Pruebas-de-identidad-y-eficacia-de-la-droga-cruda-de-Matricaria-recutita-Asteraceae--una-contribucion-para-la-elaboracion-de-la-monografia-tipo-OMS-de-la-planta-cultivada-en-Mexico

Vista previa del material en texto

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FACULTAD DE QUÍMICA 
 
 
“PRUEBAS DE IDENTIDAD Y EFICACIA DE LA DROGA CRUDA 
Matricaria recutita (ASTERACEAE): UNA CONTRIBUCIÓN PARA LA 
ELABORACIÓN DE LA MONOGRAFÍA TIPO OMS DE LA PLANTA 
CULTIVADA EN MÉXICO”. 
 
 
TESIS MANCOMUNADA 
 
 
QUE PARA OBTENER EL TITULO DE: 
QUIMICA FARMACÉUTICA BIOLOGA 
 
 
PRESENTAN: 
AZALIA ALVAREZ FRANCO 
NANCY MUNGUÍA VAQUERA 
 
 
 
MÉXICO D.F.                  2006 
 
UNAM – Dirección General de Bibliotecas 
Tesis Digitales 
Restricciones de uso 
 
DERECHOS RESERVADOS © 
PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL 
 
Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal 
del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). 
El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea 
objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para 
fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo 
mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, 
reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el 
respectivo titular de los Derechos de Autor. 
 
 
 
JURADO ASIGNADO 
 
 
 
PRESIDENTE: Dra. Rachel Mata Essayag 
VOCAL: Dr. Rogelio Gregorio Pereda Miranda 
SECRETARIO: M en C. Isabel del Carmen Rivero Cruz 
PRIMER SUPLENTE: Q.F.B. Sergio Ismael Martínez Luis 
SEGUNDO SUPLENTE: Q.F.B. José Antonio Guerrero Analco 
 
 
El presente trabajo se desarrollo en el Laboratorio 124, Departamento de 
Farmacia, Edificio E, Facultad de Química, UNAM 
 
 
 
ASESOR SUPERVISOR TÉCNICO 
 
 
 
 
 
 
 
 Dra. Rachel Mata Essayag M en C. Laura Alicia Acevedo Arteaga 
 
 
SUSTENTANTES 
 
 
 
 
 
 
 
 Azalia Alvarez Franco Nancy Munguía Vaquera 
 
 
 
 
AAGGRRAADDEECCIIMMIIEENNTTOOSS 
 
 
 
AA llaa UUnniivveerrssiiddaadd NNaacciioonnaall AAuuttóónnoommaa ddee MMééxxiiccoo ppoorr nnuueessttrraa ffoorrmmaacciióónn ccoommoo 
pprrooffeessiioonniissttaass.. 
 
 
EEssttee ttrraabbaajjoo ssee rreeaalliizzóó ccoonn eell aappooyyoo eeccoonnóómmiiccoo ddee llooss pprrooyyeeccttooss DDGGAAPPAA 
IINN221122000055 yy CCOONNAACCyyTT CC0011--001188 
 
DDeesseeaammooss eexxpprreessaarr nnuueessttrroo pprrooffuunnddoo aaggrraaddeecciimmiieennttoo aa llaa DDrraa.. RRaacchheell MMaattaa 
EEssssaayyaagg,, ccrreeaaddoorraa ddee eessttee pprrooyyeeccttoo ddee iinnvveessttiiggaacciióónn,, ggrraacciiaass ddee ttooddoo ccoorraazzóónn ppoorr 
oorriieennttaarrnnooss,, ppoorr llaa ppaacciieenncciiaa bbrriinnddaaddaa yy ssoobbrree ttooddoo ggrraacciiaass aa ssuuss vvaalliioossooss ccoonnsseejjooss 
ppaarraa llaa rreeaalliizzaacciióónn ddee eessttaa tteessiiss.. 
 
 
AA llaa MM eenn CC.. LLaauurraa AAlliicciiaa AAcceevveeddoo AArrtteeaaggaa ppoorr gguuiiaarrnnooss eenn nnuueessttrroo ccaammiinnoo ppoorr 
ttooddaa llaa ppaacciieenncciiaa bbrriinnddaaddaa,, ssuu iinnccoonnddiicciioonnaall aammiissttaadd yy eell aappooyyoo ttééccnniiccoo bbrriinnddaaddoo 
dduurraannttee llaa rreeaalliizzaacciióónn ddee eessttee ttrraabbaajjoo.. 
 
 
AA llaa DDrraa.. MMyyrrnnaa DDéécciiggaa CCaammppooss yy aall MM eenn CC.. JJuuaann FFrraanncciissccoo PPaallaacciiooss EEssppiinnoossaa 
ppoorr eell aappooyyoo ttééccnniiccoo ppaarraa llaa rreeaalliizzaacciióónn ddee llaa eevvaalluuaacciioonneess bbiioollóóggiiccaass.. 
 
 
AA llaa DDrraa.. AAlleejjaannddrraa RRoojjaass MMoolliinnaa ppoorr ssuu ccoollaabboorraacciióónn eenn llaa eevvaalluuaacciióónn ddeell 
ppootteenncciiaall eessppaassmmoollííttiiccoo ddee llooss eexxttrraaccttooss yy llaa xxaannttoocciillíínnaa.. 
 
 
AAll ppeerrssoonnaall ttééccnniiccoo ddee llaa UUSSAAII ppoorr eell rreeggiissttrroo yy aannáálliissiiss ddee llooss ddiissttiinnttooss eessppeeccttrrooss 
uuttiilliizzaaddooss eenn eell pprreesseennttee eessttuuddiioo.. 
 
AA llaa MM eenn CC IIssaabbeell RRiivveerroo ppoorr eell aappooyyoo ttééccnniiccoo bbrriinnddaaddoo 
 
 
NNaannccyy MM.. aaggrraaddeeccee eell aappooyyoo ddeell pprrooggrraammaa 112277 ((FFoorrmmaacciióónn bbáássiiccaa eenn 
IInnvveessttiiggaacciióónn)) ddee llaa FFaaccuullttaadd ddee QQuuíímmiiccaa yy AAzzaalliiaa AA.. aaggrraaddeeccee aall SSiisstteemmaa NNaacciioonnaall 
ddee IInnvveessttiiggaaddoorreess ((CCOONNAACCyyTT)) ppoorr llaa bbeeccaa ddee aayyuuddaannttee ddee IInnvveessttiiggaaddoorr NNaacciioonnaall 
NNiivveell IIIIII 
 
AA ttooddooss nnuueessttrrooss ccoommppaaññeerrooss ddeell LLaabboorraattoorriioo 112244 
 
 
AA llooss mmiieemmbbrrooss ddeell jjuurraaddoo,, ppoorr llaa rreevviissiióónn ddee eessttee ttrraabbaajjoo ccuuyyaass oobbsseerrvvaacciioonneess 
aayyuuddaarroonn aa mmeejjoorraarr llaa vveerrssiióónn ffiinnaall ddeell mmiissmmoo.. 
Índice 
 
 I
ÍNDICE 
Página 
LISTA DE ABREVIATURAS IV 
LISTA DE CUADROS VI 
LISTA DE FIGURAS VIII 
LISTA DE ESPECTROS XI 
I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 1 
II. ANTECEDENTES 6 
2.1 Antecedentes botánicos y etnobotánicos de la especie 
Matricaria recutita. 6 
2.2 Estudios químicos y farmacológicos. 8 
III. OBJETIVOS Y METAS 30 
IV. PARTE EXPERIMENTAL 32 
4.1 Material Vegetal. 32 
4.2 Procedimientos experimentales generales. 32 
4.2.1 Análisis Cromatográficos. 32 
4.2.2 Determinación de constantes físicas, espectroscópicas y 
espectrométricas. 34 
4.3 Preparación de aceites esenciales. 34 
4.4 Preparación de infusiones. 35 
4.5 Extracción y fraccionamiento. 36 
4.6 Aislamiento y purificación del compuesto xantocilina (58) a partir 
de la fracción primaria 4. 36 
Índice 
 
 II
 Página 
4.7 Ensayos biológicos. 38 
4.7.1 Determinación del potencial antiinflamatorio. 38 
4.7.2 Determinación de la toxicidad aguda. 40 
4.7.3 Determinación de la toxicidad del aceite esencial y extracto 
orgánico para el crustáceo Artemia salina Leach. 41 
4.7.4 Determinación del efecto del extracto orgánico sobre la 
contracción espontánea de íleon de cobayo. 42 
 4.7.4.1 Aislamiento de íleon . 42 
 4.7.4.2 Sistema de registro. 43 
 4.7.4.3 Evaluación del efecto relajante. 43 
4.7.5 Efecto antinociceptivo del extracto. 44 
4.7.5.1 Prueba de la placa caliente. 44 
4.7.5.2 Prueba de estiramiento abdominal. 45 
V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 
5.1 Selección de la especie Matricaria recutita L. (Asteraceae). 47 
5.2 Pruebas de eficacia. 48 
5.2.1 Determinación del efecto antinociceptivo. 48 
5.2.2 Determinación del efecto antiinflamatorio. 51 
5.2.3 Evaluación del potencial antiespasmódico de M. recutita. 52 
5.3 Pruebas de inocuidad. 54 
 
Índice 
 
 III
Página 
5.4 Composición de los aceites esenciales de M, recutita preparados a 
partir de distintos lotes de la planta cultivada y preparado comerciales. 55 
5.5 Obtención de los perfiles cromatográficos de los aceites esenciales 
de M. recutita 65 
5.6 Obtención de los perfiles cromatográficos de las infusiones de 
M. recutita 69 
5.7 Aislamiento y purificación de la xantocilina (58). 72 
5.8 Evaluación del efecto antinociceptivo de la xantocilina (58). 73 
VI RESUMEN Y CONCLUSIONES 75 
VII PERSPECTIVAS 77 
VIII BIBLIOGRAFIA 78 
IX ANEXO 83 
 Abreviaturas 
 
 
IV
ABREVIATURAS. 
 
°C Grados centígrados 
5-HT 5-Hidroxitriptamina 
Ad libitum A voluntad 
MgHCO3 Carbonato de sodio 
cm Centímetros 
CDCl3 Cloroformo deuterado 
CaCl2 Cloruro de calcio 
KCl Cloruro de potasio 
NaCl Cloruro de sodio 
CI50 Concentración inhibitoria media 
J Constante de acoplamiento 
CG Cromatografía de gases 
CG-EM Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría 
de Masas 
CLAR Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución 
CCF Cromatografía en capa fina 
δ Desplazamiento químicoCH2Cl2 Diclorometano 
DMSO Dimetilsulfoxido 
CO2 Dioxido de carbono 
d Doblete 
DL50 Dosis letal media 
eV Electrovoltz 
EE Error Estándar 
COSY Espectroscopia de correlación homonuclear 
FHEUM Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos 
Mexicanos 
FM Formula molecular 
KH2PO4 Fosfato ácido de potasio 
g Gramos 
HEX Hexano 
hrs Horas 
IR Infrarrojo 
 Abreviaturas 
 
 
V
i.p Intraperitoneal 
Kg Kilogramos 
L Litros 
log Logaritmo 
λmax Longitud máxima 
MeOH Metanol 
m Metros 
μl Microlitros 
μm Micrometros 
mg Miligramos 
mL Mililitros 
mm Milímetros 
min Minutos 
nm Nanómetros 
ESCOP Organización Científica Europea 
O2 Oxigeno 
ppm Partes por millón 
PM Peso Molecular 
% Por ciento 
pH Potencial de hidrogeno 
pf Punto de fusión 
m/z Relación masa-carga 
RMN 13C Resonancia Magnética Nuclear de Carbono 13 
RMN 1H Resonancia Magnética Nuclear de Hidrogeno 
s Singulete 
SNC Sistema Nervioso Central 
SSI Solución Salina Isotónica 
MgSO4⋅ 7H2O Sulfato de Magnesio Heptahidratado 
tR Tiempo de retención 
TMS Tetrametilsilano 
UV Ultravioleta 
p.o Vía oral 
 
Lista de Cuadros 
 
 VI
LISTA DE CUADROS 
Página 
 
Cuadro 1. Ejemplos de plantas medicinales tóxicas. 2 
 
Cuadro 2. Nombres comúnes de la M. recutita en diferentes países. 7 
 
Cuadro 3. Sesquiterpenoides presentes en la especie M. recutita. 10 
 
Cuadro 4. Monoterpenoides presentes en la especie M. recutita. 15 
 
Cuadro 5. Acetilenos presentes en la especie M. recutita. 19 
 
Cuadro 6. Flavonoides presentes en la especie M. recutita. 19 
 
Cuadro 7. Cumarinas presentes en la especie M. recutita . 24 
 
Cuadro 8. Compuestos de tipo C6C2 y C6C3 presentes en la especie 
M. recutita. 24 
 
Cuadro 9. Alcaloides presentes en la especie M. recutita. 25 
 
Cuadro 10. Otros compuestos presentes en la especie M. recutita. 25 
 
Cuadro 11. Condiciones de análisis en la Cromatografía de líquidos 33 
 
Cuadro 12. Obtención de los aceites esenciales 35 
 
Cuadro 13. Fraccionamiento primario. 38 
 
Cuadro 14. Toxicidad aguda del extracto orgánico de M. recutita. 55 
 
 
Lista de Cuadros 
 
 VII
Página 
 
Cuadro 15. Rendimientos de los aceite esenciales. 58 
 
Cuadro 16. Componentes identificados en la esencia del lote I de M. recutita. 59 
 
Cuadro 17 Componentes identificados en la esencia del lote III de M. recutita. 60 
 
Cuadro 18 Componentes identificados en la esencia de la marca 
comercial (A) de M. recutita. 61 
Cuadro 19 Componentes identificados en la esencia de la marca 
comercial (B) de M. recutita. 62 
Cuadro 20 Componentes identificados en la esencia de la marca 
comercial (C) de M. recutita. 63 
Cuadro 21 Principales componentes identificados en la esencia de la marca 
comercial (D) de M. recutita. 64 
Cuadro 22 Composición de los aceites esenciales de M. recutita. 
analizados en el presente estudio. 66 
Cuadro 23. Constantes físicas, espectroscópicas y espectrométricas de la 
xantocilina (58). 73 
 
Lista de Figuras 
 
 VIII
LISTA DE FIGURAS 
Página 
Figura 1. Primera edición de la Farmacopea Herbolaria de los Estados 
Unidos Mexicanos. 5 
Figura 2. Matricaria recutita L. (Asteraceae). 6 
Figura 3. Formación del camazuleno a partir de la hidrodestilación. 9 
Figura 4. Aparato de hidrodestilación. 35 
Figura 5. Extracción y fraccionamiento primario del extracto de 
M. recutita. 37 
Figura 6. Pletismómetro Ugo Basile 7140. 39 
Figura 7. Prueba de la placa caliente. 45 
Figura 8. Prueba de estiramiento abdominal. 46 
Figura 9. Efecto antinociceptivo del extracto y la infusión de M. recutita 
en la prueba de los estiramientos abdominales. 49 
Figura 10. Efecto antinociceptivo del extracto orgánico, la xantocilina (58) 
y la infusión en la prueba de la placa caliente. 50 
Figura 11. Efecto antiinflamatorio del extracto orgánico, en el modelo del 
edema plantar inducido por carragenina en rata. 52 
Figura 12. Curvas concentración – respuesta del aceite esencial y la 
xantocilina (58). 54 
Figura 13. Efecto del extracto de manzanilla en el peso corporal de los 
ratones durante la primera fase de la prueba de Lorke. 56 
 
Lista de Figuras 
 
 IX
Página 
Figura 14. Efecto del extracto de manzanilla en el peso corporal de los 
ratones durante la segunda fase de la prueba de Lorke. 56 
Figura 15. Evaluación de la toxicidad para Artemia salina del extracto 
orgánico (A) y el aceite esencial (B) de M. recutita. 57 
Figura 16. Cromatograma de gases de los componentes identificados 
en la esencia del lote I de Matricaria recutita. 59 
Figura 17. Cromatograma de gases de los componentes identificados 
en la esencia del lote III. - 60 
Figura 18. Cromatograma de gases de los componentes identificados 
en la esencia de la marca comercial A de M. recutita. 61 
Figura 19. Cromatograma de gases de los componentes identificados 
en la esencia de la marca comercial B de M. recutita. 62 
Figura 20. Cromatograma de gases de los componentes identificados 
en la esencia de la marca comercial C de M. recutita. 63 
Figura 21. Cromatograma de gases de los componentes identificados 
en la esencia de la marca comercial D de M. recutita. 64 
Figura 22. Cromatograma obtenido del aceite esencial de la marca 
comercial A. 67 
Figura 23. Cromatograma obtenido del aceite esencial de la marca 
comercial B. 67 
 
 
Lista de Figuras 
 
 X
Página 
Figura 24. Cromatograma del aceite de la planta cultivada de M. recutita 
en el centro de México. 68 
Figura 25. Cromatograma del aceite esencial de M .recutita procedente 
de San Luis Potosí.(lote III). 68 
Figura 26. Cromatograma de la infusión de la marca comercial A. 69 
Figura 27. Cromatograma de la infusión de la marca comercial B. 70 
Figura 28. Cromatograma de la infusión de M. recutita (Lote I) después 
de una partición de la infusión original con CH2Cl2. 71 
Figura 29. Efecto antinociceptivo de la xantocilina (58) en la prueba 
de los estiramientos abdominales. 74 
 
Lista de espectros 
 
LISTA DE ESPECTROS 
 
Página 
 
Espectro 1. Espectro de masas de la 2-hidro-4,6-dimetoxiacetofenona (58). 83 
 
Espectro 2. Espectro en el IR de la la 2-hidro-4,6-dimetoxiacetofenona (58). 84 
 
Espectro 3. Espectro de RMN 1H de la 2-hidro-4,6-dimetoxiacetofenona (58) 85 
a 300 MHz CD3OD. 
 
Espectro 4. Espectro de RMN 13C de la 2-hidro-4,6-dimetoxiacetofenona (58) 
a 300 MHz CD3OD. 86 
 
Espectro 5 Espectro de RMN 1H COSY de la 2-hidro-4,6-dimetoxiacetofenona 
 (58). 87 
 XI
Planteamiento del problema 
 
 1
I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 
 
El empleo de los productos herbolarios con fines curativos data de tiempos 
inmemorables, y hasta hace poco menos de un siglo constituyeron el principal recurso 
terapéutico en muchas regiones del mundo. Algunas plantas se utilizan como tales, tras 
desecación y extracción, o bajo la forma de extractos o aceites esenciales; otras 
constituyen la materia prima para obtener moléculas activas, que forman parte de los 
fármacos convencionales (SSA, 2005). 
Los productos herbolarios pueden producir grandes beneficios, pero también 
pueden ocasionar severos daños por lo que se necesitan implementar, estrategias 
efectivas que permitan establecer los riesgos de algunas plantas medicinales, sobre 
todo si se considera que un sector importante de la población mundial consume 
indiscriminadamente estos productos bajo la premisa de que, al ser naturales, son 
inocuos (Segui y Olivares 2005). Sin embargo, el abuso y el uso irresponsable de estos 
medicamentos pueden provocar efectos tóxicos severos. En el Cuadro 1 se muestran 
algunos ejemplos de plantas medicinales tóxicas y los efectostóxicos que provocan por 
su consumo excesivo o irresponsable (Lane, 2005). 
La falta de un control de calidad de las plantas medicinales y los 
fitomedicamentos representa otro problema importante relacionado con su uso, tanto en 
los países industrializados como en los subdesarrollados. A menudo los productos que 
alcanzan al consumidor no tienen la calidad óptima, se encuentran adulterados o 
inclusive puede tratarse de sustitutos menos eficaces (Thimothy et al., 2004). 
 
 
Planteamiento del problema 
 
 2
Cuadro 1. Ejemplos selectos de plantas medicinales tóxicas. 
 
Nombre común 
 
Nombre científico 
 
Efectos secundarios 
 
Referencia 
 
 
 
Anis de estrella 
 
 
Illicium anisatum 
Alteraciones en la 
conciencia, cólico y 
diarrea intensa, 
hepatotóxico y ocasiona 
dermatitis. 
 
Arnica Arnica Montana L Gastroenteritis con 
cólicos intensos 
 
Belladona Atropa belladona Muerte, paro cardiaco y 
parálisis generalizada. 
 
Diente de León 
 
Taraxacum officinale Diurético 
Uña de gato Uncaria tomentosa Diarrea, no debe 
tomarse durante el 
embarazo 
 
Ginko Ginko biloba Hemorragia cerebral. 
Hierba de San 
Juan 
Hipericum 
perforatum 
Prolonga el efecto de la 
anestesia. 
Kava kava Piper methysticum Causa depresión. 
Té verde Camelia sinensis Inhibe la agregación 
plaquetaria. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Segui et al., 
2005. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Equinacea Echinaceae 
purpurae 
. Hepatoxicidad, naúsea 
y reacciones alérgicas. 
Manzanilla Matricaria recutita Reacciones alérgicas. 
 
 
 
Lane, 2005. 
 
Por estos motivos la Organización Mundial de la Salud (OMS) promovió una serie 
de recomendaciones para la regularización de los productos terapéuticos preparados 
con plantas medicinales (Romero et al., 2005). Así, en 1979, la OMS planteó la 
necesidad de elaborar monografías específicas para cada droga vegetal con métodos 
Planteamiento del problema 
 
 3
generales de control de calidad. En el año de 1999, la OMS publicó un primer grupo de 
28 monografías y, posteriormente, una segunda edición la cual contiene 30 
monografías; que proporcionan información científica sobre la seguridad, la eficacia y el 
control de calidad de las plantas medicinales de amplio uso. Además, constituyen 
modelos para asesorar a los Estados Miembros de la OMS en el desarrollo de las 
monografías de sus plantas autóctonas e introducidas y facilitan el intercambio de 
información entre los Estados Miembros de la OMS (WHO, 1999; WHO, 2002). 
 
En respuesta a estas recomendaciones las autoridades sanitarias de diversas 
regiones del mundo han demostrado un creciente interés en elaborar un registro oficial 
de la inocuidad, eficacia y control de calidad de los medicamentos herbolarios. La 
comunidad europea ha seguido diferentes enfoques para examinar las fitomedicinas y a 
la fecha la Cooperativa Científica Europea (ESCOP) ha publicado seis fascículos con 10 
monografías. Cada monografía consta de las siguientes partes: denominación latina e 
inglesa de la droga, definición de las plantas utilizadas, constituyentes principales, 
métodos de análisis, indicaciones terapéuticas, posología y forma de administración, 
precauciones, posibles interacciones, efectos sobre el embarazo y la lactancia, efectos 
secundarios indeseables, sobredosis, propiedades farmacodinámicas y 
farmacocinéticas, ensayos clínicos y datos preclínicos de seguridad. En Estados Unidos 
la organización American Herbal Pharmacopoeia ha publicado varias monografías de 
las especies de un mayor consumo en ese país (Barnes, 2003). 
 
 
Planteamiento del problema 
 
 4
En México se publicó la primera Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos 
Mexicanos (Figura 1) en el año 2001, la cual contiene 82 monografías de plantas 
medicinales y aceites esenciales. Estas describen las características de identidad, 
pureza y composición de algunas plantas medicinales de gran consumo en nuestro país 
(FHEUM, 2001). La mayoría de las monografías son de plantas introducidas y son copia 
fiel de las publicadas en las farmacopeas española y europea. Por lo tanto, su utilidad 
para el control de calidad de las plantas que se cultivan en México puede ser 
cuestionada. Por otro lado, las monografías de plantas autóctonas son inexistentes, 
debido a la falta de información científica para integrarlas. Por este motivo, es 
importante generar la información científica de aquellas especies de mayor uso 
medicinal en México con la finalidad de elaborar monografías tipo OMS que permitan 
establecer los lineamientos para la regulación de los productos herbolarios 
proporcionando la información más relevante acerca del control de calidad, eficacia y 
pureza de estos recursos. Esta aseveración cobra importancia ante las nuevas 
exigencias de la Secretaria de Salud para el registro de medicamentos o remedios 
herbolarios. 
En este contexto, surge el presente trabajo de tesis el cual forma parte de un 
proyecto de investigación multidisciplinario que tiene por objetivo generar la información 
científica necesaria para establecer la eficacia, la inocuidad y algunos parámetros para 
el control de calidad de especies vegetales selectas de la flora medicinal de México, 
incluyendo Matricaria recutita L. (Asteraceae) cultivada en la zona central de México. 
 
 
 
Planteamiento del problema 
 
 5
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 1. Primera edición de la Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos 
Mexicanos. 
 
 
Antecedentes 
 
 6
 
II. ANTECEDENTES 
 
 
2.1 Antecedentes botánicos y etnobotánicos de la especie Matricaria recutita 
 
Matricaria recutita L. (Asteraceae) es una planta herbácea anual, de altura 
(20 a 40 cm). La cabezuela floral situadas en el extremo de las ramas con la parte 
central de color amarillo intenso, y los pétalos en la periferia son blancos y 
linguiformes, las hojas son pequeñas y se encuentran finamente divididas (WHO, 
1999). 
 
 Figura 2. Matricaria recutita L. (Asteraceae) 
 
Antecedentes 
 
 7
Matricaria recutita es una de las plantas medicinales más populares en todo 
el mundo (Raal, 2003) y su monografía se presenta en la farmacopea de 25 
países incluyendo México. El nombre común de la especie varia según el país. A 
manera de ejemplo en el Cuadro 2 se indican los nombres comunes de la planta 
en 16 países (WHO, 1999; WHO, 2002). 
La manzanilla se utiliza tradicionalmente para el tratamiento de desórdenes 
gastrointestinales como dolor de estómago y cólicos agudos (Hernández et al, 
2002). Los preparados o infusiones a base de la especie regulan y normalizan el 
funcionamiento intestinal, de manera adicional, se le atribuyen propiedades 
sedantes, antiinflamatorias (Gonzalez et al.,2003), antibacterianas, 
antiparasitarias, eupécticas, emenagogas, y antigotosas (Pinto et al, 2006). 
Cuadro 2. Nombres comunes de la M. recutita en diferentes países. 
País Nombre común de la 
M.recutita 
México, Colombia, 
Guatemala, 
Honduras e Italia 
 
Manzanilla 
Francia Matricaire 
India Babuna 
Argentina Manzanilla Cimarrona 
Alemania Chamomile 
Noruega Kamille 
Japón Kamitsuture 
Republica de 
Eslovaquia 
Yumancek Kamilkovy 
España Camomila 
África Bahboonig 
Brasil Camomilha 
 
Antecedentes 
 
 8
En algunas regiones la compuesta se considera útil para el tratamiento de la 
ciática, el insomnio y como un tónico amargo. En la práctica pediátrica se valora 
para el tratamiento de cólicos y como un agente anticonvulsivo. Su aceite esencial 
se utiliza también en las industria cosmética y alimentaría (Marica et al., 1997). 
 
2.2 Estudios químicos y farmacológicos. 
 
Desde el punto de vista fitoquímico, la especie M. recutita biosintetiza una 
amplia variedad de constituyentes químicos incluyendo una gran diversidad de 
terpenoides, fenilpropanoides, flavonoides, compuestos de tipo C6C2, cumarinas, y 
acetilenos, entre otros (Szoke et al., 2004). En los Cuadros3-10 se resumen los 
compuestos más importantes de la planta. Como en otras especies vegetales, la 
composición química de esta especie varia de manera importante según la región 
en que se cultiva. De acuerdo a un estudio reciente (Raal et al, 2003), los 
constituyentes que presentan mayor variación son los terpenoides, el camazuleno 
(21) y los bisabolenos [(α-bisabolol) 1 y (óxidos de bisabolol A-C, 
respectivamente) 3-5]. Así, por ejemplo, en el aceite esencial de manzanilla 
procedente de Hungría el producto predominante es el α-bisabolol (1), en los 
procedentes de Estonia, Bélgica y Francia predomina el oxido de bisabolol A (3) y 
en menor proporción los óxidos de bisabolol B y C (4 y 5); el aceite procedente de 
Gran Bretaña, en cambio contiene buena cantidad de camazuleno (21) (Orav et 
al., 2001). Con base en estas variaciones la manzanilla europea se clasifica en 
cuatro tipos (A-D) los cuales difieren en el contenido de bisabolol, óxidos de 
bisabolol y en la ausencia o presencia de camazuleno (21) (May, 2003). Los 
primeros tres tipos (A-C) contienen camazuleno (21) y los óxidos de bisabolol A-C 
Antecedentes 
 
 9
(3-5), respectivamente, son los componentes mayoritarios. El tipo D no contiene 
camazuleno (21). 
 
El camazuleno (21) es un artefacto, formado por la descomposición de una 
lactona sesquiterpénica, matricina (20), durante el proceso de hidrodestilación 
(Figura 3) (May, 2003). 
 
 
 
CH3
H3C COOH
O
HO
H
H
O
H+ H2O
CH3
C
O H
O
H+
OCO
OHO
H
O
CH3
H H
H2O
HO+
H
H
O OH
CO2
H2O
O
O
Matricina
Acido carboxílico del
camazuleno
Camazuleno (21)
 
 
Figura 3. Formación del camazuleno (21) a partir de la matricina 
 
Antecedentes 
 
 10
Cuadro 3. Sesquiterpenoides presentes en la especie M. recutita 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
 
1 
 
 
 
 
 
 
 
 
α-Bisabolol 
 
Morón et al., 1996 
Marica et al., 1997 
Szoke et al., 2004 
Szoke et al., 2004 
Wang et al., 2004 
 
 
 
2 
 
 
 
β- Farneseno 
 
 
Repcak et al., 1999 
Orav et al., 2002 
Szoke et al., 2004 
Schulz et al., 2004 
 
 
 
3 
 
 
 
 
 
 
Óxido de bisabol A 
 
Marica et al., 1997 
Repcak et al., 1999 
Orav et al., 2002 
Schulz et al.,2004 
Szoke et al., 2004 
 
 
 
4 
OH
O
 
Óxido de bisabol B 
 
Medic et al., 1997 
Repcak et al., 1999 
Orav et al., 2002 
Schulz et al.,2004 
Szoke et al., 2004 
OH
O
OH
 
 
 
Antecedentes 
 
 11
Cuadro 3. Sesquiterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
5 
 
 
 
 
 
Óxido de bisabol C 
 
 
Szoke et al., 2004 
Medic et al., 1997 
 
 
 
6 
 
 
 
 
 
 
 
α-Cadineno 
 
 
Orav et al., 2002 
Szoke et al., 2004 
 
 
 
 
 
7 
 
 
 
 
 
 
β-Bisaboleno 
 
 
 
Orav et al., 2002 
 
 
 
8 
O
H
O 
Óxido de bisabolona 
 
 
Kubeczka et al., 2002 
 
O
OH
H
H
 
 
 
 
 
 
Antecedentes 
 
 12
Cuadro 3. Sesquiterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
9 
O
CH3
CH2
H
CH3
CH3 H
 
Óxido de cariofileno 
 
 
 
10 
 
 
β-Cariofileno 
 
 
 
 
 
 
Orav et al., 2002 
Kubeczka et al., 2002 
 
 
 
 
11 
 
 
 
 
 
Germacrano-D 
 
 
Orav et al., 2002 
Hernández et al, 2002 
Szoke et al., 2004 
Kubeczka et al., 2002 
 
 
 
 
12 
 
 
 
 
 
 
α-Muroleno 
 
 
Szoke et al., 2004 
Orav et al., 2002 
 
 
 
Antecedentes 
 
 13
Cuadro 3. Sesquiterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
13 
 
 
 
 
 
α-Bergamoteno 
 
14 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
β-Elemeno 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Orav et al., 2002 
Kubeczka et al., 2002 
 
 
OH
H
 
15 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
α-Copaeno 
 
16 
 
α -Selineno 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
17 
 
 
 
Szoke et al., 2004 
 
 
 
 
 
 
H
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Cedrol 
OH
 
 
 
Antecedentes 
 
 14
uadro 3. Sesquiterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). C
Número Estructura Referencia 
 
 
 
 
18 
 
 
β- Eudesmol 
Szoke et al., 2004 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
H
OH
 
19 
 
 
Kubeczka t al., 2002 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
e
Orav et al., 2002 
 
Biciclogermacrano 
 
20 
 
Matricina 
 
Maurice et al.,1999 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 O
O
O
O
HO
H
 
21 
 
Camazuleno 
 
WHO, 1999 
Kube 002 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
czka et al., 2
 
 
 
 
Antecedentes 
 
 15
uadro 3. Sesquiterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). C
Número Estructura Referencia 
 
 
 
 
22 Kubeczka t al., 2002 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Espatulenol 
 
 
 
 
 
e
Szoke et al., 2004 
H
H
HO
 
23 
 
 
 
 
Orav et al., 2002 
S
K 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Candineno 
 
zoke et al., 2004 
ubeczka et al., 2002
 
 
uadro 4. Monoterpenoides presentes en la especie M. recutita. 
cia 
C
Número Estructura Referen
 
 
 
24 
OH
 
 
Borneol 
Szoke et al., 2004 
 
 
 
 
25 
 
Orav et al., 2002 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Linalol 
 
 
 
 
OH
 
 
 
Antecedentes 
 
 16
uadro 4. Monoterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). C
Número Estructura Referencia 
 
 
 
26 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Carvona 
 
27 
 
 
1,8-Cineol 
Orav et al., 2002 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
28 
 
 
Orav et al., 2002 
Ku 2 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
p-Cimeno 
 
 
beczka et al., 200
 
 
29 
 
 
 
Repcak et al., 1999 
K 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Limoneno 
 
 
 
ubeczka et al., 2002
 
 
 
 
 
O
O
Antecedentes 
 
 17
uadro 4. Monoterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). C
Número Estructura Referencia 
 
 
 
30 
 
Artemisia-cetona 
 
 
 
 
 
 
 
 
31 
 
α-Pineno 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
32 
 
Sabineno 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
33 
 
α
Piranosa y Tava 1995 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Kubeczka et al., 2002 
Orav et al., 2002 
 
O
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
-Terpineol 
OH
 
 
 
Antecedentes 
 
 18
uadro 4. Monoterpenoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). C
Número Estructura Referencia 
 
 
 
 
 
34 
 
Terpinoleno 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
35 
 
γ-Terpineno 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
36 
 
β-Ocimeno 
Kubeczka t al., 2002 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
e
Orav et al., 2002 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Antecedentes 
 
 19
Cuadro 5. Acetilenos presentes en la especie M. recutita. 
Referencia Número Estructura 
 
 
 
37 
 
Kubeczka t al., 2002 
 
 
 
 
e
Medic et al., 1997 
Cis-(E)-Espiroéter 
 
38 
 
Kubeczka t al., 2002 
 
 
Trans-(Z)-Espiroéter 
 
 
 
e
Medic et al., 1997 
 
39 
 
Szoke et al., 2004 
 
 
Éster de camomila 
 
 
 
Cuadro 6. Flavonoides presentes en la especie M. recutita 
Referencia Número Estructura 
 
 
 
 
 
40 
Repcak et al., 1999 
Quercetina 
 
 
 
 
Atoui et al., 2005 
 
O
O
H
H
O
O
O
O
O
OH
OOH
HO
OH
OH
Antecedentes 
 
 20
uadro 6. Flavonoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). 
cia 
C
Número Estructura Referen
 
 
 
 
41 Repcak et al., 1999 
 
 
 
 
Patuletina 
O
OH
OOH
HO
OHH3CO
OH
 
42 
 
Avallone et al.,2000 
S 
 
 
 
 
Apigenina 
 
 
Morón et al., 1996 
Szoke et al., 2004 
vehlikova et al.,2004
O
OH
OOH
HO
 
43 
7-(2’’-acetilglucos o) de apigenina 
 
Repcak et al.,1999 
S 
 
 
 
id
 
 
 
 
vehlikova et al.,2004
 
 
 
 
44 
Isoramnetina 
 
 
 
 
 
 
Repcak et al., 1999 
O
HO
HO
HOH2C
O
O
O
OH
OOH
O
OH
O
OHO
HO
OH
OCH3
Antecedentes 
 
 21
 recutita (cont.
Número Estructura Referencia 
Cuadro 6. Flavonoides presentes en la especie M. ) 
 
 
 
 
45 
 
 
 
 
O
OH
OCH3
OCH3HO
H3CO
OH O 
 
 
Crisosfenol 
 
 
 
 
 
 
46 
 
Espinacetina 
 
 
 
 
 
 
 
 
47 
 
 
 
 
Jaceidina 
 
 
 
 
 
Repcak et al., 1999 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
O
HO
OH
O
OCH3
OH
H3CO
H O
 
 
 
 
OCH3
O
OCH3
OH
OH
HO
H3CO
O
Antecedentes 
 
 22
 recutita (Cont.). 
ReferenciaCuadro 6. Flavonoides presentes en la especie M.
Número Estructura 
 
 
 
 
 
48 
 
 
 
 
 
 
 
7-(6’’-acetilglucosido) de apigenina 
 
 
 
 
 
Jeffrey et al.,1999 
 
 
 
 
 
49 
Crisoeriol 
 
 
 
50 
 
 
 
OH
HO
OCH3
O
O
OH
OH
H3CO
 
 
Axilarina 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Repcak et al., 1999 
 
 
 
 
 
 
 
O
HO
HO
OH
O
O
O
OH
O
OOH
O
OCH3
OH
HO
OH
Antecedentes 
 
 23
Cuadro 6. Flavonoides presentes en la especie M. recutita (Cont.). 
Número Estructura Referencia 
 
 
O
OH
OH
OH
HO
O
 
 
51 
H
 
 
Luteolina 
 
52 OH
OOH
HO
OH
 
 OH
 
O
OH
 
 
Miricetina 
 
 
53 
 
O
O
O
HO O
H3C HO
HO
OH O
O
HO
HO
OH
OH
 
Rutina 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
WHO, 1999 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Antecedentes 
 
 24
Cuadro 7. Cumarinas presentes en la especie M. recutita 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
54 
 
 
 
 
 
Herniarina 
Bruneton, 2001 
Pastirova et al., 2004 
Tosi et al.,1995 
 
O OH3CO
 
 
 
55 O OHO 
Umbeliferona 
 
 
Pastirova et al., 2004 
Repcak et al., 1999 
Tosi et al., 1995 
 
Cuadro 8. Compuesto de tipoC6C2 y C6C3 presentes en la especie M. recutita 
Referencia Número Estructura 
 
 
 
56 
Ácido Clorogénico 
W
 
 
 
 
Morón et al., 1996 
ang et al.,2004 
 
 
 
57 
O
OH
OH
HO CO
HO
OH
O
2H
 
 
 
 
 
 
E-Anetol 
 
 
 
Orav et al., 2002 
Mata, 2000 H3CO
 
 
 
 
 
 
Xantocilina 
 
Zu 6 
Ca 0 
Cechinel et al.,1994 
Valenciennes et al.,1999 
 Ali et al.,2005 
 
58 
lma et al.,199
lixto et al.,199
OCHH CO
OHO
33
Antecedentes 
 
 25
Cuadro 8. Compuesto de tipo C6C2 y C6C3 presentes en la especie M. recutita 
(Cont.). 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
 
 
59 
 
 
 
 
 
 
OH
OCH3
CH2
 
 
Eugenol 
 
 
 
Orav et al., 2002 
Mata, 2000 
 
 
Cuadro 9. Alcaloides presentes en la especie M. recutita
Número Estructura 
 
Referencia 
 
 
 
60 
 
 
 
 
 
 
Maurice, 1999 
 
 
 
 
Betonicina 
HHO
N
COO
H3C CH3
H
 
Cuadro 10. Otros compuestos presentes en la especie M. recutita 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
61 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Morón et al., 1996 
 
 
 
 
Ácido Ascorbico 
 
 
 
O
O
H
HO
HO O
OH
Antecedentes 
 
 26
Cuadro 10. Otros compuestos presentes en la especie M. recutita (Cont.) 
Número Estructura Referencia 
 
 
 
62 
 
 
 
 
 
 
 
Ácido Caprico 
 
 
 
 
63 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
3-Octanol 
 
 
 
 
64 
 
Decanol 
 
 
 
 
 
Kubeczka ., 2002 
Orav et al., 2002 
 
OH
O 
 
 
et al
OH
 
 
 
 
OH
 
 
 
 
65 Szoke et al., 2004 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Isovaleriato de geranilo 
O
O
 
 
 
 
 
Cuadro 10. Otros compuestos presentes en la especie M. recutita (Cont.) 
Antecedentes 
 
 27
Número Estructura Referencia 
 
 
 
66 
 
OH
O
5
 
 
Acido linoleico 
 
 
 
67 
 
OH
O
12
 
A itico cido Palm
 
 
 OH
O
 
Acido Heptanoico 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Orav et al., 2002 
 
68 
 
Desde el punto de vista farmacológico M. recutita y sus constituyentes han 
sido objeto de numerosos estudios que se resumen a continuación (WHO, 1999; 
ichtl, 2006): 
 
(i) El extracto de la manzanilla y el α-bisabolol (1) presentan una actividad 
(ii) El extracto hidroalcohólico de la manzanilla inhibe el crecimiento de 
Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans y Streptococcus salivarius. 
Además es un agente bactericida in vitro contra Bacillus megatherium Leptospira 
icterohaemorrhagiae. El aceite de manzanilla también inhibe el desarrollo de 
Staphylococcus aureus y Bacillus
W
protectora contra la ulcera gástrica (WHO, 1999). 
 
 y 
 subtilis (WHO, 1999). 
Antecedentes 
 
 28
 
(iii) La manzanilla y sus preparados han demostrado una nota le actividad 
antiinflamatoria en diferentes modelos farmacológicos tanto in vivo como in vitro. 
Así; el extracto, el aceite esenc α-
bisabolol (1), el oxido de bisabolol A (3), el óxido de bisabolol B (4), la matricina 
(20), el camazuleno (21), el cis-(E)-espiroéter (37), el trans-(Z)-espiroeter (38), la 
apigenina (42) y 7-O-glucósido de apigenina (43) inhiben el edema plantar 
ducido por carragenina.en ratas (Santori et al.,20003), el eritema inducido por 
radiación ultravioleta en cobayo y la fiebre provocada por levaduras en ratas, 
aunque cabe destacar que su actividad fue algo menor que el de salicilamida 
(WHO, 1999). 
En el modelo de dermatitis inducida por aceite de croton en ratones, la 
aplicación tópica del extracto total de la manzanilla y de las fracciones ricas en 
flavon
el en ratas inducida por la 
xantina oxidasa y un hidroperoxido cumeno en ratas (WHO, 1999). 
 
(iv) Con respecto a la actividad antiespasmódica, se ha comprobado que el 
extracto fluido de la planta y otros preparados disminuyen, de manera dependiente 
de la concentración, la amplitud de las contracciones inducidas por cloruro de 
b
ial y algunos de los constituyentes como el (
in
 
oides disminuyen significativamente la inflamación (Funda y Bilge, 1995) y la 
actividad de las enzimas cicloxigenasa y lipoxigenasa. El α-bisabolol (1) y los 
óxidos de bisabolol (3, 4 y 5) inhiben la actividad de la enzima 5-lipoxigenasa 
(May, 2003). La aplicación intradérmica de la apigenina-7-glucósido (43) inhibe, de 
manera dependiente de la dosis, la inflamación de la pi
Antecedentes 
 
 29
(v) La administración intraperitoneal de una infusión liofilizada de la 
manza
bario, acetilcolina e histamina en el íleon aislado de cobayo; el efecto es similar al 
la papaverina. La actividad espasmolítica de la manzanilla ha sido atribuida a la 
apigenina (42), el 7-O-glucósido de apinenina (43) y el α-bisabolol (1), el cual a 
tiene una actividad similar a la papaverina (Morón et., al 1996; WHO, 1999). 
 
nilla disminuye la movilidad basal, la conducta exploratoria y la actividad 
motora en roedores; el efecto se potencia por el hexobarbital, un inductor de 
sueño (WHO, 1999). 
 
 
Objetivos 
 
 30
 
III. Objetivos y Metas 
 
El objetivo primordial del presente trabajo de tesis consiste en establecer 
algunos parámetros de eficacia, inocuidad y calidad de la droga cruda derivada 
de la especie M. recutita cultivada en la región central de México. Con miras a 
la elaboración de las monografías tipo OMS y farmacopeica de la planta. 
Para llegar al objetivo propuesto se formularon los siguientes objetivos 
particulares: 
 
1. Determinar la composición del aceite esencial de la droga cruda y 
preparados comerciales obtenidos de la manzanilla mexicana, mediante 
la aplicación de la técnica de cromatografía de gases acoplada a 
espectrometría de masas (CG-EM). 
2. Establecer los perfiles cromatográficos del aceite esencial e infusión de 
la planta mediante la técnica de Cromatografía de Líquidos de Alta 
Resolución (CLAR). Los perfiles generados permitirán establecer la 
identidad de la especie y serán de utilidad para las pruebas de identidad 
y la estandarización de productos herbolarios de la planta. 
3. Establecer los compuestos marcadores de la planta mediante el 
cumplimiento de los objetivos 1 y 2. 
4. Iniciar los estudios de eficacia mediante la evaluación de los posibles 
efectos antiespasmódico, antinociceptivo y antiinflamatorio de varios 
preparados de la manzanilla utilizando los protocolos experimentales 
apropiados. 
Objetivos 
 
 31
5. Establecer de manera preliminar los posibles efectos tóxicos de M. 
recutita mediante la determinación su toxicidad aguda en ratones 
utilizando el método de Lorke y la toxicidad para el crustáceo Artemia 
salina Leach. 
Parte Experimental 
 
 32
 
IV. PARTE EXPERIMENTAL 
 
4.1 Material Vegetal. 
 
 En el presente estudio se utilizaron tres lotes (I-III) de material vegetal; el primero 
se recolectó en el Estado de México en el campus de la Universidad de Chapingo, 
Texcoco, en Diciembre de 2004, y fue proporcionado por el Dr. Benito Reyes Trejo. El 
segundo lote se adquirió en el mercado de Tlahuac, Distrito Federal en Marzo de 2006 
y el tercer lote cultivadoen el estado de San Luis Potosí, fue proporcionado por el 
Ingeniero Jorge Ebrard, Laboratorios Mixim en Abril de 2006. De manera adicional se 
analizaron 4 marcas comerciales de té de manzanilla que se designarón con las letras 
A-D. 
 
4.2 Procedimientos Experimentales Generales. 
4.2.1 Análisis cromatográficos. 
 
Procedimiento generales: La cromatografía en columna abierta se realizó sobre 
gel de sílice (silica gel 60 Merck; gránulos de 0.2-0.5 mm; malla 70-230). El proceso de 
elución se llevo acabo utilizando gradientes de Hex-CH2Cl2 (0:1→1:0) y CH2Cl2-MeOH 
(1:0→0:1). La cromatografía en capa fina (CCF) se realizó en placas de aluminio 
recubiertas con gel de sílice (silica gel 60 F254 Merck). La visualización de las placas 
previa elusión se realizó con una lámpara de UV (onda corta de 254nm y onda larga de 
365 nm). Como agente revelador se empleó una solución de sulfato cérico amoniacal; 
Parte Experimental 
 
 33
para el desarrollo de color fue necesario calentar las placas durante dos minutos a 100 
°C aproximadamente. 
Cromatografía: Se empleó un cromatógrafo marca Waters equipado con una bomba 
modelo 600 E con un sistema de entrega de disolventes múltiple y un sistema de 
bombeo de gradiente a baja presión, provisto de un inyector manual Rheodyne 7725i. 
Para visualizar los compuestos se empleó un detector Dual Ultravioleta/Visible (modelo 
2487, Waters). El control del equipo, la adquisición de los datos y el procesamiento de 
la información cromatográfica, se llevó a cabo, a través del programa Millenium 32, 
versión 3.05.01 (Waters). El análisis se realizó en una columna Waters Symmetry C18 
con tamaño de partícula de 5 µm y con un diámetro interno de 4.6 mm y una longitud de 
250 mm. Las condiciones de análisis empleadas para las distintas muestras estudiadas 
se resumen en el Cuadro 11. 
 
Cuadro 11. Condiciones de análisis en la Cromatografía de líquidos. 
 
Muestras de 
M. recutita 
Sistema de elución Concentración 
(mg/mL) 
Velocidad 
de Flujo 
(mL/min) 
Volumen 
de 
Inyección 
(µL) 
Aceites 
Esenciales 
ACN:H2O al 0.1%TFA 
(1:1) 
0.8 0.35 20 
Infusiones ACN:H2O al 0.1%TFA 
(2:8) 
4 0.35 20 
Fase Orgánica 
(Extracciones 
de la infusión) 
ACN:H2O al 0.1%TFA 
(1:1) 
4 0.35 20 
 
Los análisis de Cromatografía de gases acoplados a espectrometría de masas 
(CG/EM): se realizaron por la técnica de impacto electrónico (EMIE) se obtuvieron 
mediante un equipo Jeol JMS-SX102A Hewlett-Packard 5890 (serie II) con una energía 
Parte Experimental 
 
 34
de ionización de 70 eV. La columna capilar empleada fue de 10 m de largo, diámetro 
interno de 180 μm y espesor de película de 0.18 μm marca HP-5MS, empleando Helio 
de alta pureza como gas acarreador. 
 
4.2.2 Determinación de las constantes físicas, espectroscópicas y 
espectrométricas. 
 
 El punto de fusión de la xantocilina (58) se midió un aparato Fisher-Jones. Los 
espectros en el IR se registraron en un espectrofotómetro FTIR de rejilla Modelo 1605 
marca Perkin–Elmer en pastilla de bromuro de potasio. Los espectros de resonancia 
magnética nuclear protónica (RMN-1H, 300 MHz) en CDCl3 y de Carbono 13 (RMN-13C, 
75 MHz) se registraron en un aparato Varian Unity-Innova utilizando CDCl3 como 
disolvente. Los desplazamientos químicos se reportan en ppm referidos al 
tetrametilsilano (TMS) utilizando como referencia interna. El registro de los espectros se 
llevó a cabo en la Unidad de Servicios de Apoyo a la Investigación (USAI) de la 
Facultad de Química, UNAM. 
 
4.3 Preparación de aceites esenciales. 
 
Los aceites esenciales se prepararon mediante el procedimiento de 
hidrodestilación (FHEUM, 2001; WHO, 1999) empleando un sistema de destilación 
simple (Figura 4). En cada caso, se colocó en un matraz de 5 L una cantidad apropiada 
de material vegetal y agua (Cuadro 12). Al cabo del proceso, el destilado se sometió a 
una partición con diclorometano (CH2Cl2); la fase orgánica resultante se concentró al 
vacío y el residuo se peso para obtener los rendimientos. 
Parte Experimental 
 
 35
 
 
Figura 4. Aparato de hidrodestilación. 
 
 
Cuadro 12. Obtención de los aceites esenciales. 
Material Vegetal Peso del Material 
Vegetal (g) 
Volumen de H2O 
(L) 
Peso del aceite 
(mg) 
Planta Cultivada 
(Lote I) 
495.0 3 234.8 
Planta Cultivada 
(Lote II) 
50.0 0.5 10 
Planta Cultivada 
(Lote III) 
66.7 0.5 15 
Marca Comercial A 494.2 3 154.7 
Marca Comercial B 241.1 3 179.1 
Marca Comercial C 249.7 3 143.2 
Marca Comercial D 159.5 3 91.1 
 
4.4 Preparación de las Infusiones. 
 
 Para preparar las infusiones de las 4 marcas comerciales de manzanilla (A-D) y 
de los lotes I-III se pesó 1 g de material vegetal. A continuación, se añadieron 250 mL 
de agua desionizada hirviendo. La mezcla se dejó reposar durante 30 min. Al cabo de 
este tiempo se filtró. Cada filtrado se analizó por CLAR. 
Parte Experimental 
 
 36
 De manera adicional, la infusión obtenida del Lote I se sometió a una extracción 
líquido-líquido con 200 mL (x7) de CH2Cl2. La fase orgánica se secó con sulfato de 
sodio anhidro y se concentró a presión reducida. Finalmente el residuo se analizó por 
CLAR. 
 
4.5 Extracción y fraccionamiento. 
 
 El material vegetal molido y seco (4 Kg) se extrajo dos veces mediante un 
proceso de maceración con 16 L de una mezcla de CH2Cl2: MeOH (1:1) durante 20 días 
a temperatura ambiente. El extracto obtenido después de separar el material vegetal se 
concentró por destilación al vacío, obteniéndose 874 g de un residuo café. Una parte 
del extracto orgánico de M. recutita (312.2 g) se fraccionó mediante una cromatografía 
en columna abierta, empacada con 800 g de gel de sílice. Para eluir la columna se 
utilizaron gradientes de hexano-CH2Cl2 (0:1→1:0) y CH2Cl2-MeOH (1:0→0:1). Se 
recolectaron 322 fracciones de 400 mL, estas se reunieron en 10 conjuntos de 
fracciones primarias por la similitud mostrada en CCF. Este proceso se resume en el 
Cuadro 13 y en la Figura 5. 
 
4.6 Aislamiento y purificación del compuesto xantocilina (58) a partir de la 
fracción primaria F4. 
 
Con la finalidad de separar el compuesto mayoritario de la fracción primaria 4 
(2.6878 g) se realizó una cromatografía preparativa en capa delgada, utilizando placas 
de gel de sílice. El sistema de elución consistió de una mezcla Hex–CH2Cl2 (1:4). Al 
Parte Experimental 
 
 37
cabo del experimento se obtuvieron 40 mg de xantocilina (58) como un compuesto 
blanco cristalino con un punto de fusión de 80-82 º C. 
 
 
Matricaria recutita 
4 Kg 
 
 
Extracción CH2Cl2 - MeOH (1:1) 
 
Extracto CH2Cl2-MeOH 
312.2 g 
 Columna abierta de gel de silice 
Hex- MeOH ( 1:0→0:1) 
 
 
 
 F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 
 CCF preparativa con gel de silice 
Hex-CH2Cl2 (1:4) 
 
 
 
 
Figura 5. Extracción y fraccionamiento primario del extracto de M. recutita. 
 
 
 
xxaannttoocciilliinnaa ((5588)) 
Parte Experimental 
 
 38
Cuadro 13. Fraccionamiento primario. 
Eluyente Proporción
(%) 
Fracciones 
reunidas 
Clave 
 
hexano 100 1-16 F1 
Hex-CH2Cl2 50:50 17-119 F2 
CH2Cl2 100 120-207 F3 
CH2Cl2 –MeOH 90:10 208-250 F4 
CH2Cl2-MeOH 80:20 251-270 F5 
CH2Cl2-MeOH 70:30 271-291 F6 
CH2Cl2-MeOH 60:40 292-302 F7 
CH2Cl2-MeOH 40:60 303-310 F8 
CH2Cl2-MeOH 20:80 311-316 F9 
MeOH 100 317-322 F10 
 
4.7 Ensayos Biológicos. 
4.7.1 Determinación del potencial antiinflamatorio. 
 
Para determinar el potencial antiinflamatorio del extracto orgánico, se utilizó el 
modelo del edema plantar inducido por carragenina en ratas. Para el ensayo se 
utilizaron ratas machos de la cepa Wistar, con un peso entre 180 a 200 g. Los animales 
se compraron en la empresa Harlan de México S.A. de C. V. El extracto se administró 
por vía oral una hora antes de inyectar una suspensión de carragenina (0.1 mL al 1% 
en solución salina isotónica) en el cojinete plantar de la pataderecha del animal (López 
et al., 2004). Se utilizó Indometacina (10 mg/Kg) como fármaco de referencia y se 
administró por vía oral 30 minutos antes de inducir el edema (Winter y Risley, 1962; 
Crunkhorn 1971; Cuzzocrea et al., 1997). 
Parte Experimental 
 
 39
Para cuantificar las variaciones de volumen de la pata inflamada se utilizó la 
técnica volumétrica de desplazamiento de fluido mediante un pletismómetro de la marca 
Ugo Basile 7140 (Figura 6). Se realizaron varias mediciones de la pata inflamada 
durante un periodo de 6 horas (0, 1, 2, 3, 4, 5 y 6 hrs). Para el análisis estadístico de los 
datos se realizó un análisis de varianza seguida por una prueba de Dunnet (Williamson 
et al., 1996). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 6. Pletismómetro Ugo Basile 7140. 
 
 
 
 
Parte Experimental 
 
 40
4.7.2 Determinación de la toxicidad aguda. 
 
La evaluación del efecto tóxico agudo potencial del extracto orgánico a partir de 
M. recutita se determinó de acuerdo con el protocolo experimental establecido por 
Lorke (Lorke, 1983). 
 
El ensayo se realizó empleando ratones macho adultos (20-25 g) con ayuno de 
18 hrs. Para determinar la toxicidad aguda del extracto de prueba se realizaron dos 
fases en la primera fase se emplearon dosis correspondientes a 1000, 100 y 10 mg/Kg 
de peso corporal, mientras que en la segunda se emplearon dosis de 5000, 2900 y 
1600 mg/Kg de peso. 
 
El efecto tóxico del extracto orgánico de M. recutita se determinó mediante la 
administración oral de las muestras de prueba a los animales de experimentación. El 
efecto de la muestra y el control negativo (SSI) se determinó mediante la observación 
directa del comportamiento de los animales durante catorce días. Al terminó de este 
periodo, los animales se sacrificaron por dislocación cervical. Posteriormente, se realizó 
una disección en el abdomen para aislar órganos vitales (hígado, riñones, corazón y 
estómago) y evaluar posibles alteraciones. Los resultados representan un promedio de 
tres replicas. La DL50 se evaluó mediante el cálculo de la media geométrica siguiendo 
los criterios establecidos por Lorke. 
 
 
Parte Experimental 
 
 41
4.7.3 Determinación de la toxicidad del aceite esencial y extracto orgánico para el 
crustáceo Artemia salina Leach . 
 
El extracto orgánico y el aceite esencial de la planta fresca se evaluaron 
utilizando el bioensayo de la toxicidad para el crustáceo Artemia salina (TAS), 
empleando la metodología descrita por Anderson y colaboradores (1991). 
 
 Las larvas de Artemia salina se obtuvieron mediante la incubación de los 
huevecillos del crustáceo se incubaron en salmuera, previamente oxigenado durante 48 
horas. Las muestras del ensayo se prepararon disolviendo 20 mg del aceite esencial, 
en 2 mL de CH2Cl2 de esta solución se transfirieron 500, 50, 5 μL a cada vial por 
triplicado. En el caso del extracto orgánico las muestras se prepararon disolviendo 
40 mg del extracto, en 4 mL CH2Cl2-MeOH (1:1). De esta solución se transfirieron 500, 
400, 200 y 50 μL a cada vial, por triplicado. Una vez que se eliminó el disolvente en 
cada vial por evaporación libre, se transfirieron 10 larvas del crustáceo a cada uno de 
los viales con las muestras a evaluar, a cada vial se adiciono salmuera hasta un 
volumen final 5 mL. De esta forma se obtienen concentraciones finales 1000, 100 y 10 
μg/mL para el aceite esencial y 1000, 800, 400 y 100 μg/mL para el extracto orgánico. 
 
Después de sembrar las larvas, las muestras se mantuvieron con iluminación 
artificial durante 24 hrs; transcurrido ese tiempo se procedió a contar el número de 
crustáceos sobrevivientes. Se utilizó la colchicina como control positivo. La CL50 
(concentración letal media) se calculó a partir de los porcentajes de mortalidad 
mediante un análisis probit (Steven et al., 1993). 
 
Parte Experimental 
 
 42
4.7.4 Determinación del efecto del extracto orgánico sobre la contracción 
espontánea de íleon de cobayo. 
 
 El efecto relajante del extracto íntegro de Matricaria recutita (Lote I) sobre la 
contracción espontánea del íleon de cobayo se determinó de acuerdo a un diseño 
experimental previamente establecido (Rojas et al., 1996; Hernández et al., 2004). 
 
4.7.4.1 Aislamiento del íleon. 
 
Para la obtención del tejido, se utilizaron cobayos macho adultos (500-800 g) de 
la cepa Harley alimentados ad libitum. Los animales se sacrificaron por dislocación 
cervical e inmediatamente se realizó una incisión abdominal para extraer el íleon, el 
cuál se colocó en un recipiente con solución Krebs-Henseleit (Composición (mM): NaCl 
118, KCl 4.7, KH2PO4 1.2, MgSO4·7H2O 1.2, CaCl2 2.5, NaHCO3 25 y D-glucosa 11). La 
solución se preparó con agua destilada, el pH se ajustó a 7.4, a 37 °C y se mantuvo 
bajo burbujeo constante. La solución se burbujea con una mezcla gaseosa de O2/CO2 
(95:5). El íleon aislado se limpió y se cortó en segmentos de 5 cm aproximadamente. 
Cada porción se lavó haciendo pasar por su interior un poco de solución de Krebs-
Henseleit con ayuda de una jeringa con aguja de punta roma cuidando de no maltratar 
demasiado el tejido. Después de limpiar los tejidos, se cortaron en segmentos de 1 cm 
aproximadamente y se montaron en celdas que contenían la solución de Krebs-
Heinseleit, a una temperatura de 37 °C gasificada constantemente con la mezcla de 
gases. 
 
 
 
 
Parte Experimental 
 
 43
4.7.4.2 Sistema de registro. 
 
 Las contracciones espontáneas de cada tejido se registraron isométricamente 
por medio de transductores de fuerza (Grass, modelo FT03) acoplados a un polígrafo 
de cuatro canales de registro (Grass Modelo 7D). Todos los tejidos se ajustaron a una 
tensión basal de 1 gramo. Después de un tiempo de estabilización de 30 minutos, se 
registró un periodo control de 10 minutos y después de este tiempo se aplicó la 
sustancia a evaluar (Rojas et al; 1996). 
 
4.7.4.3 Evaluación del efecto relajante. 
 
Posteriormente, se registró el efecto de diferentes concentraciones de las 
muestras de prueba [extracto, aceite esencial, infusión, xantocilina (58) y del control 
positivo. Para ello, se adicionó al baño diferentes concentraciones de estas muestras 
disueltas en DMSO (dimetil sulfóxido); el DMSO se utilizó a una concentración no 
mayor al 0.2% (v/v), concentración a la cual esta sustancia no presenta efecto en el 
bioensayo. El efecto de las sustancias evaluadas se registró durante 10 min 
aproximadamente. La magnitud de la respuesta de los efectos contráctiles se determinó 
comparando la fuerza de contracción de la sustancia con la fuerza de contracción 
inducida por papaverina. 
 
 Todos los resultados se expresaron como la media de varios experimentos (n=4-
7) ± el error estándar (e.e.). Las curvas concentración respuesta se graficaron y se 
calculó la concentración inhibitoria media (CI50) mediante un ajuste no lineal, utilizando 
Parte Experimental 
 
 44
la ecuación de Boltzmann, y el programa de análisis estadístico PRISMA 3.02, 
GraphPad. 
 
4.7.5 Efecto antinociceptivo del extracto. 
 
El efecto antinociceptivo se determinó utilizando las pruebas, de la placa caliente 
y el estiramiento abdominal, de acuerdo a los protocolos experimentales reportados en 
la literatura (Williamson et al., 1996). En los dos tipos de experimentos se utilizaron 
ratones de la cepa ICR con un peso entre 25 y 30 g. Los animales se mantuvieron en 
un bioterio con ciclos de 12 hrs de luz y 12 hrs de oscuridad. Antes de los ensayos, los 
animales se dividieron en grupos de seis y se mantuvieron en ayuno por 24 horas con 
libre acceso al agua (ad libitum). 
 
4.7.5.1 Prueba de la placa caliente. 
 
Los ratones se introdujeron en un cilindro de plástico transparente colocado 
sobre una placa caliente a la temperatura de 55.5 ± 0.2 °C (Figura 7). Inmediatamente 
se determinó el período de latencia al estimulo nociceptivo (en segundos), es decir, el 
tiempo transcurrido entrela aplicación del estímulo y la primera respuesta de los 
animales (lamida, levantamiento de las patas traseras o salto fuera del cilindro). Debido 
a la naturaleza del experimento, fue necesario inicialmente ambientar a los animales al 
entorno del experimento. Para ello, se colocaron los animales dentro del cilindro; sobre 
la placa de calentamiento (apagada) durante 20 minutos o hasta que el ratón no 
presentará un comportamiento de exploración del medio. Este proceso se realizó el día 
previó al experimento y momentos antes de iniciarlo. La administración del extracto y la 
Parte Experimental 
 
 45
infusión de M. recutita se realizó por vía oral (p.o.). Como control negativo se empleó 
SSI (p.o.) y como control positivo la morfina a la dosis de 1.5 mg/Kg administrada por 
vía intraperitoneal (i.p.). Para el análisis estadístico de los datos se realizó un análisis 
de varianza seguida por una prueba de Dunnet (Cervero, 1994). 
 
Figura 7. Prueba de la placa caliente. 
 
4.7.5.2 Prueba de estiramiento abdominal. 
 
El extracto de M. recutita (251, 398 y 794 mg/Kg) y la infusión (100 mg/Kg), se 
administraron por vía oral, a los 30 y 60 minutos, respectivamente, previos a la 
realización del experimento. Una vez cumplido el tiempo de absorción, se inyectó a los 
ratones por vía intraperitoneal una solución de ácido acético al 0.6 %. Inmediatamente 
Parte Experimental 
 
 46
después, los animales se colocaron en una caja de plástico transparente y se 
observaron las contracciones acumuladas en un lapso de 5 min durante 30 min. 
En este caso, la nocicepción se manifiesta por estiramientos abdominales (en 
algunas ocasiones se pueden observar contracciones); por lo tanto, se registra el 
número de los estiramientos de las patas traseras y flexión del cuerpo hacia atrás 
(Figura 8). El efecto antinociceptivo se determinó con base en la disminución del 
número de estiramientos de los animales tratados en relación al control (tween al 2% en 
solución salina vía p.o.). En esta prueba de nocicepción, se utilizó la Dipirona como 
control positivo y fue administrada 30 minutos antes de inyectar el agente algogénico, a 
la dosis de 100 mg/Kg, per os. Para el análisis estadístico de los datos, se realizó un 
análisis de variancia seguida por una prueba de Dunnet (Elie y Traub, 2002; Koster et 
al., 1959). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 8. Prueba de estiramiento abdominal. 
Resultados y discusión 
 
 47
 
V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 
 
5.1 Selección de la especie Matricaria recutita L. (Asteraceae). 
 
Matricaria recutita es una planta medicinal introducida de Europa que se 
comercializa ampliamente en toda la República Mexicana, principalmente para tratar 
padecimientos estomacales de diversa etiología. Por este motivo, la manzanilla 
cultivada en México fue seleccionada para la elaboración de una monografía de tipo 
OMS. Como se indicó en la sección de antecedentes la monografía actual de la FHEUM 
es una copia de la Farmacopea Española, por lo tanto, no es la adecuada para el 
análisis de la planta cultivada en la Republica Mexicana ya que el contenido metabólico 
de las especies vegetales puede variar de manera importante en función de su 
distribución geográfica. 
 
Una vez realizado el proceso de selección, se procedió a la obtención de tres 
lotes (I-III) de material vegetal cultivado y de cuatro marcas comerciales (A-D) de 
manzanilla. En cada caso se prepararon las infusiones; a partir de las marcas 
comerciales (A-D) y de los lotes I y II se prepararon además los aceites esenciales. El 
lote I se destinó también a la preparación de un extracto orgánico para la realización de 
las pruebas biológicas de eficacia e inocuidad y de un estudio fitoquímico destinado a la 
obtención de los compuestos marcadores. 
Resultados y discusión 
 
 48
5.2 Pruebas de eficacia 
 
Las pruebas de eficacia a nivel de extracto realizadas en este estudio 
consistieron en la determinación del potencial antinociceptivo, antiinflamatorio y 
antiespasmódico del extracto integro de la planta. Como se indicó previamente en 
los antecedentes la especie se usa en las prácticas médicas populares para tratar 
trastornos gastrointestinales (Martínez, 1989), por lo tanto, al igual que la especie 
cultivada en otras regiones del mundo es factible que la de México presente 
propiedades antiinflamatorias y espasmolíticas. De manera adicional, con la finalidad de 
explorar si la eficacia para tratar cólicos de esta planta esta asociado con algún efecto 
analgésico se evaluó su potencial antinociceptivo. 
 
5.2.1 Determinación del efecto antinociceptivo. 
 
La evaluación del potencial antinociceptivo del extracto e infusión preparados a 
partir del lote I, se realizó utilizando las pruebas de la placa caliente y estiramiento 
abdominal. Estos modelos son recomendados por la Asociación Internacional para el 
Estudio del Dolor ya que las respuestas que se generan son cuantificables y 
reproducibles; además, los ensayos están validados y cumplen con determinados 
requerimientos de tipo ético contenidos en la NOM-062-ZOO-1999. 
 
En el modelo de estiramiento abdominal, el animal (normalmente roedores) 
responden al dolor que se genera en respuesta a un estimulo químico. El método 
consiste en inyectar intraperitonealmente a los roedores una solución algogénica (i.e., 
sol. diluida de ácido acético) y medir, en un periodo de tiempo, el número de 
estiramientos-contracciones provocados por el estímulo químico. El modelo permite 
Resultados y discusión 
 
 49
detectar compuestos con actividad analgésica central periférica; cabe señalar que este 
modelo ha sido objeto de críticas debido a que el estímulo químico no se considera 
natural (Koster et al., 1959). 
Las dosis utilizadas para la evaluación del efecto antinociceptivo del extracto 
íntegro en la prueba del estiramiento abdominal fueron de 251, 398 y 794 mg/Kg, 
mientras que la infusión se ensayó a una dosis de 100 mg/Kg. En ambos 
experimentos, el efecto fue comparado con el provocado por la Dipirona a la dosis de 
100 mg/Kg. Los resultados obtenidos en las evaluaciones se ilustran en la Figura 9. 
Como se puede observar, el extracto orgánico íntegro de M. recutita logró reducir casi 
en un 50% el número de estiramientos inducidos por el ácido acético; sin embargo, el 
efecto no fue dosis-dependiente. La infusión a la dosis de prueba fue inactiva. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Vehiculo 100 251 398 794 100
0
5
10
15
20
25
30
35
 Extracto M. recutita
 mg/kg (p.o.)
 Dipirona
 mg/kg (p.o.)
 ***
 *
 Infusión
mg/kg (p.o.)
N
úm
er
o 
de
 e
st
ira
m
ie
nt
os
 to
ta
le
s
 
 
 
 
 
Figura 9. Efecto antinociceptivo del extracto y la infusión de M. recutita en la prueba de los 
estiramientos abdominales. Cada barra representa la media de N=6 ± e.e. Las diferencias 
estadísticamente significativas con respecto al vehículo (SSI + Tween 80 al 2%) fueron 
determinadas por un análisis ANADEVA seguido de una prueba de Dunnet *P< 0.05. 
Resultados y discusión 
 
 50
En el modelo de retirada ante un estímulo térmico el animal, generalmente 
roedores (rata o ratón), se coloca dentro de un cilindro de plástico sobre una placa 
caliente (a temperatura constante, 55.5±0.2 º C); este estímulo produce dos conductas 
(saltar o lamer sus patas traseras) que pueden medirse en términos de tiempo de 
reacción. Este modelo es comúnmente usado para identificar analgésicos que actúan a 
nivel de SNC (Déciga et al., 2006) 
En el modelo de placa caliente, la evaluación del extracto íntegro se realizó a las 
dosis de 300 y 600 mg/Kg; de nueva cuenta, la infusión se evaluó a la dosis de 100 
mg/Kg. Como se desprende de los resultados resumidos en la Figura 10, los 
tratamientos no provocaron un efecto antinociceptivo estadísticamente significativo con 
respecto al vehículo. Los resultados de ambas pruebas nos permiten concluir que el 
extracto orgánico y la infusiónde M. recutita no poseen actividad analgésica central, 
sino a nivel periférico. 
 
Vehículo 100 600 300 100 1.5
0
500
1000
1500
 Infusión
mg/kg (p.o)
 Extracto
 mg/kg (p.o)
Xantocilina
 mg/kg (p.o)
Morfina
mg/kg (i.p.)
A
U
C
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 10. Efecto antinociceptivo del extracto orgánico, la xantocilina (58) y la infusión en la 
prueba de la placa caliente. Cada barra representa la media de N=6 ± e.e. Las diferencias 
estadísticamente significativas con respecto al vehículo (SSI + Tween 80 al 2%) fueron 
determinadas por un análisis ANADEVA seguido de una prueba de Dunnet *P< 0.05. 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 51
5.2.2 Determinación del efecto antiinflamatorio. 
 
El modelo del edema plantar inducido con carragenina en rata, es uno de los 
modelos más utilizados para evaluar agentes antiinflamatorios en el ámbito científico, 
esto debido a que presenta varias ventajas, entre las que destacan las siguientes: 
a) La carragenina es muy estable y la cantidad necesaria para provocar el efecto 
inflamatorio, sin ocasionar otros daños adicionales al animal de experimentación, 
se encuentra debidamente establecida. 
b) El curso de la inflamación es similar a la presentada en el hombre. 
c) El ensayo es altamente reproducible. 
d) El ensayo permite la evaluación de manera cuantitativa de la inflamación, ya que 
la magnitud de la respuesta es proporcional a la concentración del compuesto de 
la prueba. 
El mecanismo de acción de la carragenina ha sido ampliamente estudiado, sin 
embargo, los resultados han sido controversiales, algunos autores mencionan que el 
edema, es causado en una primera etapa por la liberación de la histamina, serotonina y 
elementos del complemento y, en una segunda fase, por la producción de 
prostaglandinas, bradiquina y 5-hidroxitriptamina (5-HT), además de la presencia de 
leucocitos. (Winter et al., 1962; Crunkhorn et al., 1971). El efecto antiinflamatorio del 
extracto íntegro a las dosis de 100, 300 y 1000 mg/Kg de M. recutita se determinó 
utilizando el modelo del edema plantar inducido con carragenina en ratas. A las cuatro 
dosis evaluadas no se observó ningún efecto estadísticamente significativo (Figura 11). 
 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 52
 
 
Vehículo 100 300 1000 10
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
Extracto de M. recutita
 mg/kg (p.o.)
Indometacina
 mg/kg (p.o.)
D
if.
 d
e 
vo
lu
m
en
 (m
L)
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Figura 11. Efecto antiinflamatorio del extracto orgánico, en el modelo del edema plantar 
inducido con carragenina en rata. Cada barra representa la media de N=6 ± e.e. Las 
diferencias no son estadísticamente significativas con respecto al vehículo (SSI + 
Tween 80 al 2%) fueron determinadas por un análisis ANADEVA seguido de una prueba 
de Dunnet *P< 0.05. 
 
 
 
 
 
 
 
5.2.3 Evaluación del potencial antiespasmódico de M. recutita. 
 
El extracto, la esencia y el compuesto obtenidos a partir del lote I de manzanilla 
se ensayaron para determinar su potencial espasmolítico. El efecto farmacológico se 
estableció utilizando el ensayo de íleon aislado de cobayo que consiste en medir el 
efecto de las sustancias de prueba sobre las contracciones del íleon cobayo, 
espontáneas o inducidas por diferentes espasmógenos sobre la preparación. Los 
resultados de esta determinación indicaron, que tanto el aceite como el compuesto (58) 
provocan la relajación de las contracciones espontáneas e inducidas por acetilcolina del 
íleon de cobayo de manera dependiente de la concentración. La esencia presentó la 
mejor actividad y la CI50 calculada fue de 10.47 ± 1.32 μg/mL. El efecto fue comparable 
Resultados y discusión 
 
 53
al de la papaverina, conocido agente espasmolítico, utilizado como control positivo 
(Figura 12). 
El extracto a 100 μg/mL provocó un efecto contráctil y a concentraciones bajas 
(1, 3.16, 6, 10 y 31 μg/mL), no provocó un efecto espasmolítico significativo. Con base 
en estos resultados se estableció que la manzanilla cultivada en México al igual que la 
cultivada en varias regiones de Europa, Cuba y Argentina contiene también principios 
espasmolíticos. En todos los casos, el efecto relajante mayor se observa en el aceite 
esencial o la tintura hidroalcoholica (Morón et al; 1996; WHO 1999). 
 
-1 0 1 2 3
0
25
50
75
100
aceite
papaverina
Log concentración (μg/mL)
%
 d
e 
in
hi
bi
ci
ón
-1 0 1 2 3
0
25
50
75
100
compuesto 58
papaverina
Log concentración (μg/mL)
%
 d
e 
in
hi
bi
ci
ón
 
 
Figura 12. Curvas concentración-respuesta del Aceite esencial 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 54
55..33 PPrruueebbaass ddee iinnooccuuiiddaadd 
 
 Los estudios de inocuidad a los que fue sometida la especie M. recutita 
consistieron en: la evaluación de la toxicidad aguda de acuerdo al procedimiento de 
Lorke y el estudio de toxicidad para el crustáceo Artemia salina. 
 
Para evaluar si el extracto de M. recutita presenta efectos tóxicos agudos, se 
utilizó el método de Lorke. Este tiene la ventaja de que requiere de pocos animales y 
permite estimar fácilmente los síntomas de toxicidad más comunes. El estudio consta 
de dos fases como se detalló en la sección experimental (Lorke, 1983). 
 
En la primera fase, el extracto íntegro de la especie se evaluó a las dosis de 10, 
100 y 1000 mg/Kg y como se observa en los resultados resumidos en el Cuadro 14 a 
estas dosis se registró la muerte de ningún animal, ni se apreciaron efectos tóxicos 
visibles en los grupos tratados. El análisis macroscópico de los órganos y tejidos de los 
animales reveló la ausencia de anomalías o alteraciones. Estos resultados condujeron 
entonces a la realización de la segunda fase del experimento. En esta segunda etapa, 
el extracto se evaluó a las dosis de 1600, 2900 y 5000 mg/Kg. Los tratamientos de 
nueva cuenta no provocaron la mortalidad de los ratones, ni efectos tóxicos visibles. En 
consecuencia, la DL50 es mayor a 5000 mg/Kg. 
 
Un parámetro importante analizado en este estudio fue la variación en el peso de 
los animales. En las Figuras 13 y 14 se aprecia que el peso corporal de los ratones no 
varió significativamente con respecto a su peso inicial. 
 
 
Resultados y discusión 
 
 55
Cuadro 14. Toxicidad aguda del extracto orgánico de M. recutita. 
FASE 1 
 
FASE 2 DL50
Dosis 
(mg/Kg) Mortalidad 
Dosis 
(mg/Kg) Mortalidad 
10 0/3 1600 0/3 
100 0/3 2900 0/3 
1000 0/3 5000 0/3 
 
 
>5000 
 mg/Kg 
 
Otra prueba de toxicidad utilizada en el presente estudio fue la del crustáceo 
Artemia salina. Este ensayo, se realizó de acuerdo al procedimiento descrito por 
Anderson (1991) y es de utilidad para detectar de manera preliminar posibles efectos 
citotóxicos. Los resultados obtenidos en el estudio se muestran en la Figura 15. La 
concentración letal media calculadas para el extracto, es mayor a 200 ppm en tanto, 
que el aceite si mostró un efecto tóxico moderado ya que la concentración letal media 
fue de 56.2 ppm. Estos resultados sugieren la necesidad de evaluar la citotoxicidad de 
los preparados a base de manzanilla. 
 
5.4 Composición de los aceites esenciales de M. recutita preparados a partir de 
distintos lotes de la planta cultivada y preparados comerciales. 
 
Los aceites esenciales analizados se prepararon por la técnica de 
hidrodestilación; con la excepción de la esencia del lote II, todas se obtuvieron como un 
líquido amarillo de aroma agradable y característico. El aceite del lote III se obtuvó 
como un aceite azul. En el Cuadro 15 se indican los rendimientos de las distintas 
muestras analizadas. 
 
Resultados y discusión 
 
 56
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 7 14
Días
G
ra
m
os
10 mg/Kg
100 mg/Kg
1000 mg/Kg
Vehículo
 
Figura 13. Efecto del extracto de manzanilla en peso corporal de los ratones 
durante la primera fase de la prueba de Lorke. 
0
5
10
15
20
25
30
35
40
0 7 14
Días
G
ra
m
os
1600 mg/kg2900 mg/kg
5000 mg/kg
Vehículo
 
Figura 14. Efecto del extracto de manzanilla en peso corporal de los ratones durante la 
segunda fase de la prueba de Lorke 
Resultados y discusión 
 
 57
A) 
 Extracto de M. recutita
0
10
20
30
40
50
60
70
1,8 1,9 2 2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9 3 3,1
lo g D o sis
N
úm
er
o 
de
 a
cu
m
ul
ad
os
muertos acumulados
Vivos acumulados
 
 
 
 
 
 
 
 
 
B) 
Aceite esencial M. recutita
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
0.5 0.7 0.9 1.1 1.3 1.5 1.7 1.9 2.1 2.3 2.5 2.7 2.9 3.1 3.3
Log dosis
N
úm
er
os
 a
cu
m
ul
ad
os
Muertos acumulados
Vivos acumulados
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 15. Evaluación de la toxicidad para Artemia salina del extracto orgánico (A) y el 
aceite esencial (B) de M. recutita 
 
 
Resultados y discusión 
 
 58
Cuadro 15. Rendimiento de los aceites esenciales. 
Lotes 
Cantidad del 
material vegetal 
(g) 
Aceite esencial 
obtenido 
(mg) 
Rendimiento
(%) 
I 495.0 234.8 0.047 
II 50.0 2.4 0.004 Planta Cultivada III 66.7 3.2 0.004 
A 494.2 154.7 0.031 
B 241.1 179.1 0.074 
C 249.7 143.2 0.057 
Marca 
Comercial 
D 159.5 91.1 0.057 
 
Los aceites de los diferentes lotes (I y III) y marcas comerciales (A-D) de 
manzanilla se analizaron por CG-EM. La caracterización de alguno de los componentes 
de los aceites se realizó mediante la comparación de sus espectros de masas con los 
de la biblioteca del espectrómetro y los de diferentes bancos de datos. Como se aprecia 
en los Cuadros 16-22 y Figuras 16-21, la composición de los aceites analizados es 
similar. Los constituyentes comunes más abundantes en todas las muestras (I y A-D) 
fueron el cis-(Z)-espiroéter (37), el trans-(Z)-espiroéter (38) y la xantocilina (58). La 
herniarina (54) se detectó en tres de las cinco muestras analizadas La muestra A, 
además de los compuestos 37, 38 y 58, presentó una serie de aldehídos novedosos en 
la manzanilla. Es posible que esta muestra sea una mezcla de manzanilla y otra(s) 
planta(s). 
 
De los constituyentes comunes detectados en todas las muestras estudiadas el más 
útil para propósitos analíticos es la xantocilina (58) ya que es químicamente más 
estable. Por lo tanto, se propone a este compuesto como el marcador característico de 
la especie que se cultiva en la zona central de México, estos marcadores son los más 
relevantes tanto para las pruebas de identidad química de las drogas crudas como para 
la estandarización de preparados fitofarmacéuticos. 
Resultados y discusión 
 
 59
Cuadro 16. Componentes identificados en la esencia del lote I de Matricaria recutita. 
 
 
NOMBRE 
tR
(min) 
ABUNDANCIA 
(%) 
PESO 
MOLECULAR 
(g/mol) 
Xantocilina 
(58) 
16.99 19.85 196 
Herniarina 
(54) 
17.78 11.33 228 
Acido palmítico 
(67) 
19.98 7.19 256 
β- eudesmol 
(18) 
16.64 6.11 222 
Trans-(Z)-espiroéter 
(38) 
19.22* 1.06 200 
Cis-(E)-espiroéter 
(37) 
19.36* 2.00 200 
Acido linoleíco 
(66) 
21.72 2.27 280 
Acido heptanoíco 
(68) 
7.10 3.09 130 
Artemisa cetona 
(30) 
7.70 0.32 152 
Acido cáprico 
(62) 
13.11 7.15 172 
 
 
Figura 16. Cromatograma de gases de los componentes identificados en la esencia del lote I de 
Matricaria recutita. Asignación de los picos: ácido heptanoico(68), artemisa cetona (30), ácido 
caprico (62), β-eudesmol (18), xantocilina (58), herniarina (54), trans-(Z)-espiroéter (38), cis-(E)-
espiroéter (37), ácido palmitico (67) y ácido linoleico (66). 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 60
Cuadro 17. Componentes identificados en la esencia del lote III de M. recutita 
 
 
NOMBRE 
tR 
(min) 
ABUNDANCIA 
(%) 
PESO 
MOLECULAR 
(g/mol) 
Oxido de bisabolol (A) 
(3) 
10.78 48.57 238 
Trans-(Z)-espiroéter 
(38) 
11.45* 12.49 200 
Cis-(E)-espiroéter 
(37) 
11.48* 12.49 200 
α- Bisabolol 
(1) 
10.41 6.84 222 
Oxido de bisabolol (B) 
(4) 
10.26 4.48 238 
Espatulenol 
(22) 
9.83 1.07 220 
Camazuleno 
(21) 
10.68 0.56 184 
β-elemeno 
(14) 
9.35 0.21 204 
Óxido de cariofileno 
(9) 
9.68 0.01 220 
 
 
 
Figura 17. Cromatograma de gases de los componentes identificados en la esencia del lote III. 
 
 
Resultados y discusión 
 
 61
Cuadro 18. Componentes identificados en la esencia de la marca comercial A de M. 
recutita. 
 
 NOMBRE 
tR 
(min) 
ABUNDANCIA 
(%) 
PESO 
MOLECULAR 
(g/mol) 
Xantocilina 
(58) 
675.6 14.92 196 
Cis-(E)-espiroéter 
(37) 
746.3 33.58 200 
Trans-(Z)-espiroéter 
(38) 
741.3 11.25 200 
β-elemeno 
(14) 
661.4 4.29 204 
α- Bisabolol 
(1) 
668.5 1.29 222 
 
 
 
 
Figura 18. Cromatograma de gases de los componentes identificados en la esencia de la marca 
comercial A. 
 
 
 
 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 62
Cuadro 19. Componentes identificados en la esencia de la marca comercial (B) de 
M. recutita 
 
NOMBRE 
tR 
(min) 
ABUNDANCIA (%) PESO 
MOLECULAR 
(g/mol) 
Xantocilina 
(58) 
17.15 19.50 196 
Ácido palmítico 
(67) 
20.14 12.36 256 
β-eudesmol 
 
16.88 9.18 204 
Cis-(E)-espiroéter 
(37) 
19.45* 8.51 200 
Trans-(Z)-espiroéter 
(38) 
19.53* 6.23 200 
Acido caprico 
(62) 
12.97 4.63 172 
Herniarina 
(54) 
17.79 4.56 176 
β-cariofileno 
(10) 
14.07 1.68 204 
 
 
 
 
 
Figura 19. Cromatograma de gases de los componentes identificados en la esencia de la marca 
comercial B, de Matricaria recutita. ácido caprico (62), β-cariofileno (10), β-eudesmol (18), xantocilina 
(58), herniarina (54), cis-(E)-espiroéter (37), trans-(Z)-espiroéter (38) y acido palmitico (67). 
 
 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 63
Cuadro 20. Componentes identificados en la esencia de la marca comercial (C) de M. 
recutita 
 
 
NOMBRE 
tR 
(min) 
ABUNDANCIA (%) PESO 
MOLECULAR 
(g/mol) 
Xantocilina 
(58) 
16.86 20.85 196 
Trans-(Z)-espiroéter 
(38) 
19.28* 23.04 200 
Cis-(E)-espiroéter 
(37) 
19.37* 12.88 200 
β- cariofileno 
(10) 
13.85 3.42 256 
β- eudesmol 
(18) 
16.64 3.35 222 
Acido linoléico 
(66) 
21.63 1.46 280 
Acido palmítito 
(67) 
19.92 6.15 256 
Herniarina 
(54) 
17.57 1.29 176 
 
 
 
 
 
 
Figura 20. Cromatograma de gases de los componentes identificados en la esencia de la marca 
comercial C, de Matricaria recutita. β- cariofileno (10), β-eudesmol (18), xantocilina (58), herniarina 
(54), trans-(Z)-Espiroeter (38), cis-(E)-espiroéter (37), ácido palmitico (67) y ácido linoleico (66). 
 
 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 64
Cuadro 21. Principales componentes de la esencia de la marca comercial (D) de 
M. recutita 
 
 
NOMBRE 
tR 
(min) 
ABUNDANCIA 
(%) 
PESO 
MOLECULAR 
(g/mol) 
Xantocilina 
 (58) 
763.9 9.02 196 
Trans-(Z)-espiroéter 
(38) 
700.0 0.5 200 
Cis-(E)-espiroéter 
(37) 
740.9 0.5 200 
β- cariofileno 
(10) 
764.3 12.3 256 
Acido palmítico 
(67) 
764.3 12.3 256 
Herniarina 
(54) 
668.3 2.43 176 
Artemisa cetona 
(30) 
1.01 0.32 152 
 
 
 
Figura 21. Cromatograma de gases de los componentes identificados en la esencia de la 
marca comercial D, de Matricaria recutita. 
 
 
 
Resultados y discusión 
 
 65
El camazuleno (21) compuesto marcador de la manzanilla europea y argentina, 
sólo se detectó en el producto comercial proporcionado por los Laboratorios Mixim. Por 
lo tanto, la prueba de identidad y composición que se proponen en la FHEUM para la 
flor de manzanilla no son las adecuadas para la droga cruda derivada de la planta 
cultivada en México. 
 
5.5 Obtención de los perfiles cromatográficos de los aceites esenciales de M. 
recutita 
 
Con la finalidad de completar las pruebas de identidad se generaron los perfiles 
cromatográficos utilizando (CLAR). Para ello fue necesario desarrollar un método que 
permitiera la mejor separación de los constituyentes del aceite y la clara detección del 
compuesto marcador. 
La concentración del aceite se ajustó para tener un rango de respuesta menor a 1.0 
unidad de absorbancia. De esta forma la concentración analizada de los aceites fue de 
0.08 mg/mL y el tiempo de corrida de 60 minutos. En las figuras 22-25 se aprecian, a 
manera de