiogénicas.
La fotocoagulación por láser es otra estrategia quirúrgica comúnmente usada que induce la 
regresión de la neovascularización. Sin embargo el mecanismo de este fenómeno no es bien 
comprendido. Se ha demostrado que la fotocoagulación en retinas isquémicas de animales 
induce la proliferación de células del epitelio pigmentario en los puntos lesionados, cubriendo 
el tejido neovascular (Wada M, 1999). Un incremento paulatino de ARNm y proteínas de 
PEDF también fue observado cuya expresión máxima fue después de las dos semanas, mientras 
que la proteína VEGF fue débilmente expresada semanalmente. Sugiriendo que la fotocoagulación 
modula el proceso de neovascularización coroidea a través de la estimulación de PEDF en las 
lesiones causadas por el láser (Ogata, 2001; 2002). 
Sin dejar de ser importante, la crioterapia es otra técnica opcional que ha sido ampliamente 
utilizada para el tratamiento de tumores recurrentes donde la terapia por radiación no fue 
totalmente exitosa (Baust JG, 2004; de la Taille A, 2000). Se ha evidenciado que la crioterapia 
induce la muerte celular periférica sobre los tejidos cancerosos (Yang WH, 2004). Esta técnica 
también se ha usado contra el desarrollo neovascular a nivel de retina, se sugiere que actúa como 
inductor de apoptosis de células vasculares endoteliales. Sin embargo se desconoce sí el nivel 
de expresión de las factores angiogénicos y antiangiogénicos en la crioterapia son similares a los 
efectuados por la fotocoagulación por láser. Siendo de estudiar el efecto que realiza la crioterapia 
sobre los principales factores angiogénicos y antiangiogénicos. 
JUSTIFICACIÓN 
Varias opciones de tratamientos clínicos existen para pacientes que presentan NVC. 
Las técnicas de cirugía por láser y terapia fotodinámica para DMRE son las más comúnmente 
utilizadas. Desafortunadamente, la fotocoagulación por láser daña a las células sanas adyacentes 
al área tratada, permitiendo una pérdida significante de la visión. Recientemente el uso de la 
terapia fotodinámica reduce el daño colateral durante la terapia por láser. Sin embargo, la 
recurrencia de los síntomas es común y puede dar como resultado la perdida de la visión. Además, 
su accesibilidad es limitada debido al alto costo del tratamiento. 
Por lo que es importante utilizar nuevas terapias medico quirúrgicas que demuestren la 
inhibición de factores angiogénicos como el VEGF o estimulación de factores 
antiangiogénicos como el PEDF, que permitan reducir su manipulación quirúrgica y que sea 
accesible a la población en general. Por lo tanto, en este estudio se estudiaran los efectos de la 
crioterapia para disminuir el estado de NVC relacionado a la expresión de los factores angio y 
antiangiogénicos, siendo relevante el estudio debido a que la técnica de crioterapia se ha 
utilizado como una alternativa para reducir el estado de neovascularización en pacientes con 
DMRE.
HIPÓTESIS 
La crioterapia incrementa en ojos de cerdos raza landras la expresión del factor PEDF 
y la disminución del factor VEGF. 
OBJETIVO GENERAL:
Determinar el efecto de la crioterapia ocular sobre el factor de crecimiento endotelial 
vascular y el factor derivado del epitelio pigmentado en cerdos raza landras.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Determinar el efecto de la criocirugía a nivel intraocular, sobre la expresión de 
los factores VEGF y el PEDF.
• Cuantificar el nivel de expresión de PEDF y VEGF antes y después del 
tratamiento por crioterapia.
• Determinar la relación de permanencia entre PEDF y VEGF durante 3 meses 
post tratamiento crioquirúrgico.
• Determinar el daño celular de la crioterapia sobre las capas celulares 
corioretinales y relacionarlo con la expresión de la proteína.
DISEÑO DEL ESTUDIO 
Tipo de estudio: Prospectivo, Longitudinal, Experimental y Comparativo. 
 
MATERIALES Y MÉTODOS 
Constante: Emisión del haz del láser y exposición al tratamiento crioquirúrgico 
en el ojo derecho de los cerdos de la raza Landras. 
Variable independiente: tratamiento quirúrgico por láser y crioterapia a 
intervalos de tiempo. 
Variable dependiente: Medición cuantitativa de la expresión de los genes 
PEDF y VEGF y área de expresión en las capas celulares tratadas. 
Control interno: Expresión cuantitativa del gen GADPH y β-actina. 
Control interno negativo: Expresión del gen de la β-globina. 
Control normal: Medición cuantitativa de la expresión de los genes PEDF y 
VEGF y área de expresión en las capas celulares de ojo izquierdo sin tratamiento. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
El presente estudio se realizo en colaboración con la UNAM y el Hospital Juárez 
de México. Se utilizo para el experimento el ojo derecho de 9 cerdos de raza landras de 
20 meses de edad y se dividieron en dos grupos: el grupo uno se sometió a criocirugía y 
el segundo grupo con fotocoagulación de láser de argón, ambos fueron anestesiados 
antes de la cirugía (intraperitonealmente con 30 mg/kg pentobarbital) y se dilato la 
pupila con 2.5% de fenilefrina y 1% de tropicamida. Se realizaron en el polo posterior 
del ojo derecho aproximadamente 50 spots con láser de argon. El ojo izquierdo no será 
tratado y servirá como control normal. Después del tratamiento se toman tres animales 
de cada grupo y se sacrifican con una sobredosis de anestesia en diferentes tiempos ( 7, 
14, 21 días). Se enuclearon ambos ojos y se realizaron toma de muestra de vítreo sin 
diluir usando jeringas de insulina, colectados en tubo estéril y colocado inmediatamente 
sobre hielo, clarificada por centrifugación y rápidamente congelada a -80°C. 
 
 
 
Momento de la 
aplicación de 
fotocoagulación con 
láser de argón 
 
 
 
 
 
 
Obtención de las 
muestras 
 
 
 
 Purificación de proteínas de humor vítreo 
 El análisis de las proteínas contenidas en el humor vítreo será resuelto por 
electroforesis en cámara vertical usando acrilamida al 10%. Las proteínas serán 
visualizadas mediante tinción de commassie y subsecuentemente transferido a 
membranas de nitrocelulosa. Se utilizará como anticuerpo primario el anticuerpo de 
conejo anti-peptido PEDF o el anticuerpo monoclonal anti-PEDF. Como anticuerpo 
secundario se empleará anti IgG de conejo o anti igG de oveja. La detección se realizará 
por quimioiluminiscencia. 
 
Extracción del ADN 
En las muestras de tejido se adicionaran 500 μl de solución amortiguadora 
TE (tris 10 mM, EDTA 1 mM pH 8.0) y se centrifugaran a 10,000 rpm por 5 min. 
Cuidadosamente se descartará la solución, y de nuevo se adicionarán 400 μl de 
solución TE. Posteriormente, la muestra se incubara a 65°C con 5 μl de proteinasa K (10 
mg/ml) y 70 μl de SDS al 10%. Al finalizar se adicionaran 100μl de NaCl 5 M y 100μl de 
solución NaCl/CTAB previamente calentado a 65°C y se incubará por 10 min a 65°C. El ADN 
será purificadocon la adición de 750 μl de cloroformo:alcohol isoamílico 24:1 y con una 
centrifugación a 12000g por 5 min a temperatura ambiente. La precipitación del ADN se 
realizará con 0.6 volumenes de isopropanol, incubándolo a -20°C por 30 min. 
El ADN será recuperado mediante la centrifugación a 12000 g por 5 min a TA. Posteriormente 
el ADN es lavado con 1 ml de etanol al 70% y centrifugado a 12000 por 5 min a TA. 
Finalmente el ADN se resuspenderá en agua y almacenado a -70°C. 
 
Extracción del ARN 
 Se adicionaran a la biopsias de tejido 500 μl de solución TE pH 8.0 y se 
centrifugara a 10,000 rpm por 5 min. Cuidadosamente se descartara la solución y se 
adicionarán de nuevo 400 μl de solución amortiguadora TE 1X (Tris 10 mM, EDTA 
1 mM pH 8.0) y aproximadamente un volumen de 100μl de perlas de vidrio de 0.1 mm 
de diámetro. Posteriormente, el tejido será mecánicamente homogenizado en un des-
amalgamador por tres pulsos de 30s a 4.5 m/s, seguidas por cuatro pulsos de 15s a 6.5 
m/s. Entre cada pulso, las muestras serán mantenidas en hielo por 2-5 min. Después de la 
homogenización del tejido, el ARN será extraído de acuerdo al protocolo descrito por 
High Pure RNA Isolation Kit. La calidad y concentración del ARN total purificado será 
asegurado mediante la electroforesis en gel de agarosa, cuantificación por 
espectrofotometría y almacenamiento a -70°C. 
 
 RT-PCR 
 La reacción de la transcriptasa reversa se realizará con 0.1-1 μg de ARN total. 
La síntesis de ADNc se llevará a cabo usando el sistema Titan One Tube RT-PCR 
(Roche-applied-science). La subsecuente reacción de PCR se realizará con 10 pmol de 
cada oligonucleótido diseñado para VEGF, PEDF, GADPH y β-actina que amplifican 
los fragmentos de 191, 225, 422 y 587 pb, respectivamente. Los ciclos de temperatura 
serán las siguientes: Un ciclo de 30 min a 55ºC; otoe de 2 min a 92°C, seguidos por 25 
ciclos con 30 seg a 94ºC, 30 seg min a 60ºC y 40 seg a 68ºC; y un ciclo de 7 min a 
68ºC. Los productos amplificados serán analizados en geles de acrilamida al 8% y 
cuantificados en un analizador de imagen. El mismo protocolo de PCR será usado para 
amplificar el ADN de los genes de interés. 
 
Inmunohistoquímica 
El tejido es primeramente desparafinado a 60º C durante 1 hora, se 
realizaran dos cambios de xilol por 5 min, un cambio de alcohol-xilol por otros 5 min 
y otro de alcohol absoluto durante otros 5 min. Se Inhibirá la peroxidasa endógena con 
metanol y peróxido de hidrógeno al 3% durante 1 hora, se incubará en alcohol etílico 
durante 5 min y posteriormente se lavará con agua corriente por 5 min. Se realizaran 
2 lavados con PBS 1x tween al 0.01% durante 5 min y se agregará Suero Normal 
de Equino al 10% (diluido en PBS 1x tween al 0.01%) por 1 h o Bloqueador Universal 
libre de suero por 20- 30 min. Se decantará bloqueador y se adicionará el anticuerpo 
primario durante 5-24 horas (dilución en PBS 1x tween0.01%). Después se decantará el 
anticuerpo primario y se realizaran 2 lavados con PBS 1x tween al 0.01% por 5 min. 
Posteriormente se adicionará el anticuerpo secundario correspondiente durante 45 min 
a 1 hora y se realizaran dos lavados con PBS 1x tween al 0.01% de 5 min. Para 
revelar se utilizará 10 ml de solución diaminobencidina (1mg/ml) y se detendrá la 
reacción con agua corriente durante 30 segundos. Se incubará en hematoxilina de Harris 
1 min y luego se lavará en agua corriente. Se realizaran 2 cambios de alcohol etílico 96º 
durante 3 min, 2 cambios de alcohol absoluto durante 3 min, dos cambios de alcohol-
xilol durante 3 min, 2 cambios de xilol durante 3 min. Posteriormente se colocan en 
resina y se cubren. 
 
 
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AANNAALLIISSIISS DDEE GGEENNEESS EENN 
LLAA BBAASSEE DDEE DDAATTOOSS 
DDIISSEEÑÑOO DDEE OOLLIIGGOONNUUCCLLEEÓÓTTIIDDOOSS 
 Resumen métodos 
 
 
 
 
 
 
 
P
E
P
E
D
F
D
F
V
E
G
F
V
E
G
F
G
A
D
P
H
G
A
D
P
H
RT-PCRRT-PCR
MM
ββ
-A
C
T
IN
A
-A
C
T
IN
A
1B
Resultados
La expresión de los niveles de VEGF y PEDF se determinaron por RT-PCR. 
La figura 1A y 1B muestra los fragmentos amplificados de VEGF, PEDF y 
GAPDH, éste último utilizado como valor de referencia para determinar el
 nivel de expresión entre estos dos factores estudiados. 
Figura 1A y 1B , condiciones 
preliminares 
de amplificación.
90 180 360 ng90 180 360 ng
ARNARN
En las figuras 1A y 1B podemos ver la expresión normal de estos factores estudiados 
en los ojos no tratados. El PEDF se expresa 20% menos comparándolo con el VEGF. 
Después de 7 días post- tratamiento con fotocoagulación con láser de argón y crioterapia 
observamos un incremento en PEDF comparado con una reducción de VEGF (figura 2). 
- Figura 2: Niveles de 
expresión a la semana de 
tratamiento.
A los 14 días post-tratamiento, los cerdos tratados con láser de argon mostraron 
que tanto los factores angiogénicos como los antiangiogénicos se reestablecieron a 
condiciones normales. En los ojos tratados con crioterapia los niveles del factor derivado 
de epitelio pigmentado continuaban aumentados (figura 3).
 
 Figura 3: VEGF y PEDF a 
las 2 semanas de 
tratamiento.
 A los 21 días post-tratamiento ambos, tanto los niveles de PEDF como de VEGF, 
regresaron a condiciones normales de expresión (figura 4).
Figura 4: Niveles de 
expresión a los 21 
días.
 Nuestros resultados muestran que la crioterapia afecta los niveles de expresión del 
factor de crecimiento vascular endotelial por lo menos durante 14 días, siendo inversamente 
proporcional las condiciones de expresión con el factor derivado del epitelio pigmentado al 
existir estimulación con inhibidores físicos tales como el láser de argón y la crioterapia.
 Figura 5: resultados comparando semanas post-tx.
A continuación se muestras los resultados en gráficas que indican la expresión 
de los factores estudiados en este estudio.
- Se muestra un 
aumento en la 
expresión de PEDF.
- A los 14 días el nivel de expresión de VEGF aumenta y disminuye el de PEDF en los 
ojos tratados con láser de argón, mientras que los tratados con crioterapia continua 
aumentado el factor derivado del epitelio pigmentado y el factor de crecimiento vascular 
endotelial diminuido.
- Después de 21 días de tratamiento el factor de crecimiento vascular endotelial aumenta y 
el factor derivado del epitelio pigmentado disminuye en su expresión, como se encontraban 
en un principio y mostrado en el grupo control.
DISCUSIÓN
El presente estudio demuestra por primera vez que los niveles de expresión del 
factor de crecimiento vascular endotelial y el factor derivado del epitelio pigmentado de 
retina se ven afectados con el uso de crioterapia en un modelo porcino. Un incremento en 
los niveles del factor derivado del epitelio pigmentado se produce durante los 14 días post-
tratamiento con crioterapia, mientras que el factor de crecimiento vascular endotelial 
disminuye significativamente durante éste período, reestableciéndose a niveles normales de 
expresión después de 21 días post- tratamiento, y el factor derivado del epitelio pigmentadodisminuye drásticamente.
 Resultados similares se han reportado en estudios sobre neovascularización 
donde ambos factores se expresaron en contrabalance, en otras palabras, la sobre-expresión 
de cualesquiera de éstos dos factores afecta negativamente la expresión del otro factor 
(Gao,2002). El efecto de los niveles de expresión del factor de crecimiento vascular 
endotelial y del factor derivado del epitelio pigmentado post-tratamiento con fotocoagulación 
con láser de argón se uso como un modelo comparativo ya que éste procedimiento es uno 
de los tratamientos más usados para inducir la regresión de neovascularización, aunque el 
mecanismo exacto no es del todo entendido. Se ha demostrado que la fotocoagulación de 
retinas isquémicas en animales induce la proliferación de células epiteliales pigmentadas 
en las áreas lesionadas, cubriendo el tejido de neovascularización (Wada M 1999). 
 Un incremento paulatino en las proteínas del RNAm y del factor derivado 
del epitelio pigmentado también se ha observado, y su máxima expresión fue después 
de 2 semanas, por lo contrario, las proteinas del factor de crecimiento vascular endotelial 
se expresaron pobremente, sugiriendo que la fotocoagulación modula el proceso de 
neovascularización coroidea mediante la estimulación del factor derivado del epitelio 
pigmentado en las lesiones causadas por el láser utilizado en fotocoagulación (Ogata 
2001;202). Nosotros podemos agregar nuestros resultados al entendimiento de éstos 
tratamientos al demuestra que la crioterapia induce un efecto inversamente proporcional 
entre los factores analizados encontrando que el PEDF se encuentra sobreexpresado, 
mientras que el VEGF se encuentra en baja expresión.
Conclusiones
 Se ha demostrado que el efecto de la crioterapia induce la 
sobreexpresión del factor PEDF, sin embargo; es necesario 
determinar los niveles de permanencia de las proteínas producidas 
post-tratamiento y su distribución en el tejido. 
 Se demostrará la relación de las proteínas VEGF y PEDF con el 
estado necrótico o apoptótico del tejido estudiado. 
 MODELO DE ALTA EXPRESIÓN PDEF DE FÁCIL ACCESO, 
DONDE PUEDA COMPARARSE EL BALANCE CON VEGF.
BIBLIOGRAFIA
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