Lineamientos-basicos-para-la-validacion-de-los-metodos-analiticos-de-uso-farmaceutico

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA 
 
DE MEXICO 
 
 
FACULTAD DE QUIMICA 
 
 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA 
VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS ANALÍTICOS 
DE USO FARMACÉUTICO 
 
 
 
 
 
 
 
TRABAJO ESCRITO VIA CURSOS EDUCACION CONTINUA 
 
QUE PARA OBTENER EL TITULO DE: 
 
QUIMICA FARMACEUTICA BIOLOGA 
 
P R E S E N T A : 
 
PEREZ DE LA CRUZ LETICIA 
 
 
 
 
 
 
ASESOR: QFB FERNANDO CALDERON OZUMBILLA 
 
 
 
 
 
 
 
MEXICO D. F. 2006 
 
UNAM – Dirección General de Bibliotecas 
Tesis Digitales 
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Jurado asignado: 
 
Presidente María del Socorro Alpizar Ramos 
Vocal Marco Antonio Rivera Guzmán 
Secretario Fernando Calderón Ozumbilla 
1er Suplente Carlos Herrera Arenas 
2do. Suplente Zoila Nieto Villalobos 
 
 
 
 
 
Sitio en donde se desarrolló el tema: Sistema Bibliohemerográfico, UNAM 
 
 
 
 
Asesor del tema: _____________________________ 
 QFB Fernando Calderón Ozumbilla 
 
 
 
Sustentante: __________________________ 
 Leticia Pérez de la Cruz 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
AGRADECIMIENTOS 
 
 
Mi más sincero agradecimiento a mi asesor QFB Fernando Calderón 
Ozumbilla por su tiempo y consejos para la realización de este trabajo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
DEDICATORIAS 
 
 
A mis padres Salvador y Genoveva por su cariño, confianza y por el apoyo que 
a cada momento me han brindado. 
 
A mi hermana Lupita y mis hermanos Salvador y Antonio con mucho cariño y 
porque siempre han estado conmigo. 
 
A Javier por estar a mi lado y por el apoyo que me brinda día a día. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Índice General 
 
1.0 INTRODUCCION……………………………………………………………….…1 
2.0 INFROMACION GENERAL…………………………………………………...…2 
2.1 Método Analítico……………………………………………………….….2 
2.2 Validación de Métodos Analíticos……………………………………....3 
2.3 Requerimientos Generales para Validación de Métodos Analíticos...3 
2.4 Regulación……………………………………………………….………..4 
2.5 Personal…………………………………………………………………..4 
2.6 Condiciones necesarias para la validación…………………………….5 
2.7 Criterios de aceptación…………………………………………………...5 
2.8 Parámetros de validación………………………………………………..5 
2.8.1 Especificidad y selectividad……………………………….…8 
2.8.2 Linealidad del sistema………………………………….…….8 
2.8.3 Exactitud……………………………………………………….9 
2.8.4 Precisión………………………………………………………10 
2.8.5 Linealidad del método…………………………………….….11 
2.8.6 Límite de detección…………………………………………...12 
2.8.7 Límite de cuantificación………………………………………12 
2.8.8 Tolerancia…………………………………………………...…13 
2.8.9 Robustez……………………………………………………….13 
2.8.10 Estabilidad de la muestra…………………………………….14 
2.8.11 Adecuabilidad del sistema……………………………………14 
3.0 DISCUSIÓN………………………………………………………………….……...15 
4.0 CONCLUSIÓN………………………………………………………………………16 
5.0 GLOSARIO ………………………………………………………………………….17 
6.0 BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………19 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 1 
 
1.0 INTRODUCCIÓN 
 
Los procedimientos analíticos utilizados para determinar la calidad de productos farmacéuticos 
abarcan la mayoría de las técnicas y tecnologías disponibles. Desde el análisis con moléculas 
de gran tamaño como las proteínas, en técnicas electroforéticas o de inmunoensayo, hasta los 
métodos cromatográficos donde se trabaja con moléculas pequeñas, es imprescindible tener 
en cuenta que el aspecto más importante de cualquier método analítico es la calidad de datos 
que produce. 
 
Una de las guías más utilizadas y consultadas en la industria farmacéutica es la llamada 
1“Validation of Compendial Methods” encontrado en el apartado de Métodos Generales de la 
USP, donde se define a la validación de métodos analíticos como el proceso por el cual se 
establece, mediante estudios de laboratorio, que las características de un método analítico 
cumplen con los requerimientos para su aplicación analítica, y que será libre de problemas 
durante su uso. 
 
Existen Guías como la de Food and Drug Administration (FDA por sus siglas en inglés) y la 
Guía International Conference Harmonisation (ICH por sus siglas en inglés) las cuales 
describen los parámetros de validación, cómo se determinan, necesarios dependiendo la 
aplicación del método analítico. Por ejemplo para métodos de impurezas, principio activo, 
ensayo o validación de limpieza. 
Los parámetros de validación para un determinado método analítico deben ser evaluados para 
demostrar y documentar que de dicho método se obtendrán resultados confiables cuando se 
lleve a cabo. Por eso la validación del método analítico debe hacerse en base a sus 
requerimientos. 
En nuestro país existen guías como la de Validación de Método Analíticos del Colegio 
Nacional de QFB (CNQFB) y normas como la Norma Oficial NOM-059 Buenas prácticas de 
fabricación y otras normas relacionadas publicadas en el Diario Oficial de la Federación. En 
dichas normas se establece que los establecimientos que se destinen a la fabricación de 
insumos para fármacos y medicamentos, así como los que fabriquen fármacos y 
medicamentos, deben llevar el control analítico de éstos incluyendo especificaciones y 
técnicas analíticas para analizar los componentes de sus productos, así como la validación de 
cualquier técnica empleada. 
Para el registro sanitario de medicamentos, vacunas y hemoderivados, la Secretaría de Salud 
solicita la validación del o los métodos de control utilizados para su caracterización y 
evaluación. La NOM-0591 establece que los métodos analíticos deben ser validados de 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 2 
acuerdo al apartado de “Control del Laboratorio Analítico”:si no aparece en la 
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) o en cualquier farmacopea 
internacional, la documentación relativa a este estudio de validación, debe realizarse 
por el laboratorio siendo el fabricante responsable de mantenerla y revisarla. Esta 
documentación debe estar completa, ordenada y disponible para su presentación en 
caso de requerirse durante alguna auditoria. 
Antes de comenzar una validación se debe contar con documentación como el 
protocolo de validación que es un documento que especifica los parámetros de 
validación a ser evaluados, las pruebas que se llevarán a cabo y cómo serán 
evaluados los resultados a través de criterios de aceptación. Este documento debe ser 
revisado y autorizado previo a su ejecución al menos por el encargado de laboratorio 
donde se lleva a cabo el método analítico a validar y por el encargado de Control de 
Calidad del laboratorio. Una vez que se han efectuado las pruebas y compilado y 
analizado los resultados obtenidos a partir de las mismas, se realizará un Reporte de 
Validación donde se resumen los resultados y se comparan con los criterios de 
aceptación. 
 
2.0 INFORMACIÓNGENERAL 
2.1 Método Analítico 
 
Un método analítico es la forma de llevar a cabo un análisis, ya que describe a detalle 
los pasos necesarios para realizar una prueba e incluye tratamiento de muestras, de 
sustancias de referencia, concentraciones, preparación de reactivos, equipos, 
aparatos, fórmulas para cálculos, etc. 
Los métodos o procedimientos2 analíticos se dividen, en función de su propósito 
analítico, en diferentes categorías: 
- Categoría I: son métodos analíticos para cuantificar los componentes 
principales en un producto farmacéutico. 
- Categoría II: procedimientos analíticos para la determinación de impurezas en 
API (principio activo) o compuestos de degradación en productos 
farmacéuticos. Puede incluir pruebas cuantitativas o pruebas límite. 
- Categoría III: procedimientos analíticos para la determinación de características 
de desempeño, por ejemplo en disolución. 
- Categoría IV: pruebas de identidad 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 3 
 
2.2 Validación de Métodos Analíticos 
 
La validación de un método o procedimiento analítico surge de la necesidad de tener 
métodos analíticos que no presenten variaciones durante su uso cumpliendo con su 
propósito analítico para obtener datos exactos, precisos y sobre todo confiables. 
Se llevan a cabo pruebas en el laboratorio que cumplan con parámetros y 
criterios de aceptación previamente establecidos. 
 
2.3 Requerimientos Generales para Validación de Métodos 
Analíticos 
 
El nivel y extensión de los requerimientos de una validación de métodos analíticos 
debe tomar en cuenta la etapa de desarrollo de un producto, el tipo de método 
(impurezas, de identificación, potencia, ensayo, etc) y su uso (investigación, para 
liberación de procesos, producto terminado o validación de limpieza). 
Antes de iniciar con las actividades o experimentos en el laboratorio de la validación se 
debe contar con documentación aprobada por los departamentos involucrados. Entre 
esta documentación esta el Plan Maestro de Validación que es una parte integral de 
un proyecto de validación organizado. Especifica el alcance de la validación, las 
responsabilidades, objetivos generales procedimientos e indica los procedimientos y 
protocolos que deben realizarse. 
También se debe tener el Protocolo de Validación aprobado que es el documento que 
describe el método a ser validado, especifica los parámetros que serán evaluados, sus 
criterios de aceptación, las pruebas que se van a llevar a cabo y de qué forma serán 
evaluados los resultados para su aceptación, así como los pasos a seguir en caso de 
encontrar resultados atípicos o que no cumplan con los criterios de aceptación 
establecidos. 
Los análisis en el laboratorio deben realizarse en instrumentos y equipos calificados y 
con estándares de referencia certificados. Una vez que se obtienen datos de las 
pruebas realizadas, se deben hacer análisis de dichos datos con procedimientos 
estadísticos adecuados. Estos procedimientos también deben ser determinados antes 
de empezar la validación. Es importante que los programas y las hojas de cálculo que 
se utilizarán estén validados o verificados. 
Una vez que se concluyen los estudios experimentales y que se han obtenido datos se 
debe hacer un resumen donde se indique si los parámetros cumplen con los criterios 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 4 
de aceptación y se debe concluir si el método está validado. Este resumen forma parte 
del reporte de Validación para el método específico. 
 
2.4 Regulación 
 
La Norma Oficial NOM-059-SSA1-1993 Buenas Prácticas de Fabricación para 
establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a la fabricación de 
medicamentos establece que se debe contar con métodos analíticos validados para 
productos a granel, producto terminado y materia prima en caso de no aparecer en la 
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) o en alguna farmacopea 
internacional. 
 
La Norma Oficial NOM-164-SSA1-1998 Buenas Prácticas de Fabricación para 
fármacos dice que se deben validar los métodos analíticos tanto farmacopéicos como 
no farmacopéicos que tengan desviaciones frente a la farmacopea de referencia. 
 
La Norma Oficial NOM-177-SSA1-1998 Intercambiabilidad de medicamentos, 
Establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es 
intercambiable y los requisitos a los que deben sujetarse los terceros autorizados que 
realicen las pruebas. 
Establece que el método analítico que se utilice para hacer el perfil de disolución debe 
estar validado. 
 
Las guías como la Internacional Conference Harmonization ICH, Food and Drug 
Administration FDA y la Farmacopea de los Estados Unidos USP forman parte de la 
regulación internacional. 
 
2.5 Personal 
 
Se debe contar con personal capacitado, de preferencia dedicado al 100% a la 
validación, con capacidad analítica y con disposición para trabajar en equipo. 
2.6 Condiciones necesarias para la validación 
 
La validación de métodos analíticos se tiene que hacer no sólo para cumplir con 
regulaciones sino para que un método no presente problemas cuando se realiza de 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 5 
forma rutinaria, de esta forma se evitarán retrasos en los análisis, reanálisis, 
reprocesos, resultados falsos fuera de especificaciones, decisiones equivocadas. Por 
estas razones el costo económico puede ser justificado al ahorrar en costos de falla y 
se debe permitir más tiempo del planeado para realizar la validación. 
2.7 Criterios de aceptación 
 
Son límites numéricos, intervalos u otra medida apropiada para aceptar los resultados 
de un método analítico. Deben ser establecidos basados en los límites de 
especificación. Una desviación estándar de 1/6 del intervalo de especificaciones es 
apropiada. Los criterios de aceptación deben ser establecidos antes de iniciar la 
validación y ser incluidos en el protocolo de validación. 
 
2.8 Parámetros de validación 
 
En el caso de los métodos compendiales, presentes en farmacopeas, las regulaciones 
señalan que no es obligatorio validarlos, a pesar de esto, es importante verificar que 
son métodos adecuados para las condiciones normales de uso y para las condiciones 
presentes en el laboratorio analítico donde serán aplicados5. 
Los parámetros para validar un método analítico son: 
2.8.1 Especificidad y Selectividad 
2.8.2 Linealidad del sistema 
2.8.3 Exactitud 
2.8.4 Precisión 
 2.8.4.1 Repetibilidad 
 2.8.4.2 Precisión intermedia 
 2.8.4.3 Reproducibilidad 
2.8.5 Linealidad del método 
2.8.6 Límite de Detección 
2.8.7 Límite de Cuantificación 
2.8.8 Tolerancia 
2.8.9 Reproducibilidad 
 
Las Guías ICH y USP son las principales guías para la validación de métodos 
analíticos. En la tabla 1 y 2 se resumen los parámetros de validación más importantes 
generalmente usados. 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 6 
Los parámetros requeridos para la validación de procedimientos de acuerdo a la 
Farmacopea de Estados Unidos USP se muestran en la Tabla 1: 
 
Tabla 1. Parámetros de Validación 
 
 
Categoría II** 
Parámetros 
Categoría I ** 
Cuantitat
iva 
Límite 
Categoría 
III** 
Categoría 
IV** 
 
 Exactitud 
 
 
SI 
 
SI 
 
* 
 
* 
 
NO 
 
Precisión 
 
 
SI 
 
SI 
 
NO 
 
SI 
 
NO 
 
Especificidad 
 
 
SI 
 
SI 
 
SI 
 
* 
 
SI 
 
Límite de 
detección 
 
 
NO 
 
NO 
 
SI 
 
* 
 
NO 
 
Límite de 
cuantificación 
 
 
NO 
 
SI 
 
NO 
 
* 
 
NO 
 
Linealidad 
 
 
SI 
 
SI 
 
NO 
 
* 
 
NO 
 
Rango 
 
 
SISI 
 
* 
 
* 
 
NO 
 
* Puede ser requerida dependiendo de la naturaleza de la prueba específica 
** Ver los conceptos de categorías de métodos en la sección 2.1 
 
Dependiendo el tipo de prueba, se llevarán a cabo los parámetros antes mencionados, 
ya que no todos aplican para las diferentes pruebas, por lo tanto, para hacer la 
validación de un método analítico se debe tomar en cuenta lo que se va a determinar 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 7 
con dicho método. En la Tabla 2 se muestra el tipo de prueba y los parámetros de 
validación que aplican, según las guías ICH4. 
 
Tabla 2. Parámetros de Validación 
 
 
CLASE DE MÉTODO ANALÍTICO 
 
 
 
PARÁMETO 
 
IDENTIFICACIÓN 
 
PRUEBAS PARA 
IMPUREZAS 
 
 
CUANTITATIVO LIMITE 
 
VALORACIÓN, DISOLUCIÓN 
(UNICAMENTE MEDIDA) 
CONTENIDO/POTENCIA 
 
EXACTITUD 
 
- 
 
+ - 
 
+ 
 
PRECISIÓN 
 REPETIBILIDAD 
 
 PRECISIÓN 
 INTERMEDIA 
 
 
 
- 
 
- 
 
 
+ - 
 
+1 - 
 
 
 
+ 
 
+1 
 
ESPECIFICIDAD2
 
+ 
 
+ + 
 
+ 
 
LIMITE DE 
DETECCIÓN 
 
- 
 
-3 + 
 
- 
 
LIMITE DE 
CUANTIFICACION 
 
- 
 
+ - 
 
- 
 
LINEALIDAD 
 
- 
 
+ - 
 
+ 
 
- Este parámetro normalmente no se determina 
+ Este parámetro normalmente se determina 
1 En los casos donde la reproducibilidad se ha llevado a cabo, no es necesaria 
la precisión intermedia 
2 La falta de especificidad de un método analítico puede ser compensada por 
otro método analítico de soporte. 
3 Puede ser necesario en algunos casos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 8 
2.8.1 Especificidad y Selectividad 
 
Especificidad 
 
Es la habilidad del método para obtener una respuesta de manera exacta y solamente 
debida al analito de interés en la presencia de componentes que están presentes en la 
muestra. 
 
Especificidad para impurezas 
 
Cuando están disponibles las impurezas, el método debe ser capaz de detectar y 
resolver cada impureza con respecto al activo y los otros componentes de la 
formulación. 
Cuando los estándares de impurezas no están disponibles se tiene que demostrar que 
los productos de degradación y los excipientes pueden ser resueltos. 
En el primer caso, comparar los resultados de muestras con impurezas adicionadas y 
los resultados de muestras no adicionadas con impurezas. 
 
 
Selectividad 
 
Es la capacidad de un método para medir y diferenciar al analito de interés, en 
presencia de otros componentes en la muestra. 
 
Criterio de aceptación 
 
La respuesta del método únicamente debe estar relacionada con la presencia del 
analito que el método busca detectar. 
 
 
2.8.2 Linealidad del sistema 
 
La linealidad es la habilidad de un método de obtener resultados que sean 
directamente proporcional a cambios de concentración del analito en la muestra, 
dentro de un intervalo determinado. 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 9 
El analista debe preparar por lo menos y por triplicado 5 niveles de concentración, que 
corresponden al intervalo, a partir de una solución concentrada de referencia, por 
diluciones o por pesadas independientes cuando no sea posible por dilución. 
 
El intervalo debe incluir la especificación para el caso de métodos utilizados para 
contenido, potencia o valoración. 
 
La linealidad se evalúa haciendo cálculos de regresión lineal obteniendo pendiente, 
ordenada al origen, coeficiente de determinación e intervalo de confianza. También por 
mínimos cuadrados. 
Criterios de aceptación 
 
r2 ≥ 0.98 
El intervalo de confianza no debe incluir el cero 
m ≠0 
 
2.8.3 Exactitud 
 
Es la concordancia entre un valor aceptado como verdadero o de referencia y el valor 
obtenido. Esta concordancia se expresa como porcentaje de recobro obtenido del 
análisis de las muestras a las que se les ha adicionado cantidades conocidas de 
sustancia. 
 
Para evaluación de potencia se preparan placebos cargados a lo largo del rango, al 
valor especificado y a los extremos. 
Si no se cuenta con muestras de placebos se acepta adicionar principio activo al 
producto terminado. 
 
Se realiza con placebo cargado un mínimo de 3 determinaciones a cada nivel, el 
CNQFB ahora pide 6 determinaciones al 100%. 
Si se requiere validar un rango muy pequeño, como en el caso de las impurezas, con 
una determinación al 100% es suficiente. 
Se reporta el % de recobro 
 
100*Re%
cuperadaCantidadre
icionadaCantidadadcobro = 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 10 
 
Calcular el promedio aritmético, la desviación estándar, el coeficiente de variación y el 
intervalo de confianza para la media poblacional del porcentaje de recobro. 
 
Criterios de aceptación 
 
El intervalo de confianza debe incluir el 100% o que el promedio de % recuperado se 
incluya en el intervalo. 
98 - 102% para métodos cromatográficos o volumétricos y el CV ≤ 2% 
97 - 103% para métodos químicos o espectrofotométricos y el CV ≤ 3% 
95 - 105% para métodos microbiológicos y el CV ≤ 5% 
 
Cuando se trata de impurezas y si se cuenta con ellas, se preparan muestras 
cargadas con éstas con cantidades correspondientes al límite de cuantificación, al 
120% y a un nivel intermedio con un mínimo de 3 réplicas. 
 
En el caso de disolución se debe demostrar que no hay adsorción de los compuestos 
del placebo o durante el filtrado, con el principio activo, esto se demuestra por el 
recobro de cantidades conocidas del principio activo adicionado directamente al 
aparato de disolución en presencia del placebo. 
 
Se realizan tres concentraciones por triplicado cubriendo el rango de especificación. 
Por ejemplo de Q. 
2.8.4 Precisión 
 
Es una medida del grado de concordancia entre una serie de medidas de múltiples 
muestreos, de la misma muestra homogénea preparadas bajo las condiciones 
descritas. Existen tres tipos de precisión repetibilidad, precisión intermedia y 
reproducibilidad. 
 
2.8.4.1 Repetibilidad 
 
Es la precisión de determinaciones independientes bajo las mismas condiciones de 
operación en un intervalo corto de tiempo: analista, aparatos, equipos. Se utilizan 
placebos cargados. 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 11 
 
Se realizan un mínimo de 9 determinaciones cubriendo el rango especificado o un 
mínimo de 6 determinaciones al 100% 
 
 Criterios de Aceptación 
 
 CV ≤ 2% 
 
 
2.8.4.2 Precisión intermedia 
 
Es la precisión en donde hay variaciones dentro del mismo laboratorio, por ejemplo, 
diferentes días, diferentes analistas, diferentes equipos. 
Se analiza por triplicado una muestra homogénea de producto terminado aprobado 
cercana al 100% de la concentración teórica, analizada por dos analistas en dos días 
diferentes. 
 
Calcular el contenido, potencia o valoración. De estos resultados se calcula la media 
aritmética, desviación estándar y coeficiente de variación. 
 
Criterios de Aceptación 
 
CV ≤ 2% para métodos cromatográficos o volumétricos 
CV ≤ 3% para métodos químicos y espectrofotométricos 
CV ≤ 5% para métodos biológicos 
 
 
2.8.4.3 Reproducibilidad 
 
Expresa la precisión entre laboratorios. 
 
2.8.5 Linealidad del Método 
 
El analista debe preparar el placebo analítico con el tipo de componentes que 
generalmente están en la muestra, en caso de que se conozcan los componentes de 
LINEAMIENTOSBASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 12 
la muestra, si no es así, se preparan muestras adicionadas con una sustancia de 
referencia. 
En ambos casos se preparan a los tres niveles incluyendo el 100%, una arriba y otro 
por debajo de este nivel, por triplicado. 
Se construye la gráfica de cantidad adicionada (mg/mL) vs cantidad recuperada 
(mg/mL). 
 
Criterios de Aceptación 
 
r2 ≥ 0.98 
El intervalo de confianza de la pendiente debe incluir a la unidad 
El intervalo de confianza de la ordenada al origen debe incluir el cero. 
CV ≤ 2.0 % del porciento de recobro 
2.8.6 Límite de detección 
 
Es la mínima concentración de sustancia en una muestra, que puede ser detectada 
pero no necesariamente cuantificada. 
 
Aunque en USP se expresa el límite de detección como 2 o 3 veces el ruido, este 
concepto no es muy práctico, ya que el nivel de ruido en diferentes detectores o tipos 
de detectores puede variar o por el tiempo de la lámpara. 
Un analista debe determinar la respuesta de muestras blanco, por ejemplo placebos 
analíticos, reactivos, solventes, etc. Y la respuesta de muestras analíticas como 
analito, o placebos adicionados según proceda, en un intervalo de concentraciones del 
analito que incluya la especificación de la prueba de impurezas límite o inferiores, o 
que incluya la especificación del contenido de la prueba de impurezas (cuantificación) 
 
Criterios de aceptación 
El límite de detección debe ser menor a la especificación de la prueba de productos de 
degradación o impurezas límite. 
 
 
2.8.7 Límite de Cuantificación 
 
Es la concentración mínima del analito, que puede ser determinada con precisión y 
exactitud aceptables, bajo las condiciones de operación establecidas. 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 13 
El límite de cuantificación se expresa como 10 veces la señal ruido. 
Criterios de aceptación 
El límite de cuantificación debe ser menor a la especificación de contenido o 
valoración de la prueba de impurezas. 
 2.8.8 Tolerancia 
 
Reproducibilidad de los resultados analíticos por el análisis de la misma muestra bajo 
diferentes condiciones de operación, lo cual se refiere a factores ajenos al método 
como utilizar diferentes equipos, lotes de reactivos, columnas, etc. Que se puedan 
presentar al reproducir el método en otras condiciones de uso. Se deben fijar por lo 
menos dos condiciones de uso y analizar una misma muestra por triplicado a cada 
condición. Reportar el contenido, potencia o valoración del analito de todas las 
muestras. 
Criterios de aceptación 
CV ≤ 2% para métodos cromatográficos o volumétricos 
CV ≤ 3% para métodos químicos y espectrofotométricos 
CV ≤ 5% para métodos biológicos 
2.8.9 Robustez 
 
Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse 
variaciones pequeñas pero deliberadas en las condiciones normales de operación. Por 
ejemplo algunos factores instrumentales como temperatura de la columna, velocidad 
de flujo, presión o factores no instrumentales como pH de la fase, proporción de los 
componentes de la fase, etc. La misma muestra se analiza por triplicado. Reportar el 
contenido, potencia o valoración del analito para las muestras de condición normal de 
operación y para las muestras de las otras condiciones de operación expresadas como 
porcentaje. 
 
Calcular la media aritmética de la condición normal de operación y de cada condición 
de operación diferente. Calcular la diferencia absoluta de la media aritmética de cada 
condición respecto a la condición normal (di). 
 
Criterio de Aceptación 
di ≤ 2% para métodos cromatográficos o volumétricos 
di ≤ 3% para métodos químicos y espectrofotométricos 
di ≤ 5% para métodos biológicos 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 14 
2.8.10 Estabilidad de Muestras 
 
Es la característica de una muestra y/ o soluciones de referencia, preparadas para su 
cuantificación, de conservar su integridad fisicoquímica y la concentración del analito 
después de almacenarse durante un tiempo determinado bajo condiciones específicas. 
El analista debe establecer la etapa de análisis en la cual se desea evaluar la 
estabilidad y las condiciones de almacenaje y tiempo. 
El analista debe procesar hasta la etapa preestablecida por lo menos por triplicado una 
muestra homogénea. Fraccionar cada una de las preparaciones de acuerdo a las 
condiciones de almacenaje y terminar el análisis de una de las fracciones de cada 
preparación. Se prosigue con el análisis de cada una de las fracciones al término de 
cada condición y utilizando una solución de referencia preparada recientemente. 
 
Calcular la media aritmética del análisis inicial y de cada condición de almacenaje. 
Calcular la diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición de almacenaje 
con respecto al análisis inicial di. 
 
Criterios de Aceptación 
di ≤ 2% 
2.8.11 Adecuabilidad del Sistema 
 La adecuabilidad del sistema consiste en verificar que el sistema, por ejemplo el 
instrumento, analista, equipo o sustancia de referencia, cumplen con criterios de 
aceptación preestablecidos, de esta forma se asegura la confiabilidad de los 
resultados del método analítico. 
Un ejemplo de adecuabilidad del sistema es inyectar por quintuplicado la solución de 
adecuabilidad, la respuesta de este analito debe cumplir con un coeficiente de 
variación y cuando aplique, en caso de cromatografía, cumplir con criterios como 
factor de capacidad, resolución, tiempos de retención relativa, factor de coleo, número 
de platos teóricos, entre otros. 
Los criterios de aceptación que usualmente se manejan son los siguientes: 
CV ≤ 2% 
Para cada inyecciòn se recomienda: 
K´ > 2 (Factor de capacidad) 
R > 2 (Resolución) 
T < 2 (Factor de coleo) 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 15 
3.0 DISCUSIÓN 
 
Existen normas en nuestro país que determinan la obligación para validar métodos 
analíticos, cuando éstos no son farmacopeicos o presentan alguna desviación al 
método farmacopeico, cuando se quiere registrar algún medicamento o evaluar la 
bioequivalencia entre dos productos farmacéuticos. Pero es importante tener en mente 
que la validación de los métodos no se debe realizar sólo para cumplir con alguna 
regulación sino para que el método no cause problemas durante su uso y se obtengan 
resultados confiables. Para este propósito se evalúan los parámetros antes 
mencionados. Antes de comenzar una validación debe ser bien planeada. Esto 
incluye tener un protocolo de validación autorizado donde estén especificados los 
criterios de aceptación, los parámetros a evaluar y el procedimiento para realizar esta 
evaluación, así como los pasos a seguir en caso de encontrar fallas o desviaciones 
durante el desarrollo del ejercicio de Validación. 
 
Cuando se hace una validación no se deben olvidar hacer pruebas con impurezas, si 
no se cuenta con ellas, las muestras se pueden someter a condiciones de estrés para 
obtener productos de degradación. Por ejemplo en un método cromatográfico en 
donde no aparecen impurezas que interfieran con el pico principal o de interés, no se 
tiene la certeza de que no habrá interferencia en un tiempo posterior con muestras de 
estabilidad y es donde pueden aparecer picos que no se habían tomado en cuenta y el 
peor de los casos es cuando éstos no se resuelven con respecto al pico principal. 
 
Otra característica importante son los límites que deben ir de acuerdo a las 
especificaciones. Como regla general una desviación estándar de 1/6 del rango de 
especificación será apropiada. Para métodos con límites de especificación e 95.0 a105.0 % recobros de 98.0 a 102.0 % son aceptables. 
Una de las condiciones para validar métodos es contar y utilizar instrumentos y 
equipos calificados y con calibración vigente, esto nos dará seguridad de que los 
equipos nos estarán proporcionando mediciones confiables. Las sustancias de 
referencia pueden se primarias o estar estandarizadas. 
 
Por último la tolerancia es un parámetro que nos va a ahorrar problemas ya que no 
siempre se podrá utilizar el mismo equipo, por ejemplo en HPLC uno con detector dual 
o uno de diodos. Aunque no se debe intercambiar columnas pero probablemente 
alguna vez tenga que utilizarse una equivalente. 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 
 
16
4.0 CONCLUSIÓN 
 
El propósito de validar un método es obtener datos de calidad, si los datos y 
resultados de un análisis no son confiables esto repercutirá directamente en la calidad 
del producto ya que ésta será dudosa o simplemente se tomarán decisiones 
equivocadas en lo que se refiere a la liberación de productos ya sea evitando la 
liberación de lotes que cumplan especificaciones, o en el pero caso, liberando lotes 
cuyas características no cumplen los criterios de aceptación de calidad para los 
mismos, situaciones que a la larga afectarán económicamente a la empresa, o incluso 
puedan llevar a la pérdida de confianza en la misma y a un daño en su reputación. Es 
por esto por lo que es necesario dedicarle tiempo y recursos a la validación de 
métodos analíticos para que se pueda planear y organizar de manera correcta, se 
pueda ejecutar y revisar de manera apropiada, evitando así fallos o errores en la 
interpretación y aprobación de resultados consiguiendo a la larga no tener problemas 
después de concluida la validación. 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 17 
 
5.0 Glosario 
 
Analito: componente específico de una muestra que se mide en el análisis. 
 
Concentración: cantidad de analito, por ejemplo un fármaco, presente en un 
medicamento expresada como peso/peso, peso/volumen o unidad de 
dosis/volumen. 
 
Coeficiente de Variación: es la desviación estándar entre la media en porcentaje. 
 
Criterios de aceptación: son límites numéricos o intervalos para aceptar 
resultados de un método analítico. 
 
Método analítico: es una descripción de la secuencia de actividades, recursos, 
materiales y parámetros que se deben cumplir para realizar un análisis de un 
componente específico de una muestra. 
 
Muestra: es una porción del material a evaluar. 
 
Parámetro de desempeño: es un parámetro específico a estudiar en un protocolo 
de validación. 
 
Placebo analítico: es una muestra que contiene todos los componentes de un 
producto excepto el analito. 
 
Placebo adicionado: es una muestra de placebo analítico al cual se le adiciona 
una cantidad conocida de analito. 
 
Recobro: Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado o muestra 
adicionada, empleando el método analítico. 
 
Reporte de Validación de Método Analítico: Es un resumen de los resultados 
obtenidos tras la aplicación de un protocolo de Validación donde los datos 
generados se comparan contra los criterios de aceptación previamente 
establecidos y se hace una conclusión respecto a la capacidad del método para 
satisfacer la aplicación analítica deseada.
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 18 
 
 
 
Revalidación: es la comprobación de que el método analítico mantiene su 
desempeño cuando existen cambios en la composición del producto, en el método 
analítico o cambios críticos en los procesos de fabricación. 
 
USP: United States Pharmacopeia. Farmacopea de Los Estados Unidos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 19 
 
ABREVIATURAS 
 
API Principio activo 
bo Ordenada al origen 
CNQFB Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos 
CV Coeficiente de variación 
CV y/x Coeficiente de variación de regresión 
di Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición respecto a la 
media aritmética del análisis inicial 
K´ Factor de capacidad 
m Pendiente 
NOM Norma Oficial Mexicana 
r Coefieciente de correlación 
R Factor de resolución 
SSA Secretaría de Salud 
T Factor de coleo 
Tr Tiempo de retención 
Q % disuelto 
 
 
LINEAMIENTOS BASICOS PARA LA VALIDACION DE LOS METODOS ANALITICOS DE USO FARMACEUTICO 
 
19
6.0 BIBLIOGRAFÍA 
 
1. Norma Oficial NOM-059-SSA1-1993 Buenas Prácticas de Fabricación para 
establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a la fabricación de 
medicamentos 
2. The United States Pharmacopeia (USP) Ed. 28. 2005 
3. International Conference Harmonization. Guideline for Industry Q2B. Validation of 
Analytical Procedures. November 1996 
4. International Conference Harmonization. Guideline for Industry Q2A .Text on Validation 
o Analytical Procedures. March 1995. 
5. Food and Drug Administration. CDER. Guidance for Industry. Analytical Procedures and 
Method Validation. August 2000. 
6. Food and Drug Administration CDER. Reviewer Guidance, Validation of 
Chromatographic Methods. November 1994. 
 
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	Texto
	Conclusión
	Bibliografía