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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE QUIMICA MÉXICO, D.F. 2008 T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: Q U Í M I C A D E A L I M E N T O S P R E S E N T A : A D R I A N A V Á Z Q U E Z G I L “ESTUDIO Y EVALUACIÓN DE LAS PROPIEDADES MECÁNICAS Y DE BARRERA DE PELICULAS DE QUITOSANO Y -CARRAGENINA” UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. JURADO ASIGNADO PRESIDENTE MC. MARIA DE LOS ÁNGELES VALDIVIA LÓPEZ VOCAL Dr. ARTURO NAVARRO OCAÑA SECRETARIO Dr. ALBERTO TECANTE CORONEL 1er. SUPLENTE QFB. AGUSTÍN REYO HERRERA 2do. SUPLENTE Dra. MARICARMEN QUIRASCO BARUCH SITIO EN DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA DEPARTAMENTO DE ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGÍA LAB 313, EDIFICIO “E”, FACULTAD DE QUÍMICA, UNAM ASESOR DEL TEMA SUSTENTANTE _______________________ ______________________ Dr. ALBERTO TECANTE CORONEL ADRIANA VÁZQUEZ GIL AGRADECIMIENTOS A Dios por todas las bendiciones recibidas y por darme la oportunidad de terminar un ciclo más de mi vida. A la Universidad Nacional Autónoma de México y a su Facultad de Química por formarme como profesionista y darme la enorme satisfacción de estudiar en ellas. Al Dr. Alberto Tecante Coronel por haberme dado la oportunidad de trabajar bajo su asesoría y brindarme su apoyo, orientación, dedicación y tiempo durante la elaboración de este trabajo. A la I.A Mariana Ramírez Gilly por su disposición y apoyo técnico en el desarrollo de este trabajo. A la M. en C. María de los Ángeles Valdivia López y al QFB Agustín Reyo Herrera por sus valiosas aportaciones, comentarios y tiempo dedicado a la revisión de esta tesis. A la Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA- UNAM) por el apoyo financiero brindado en la Etapa 18 del proyecto IN204306 con el titulo “Estudio y evaluación de las propiedades funcionales de empaque y recubrimiento de membranas de hidrogeles de polisacáridos”. A mi mamá Por ser la persona mas importante en mi vida y estar siempre a mi lado, por sus consejos, cariño y por todo el amor que me ha brindado. ¡Gracias! por tu dedicación y por todos los esfuerzos que has realizado para darme lo necesario para mi realización personal y profesional, por ofrecerme un hogar y por enseñarme que el esfuerzo y el trabajo duro son el camino para lograr cualquier objetivo. ¡Te quiero mucho! DEDICATORIAS A mi abuelita Por todos sus cuidados cuando era pequeña y por cuidarme ahora desde el cielo. Por el inmenso amor y cariño que nos brindo a mis hermanos y a mi. ¡Gracias! A mis hermanos Diana y Alberto Por su amistad, cariño, comprensión, consejos y por todo el apoyo y enseñanzas que me han brindado, por que han sido y seguirán siendo una hermosa compañía a lo largo de mi vida, por ser mi familia y sobre todo por ser los seres más nobles que conozco. ¡Los quiero mucho! A mis sobrinos Melanie y Daniel Por regalarme sus sonrisas que me iluminan y alegran los días y por permitirme seguir aprendiendo a través de su inocencia. A mi Tío Miguel y mis Primos Verónica y Arturo Que directa e indirectamente siempre me han brindado su ayuda y apoyo incondicional. ¡Gracias! A Jessica y Beleguixaiba Por ser las mejores amigas que pude haber encontrado, por enseñarme de nuevo el verdadero valor y la mejor definición de la amistad, por brindarme su apoyo y escucharme en todo momento, por las historias compartidas, por todos sus consejos, su confianza y sencillamente por ser como son. ¡Las quiero mucho! A Hiromi Por todas las historias y desvelos compartidos, por los buenos y malos momentos que pasamos y por su compañía que hizo mas agradables cada uno de los semestres y sin la cual nada hubiera sido igual. ¡Gracias! A mis amigas de la facultad Cindy, Adriana Vega, Adriana Martínez, Silvia, Adriana Navarro, Marisol, Sonia, Adriana Rodríguez y Angélica por todo el apoyo, paciencia y consejos brindados, por los agradables momentos compartidos y por su gran amistad. ¡Gracias! A mis amigas Verónica B., América, Gabriela, Citlally, Dulce, Nancy, Guadalupe, Verónica A. y Susana, por los momentos compartidos, por su amistad y por que siempre están y estarán presentes en mi vida A todas y cada una de las personas que han formado parte de mi vida. ¡Gracias! Índice ÍNDICE INDICE DE FIGURAS INDICE DE CUADROS RESUMEN………………………………………………………………………………………………………………… 1 INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………………………………………. 2 OBJETIVOS……………………………………………………………………………………………………………… 4 Objetivo General……………………………………………………………………………….…………. 4 Objetivos Específicos……………………………………………………………………………………. 4 HIPÓTESIS………………………………………………………………………………………………………………. 4 CAPITULO 1. PELÍCULAS Y RECUBRIMIENTOS COMESTIBLES 1.1 Definiciones………………………………………………………………………………………………………. 5 1.2 Generalidades de películas y recubrimientos comestibles…………………………..… 6 1.2.1 Propiedades funcionales……………………………………………………………….……. 7 1.2.2 Aplicaciones………………………………………………………………………………………… 9 1.3 Materiales empleados para la formulación de películas y recubrimientos comestibles……………………………………………………………………………………………………………… 10 1.4 Aditivos………………………………………………………………………………………………………..…… 13 1.4.1 Plastificantes…………………………………………………………………………………….… 14 CAPITULO 2. QUITOSANO Y CARRAGENINA 2.1 QUITOSANO……………………………………………………………………………………………………… 15 2.1.1 Definición………………………………………………………………………………………….… 15 2.1.2 Aspectos generales……………………………………………………………………….……. 15 2.1.3 Estructura…………………………………………………………………………………………… 17 2.1.4 Propiedades………………………………………………………………………………………… 17 2.1.5 Aplicaciones………………………………………………………………………………………… 18 2.2 CARRAGENINA…………………………………………………………………………………………….…… 21 2.2.1 Definición………………………………………………………………………………………….… 21 2.2.2 Aspectos Generales………………………………………………………………………….… 21 2.2.3 Estructura…………………………………………………………………………………………… 23 2.2.4 Propiedades………………………………………………………………………………………… 24 2.2.4.1 Propiedades en solución………………………………………………….…… 24 2.2.4.2 Propiedades en gel……………………………………………………………….. 26 2.2.5 Aplicaciones………………………………………………………………………………………… 27 CAPITULO 3. ESTUDIOS PREVIOS 3.1 Películas de carragenina………………………………………………………………………………….. 31 3.2 Películas de quitosano……………………………………………………………………………………… 31 3.3 Películas de mezclas quitosano/carragenina…………………………………………………… 35 3.4 Conclusiones……………………………………………………………………………………………………..37 Índice CAPITULO 4. DESARROLLO EXPERIMENTAL 4.1 Diagrama General……………………………………………………………………………………………. 38 4.2 Materiales…………………………………………………………………………………………………………. 39 4.3 Metodología………………………………………………………………………………………………………. 39 4.3.1 Procedimiento de elaboración de películas……………………………………….. 40 4.3.2 Procedimiento de evaluación de las películas…………………………………… 41 4.3.3 Propiedades Mecánicas………………………………………………………………………. 42 4.3.3.1 Fuerza de fractura en la punción…………………………………………. 43 4.3.3.2 Fuerza de fractura en la extensión………………………………………. 43 4.3.4 Propiedades de barrera……………………………………………………………………… 44 4.3.4.1 Permeabilidad al vapor de agua…………………………………………… 44 4.3.4.2 Permeabilidad al oxígeno……………………………………………………… 46 4.4 Análisis Estadístico…………………………………………………………………………………………… 47 CAPITULO 5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 5.1 Características cualitativas………………………………………………………………………………. 48 5.2 Propiedades mecánicas……………………………………………………………………………………. 52 5.2.1 Fuerza de fractura en la punción……………………………………………………….. 53 5.2.2 Fuerza de fractura en la extensión……………………………………………………. 57 5.3 Propiedades de barrera……………………………………………………………………………………. 64 5.3.1 Permeabilidad al vapor de agua………………………………………………………… 64 5.3.2 Permeabilidad al oxígeno…………………………………………………………………… 71 CONCLUSIONES………………………………………………………………………………………………………. 78 REFERENCIAS…………………………………………………………………………………………………………… 79 APÉNDICE A Cálculos estequiométricos ……………………………………………………………….. 86 APÉNDICE B Tratamiento de datos………………………………………………………………………… 87 APÉNDICE C Películas de las formulaciones evaluadas………………………………………… 90 APÉNDICE D Análisis estadístico……………………………………………………………………………. 92 APÉNDICE E Propiedades de barrera de películas sintéticas y naturales……………. 94 Resumen RESUMEN Una forma innovadora de minimizar el impacto ambiental que generan los envases sintéticos utilizados en la industria de alimentos consiste en el desarrollo de películas y recubrimientos comestibles y/o biodegradables, los cuales no sólo representan un beneficio para el medio ambiente sino también en la mejora económica de los materiales de empaque. Los objetivos propuestos en el presente trabajo fueron el desarrollar películas de quitosano, κ-carragenina y de mezclas quitosano/κ-carragenina (películas compuestas) utilizando glicerol como plastificante, así como caracterizar sus propiedades mecánicas y de barrera. Las películas se elaboraron a partir de dispersiones de cada biopolímero seguidas de un moldeado y evaporación del solvente a 40 ºC durante 24 horas. Las películas tanto de quitosano como de κ-carragenina se presentaron homogéneas, flexibles y fácilmente manipulables, observándose una ligera tonalidad amarilla en las de quitosano mientras que las de κ-carragenina fueron transparentes. Para el caso de las películas compuestas éstas presentaron una superficie rugosa, así como con el aumento de la proporción de quitosano en las mezclas se observó a simple vista un incremento en la tonalidad amarilla de las películas. Las propiedades mecánicas se analizaron en una máquina de pruebas mecánicas mediante ensayos de fuerza de fractura en la punción y en la extensión. Las propiedades de barrera se determinaron mediante la evaluación de la permeabilidad de las películas al vapor de agua y al oxígeno, para el caso de la permeabilidad al vapor de agua ésta se calculó mediante el método modificado de Gennadios et al. (1994) y el método ASTM E96-00 (2003); en el caso de la permeabilidad al oxígeno fue determinada mediante el método ASTM D1434-82(2003). La flexibilidad y la permeabilidad al vapor de agua (WVP) y al oxigeno de las películas de quitosano, κ-carragenina y compuestas aumentaron con el incremento de la concentración de glicerol, en el caso del esfuerzo de fractura en la punción y en la extensión éstos disminuyeron como efecto del plastificante. Las películas de mezclas κ- carragenina/quitosano presentaron propiedades mecánicas y de barrera intermedias, sin observarse algún efecto sinérgico en las propiedades evaluadas. Las mejores propiedades mecánicas y de barrera encontradas entre las diez formulaciones estudiadas fueron las de películas a base de κ-carragenina con 5% de glicerol, las cuales presentaron la menor permeabilidad tanto al vapor de agua como al oxígeno y las propiedades mecánicas más altas, teniendo estas películas similar permeabilidad al oxígeno pero inferiores en las otras tres propiedades a las reportadas para polímeros sintéticos como el polietileno de alta (HDPL) y el de baja densidad (LDPL). Las películas que presentaron buenas propiedades fueron las de quitosano disperso en acético al 2% con 5% de glicerol y las películas a base de mezclas κ- carragenina/quitosano con una relación de mezcla 87:13 y glicerol al 5%. 1 Neevia docConverter 5.1 Introducción INTRODUCCION La mayoría de los materiales de empaque para alimentos es elaborada a partir de plásticos de origen sintético, muchos de los cuales no son reciclables o biodegradables, por lo cual el uso incrementado de este tipo de materiales se ha convertido en una gran problemática para el medio ambiente debido a que en los últimos años se ha generado su acumulación masiva en el planeta. Por tal situación en la actualidad se ha observado un creciente interés en la búsqueda y desarrollo de películas y recubrimientos comestibles con buenas propiedades funcionales de empaque y constituidos por materiales biodegradables, siendo éstas una alternativa viable e innovadora para incrementar la conservación y protección de los alimentos sustituyendo parcial o totalmente el uso de materiales sintéticos y reducir el impacto en la contaminación ambiental que éstos han producido. Para la formación de tales películas y recubrimientos se necesita de un componente capaz de constituir una matriz estructural con suficiente cohesión (proteínas, polisacáridos y lípidos), en muchos de los casos éstas se han elaborado a partir de materiales abundantes en la naturaleza e incluso de algunos que actualmente se consideran subproductos descartables de la industria de alimentos, lo cual ofrece la oportunidad de también disminuir estos desperdicios convirtiéndolos en materia prima (Krochta & De Mulder-Johnston, 1997; Sothornvit et al. 2003). Entre los biopolímeros más utilizados para desarrollar películas y recubrimientos comestibles se encuentran los polisacáridos, entre ellos el quitosano y la carragenina, los cuales son utilizados en el presente trabajo. El quitosano es el único polisacárido natural que contiene grupos catiónicos, es generalmente obtenido por desacetilación alcalina (sustitución de grupos acetamida por grupos amino) de la quitina, la cual es el segundo polímero más abundante en la naturaleza después de la celulosa y se encuentra principalmente en el exoesqueleto de crustáceos, insectos, así como también en las paredes celulares de varios hongos, levaduras y algas. Debido a las propiedades fisicoquímicas de este polímero, presenta una amplia aplicación en diferentes campos como medicina, farmacia, alimentación y agricultura, para el caso de películas comestibles se ha 2 Neevia docConverter 5.1 Introducción investigado debido a que este polisacárido representa una gran fuente biodegradable, no toxica, renovable y natural. La carragenina en su caso se puede definir como un grupo complejo de polisacáridos sulfatados (grupos aniónicos) extraídos de distintas especies de algas rojas de la clase rodofícea (géneros Chondrus, Gigartina, Hypnea y Euchema). Las fracciones más importantes de carragenina hansido denominadas como κ, ι y λ-carragenina, y difieren entre sí en el número y posición de los grupos éster sulfato, así como en la presencia o ausencia de moléculas 3,6-anhidro-D-galactosa. Tanto κ como ι-carragenina son importantes polisacáridos gelificantes, sin embargo en el caso de λ-carragenina ésta no gelifica, pero presenta propiedades espesantes. Entre las aplicaciones más importantes de la carragenina se encuentran el uso como agente espesante o emulsificante (Nickerson & Paulson, 2005; Shumilina & Shchipunov, 2002). En este trabajo se elaboraron películas de quitosano (polisacárido catiónico), κ-carragenina (polisacárido aniónico) y mezclas de ambos, con el objetivo de estudiar y comparar sus propiedades funcionales de empaque (de barrera y mecánicas) y determinar si existe un efecto sinérgico debido a la interacción entre los polímeros esperando mejoras en las propiedades de las películas a base de mezclas en relación con las elaboradas con los polímeros por separado, así como también conocer de qué forma influye en tales propiedades el adicionar un agente plastificante como glicerol. A la vez se buscó de forma general encontrar las formulaciones de las películas que presenten las mejores propiedades mecánicas y de barrera. 3 Neevia docConverter 5.1 Objetivos e Hipótesis OBJETIVOS » Objetivo General Evaluar las propiedades mecánicas y de barrera de películas elaboradas con quitosano, κ- carragenina y sus mezclas para conocer su potencial aplicación como recubrimientos en alimentos. » Objetivos Específicos Analizar los cambios en las propiedades mecánicas y de permeabilidad al vapor de agua y al oxigeno de películas de quitosano, κ-carragenina y sus mezclas como resultado de la adición de glicerol como plastificante. • • • • Conocer la permeabilidad al vapor de agua y al oxígeno de películas de quitosano, κ- carragenina y sus mezclas para evaluar y comparar sus propiedades de barrera. Conocer la resistencia a la punción y a la extensión de películas de quitosano, κ- carragenina y sus mezclas para evaluar y comparar sus propiedades mecánicas. Determinar la concentración de hidrocoloides y de plastificante en las películas que produzca mayor resistencia mecánica y menor permeabilidad al vapor de agua y al oxígeno. HIPÓTESIS Las películas formadas a partir de mezclas quitosano y κ-carragenina presentarán un efecto sinérgico debido a la interacción iónica entre los polímeros, observándose mejoras en las propiedades mecánicas y de barrera con respecto a las elaboradas con los polímeros por separado. 5 Neevia docConverter 5.1 Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 5 CAPITULO 1 PELÍCULAS Y RECUBRIMIENTOS COMESTIBLES 1.1 Definiciones Una película comestible es definida como una o varias capas delgadas y continuas constituidas de materiales que pueden ser ingeridos por los seres vivos, las cuales actúan como barrera a la transferencia de masa y proveen un medio para acarrear aditivos. Éstas son elaboradas a partir de sustancias poliméricas naturales que se pueden consumir sin ningún riesgo y que en ocasiones pueden llegar a aportar algunos nutrientes (Becerra-Sen, 2001; Díaz-Mora, 2003; Guilbert et al. 1995; Guzmán-Venegas, 2003; Tawill-Bouchez, 2003; Yu-Hernández, 2004). Los recubrimientos comestibles son una capa delgada de un material no tóxico y fácilmente ingerible que se forma directamente sobre un alimento, estos materiales son aplicados en su forma liquida sobre el alimento por inmersión, aspersión o goteo, mientras que las películas son estructuras preformadas y colocadas posteriormente en el alimento o entre los componentes del alimento (McHugh & Senesi, 2000). Para el caso de las películas biodegradables, éstas son elaboradas a partir de sustancias de origen natural que pueden llegar a transformarse (Figura 1) en compuestos de menor complejidad (CO2, H2O y sales minerales), mediante una despolimerización o un proceso de degradación (Tharanathan, 2003). Figura 1. Ciclo del carbono de polímeros biodegradables (Tharanathan, 2003) Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 6 1.2 Generalidades de películas y recubrimientos comestibles La aplicación intensiva de materiales sintéticos (plásticos no biodegradables) como constituyentes de empaques de alimentos, ha producido a nivel mundial un problema serio tras la acumulación de residuos sólidos, buscando reducir el impacto en la contaminación ambiental que esto genera. Una alternativa viable que ha presentado un creciente interés para la industria de alimentos consiste en el desarrollo de materiales con propiedades funcionales de empaque elaborados a partir de compuestos comestibles, reciclables y/o biodegradables. Entre dichos materiales se encuentran los denominados como películas o recubrimientos comestibles los cuales permiten minimizar el impacto ambiental, así como resultan ser una opción innovadora que puede ofrecer varias ventajas en la protección y conservación de alimentos (Krochta & De Mulder-Johnston, 1997; Yang & Paulson, 2000a). La elaboración de películas comestibles no sólo ofrece la oportunidad de disminuir la contaminación generada por los envases sintéticos, sino también la de convertir subproductos descartables de algún proceso tecnológico de la industria de alimentos en una materia prima para la elaboración de dichas películas (Becerra- Sen, 2001). Investigadores como Kester & Fennema (1986) han establecido que el desarrollo de películas comestibles y/o biodegradables, inicialmente no está diseñado con el propósito de reemplazar completamente a los materiales de empaque sintéticos, sino buscando una acción conjunta con la finalidad de mejorar la calidad de los alimentos. Las películas y recubrimientos comestibles han atraído la atención de numerosos investigadores (Biquet & Labuza, 1988; Guilbert et al. 1995; Kester & Fennema, 1986) lo que ha llevado a que hoy en día exista una gran diversidad de trabajos sobre el desarrollo, tecnología de elaboración, formulación, caracterización y de sus posibles aplicaciones. Para que las películas comestibles puedan ser aplicadas como empaques en alimentos deben cumplir algunos requisitos que se resumen en el Cuadro 1. De forma general las sustancias que se utilicen para la formación de las películas deben ser insípidas, o tener el menor sabor como sea posible, si presentan un sabor particular éste debe ser compatible con el alimento (Biquet & Labuza, 1988; McHugh & Krochta, 1994). Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 7 Cuadro 1. Requisitos y ventajas de las películas comestibles (Guilbert et al. 1995) Ventajas Condiciones Requeridas - Consumo directo con el producto - Materiales poco costosos - Posibilidad de embalaje individual de pequeños trozos - Posibilidad de empleo en el interior del alimento, por ejemplo, entre distintos componentes de un alimento heterogéneo o de una mezcla - Palatabilidad (solubilidad , dispersabilidad en la boca o durante su preparación) - Propiedades sensoriales compatibles con la naturaleza del alimento - Buenas propiedades mecánicas y de barrera - Reducción o supresión del embalaje no comestible - Disminución de la contaminación medioambiental - Estabilidad fisicoquímica, bioquímica y microbiana suficiente - Tecnología simple - Ausencia de toxicidad - Mejora de las propiedades mecánicas, sensoriales, nutricionales y de conservación: retardo de la transferencia de agua, gases, grasas y solutos disminución de las pérdidas de substancias volátiles (aromas) mejora la cohesión, conservación de la integridad del alimento; manipulación fácil protección frente a contaminantes microbianos u otros, y frente a agentes externos (H2O, O2, etc) agentesde soporte y control de la retención de aditivos (aromas, colorantes, antioxidantes, antimicrobianos) - Composición acorde con la reglamentación relativa a la aplicación alimentaría - Termosellable y/o buena adhesión a la superficie del alimento - Funcional en las condiciones de empleo - Sin contaminantes 1.2.1 Propiedades funcionales Las propiedades funcionales que ofrecen las películas comestibles dependen de los componentes de los cuales estén elaboradas. En el Cuadro 2 se presentan algunas de las propiedades funcionales que desempeñan las películas comestibles cuando son aplicadas en alimentos (Kester & Fennema, 1986; Soliva-Fortuny & Martin, 2001; Tharanathan, 2003; Yu-Hernández, 2004). Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 8 Cuadro 2. Propiedades funcionales de películas comestibles Reducir la pérdida de humedad Reducir el transporte de gases (CO2 y O2) Reducir la migración de aceites y grasas Reducir el transporte de solutos Mejorar las propiedades mecánicas y de manejo de los alimentos Proveer integridad estructural a los alimentos Retener los componentes volátiles Contener aditivos La función más importante es el control del contenido de humedad y de la actividad de agua (aw), mediante la reducción del intercambio (pérdida o ganancia) de humedad entre el alimento y el medio circundante, evitando grandes cambios los cuales pueden afectar el color y textura de los alimentos (Howard & Dewi, 1995). En este caso la naturaleza de la película o recubrimiento es de gran importancia ya que a una mayor hidrofilidad del material con el que es elaborada la película mayor será su permeabilidad al vapor de agua y menor será el control de humedad, por el contrario si el material utilizado es mas hidrófobo (de naturaleza lipidica) se presentan mejores propiedades de barrera ante la migración de humedad. En relación con aw, ésta debe mantenerse a ciertos niveles ya que es un factor critico de gran importancia para la seguridad, calidad y vida útil del alimento, debido a que durante el almacenamiento reacciones deteriorativas químicas y enzimáticas (oxidación de lípidos, obscurecimiento enzimático y reacciones de Maillard) así como el crecimiento microbiano proceden a intervalos asociados con aw y el contenido de agua en alimentos, así como adicionalmente propiedades como la textura dependen en gran parte de aw del alimento (Díaz-Mora, 2003; Yang & Paulson, 2000a). Las películas y recubrimientos comestibles también presentan la propiedad de inhibir o llegar a evitar la migración de gases (oxígeno, dióxido de carbono), aromas, lípidos y otros compuestos volátiles. El control del intercambio de gases en alimentos es muy importante, en particular el oxígeno el cual genera la oxidación de los alimentos por lo que películas con escasa permeabilidad al oxígeno permiten reducir las reacciones de oxidación (Hernández-Quiroz, 2006). También han resultado buenos vehículos para transportar e incorporar aditivos como antioxidantes, sabores y agentes antimicrobianos. En la actualidad con el desarrollo del envasado activo, estas películas han adquirido un nuevo interés ya no sólo Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 9 como vehículo de aditivos sino también de nutrientes, ya que con ellas se ha controlado con mayor facilidad la difusión de estos componentes que con las películas sintéticas (Fernández, 2000). Finalmente las películas tienen además la propiedad de impartir o mejorar la integridad mecánica y facilitar la manipulación de los alimentos. 1.2.2 Aplicaciones Las películas y recubrimientos comestibles han sido utilizadas desde tiempos antiguos, buscando la protección de los alimentos así como la extensión de su vida de anaquel. Se tiene reportado que desde el siglo XII China ha realizado una práctica habitual que consiste en el uso películas a base de ceras para cubrir principalmente a los cítricos y retardar su desecación. En el caso de Europa cerca del siglo XVI se inició la práctica de recubrir tanto frutas como piezas de carne con parafina u otros materiales grasos previniendo la deshidratación del alimento y el intercambio gaseoso. En las últimas décadas el uso de envolturas comestibles ha incrementado considerablemente (Kester & Fennema, 1986). Para determinar la aplicación que se le dará a una determinada película o recubrimiento se debe tomar en cuenta tanto sus propiedades de protección, sensoriales y funcionales, como su compatibilidad desde el punto de vista sensorial, fisicoquímico y de su naturaleza (Biquet & Labuza, 1988). Entre las aplicaciones actuales se encuentran: en el envasado de pescados, carnes, pollos, cereales y alimentos liofilizados reduciendo la deshidratación superficial con un buen material de barrera o utilizando un material hidrofílico altamente húmedo que se deseque antes del producto (Díaz-Mora, 2003); en cereales de desayuno se han utilizado recubrimientos para cubrir las pasas que se le incorporaran, previniendo la migración de humedad de las pasas hacia el cereal seco manteniendo su calidad (Krochta & De Mulder-Johnston, 1997); limitando la penetración de aceite de alimentos que se fríen mediante un previo recubrimiento con materiales hidrofílicos, frenando la incorporación de solutos durante la deshidratación osmótica de frutas, en la congelación de piezas cárnicas y en el uso de salmueras en alimentos. En el Cuadro 3 se resumen algunas de las aplicaciones más importantes en la industria de alimentos. De forma especifica en frutas y hortalizas las películas y recubrimientos Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 10 se utilizan para reducir la transferencia de humedad y oxígeno, disminuir la actividad respiratoria, en aplicación post cosecha incorporando fungicidas y dotando a las frutas y vegetales de integridad física para facilitar su posterior manipulación (Baldwin & Baker, 2001). Cuadro 3. Aplicaciones de películas comestibles en alimentos (Guilbert et al. 1995). Propósito Aplicaciones Proveer protección individual contra humedad y oxígeno Pescado fresco, quesos, carne y derivados, alimentos secos y de humedad intermedia, botanas Retardar el crecimiento microbiano externo Alimentos de humead intermedia Controlar el balance de humedad dentro de un alimento que va a ser procesado o heterogéneo Pays, pizzas, pasteles, sándwiches, alimentos congelados Mejorar las propiedades mecánicas de un alimento que va a ser procesado Cacahuates, camarones, jaiba, botanas Mejorar la integridad estructural para reforzar la estructura del alimento Carne reestructurada, alimentos liofilizados, pescado Restringir la migración de humedad Alimentos batidos, horneados y congelados, frutas Mejorar la apariencia del alimento añadiendo brillo Productos de confitería, nueces, frutas de humedad intermedia, botana, productos de panificación Impartir o mejorar color, sabor y palatabilidad Alimentos diversos Contener porciones para disolver después y proteger las piezas que estarán dentro de tazas o bolsas Nutrientes, aditivos, enzimas, sopas deshidratadas, te o café instantáneo, sazonadores y edulcorantes. 1.3 Materiales empleados para la formulación de películas y recubrimientos comestibles Según el tipo de componente que constituya las películas y recubrimientos comestibles serán las propiedades que presenten. Tales componentes se pueden dividir en tres categorías: hidrocoloides (proteínas y polisacáridos), lípidos y a partir de mezclas también llamadas películas de componentes compuestos (McHugh & Krochta, 1994). De forma general las películas que son elaboradas a partir de hidrocoloides presentan buenas propiedades de barrera a gases y lípidos, observándose más permeables al dióxido de carbono que al oxígeno, pero no es el Capitulo 1. Películasy Recubrimientos Comestibles 11 caso cuando se habla del vapor de agua frente al cual presentan poca resistencia debido a su naturaleza hidrofílica (Fernández, 2000). En relación con sus propiedades mecánicas la mayoría de las películas a base de proteínas y polisacáridos presentan propiedades mecánicas deseables. Por el contrario la mayoría de las películas elaboradas a base de materiales de naturaleza lipidica presentan propiedades mecánicas pobres pero buenas propiedades de barrera al vapor de agua. Algunos de los polímeros que se utilizan en la actualidad para elaborar películas y recubrimientos comestibles se mencionan en el Cuadro 4. Los polisacáridos tienen buenas propiedades como filmógenos, las cuales se busca aprovechar para la elaboración de películas comestibles, los más empleados son polímeros de cadena larga que producen un fuerte incremento en la viscosidad (Poovaiah, 1986; Soliva-Fortuny & Martin, 2001; Wong et al. 1994). En el caso de las proteínas éstas tienen buenas propiedades formadoras de películas, las cuales la mayoría de los casos presentan una permeabilidad al vapor de agua pobre, sin embargo tal permeabilidad es mayor en relación con la otorgada por películas a base de polisacáridos. Las proteínas utilizadas tradicionalmente son el colágeno y la gelatina, pero hoy en día existen numerosos trabajos de películas a partir de una gran variedad de proteínas tanto de origen animal como vegetal ya que éstas pueden obtenerse con una relativa facilidad (Krochta & De Mulder-Johnston, 1997; Park et al. 1994; Tanaka et al. 2001) y también a que gran parte de ellas confieren además un valor agregado, por ejemplo las proteínas lácteas (caseína y proteínas de suero) forman películas con buenas propiedades mecánicas y a la vez confieren un excelente valor nutricional (McHugh & Krochta, 1994). También se han investigado nuevas opciones para mejorar o eliminar las desventajas de las películas a base de proteínas, se ha estudiado mejorar las propiedades de barrera utilizando agentes desnaturalizantes, formadores de puentes o curtidores (Kester & Fennema, 1986). Otra desventaja es que las proteínas son sensibles a cambios de pH el cual influye en su solubilidad y por lo tanto en las propiedades finales de las películas, formándose películas con mejores propiedades sensoriales y visuales en condiciones ácidas (pH 2-4) que en condiciones alcalinas (pH 9-13) (Baldwin & Baker, 2001; Gontard et al. 1996). Para el caso de lípidos éstos otorgan a las películas propiedades de barrera excelentes principalmente al vapor de agua debido Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 12 a su naturaleza hidrofóbica, baja polaridad y capacidad de formar una red molecular densa y ordenada, sin embargo carecen de integridad y estabilidad estructural (Baldwin et al. 1997; Guzmán-Venegas, 2003). La permeabilidad al vapor de agua de películas de lípidos incrementa con el aumento de la polaridad, ramificación e instauración. La eficacia como barrera a la humedad de los lípidos que se ha reportado es (Hagenmaier & Shaw, 1990): Ceras > grasas sólidas > lecitina, acetogliceridos > aceites líquidos Además pueden cumplir otras funciones como otorgar brillo, soporte de aditivos liposolubles, protección a la oxidación y al crecimiento de microorganismo (Avena- Bustillos & Krochta, 1993; Becerra-Sen, 2001; Tawill-Bouchez, 2003). Cuadro 4. Polímeros más utilizados en la elaboración de películas. POLISACARIDOS PROTEINAS LIPIDOS Almidón - amilosa - amilopectina - almidón Hidroxipropilado Colágeno Gelatina Zeína Gluten Soya Acetogliceridos Ácidos grasos y sus ésteres - saturados - monoinsaturados Alginato Gelana Xantana Tragacanto Quitosano Garrofin Proteínas de leche - caseína - proteínas del suero Gliadinas Seroalbumina Albúmina de huevo Ceras - parafina - cera de abeja - cera de carnauba - cera de candelilla Resinas Carragenina Lactoalbumina Aceites vegetales Pectina Lecitina Celulosa - CMC - HPMC - HPC - MC Assis & Pessoa, 2004; Guilbert et al. 1995; Howard & Dewi, 1995; Wong et al. 1994; Krochta & De Mulder-Johnston, 1997; Nussinovitch & Hershko, 1996; Tharanathan, 2003. Como se mencionó anteriormente las películas a base de hidrocoloides son malas barreras al vapor de agua, en comparación con las propiedades de barrera que otorgan las películas de naturaleza lipidica. Sin embargo los hidrocoloides presentan Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 13 mejores propiedades mecánicas que los lípidos, tales ventajas y desventajas de cada uno de estos polímeros (hidrocoloides y lípidos) han llevado a la formulación de películas compuestas, las cuales se definen como un sistema multicomponente que consta de dos o más componentes que se combinan con el propósito de mejorar, complementar y aumentar sus propiedades funcionales disminuyendo las desventajas que presenta cada componente por separado. El uso de este tipo de películas es una solución viable para aprovechar las ventajas de cada biopolímero y poder llegar a obtener películas cada vez más eficientes (Fernández, 2000). Se han propuesto mezclas de hidrocoloides, sin embargo la mayoría de las investigaciones asocian un compuesto lipidico y un hidrocoloide como matriz estructural (Avena- Bustillos & Krochta, 1993; Avena-Bustillos et al. 1994 y 1997), tales mezclas se forman mediante emulsión de uno de los componentes o mediante un recubrimiento multicapa, las emulsiones favorecen estructuras más fuertes y pueden aplicarse con mayor facilidad que las multicapa, pero en el caso de los recubrimientos multicapa éstos presentan una menor permeabilidad observándose mejores propiedades de barrera que los de emulsión (Baldwin et al, 1997; Martin-Belloso et al. 2005). Otra opción para la formulación de películas compuestas es a base de purés de fruta, los cuales son constituidos principalmente por sustancias pécticas y celulósicas, así como por algunos mono y oligosacaridos. McHugh et al. (1996) desarrollaron los primeros recubrimientos a partir de puré de manzana, posteriormente McHugh & Senesi (2000) incorporaron a la formulación de dichos recubrimientos lípidos para reducir la pérdida de agua. 1.4 Aditivos El uso de aditivos en las películas comestibles tiene dos propósitos: impartir diferentes propiedades a las películas (mecánicas, nutricionales, sensoriales) y por otro lado que las películas sirvan como vehículos de aditivos que llevan a cabo una función específica como algunos conservadores los cuales son liberados de forma controlada de la película hacia el alimento que cubren (Cherry, 1999; Hernández- Quiroz, 2006; McHugh & Senesi, 2000). Capitulo 1. Películas y Recubrimientos Comestibles 14 1.4.1 Plastificantes Los plastificantes pueden definirse como compuestos de baja volatilidad que pueden ser añadidos a las películas y recubrimientos con la finalidad de modificar algunas de sus propiedades mecánicas y de permeabilidad. Reducen la fragilidad, imparten flexibilidad e incrementan la dureza y resistencia al corte de la película, ya que estos compuestos disminuyen las fuerzas intramoleculares de las cadenas adyacentes del polímero produciendo un decremento en las fuerzas de cohesión, tensión, temperatura de transición vítrea y de las propiedades de barrera a gases, solutos y vapor de agua. La influencia del plastificante depende de su concentración, estructura química, grado de dispersión en la película y del grado de interacción con el polímero (Baldwin et al. 1997; Gontard et al. 1993; Hagenmaier & Shaw, 1990; Kester & Fennema, 1986). Los plastificantes utilizados deben de ser compatibles con el polímero, de solubilidad similar al solvente utilizado y estable en el sistemapolímero-disolvente, entre otras propiedades también se deben tomar en cuenta su estabilidad química, higroscopicidad, color y sabor (Guzmán-Venegas, 2003). Existen dos tipos de efecto plastificante: la plastificación interna debida a la modificación de la estructura química del polímero y la plastificación externa por adición de un agente que modifica la organización en la estructura tridimensional del polímero, el segundo tipo es el que se emplea en el caso de películas y recubrimientos comestibles. Entre los plastificantes más usados en la industria de alimentos son (Yu-Hernández, 2004; Howard & Dewi, 1995; McHugh & Senesi, 2000; Rakotonirainy et al, 2001): Mono, di y oligosacaridos (glucosa, jarabes de fructosa o glucosa, miel) Polioles (sorbitol, glicerol, polietilenglicol y los derivados del glicerol) Lípidos y derivados (ácidos grasos, monoacilgliceroles, derivados éster, fosfolípidos, aceites, acetogliceridos, lecitina, ceras) Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 15 CAPITULO 2 QUITOSANO Y CARRAGENINA 2.1 QUITOSANO 2.1.1 Definición El termino quitosano se refiere al único polímero natural con carácter policatiónico, obtenido principalmente de la desacetilación parcial de la quitina y se encuentra presente de forma natural en algunas algas, hongos y levaduras (Becerra-Sen, 2001; Rosca et al. 2005). 2.1.2 Aspectos generales El quitosano es un polisacárido cuya estructura es menos acetilada que la quitina (Tawill-Bouchez, 2003). Aunque se presenta de forma natural en ciertos hongos su contenido es en bajas concentraciones, por lo tanto su producción está basada principalmente en el procesado de su precursor, la quitina, la cual se encuentra extensamente distribuida en la naturaleza (Martin, 2002). La quitina fue encontrada por primera vez en hongos superiores en 1811 por el profesor francés Henri Braconnot, quien le asignó el nombre de fungina. No fue hasta 1823 cuando Odier le dio el nombre de quitina, tras aislar una fracción similar de exoesqueletos de insectos como escarabajos. Ya en 1859 Rouget observó que tratando quitina con hidróxido de sodio concentrado obtenía un nuevo producto al que denominó quitina modificada y que era soluble en ácidos orgánicos, pero no es hasta 1894 cuando Hoppe-Seyler sometió la quitina a reflujo a 180 ºC en hidróxido de potasio y observó que el producto que se forma era bastante soluble en ácido y lo denominó quitosano (Martin, 2002; Neto et al. 2005, Sandford et al. 1989). Hoy en día tanto la quitina como el quitosano son ampliamente estudiados debido a que son fuentes renovables, poseen interesantes propiedades fisicoquímicas y presentan una gran variedad de formas de uso (Sandford et al, 1989). La quitina (del griego tunic, envoltura) es uno de los polisacáridos más abundantes sobre la tierra, se encuentra en una gran variedad de animales marinos, insectos, algas, hongos y levaduras. Forma parte principalmente de la pared celular de los Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 16 hongos, levaduras y algas (verdes, cafés, rojas), del exoesqueleto de crustáceos e insectos; se ha encontrado en los caparazones y cáscaras de crustáceos como camarones, jaibas, cangrejos, almejas, ostras, calamares y langostas, así como en las alas de algunos insectos (González et al. 2001; Barrientos-Ramírez, 1999; Díaz- Mora, 2003; Guzmán-Venegas, 2003; Robyt, 1998). La cantidad de quitina presente varia de forma considerable con el organismo, el órgano quitinoso o estructura, encontrándose desde trazas hasta un 80% de la fracción orgánica. La función principal de la quitina en dichos organismos es actuar como material estructural y de defensa, mejorando la rigidez mecánica para el mantenimiento de la morfología (Martin, 2002). La fuente potencial de este polisacárido es a partir de crustáceos debido principalmente por su abundancia como residuos de la industria pesquera y en menor proporción es obtenida de la industria de la fermentación basada en hongos, ambas fuentes permiten un soporte barato para utilizar este polisacárido en aplicaciones a gran escala (Kennedy, 1988). Aproximadamente un 75% del peso vivo de los crustáceos es desechado, y entre un 20-58% peso seco de estos desechos es quitina. En la actualidad se ha llegado a observar que la industria pesquera a nivel mundial genera una gran cantidad de subproductos de contenido quitinoso, los cuales podrían ascender a más de 1, 000, 000 de toneladas. Este gran volumen de desechos ha incrementado el interés de investigadores los cuales buscan la eliminación del problema ambiental generado por esta industria mediante la explotación económicamente beneficiosa de estos desechos, con la búsqueda de posibles usos así como la transformación de la quitina en productos de mayor valor y aplicabilidad como el quitosano, permitiendo de esta forma disminuir o llegar a eliminar la contaminación ambiental generada por residuos marinos. La celulosa es el polisacárido más abundante sólo en términos de ocurrencia estática, siendo la quitina mayor en términos de metabolismo dinámico, ya que este polisacárido excede la regeneración anual de la celulosa, que es de 1.3 x 109 toneladas por año mientras que la síntesis de quitina a partir de crustáceos se ha estimado a 2.3 x 109 toneladas por año, algunos autores han llegado a citar una producción de quitina de 1011 toneladas por año (Martin, 2002). A pesar de tal abundancia la aplicación de este polisacárido biotecnológicamente, así como a nivel industrial se dificulta debido a su baja solubilidad en agua, por lo cual se ha Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 17 investigado y optado por la búsqueda de derivados, siendo el más importante el quitosano (forma desacetilada de la quitina) el cual es soluble en agua por lo que ha presentado numerosas aplicaciones. Se ha reportado su uso en una gran gama de productos de cuidado personal y de la salud, así como en la industria de alimentos y farmacéutica (Lárez, 2003; 2006). Actualmente tanto la quitina como el quitosano son producidos a gran escala en países como India, Japón, Polonia, Noruega y Australia, sin embargo aun en muchos países como México y Chile que tienen este tipo de recursos no se han empezado a explotar (Becerra-Sen, 2001). 2.1.3 Estructura El quitosano considerado una amina primaria, es un polímero lineal constituido mayoritariamente por unidades repetidas de D-glucosamina (2-amino-2-deoxi-D- glucopiranosa) y una baja cantidad de residuos N-acetilglucosamina (2-acetamido- 2-deoxi-D-glucopiranosa) unidos por enlaces glucosidicos β(1,4), la estructura del quitosano se puede observar en la Figura 2 (Assis & Pessoa, 2004; Berth & Dautzenberg, 2002; Robyt, 1998; Sashiwa & Shigemasa, 1999; Tawill-Bouchez, 2003). Figura 2. Estructura química del quitosano 2.1.4 Propiedades El quitosano es diferente a la quitina ya que contiene una mayor proporción de grupos de D-glucosamina con respecto a N-acetil-D-glucosamina, por lo cual tiene una mayor cantidad de grupos amino libres que causan que sea fácilmente disuelto en soluciones de bajo pH (Rwei et al, 2005; Sashiwa & Shigemasa, 1999). La presencia de grupos amino a lo largo de la cadena de quitosano permite la disolución de esta macromolécula en disoluciones de ácidos diluidos, por medio de la protonación de esos grupos, mediante el siguiente equilibrio: NH2 + HA NH3 + + A- Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 18 La densidad de carga del quitosano depende del grado de acetilación que presente la cadena, a bajo grado de acetilación significa un polion altamente cargado en solución ácida, una desacetilación completa difícilmente se alcanza, sin embargo en algunos estudios se ha reportadoque la solubilidad del quitosano en ácidos diluidos se logra a partir de un grado de desacetilacion de 60% (Berth & Dautzenberg, 2002). El quitosano es un polímero catiónico dependiente del pH, cuando el valor del pH de la solución de quitosano es mayor a su pKa=6.5 es insoluble, mientras que a menor pH el quitosano es una macromolécula cargada positivamente y soluble en agua, es considerado como ácido débil. El quitosano se disuelve a bajas concentraciones de ácidos orgánicos acuosos, por ejemplo ácido acético, láctico, fórmico y también en ácidos inorgánicos (clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico y perclórico diluidos), dando en todos los casos soluciones altamente viscosas. El grado de solubilidad depende de la concentración y del tipo de ácido. Este polímero es insoluble en ácido sulfúrico diluido y presenta una solubilidad limitada en ácido fosfórico. La viscosidad de soluciones de quitosano es grandemente afectada por el grado de acetilación y el peso molecular, este polisacárido produce en general soluciones altamente viscosas (Kennedy, 1988, Sandford et al. 1989). Propiedades funcionales Entre las propiedades funcionales que presenta el quitosano se encuentran baja toxicidad, biodegradable, biocompatible, actividad terapéutica, hemostático, hipocolesterémico, bacteriostático, propiedades antitumorales, formación de películas, adsorción de metales, capacidad de gelificación, interacción con péptidos o proteínas (Neto et al. 2005; Rosca et al. 2005). A la vez este polisacárido es un excelente floculante (adhiriéndose por su carga negativa) y quelante de iones como Fe+3, Cu+2, de metales tóxicos como Cd, Hg, Pb y Ni. 2.1.5 Aplicaciones Debido a las propiedades fisicoquímicas y funcionales que presenta, así como al ser el único polielectrolito catiónico natural, el interés que se tiene hacia el quitosano va en aumento. Este es particularmente enfocado a la gran variedad de aplicaciones y formas de uso que puede tener, las cuales han llegado a abarcar varios campos, Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 19 entre ellos: tratamiento de aguas, medicina, biotecnología, cosméticos y productos de cuidado personal, industria papelera y textil (Cuadro 5). Aplicaciones en la industria de alimentos El quitosano hoy en día en la industria de alimentos tiene varias aplicaciones ya sea como aditivo en varios productos debido a las propiedades que presenta como espesante, emulsificante y gelificante, así como mejorador de textura ya que fija agua y grasa. Este también es utilizado como un estabilizante del color, como antioxidante debido a su habilidad de quelar iones metálicos involucrados en la catálisis de reacciones oxidativas, así como agente coadyuvante para extender la vida de anaquel de encurtidos (Kennedy, 1988; Martin, 2002). En bebidas este polímero es aplicado como un agente floculante de taninos y proteínas, principalmente en la clarificación de vinos y zumos, a la vez retarda el obscurecimiento enzimático de jugos y se emplea como conservante (Berth & Dautzenberg, 2002). Durante la elaboración del vinagre previene la precipitación, en el caso de galletas y pan evita la disminución del volumen de la masa y es utilizado como aditivo en alimentos para animales. Entre otros usos se encuentran como liberador de ingredientes funcionales, desacidificador del extracto de café, coagulante de suero de quesería, regulador de la formación de cristales de hielo en alimentos congelados, adicionado como fibra dietética y como agente purificador de azúcar. Tanto la quitina como el quitosano tienen la capacidad de formar películas biodegradables las cuales han sido extensamente estudiadas y se han llegado a considerar una opción innovadora para la aplicación de éstas en envases de alimentos ya que presentan buenas propiedades mecánicas y de barrera (Chen & Hwa, 1996; Díaz-Mora, 2003; Peral y Gartzia, 2002). Agricultura: Las principales aplicaciones son como sistema liberador de fertilizantes, pesticidas y herbicidas; se ha utilizado para recubrir frutas y hortalizas frescas en tratamientos postcosecha con el fin de inhibir crecimiento microbiano y obtener una mejor conservación, como bioestimulante del crecimiento resultando en un incremento en la producción de cosecha, en recubrimientos de semillas, raíces y hojas con películas de quitosano para su conservación durante el almacenamiento (Hernández-Quiroz, 2006; Martin, 2002). Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 20 Cuadro 5. Áreas de aplicación y formas de uso del quitosano Aplicación Ejemplo Tratamiento de aguas Remoción de metales, floculante/coagulante, filtración, desalinización Pulpa y papel Tratamientos de superficie, papel fotográfico, papel carbón para copias, aditivo procesador Textiles Tratamiento de acabado, fijador de colorantes, filamentos para tejidos Medicina Vasos sanguíneos artificiales, antiinflamatorios, control del colesterol, inhibidor de tumores, propiedad antivirales, inhibición de la placa dental, vendas, piel artificial, lentes de contacto, liberación de fármacos, implantes de huesos, acelera la cicatrización de heridas, estimula el sistema inmune, inhibe el crecimiento bacteriano. Cosméticos Maquillaje, esmalte para uñas, humectantes, fijador, shampoo, lociones, crema para manos, pasta dental Biotecnología Inmovilización de enzimas, recuperación de células, inmovilización de células Cromatografía Soporte de intercambio catiónico Agente antimicrobiano Bactericida, fungicida, aditivo de insecticidas Agricultura Revestimiento de semillas y de hojas, fertilizantes hidropónicos, liberación controlada de agroquímicos Alimentos Remoción de la turbidez de líquidos, preservativo , estabilizador de color, productos para perder peso, empaques biodegradables, clarificación de vinos y jugos cubiertas protectoras de frutas, clarificación y desacidificación de bebidas de fruta, agente de control de textura, agente emulsificante y estabilizador de color Calidad Nutricional Fibra dietética, agente antigastritis Productos de Separación Separación quiral de fármacos, bioseparación, preevaporación Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 21 2.2 CARRAGENINA 2.2.1 Definición La carragenina se puede definir como un término genérico establecido para una familia de polisacáridos lineales galactano sulfatados, extraídos de ciertas especies de algas marinas de la clase Rhodophyceae. 2.2.2 Aspectos generales Las algas son un grupo fundamentalmente de organismos marinos que crecen a lo largo de las costas, se encuentran presentes en forma adherida a las rocas y se clasifican con base en el pigmento que contienen mayoritariamente encontrándose algas verdes (Clorofíceas), pardas (Feofíceas) y rojas (Rodofíceas). Gran parte de los polisacáridos sulfatados provienen de las algas marinas rojas donde cumplen la función biológica de ser parte integral de la estructura rígida de sus paredes celulares, las cuales están conformadas principalmente de polisacáridos como celulosa, agar, furcelarano y carragenina, pudiendo éstos llegar a constituir entre un 30 y 70% del peso seco de la pared celular dependiendo del género, factores ambientales y condiciones de crecimiento. En relación con dichos polisacáridos la celulosa (polisacárido no sulfatado) es encontrada como componente minoritario, variando entre 1 y 8%, como componente mayoritario se presenta de forma predominante alguno de los polisacáridos sulfatados (agar, furcelarano o carragenina) en función del género y la especie del alga (Hernández-Hernández, 1999; Badui, 1994). Por ejemplo, en el género Chondrus el principal polisacárido sulfatado es la carragenina y en el caso del género Furcellaria el predominante es furcelarano. Más específicamente la función de la carrageninaes otorgarle a las algas una estructura flexible y gelatinosa la cual es requerida para que estos organismos tengan libertad de movimiento y puedan soportar las variaciones de tensiones generadas por el movimiento de la marea. Las carrageninas se distribuyen de diversas maneras en la estructura de las algas diferenciándose de especie a especie, localizándose en algunas especies en la matriz intercelular, en otras en las membranas celulares o en algunos casos en ambas. La carragenina es un polisacárido complejo que presenta varias fracciones (,,,,, las cuales difieren entre sí en el grado de sulfatación y la presencia o Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 22 ausencia de un anillo anhidro (Figura 5). Estas fracciones son extraídas en diferente proporción de varias algas marinas pertenecientes principalmente a las familias Gigartinaceae, Hypneaceae y Solieriacea, encontrándose como forma predominante la producción de carragenina a través de la especie Chondrus crispus también llamado Musgo Irlandés y en menor proporción en la actualidad se extrae a partir de numerosas especies de los géneros Iridaea, Gigartina, Hypnea y Eucheuma. Las algas marinas rojas son cultivadas principalmente en las costas de Norte América, Corea, Japón, Francia, Filipinas, Indonesia, Chile y España (Badui, 1994; Flores- Serralde, 2006; Robyt, 1998; Rochas et al. 1989). Diferentes especies de algas marinas rojas aun pertenecientes al mismo género producen carrageninas con diferentes proporciones de las fracciones antes mencionadas, otros factores como condiciones ambientales, la zona donde fueron cultivadas, el proceso de extracción, así como el que la mayoría de las preparaciones comerciales consisten de mezclas de varias fracciones, influyen en la composición final de la carragenina, resultando en una gran variedad de propiedades fisicoquímicas y funcionales que se pueden obtener a partir de este polisacárido. Rochas et al. (1989) describen que además pueden existir algunas estructuras hibridas en dichas mezclas con las cuales se puede explicar una mayor heterogeneicidad de los extractos, por ejemplo las estructuras hibridas que se pueden presentar entre mezclas de las fracciones y carragenina, se pueden observar en la Figura 3. Figura 3. (a) Estructura hibrida de secuencias cortas de iota carragenina encontradas de forma aleatoria en cadenas de kappa. (b) Estructura hibrida de secuencias largas de iota carragenina localizadas en cadenas de kappa. (c) Mezcla de cadenas puras de kappa y cadenas puras de iota (Rochas et al. 1989). Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 23 2.2.3 Estructura Las carrageninas son polisacáridos lineales de galactanas sulfatadas del tipo (AB)n, cuya estructura base es una secuencia repetitiva de un disacárido, Carrabiosa (Figura 4), el cual está conformado por residuos de D-galactopiranosilo unidos alternadamente por enlaces glucosidicos (13) y (14) (Kara et al., 2006; Van de Velde & De Ruiter, 2002). Figura 4. Carrabiosa: unidad básica de las fracciones de carragenina (Stanley, 1990) Las fracciones de carragenina se diferencian entre ellas por la presencia o ausencia de moléculas 3,6-anhidro-D-galactosa, así como por la posición y cantidad de los carbonos sustituidos por grupos éster sulfato en la molécula de D-galactosa, dichas fracciones pueden llegar a presentar un contenido de grupos éster sulfato entre 15 y 40% dotando al polisacárido de una carga neta negativa por lo cual se le considera como un polielectrolito. Las fracciones que hasta la fecha se han identificado son tradicionalmente identificadas por un prefijo griego, denominadas como kappa (), iota (), lambda (), mu (), nu (), theta () y xi ()-carrageninas. De la cuales las fracciones de mayor importancia comercial son -, - y -carragenina, siendo menos comunes y encontradas de forma minoritaria -, -, -, -carragenina (Badui, 1994; Stanley, 1990; Guzmán-Manjarrez, 2001). Las estructuras de cada fracción se muestran más detalladamente en la Figura 5. -Carragenina La -carragenina es una galactana no ramificada, conformada por residuos lineales alternados de (13)--D-galactopiranosa-4-sulfato y (14)-3,6-anhidro--D- galactopiranosa y puede llegar a presentar pequeñas proporciones de (14)-D- galactopiranosa-6-sulfato. La -carragenina de grado alimenticio puede llegar a contener un máximo de 34% de residuos 3,6-anhidro--D-galactopiranosa y aproximadamente 25% de grupos éster sulfato en peso (Kennedy, 1988). Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 24 Figura 5. Representación esquemática de las diferentes unidades repetitivas de las fracciones de carragenina. (Stanley, 1990; Flores-Serralde, 2006) 2.2.4 Propiedades Las diferencias estructurales entre las fracciones de carragenina, factores ambientales y variaciones en la fuente y en los métodos de extracción, permiten obtener una gran diversidad de propiedades fisicoquímicas y funcionales a partir de este polisacárido (Badui, 1994; Rangel-Álvarez, 2000). 2.2.4.1 Propiedades en solución De forma general las carrageninas son solubles en agua e insolubles en solventes orgánicos, tales propiedades de solubilidad son influenciadas por varios factores, como son: tipo de carragenina, temperatura, pH, presencia de contra iones u otros solutos, a la vez son afectadas por la forma de sal que presentan los grupos éster sulfato. Con respecto al tipo de carragenina la presencia de un anillo anhidro en la Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 25 molécula le da cierta hidrofobicidad haciéndola menos soluble, mientras que la presencia de grupos éster sulfato e hidroxilo en la estructura le da a las moléculas un mayor carácter hidrofílico haciéndolas más solubles, así de esta forma en el caso de -carragenina es la fracción menos soluble ya que contiene en su estructura unidades 3,6-anhidro y una menor cantidad de grupos hidrofílicos (un grupo éster sulfato). Las carrageninas comerciales son disponibles como sus sales de calcio, sodio o potasio, debido a que presentan una mayor estabilidad, en relación con la forma de sal que presentan los grupos éster sulfato de las carrageninas la solubilidad es influenciada de la siguiente forma: las sales de sodio son generalmente más solubles mientras que las formas de potasio y calcio se disuelven con mayor dificultad. Las sales de sodio de carragenina son solubles en agua fría, mientras que sus sales de otros cationes tales como calcio y potasio no se disuelven completamente pero llegan a exhibir cierto grado de hidratación, para que se disuelvan en su totalidad estas sales requieren de un ligero calentamiento a temperaturas mayores de 75 ºC. La solubilidad también es afectada por la presencia de otros solutos, debido principalmente a la competencia que se establece por el agua disponible, así como por la alteración del estado de hidratación de la carragenina, la solubilidad de la fracción es la más sensible a la presencia de otros solutos (Guzmán-Manjarrez, 2001; Stanley, 1990; Van de Velde & De Ruiter, 2002). La viscosidad al igual que la solubilidad es altamente dependiente de factores como el tipo de carragenina, peso molecular, concentración, pH, presencia de otros solutos y de la temperatura. La viscosidad de las soluciones de carragenina presenta un comportamiento típico de polímeros lineales que contienen grupos cargados, es decir el aumento de forma exponencial de la viscosidad con el incremento del peso molecular y la concentración del polisacárido. La temperatura influye inversamente es decir la viscosidad disminuye exponencialmente a medida que incrementa la temperatura. El efecto de la presencia de ciertos cationes en la viscosidad de soluciones de este polímero,se debe a una reducción de la repulsión electrostática entre los grupos sulfato lo que genera una disminución en la viscosidad, un aumento muy grande en la concentración de dichos cationes puede llevar a favorecer la formación de un gel (Kennedy, 1988; Stanley, 1990; Van de Velde & De Ruiter, 2002). Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 26 2.2.4.2 Propiedades en gel Una de las principales características de la carragenina es su capacidad de gelificación, por lo cual las diferentes fracciones de este polímero se clasifican con base en esta propiedad de acuerdo con su capacidad o incapacidad para formar geles. Las fracciones , , y -carragenina, así como sus híbridos se encuentran dentro de las gelificantes, por otro lado las fracciones , y -carragenina pertenecen al grupo de las no gelificantes. Las carrageninas gelificantes requieren inicialmente un calentamiento para llevarlas a solución y posteriormente al enfriar las soluciones se forme el gel. Las características que presente el gel así como su calidad dependen de el tipo de carragenina, concentración del polímero, cantidad y tipo de cationes gelificantes (Cuadro 6), tamaño del catión y presencia de solutos en el sistema (Badui, 1994). Con base en el tipo de carragenina el menor contenido de grupos éster sulfato en la carragenina es lo que genera los geles más rígidos, menos elásticos, frágiles y que se requiera menor concentración de polímero para la formación del gel, carrageninas con una mayor presencia de grupos 3, 6-anhidro generan geles mas rígidos (Kara et al. 2006). La fracción -carragenina forma geles fuertes, termorreversibles, rígidos, frágiles, inestables a congelación-descongelación, quebradizos después de su enfriamiento, presentan histéresis, su temperatura de fusión es superior a la de formación del gel y son susceptibles a presentar elevada sinéresis (Guzmán-Manjarrez, 2001). La gelificación de -carragenina es promovida por cationes, la naturaleza de éstos determina las propiedades del gel como su fuerza, encontrando geles rígidos que son formados por cationes como K+, Ca2+, NH4 +, Rb+ y Cs+, mientras que los geles débiles son formados utilizando Na+ y Li+ los cuales no son cationes gelificantes muy efectivos debido a que presentan un diámetro iónico grande. -carragenina forma el gel más fuerte con el ion K+, estos geles son puros, claros y elásticos, la fuerza de dichos geles aumenta a medida que la concentración de K+ incrementa (Flores- Serralde, 2006; Robyt, 1998). Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 27 Cuadro 6. Resumen de propiedades en solución de , y-carragenina y en su forma de gel de y-carragenina. Propiedad Solubilidad Agua caliente Soluble a más de 70 ºC Soluble a más de 70ºC Soluble Agua fría Soluble sal de Na, insoluble sales de K y Ca Soluble sal de Na, Sales de Ca san soluciones tixotrópicas Soluble en todas las sales Leche caliente Soluble Soluble Soluble Leche fría Insoluble, pero se hincha marcadamente insolubles Soluble Soluciones de azúcar concentradas Soluble en caliente No fácilmente solubles Soluble en caliente Soluciones de sal concentradas Insolubles Soluble en caliente Soluble en caliente Viscosidad en solución Baja Media ----- Gelificación Efecto de cationes Gel más fuerte con iones K Gel más fuerte con iones Ca No gelifica Tipo de gel Fuerte y frágil con sinéresis Elástico y cohesivo sin sinéresis No gelifica Estabilidad congelación/descongelación No estable Si estable No Estabilidad pH Neutro y alcalino Estable Estable Estable Ácido (< 4) Hidrólisis en solución. Estable en gel Hidrólisis en solución Estable en gel Hidrólisis en solución 2.2.5 Aplicaciones Las carrageninas tienen un amplio campo de aplicaciones no sólo en la industria de alimentos, sino también en la industria farmacéutica, agricultura, cosméticos y aplicaciones industriales como la explotación minera. Debido a la gran variedad de propiedades que se pueden obtener a partir de este polímero su aplicación es muy versátil, se emplean comúnmente como gelificantes, para incrementar la viscosidad, como estabilizantes y espesantes (Rochas et al. 1989). El 80% de la producción total de carragenina se utiliza en preparaciones de alimentos e industrias Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 28 relacionadas con alimentos, del 20% restante una gran proporción es utilizado en aplicaciones farmacéuticas y cosméticos. Aplicaciones en la industria de alimentos La carragenina se utiliza en alimentos como agente gelificante, espesante y estabilizante, proporciona atributos organolépticos como suavidad, cuerpo, carácter cremoso, palatabilidad y una mejor apariencia. Debido a la alta capacidad de las carrageninas de interaccionar con las proteínas de la leche, permite que se empleen en distintos productos lácteos, tales como postres congelados, queso cottage, crema, leche de chocolate, yogurt, helados y en productos instantáneos. En varios estudios se ha visto que -carragenina estabiliza las caseínas y lo que evita la precipitación por presencia de iones calcio, esta interacción entre carragenina y caseína es dependiente del pH. La carragenina se utiliza para estabilizar leches maternizadas, el suero de helados, la grasa en leche evaporada y otros productos lácteos. En la leche evaporada previene la separación de grasa y proteína, también se utiliza para estabilizar yogurt al cual se le añade fruta. En el caso de helados y sorbetes no se utiliza como estabilizante primario ya que incrementa la viscosidad de la mezcla, por lo general se utiliza como primario goma guar o CMC, sin embargo éstos tienden a causar separación del suero en la mezcla de helado, por lo cual se utiliza un estabilizante secundario que es -carragenina que previene de forma efectiva el desuerado durante el almacenamiento de la mezcla no congelada y bajo condiciones congelación/descongelación. Este polímero también reduce la cristalización de la lactosa y por su naturaleza hidrofílica retiene humedad manteniendo la calidad en varios postres (Flores-Serralde, 2006). En el caso de quesos la carragenina se utiliza en combinación con otras gomas para prevenir la separación de grasa y suero, así como para mejorar la producción y en imitaciones de queso este polímero duplica las propiedades de textura a un menor costo. Aparte de aplicaciones en leche, la carragenina se utiliza en agua principalmente en postres de agua que no requieren refrigeración (Stanley, 1990). Se adiciona como mezcla seca en productos que son reconstituidos por el consumidor o formuladas para preparaciones en agua caliente o fría. También en algunos productos cárnicos se adiciona buscando texturas y propiedades reológicas adecuadas y como Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 29 recubrimiento en pescado congelado para protegerlo de quemaduras por la congelación o desintegración mecánica durante su manejo. Otras aplicaciones más recientes de las carrageninas en alimentos son en estabilización de otras proteínas como la de soya y las del cacahuate, también con base en su capacidad de interaccionar con proteínas se utilizan en la clarificación de bebidas como cerveza y algunos vinos. Se ha utilizado para sustituir el almidón en alimentos dietéticos ya que la carragenina no es metabolizable (Badui, 1994). La -carragenina y mezclas con -carragenina se han utilizado en combinación con goma guar en alimentos para mascotas, para proporcionar textura en condimentos, pizzas, salsas y jaleas. En un caso especial -carragenina al no formar geles se utiliza con la finalidad de aumentar la viscosidad de jarabes, miel y algunos aderezos (Stanley,1990; Van de Velde & De Ruiter, 2002). En el Cuadro 7 se presentan de forma resumida las aplicaciones más importantes de carragenina en la industria de alimentos. Neevia docConverter 5.1 Capitulo 2. Quitosano y Carragenina 30 Cuadro 7. Aplicaciones típicas de carragenina en alimentos (Stanley, 1990, Van de Velde, 2002) Uso Tipo de Carragenina Función Nivel de uso (%) Postres de agua gelificados + Gelificación 0.6-0.9 Geles con pocas calorías + Gelificación 0.5-1.0 Flanes cocinados , + Gelificación 0.2-0.3 Natillas preparadas frías , Espesante, gelificación 0.2-0.3 Desayunos instantáneos Suspensión, cuerpo 0.1-0.2 Leche de chocolate , Suspensión, sensación de boca 0.01-0.03 Leche desnatada , Emulsificante 0.05 Leche batida , Estabilización de la emulsión 0.01-0.05 Helado + GG, XG Prevención del suero, estabilización de emulsión, control de fusión 0.01-0.02 Crema batida Estabiliza aire incorporado 0.5-0.15 Leche de soya + Suspensión, sensación en la boca 0.02-0.04 Queso procesado Mejora el rebanado, control de fusión 0.05-3 Carnes conservadas y procesadas Retención de humedad y propiedades de rebanado 0.6 Preparaciones de ensalada Estabilización de hierbas en suspensión 0.3 Salsas Cuerpo 0.2-0.5 Pays rellenos Reduce almidón 0.1-0.2 Jarabes , Suspensión y cuerpo 0.3-0.5 Clarificación de vinos y cerveza Complejación de proteínas -------- Gomas del vino Crear estructura -------- Alimentos para mascotas estabilización de grasa, espesante, suspensión y gelificación 0.5-0.1 Geles de pescado Gelificación 0.5-0.1 Polvos de bebidas de frutas y concentrados congelados Cuerpo Reducción de pulpa 0.1-0.2 0.1-0.2 Leche de imitación Cuerpo, estabilización de grasa 0.5 Yogurt Cuerpo, Suspensión de frutas 0.2-0.5 Cremas para café estabilización de emulsión 0.1-0.2 GG= goma guar, XG= Goma Xantana Neevia docConverter 5.1 Capitulo 3. Estudios Previos 31 CAPITULO 3 ESTUDIOS PREVIOS 3.1 Películas de carragenina En la literatura se tiene reportada una basta cantidad de investigaciones sobre la carragenina, la mayoría dirigidas a sus principales aplicaciones en la industria de alimentos como espesante y gelificante. En relación con su uso en películas comestibles existen pocos trabajos reportados y en ellos se ha estudiado la efectividad de las películas de carragenina para retardar la pérdida de humedad de los alimentos, como portadoras de agentes antimicrobianos y como barrera al oxígeno. Martín-Belloso et al. (2005) citan algunas investigaciones sobre películas elaboradas a base de carragenina: Bryan (1972) utilizó películas de carragenina para la conservación de mitades de pomelo y de uvas, debido a su propiedad de actuar como barrera a la humedad buscando reducir la deshidratación, así como conservar sus propiedades sensoriales intactas. Lee et al. (2003) consiguieron disminuir la velocidad de respiración de rodajas de manzana y mejorar el efecto antioxidante de distintos agentes contenidos en la matriz de la película comestible elaborada con 0.5% de carragenina. Otros estudios son citados por Krochta & De Mulder-Johston (1997) en este caso sobre el uso de la carragenina como recubrimiento: Pearce & Lavers (1949) observaron la efectividad de recubrimientos de carragenina como barrera al oxígeno en piezas de ave de corral. Guiseley et al. (1980) buscaron la extensión de la vida de anaquel en piezas de ave de corral almacenadas en frio, así como la protección al intercambio de humedad y a la desintegración mecánica en pescado congelado. A la vez Kester & Fennema (1986) han citado investigaciones realizadas por Torres et al. (1985) con recubrimientos a base de -carragenina. 3.2 Películas de quitosano Las películas a base de quitosano han tenido un creciente interés debido a las propiedades funcionales que presenta este polímero, lo que ha llevado a que hoy en día exista un gran número de investigaciones en las que se estudian variaciones en la formulación de películas y recubrimientos, métodos de preparación, adición de Neevia docConverter 5.1 Capitulo 3. Estudios Previos 32 plastificantes u otros aditivos, propiedades mecánicas y de barrera, efecto en la vida de anaquel de productos frescos y su efectividad como agente antimicrobiano. Wiles et al. (2000), evaluaron el coeficiente de transmisión de vapor de agua (WVTR) y la absorción de humedad de películas de quitosano a una temperatura de 25 ºC sobre un intervalo de condiciones de humedad relativa (HR). Elaboraron las películas a partir de quitosano con tres diferentes grados de desacetilacion (91.7, 84 y 73%), tales películas fueron evaluadas a diferencias de humedad relativa de la prueba entre valores de 0, 11, 23, 33, 43, 53, 69, 75 y 84 %. Se encontró que el grado de desacetilacion del quitosano no presenta un efecto significativo en el WVTR de las películas, así como a medida que se incrementa la humedad relativa el WVTR aumenta, teniendo valores de entre 6.7 a 1146 g/m2d sobre la gama de 11 a 84% HR, respectivamente. En relación con la absorción de humedad se observó la misma tendencia; el contenido de agua en las películas en el equilibrio se extendió de 3.7 a 31.8% correspondientes a 11 y 84% de HR. Assis & Pessoa (2004) buscaron establecer un procedimiento básico para la formación de películas de quitosano y evaluar el efecto de la concentración de este polímero (3, 10, 15, 20, 30 y 50 g/L) tanto en la absorción de agua de las películas, como en la influencia sobre el efecto antifúngico al utilizarse éstas como capa comestible para cubrir cortes de manzana. La concentración de quitosano en la dispersión y por lo tanto en la película, refleja directamente su afinidad hacia el agua debido a su carácter hidrofílico, ya que a medida que aumentó la concentración de quitosano la cantidad de agua ganada aumentó exponencialmente, lo que sugiere que es un material pobre para usar como barrera de humedad. En relación con la acción protectora de las películas, las que mostraron una menor pérdida de peso fueron las obtenidas a partir de la concentración de 20 g de quitosano/L; las concentraciones de 30 y 50 g/L no presentaron una mejora significativa en la acción protectora con respecto a la de 20 g/L. La actividad antifúngica de las películas las determinaron de una forma cualitativa visualmente observando el crecimiento espontáneo de hongos en la superficie, comparando Neevia docConverter 5.1 Capitulo 3. Estudios Previos 33 mitades de manzana cubiertas con el quitosano con no cubiertas, la fruta sin recubrimiento presentó un mayor crecimiento. Chen et al. (1994), estudiaron la relación entre la flexibilidad de la cadena de moléculas de quitosano y las características físicas finales de las películas (fuerza de extensión, índice de hinchazón), para poder manipular las condiciones de formación de éstas y adaptar las características finales deseadas. La flexibilidad de la cadena la manipularon utilizando quitosano de diferentes grados de desacetilación, pH, fuerza iónica y solvente. El índice de hinchazón fue dependiente del pH pero disminuyó con el aumento del grado de desacetilación del quitosano, mientras que la fuerza de extensión incrementó con el aumento del grado de desacetilación. Yu-Hernández (2004) evaluó el efecto de mezclas ácido oleico y laurico como plastificantes a dos concentraciones (0.3 y 0.6%) en las propiedades físicas (color), mecánicas (fuerzas de fractura, elongación) y de transporte (velocidad de transferencia de CO2 y permeación al vapor de agua) de películas
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