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Co pa CENTRO orrelació ara pred Q D INSTITU O DE INV Y TE POSGRA ón entre decir el s TESIS Q MAESTR Q. en A. S Dr. PEDRO UTO PO VESTIGAC ECNOLOG Unidad DO EN TEC los anál sabor y n QUE PARA O RÍA EN TEC P R E S SILVIA P DIRECTO O ALBERTO SANTI OLITÉCN CIÓN EN GÍA AVA Queréta CNOLOGÍA lisis inst nivel de OBTENER EL CNOLOGÍA S E N T PINEDA OR DE TESIS VÁZQUEZ AGO DE QU NICO NA CIENCIA NZADA ro A AVANZAD trument agrado e GRADO DE A AVANZAD A PETRIC Z LANDAVE ERÉTARO, Q ACIONA A APLICA DA al y sens en papa DA HOLI ERDE QRO. NOVIEM AL ADA sorial frita MBRE 2010 Agradecimientos A Dios, por permitirme llegar hasta aquí. A mi mami, por darme tanto amor y cuidados. A mi Baruchito, por siempre hacerme sonreír a la vida. A mis hermanos, por su incondicional cariño y apoyo. A todos mis tíos y primos preferidos, por tantos buenos consejos llenos de amor. Al Dr. Pedro, por su inmensa paciencia, grandiosas enseñanzas y eterno buen humor. Al irremplazable doctor Pless, por su valioso e incondicional apoyo, sus hermosos gestos de cariño e inolvidables anécdotas de enseñanza. A la Dra. Norma, por su valiosa colaboración. A la Dra. Eva, por su valioso y generoso apoyo. Al Dr. Iván, por su amable disponibilidad e incondicional ayuda. A Vivis, por siempre brindarme su sincera amistad, apoyarme y ser como una verdadera hermanita a lo largo de toda esta experiencia de vida. A mis incondicionales amigos, Gilda, Martha, Alicia, Marco, Julio y Gera por tantos bellos momentos juntos, por sus inigualables palabras de aliento y siempre brindarme un sincero y cariñoso abrazo. A mis inigualables compañeros y amigos de CICATA, Miriam, Irais, Nuria, Susana, Fabiola, Yosselin, Claudia, Gera, Ana y David. A todo el personal de CICATA, por todo su apoyo y por siempre brindarme una sonrisa. Para mi mami que tanto quiero i ÍNDICE DE TABLAS ........................................................................................................................ iii ÍNDICE DE FIGURAS ...................................................................................................................... iv RESUMEN ..................................................................................................................................... vi ABSTRACT ..................................................................................................................................... vii 1. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................... 1 2. ANTECEDENTES ..................................................................................................................... 3 2.1 GENERALIDADES DE LA PAPA ........................................................................................ 3 2.1.1 VALOR NUTRICIONAL ............................................................................................ 3 2.1.2 USO INTEGRAL DE LA PAPA ................................................................................... 4 2.2 REQUERIMIENTOS PARA LA INDUSTRIALIZACIÓN DE PAPA ......................................... 6 2.2.1 MATERIA SECA Y ALMIDÓN EN PAPA .................................................................... 6 2.2.2 AZÚCARES REDUCTORES EN PAPA ........................................................................ 7 2.3 SABOR EN PAPA FRITA .................................................................................................. 8 2.3.1 FORMACIÓN DEL SABOR A TRAVÉS DE MAILLARD ............................................... 9 2.3.2 SABOR A PARTIR DE LÍPIDOS ............................................................................... 13 2.3.3 COMPUESTOS DE SABOR REPORTADOS EN PAPA FRITA .................................... 16 2.3.4 FACTORES QUE INFLUYEN EN LA REACCIÓN DE MAILLARD ................................ 23 2.4 ANÁLISIS INSTRUMENTAL DEL SABOR ........................................................................ 26 2.4.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA .......................................................................... 27 2.4.2 EXTRACCIÓN Y CONCENTRACIÓN ....................................................................... 27 2.4.3 SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN .......................................................................... 34 2.5 ANÁLISIS SENSORIAL DEL SABOR ................................................................................ 35 2.5.1 JUECES ENTRENADOS, OBJETIVOS O ANALÍTICOS .............................................. 37 2.5.2 JUECES CONSUMIDORES O AFECTIVOS ............................................................... 37 2.5.3 APLICACIONES DEL ANÁLISIS SENSORIAL ............................................................ 37 2.6 CORRELACIÓN CON EL ANÁLISIS MULTIVARIADO DE COMPONENTES PRINCIPALES 39 2.6.1 FASES DE UN ANÁLISIS DE COMPONENTES PRINCIPALES: ......................................... 39 3. JUSTIFICACIÓN..................................................................................................................... 41 4. HIPÓTESIS ............................................................................................................................ 43 5. OBJETIVOS ........................................................................................................................... 44 5.1 GENERAL ...................................................................................................................... 44 ÍNDICE GENERAL ii 5.2 PARTICULARES ............................................................................................................. 44 6. MATERIALES Y MÉTODOS .................................................................................................... 45 6.1 MUESTRAS DE PAPA FRITA .......................................................................................... 45 6.2 EVALUACIÓN SENSORIAL CON JUECES ENTRENADOS. ............................................... 45 6.3 EVALUACIÓN SENSORIAL CON CONSUMIDORES. ....................................................... 49 6.4 EVALUACIÓN INSTRUMENTAL ..................................................................................... 51 6.4.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA .......................................................................... 51 6.4.2 DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS ............................................... 52 6.4.3 CURVAS DE CALIBRACIÓN PARA LA CUANTIFICACIÓN DE COMPUESTOS VOLÁTILES Y SEMIVOLÁTILES EN PAPA FRITA. .................................................................... 54 6.5 CORRELACIÓN INSTRUMENTAL Y SENSORIAL ............................................................. 55 7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN .................................................................................................. 56 7.1 EVALUACIÓN SENSORIAL CON JUECES ENTRENADOS. ............................................... 56 7.1.1 OBTENCIÓN DEL PERFIL DESCRIPTIVO CUANTITATIVO DE LAS PAPAS FRITAS ... 56 7.2 EVALUACIÓN SENSORIAL CON CONSUMIDORES. ....................................................... 61 7.2.1 DETERMINACIÓN DEL NIVEL DE AGRADO DE LAS PAPAS FRITAS. ...................... 61 7.3 EVALUACIÓN INSTRUMENTAL ..................................................................................... 62 7.3.1 CURVAS DE CALIBRACIÓN PARA CUANTIFICACIÓN DE COMPUESTOS VOLÁTILES Y SEMIVOLÁTILES. ............................................................................................................... 62 7.3.2 PERFILDE COMPUESTOS VOLÁTILES Y SEMIVOLÁTILES EN PAPA FRITA POR MEDIO DE SPME‐GC‐MS. .................................................................................................... 65 7.4 CORRELACIÓN INSTRUMENTAL Y SENSORIAL ............................................................. 76 7.4.1 ANÁLISIS MULTIVARIADO DE COMPONENTES PRINCIPALES ............................. 76 8. CONCLUSIONES ................................................................................................................... 78 9. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................... 79 iii ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1. Composición química de papas en base a peso fresco. .................................................. 4 Tabla 2. Principales compuestos de sabor reportados en papa frita. ........................................ 20 Tabla 3. Descriptores y niveles para cada descriptor de olor y sabor en papa frita establecidos por el panel de jueces entrenados. ............................................................................................. 46 Tabla 4. Condiciones establecidas para la extracción de compuestos volátiles y semivolátiles por la técnica SPME. .................................................................................................................... 51 Tabla 5. Rampas de temperatura utilizadas en el horno del cromatógrafo de gases. ............... 53 Tabla 6. Concentraciones final de cada compuesto estándar para las curvas de calibración. ... 54 Tabla 7. Compuestos en papa frita cuantificados por cada curva de calibración ...................... 55 Tabla 8. Valores medios de intensidad obtenidos para cada descriptor de las siete muestras de papa frita por medio del panel de jueces entrenados. ............................................................... 57 Tabla 9. Correlación de cada componente principal con cada variable (descriptor) dada por el panel de jueces entrenados en papa frita. .................................................................................. 58 Tabla 10. Nivel de agrado para las siete muestras de papa frita por consumidores. ................. 61 Tabla 11. Coeficientes de variación para cada estándar de la curva de calibración .................. 62 Tabla 12. Identificación y cuantificación (ppm) de compuestos en papa frita con la curva de calibración de 2‐Etil‐3,5‐dimetilpirazina. .................................................................................... 66 Tabla 13. Identificación y cuantificación (ppm) de compuestos en papa frita con la curva de calibración de Metional. .............................................................................................................. 67 Tabla 14. Identificación y cuantificación (ppm) de compuestos en papa frita con la curva de calibración de 1‐Octen‐3‐ol. ....................................................................................................... 67 Tabla 15. Identificación y cuantificación (ppm) de compuestos en papa frita con la curva de calibración de Heptanal. ............................................................................................................. 68 Tabla 16. Compuestos con carácter de aroma y sabor en papa frita. ........................................ 72 iv ÍNDICE DE FIGURAS Figura 1. Uso integral de la papa. ................................................................................................. 5 Figura 2. Formación de compuestos de sabor por reacción de Maillard. .................................... 8 Figura 3. Rutas para la formación de compuestos durante la reacción de Maillard. ................... 9 Figura 4. Clases de compuestos orgánicos volátiles heterocíclicos que contienen nitrógeno formados durante la reacción de Maillard. ................................................................................. 11 Figura 5. Compuestos que contienen oxígeno y azufre formados durante la reacción de Maillard ....................................................................................................................................... 13 Figura 6. Mecanismo propuesto para formación de compuestos volátiles a partir del calentamiento de grasas animales .............................................................................................. 14 Figura 7. Dispositivo de micro extracción en fase sólida (SPME). Se observa la fibra de sílice fundida y el holder que controla la entrada y salida de la fibra. ................................................. 32 Figura 8. Proceso de extracción de analitos del headspace mediante la fibra de microextración en fase sólida ............................................................................................................................... 33 Figura 9. Formato de la hoja de evaluación para la prueba de identificación de escalas para cada atributo de olor y sabor en papa frita. ............................................................................... 47 Figura 10. Formato de hoja de evaluación para la prueba de evaluación sensorial para cada atributo de olor y sabor en cada una de las diferentes muestras de papa frita. ........................ 48 Figura 11. Imágenes de las condiciones establecidas durante la evaluación sensorial de las siete muestras de papa frita con consumidores. ................................................................................. 49 Figura 12. Hoja de respuesta utilizada para la evaluación sensorial en prueba de nivel de agrado con consumidores para papa frita. ................................................................................. 50 Figura 13. Dispositivo implementado para extracción de compuestos volátiles y semivolátiles en papa frita mediante la técnica de SPME.. .............................................................................. 52 Figura 14. Cromatógrafo de gases acoplado al espectrómetro de masas. ................................. 53 Figura 15. Gráfica de análisis de componentes principales de los resultados obtenidos del análisis descriptivo cuantitativo para cada muestra de papa frita por parte del panel de jueces entrenados. ................................................................................................................................. 60 Figura 16. Curva de calibración para Heptanal obtenida............................................................ 63 Figura 17. Curva de calibración para 1‐Octen‐3‐ol obtenida. ..................................................... 63 Figura 18. Curva de calibración para 2‐Etil‐3,5‐dimetilpirazina obtenida .................................. 64 Figura 19.Curva de calibración para Metional obtenida ............................................................ 64 v Figura 20. Gráfica de análisis de componentes principales de resultados obtenidos del análisis químico instrumental (SPME‐GC‐MS) para las siete muestras de papa frita. ............................ 75 Figura 21. Gráfica de análisis de componentes principales de los resultados obtenidos del análisis instrumental y sensorial en nivel de agrado y los descriptores de olor/sabor para las siete muestras de papa frita. ...................................................................................................... 77 vi RESUMEN Los alimentos fritos como las papas fritas son, generalmente, bien aceptados por los consumidores debido tanto a las propiedades físicas que presentan como a su sabor característico. Este sabor y aroma son debidos a la formación de compuestos volátiles y semivolátiles que vienen tanto de cambios inducidos térmicamente en la papa (reacción de Maillard) como de los cambios desarrollados al freír el aceite (degradación de lípidos), los cuales son responsables de la calidad final delproducto. En este trabajo se llevó a cabo la aplicación del análisis sensorial descriptivo cuantitativo de un panel entrenado y pruebas hedónicas sensoriales con consumidores en siete muestras de papa frita de diferente origen comercial; así mismo, se desarrolló una técnica de cuantificación de compuestos volátiles y semivolátiles en papa frita de diferente origen comercial utilizando curvas de calibración en matriz real, microextracción en fase sólida (SPME), análisis por cromatografía de gases con detección de espectrometría de masas (GC-MS) y análisis multivariado de componentes principales (PCA). Mediante el panel de jueces entrenados se describió cualitativa y cuantitativamente las diferencias entre las papas fritas. Entre los descriptores que se obtuvieron, los de mayor influencia en la calidad del producto fueron olor-sabor a papa cocida y cacahuate, sabor aceitoso y olor-sabor a buñuelo. Por medio de una prueba sensorial con consumidores se determinó el nivel de agrado de las muestras de papa frita de variado origen comercial. La técnica SPME-GC-MS presentó aceptable sensibilidad y reproducibilidad, se usó satisfactoriamente para la extracción, identificación y cuantificación de un total de 135 compuestos volátiles y semivolátiles de las siete diferentes muestras de papa frita: principalmente el perfil de compuestos fue de 37 aldehídos, 20 ácidos, 13 cetonas, 16 pirazinas, 11 alcoholes y 10 azufrados. Los compuestos que marcaron la mayor diferencia entre las muestras fueron bencenacetaldehído, metional, dimetil trisulfuro, hexanal, 2-decenal y 2,4- decadienal con nota floral, papa cocida, col, verde, grasoso y rancio, respectivamente. Siendo las muestras con mayor proporción de compuestos azufrados las de mejor agrado, mientras que las muestras con mayor cantidad de aldehídos fueron las de menor agrado. Los resultados mostraron que mediante el desarrollo de una metodología instrumento-sensorial es posible identificar y diferenciar de manera rápida y eficaz los compuestos químicos responsables de determinados olores y sabores en papa frita, lo que permite reunir información para la exploración y predicción del nivel de agrado de nuevos prototipos de papa frita de diferente procedencia y calidad de manera más sencilla. vii ABSTRACT Fried foods like potato chips are generally well accepted by consumers due to their physical properties and characteristic flavor. The flavor and aroma of potato chips arise from the formation of volatile and semi-volatile compounds by thermal treatment (Maillard reaction) and lipid breakdown in frying oil. Final flavor and aroma are strongly responsible for the overall product quality. In this work, methodologies such as quantitative descriptive sensory analysis by trained judges and hedonic sensory consumer tests were carried out on seven potato chip samples of different commercial origin. Likewise, a technique for the quantification of volatile and semi-volatile compounds was developed using calibration curves constructed using the standard addition technique in real matrix and solid phase micro extraction (SPME), coupled to gas chromatography analysis with mass spectrometry detection (GC-MS), and finally principal components analysis was performed. Results from the panel of trained judges described the differences between the chips´ main attributes. Among the descriptors obtained by the panel, the most important for product flavor was baked potato odor and taste, peanuts odor and taste, oily taste and buñuelo odor and taste. Consumer sensory testing determined the preference level for the potato chips samples studied. The SPME GC-MS technique developed was sensible and reproducible, and was successfully used for the extraction, identification and quantification of a total of 135 volatile and semi-volatile compounds in the potato chip samples, including 37 aldehydes, 20 acids, 13 ketones, 16 pyrazines, 11 alcohols, and 10 sulfur compounds. Main differences between samples were mostly due to benzene acetaldehyde, methional, dimethyl trisulfide, hexanal, 2-decenal, and 2,4-decadienal, which afford notes of floral, cooked potato, cabbage, green, oily, stale, respectively. Samples with the highest concentration of sulfur compounds were the most highly preferred, while samples with higher amounts of aldehydes were preferred the least. In conclusion, by developing a sensory-based instrumental methodology it is possible to identify and differentiate in a fast and effective way the chemical compounds responsible for desirable and undesirable odors and tastes in potato chips, which makes it possible to get valuable information for exploration and prediction of the level of pleasure provided by new potato chips prototypes of different origin and quality. 1 1. INTRODUCCIÓN Hoy en día, la papa ocupa el cuarto lugar mundial en importancia como alimento, después del maíz, el trigo y el arroz. La cantidad que se consume en fresco es menos del 50% de la producción mundial. Con el resto se obtienen alimentos e ingredientes alimentarios industriales. La papa tiene un elevado valor nutricional y una gran versatilidad que la ha llevado, en el mercado mundial, del consumo en fresco al de alimentos procesados con valor añadido. De todos los productos de papa industrializados, el que ha tenido mayor crecimiento ha sido el de papa frita, a la que se destina cerca del 80% del volumen total dirigido para la industria. La buena calidad de la papa frita depende principalmente de su composición química y de las condiciones de procesamiento durante su freído. En el producto final obtenido, la buena apariencia, textura crujiente y sabor agradable son puntos importantes de cara al consumidor. La industrialización de hojuelas de papa frita en sus diferentes presentaciones y sabores, por su parte, representan un importante segmento del creciente mercado de “snacks” a nivel mundial. Entre las nuevas oportunidades presentes para estos productos está el desarrollo de hojuelas de papas con sabores mejorados. La formación de color, sabor y aroma en la papa frita es debida principalmente a una serie de reacciones químicas que inician con una reacción entre azúcares reductores y aminoácidos, esta reacción de oscurecimiento no enzimático es conocida como reacción de Maillard. Así mismo, la degradación de lípidos es otra fuente importante en el desarrollo final de aroma y sabor en este tipo de productos. Los consumidores esperan principalmente productos libres de malos olores y sabores. Mediante la aplicación de un análisis sensorial descriptivo y nuevas tecnologías analíticas químicas es posible identificar de manera rápida y eficaz los productos químicos responsables. El análisis sensorial descriptivo es una herramienta imprescindible para obtener información en la investigación del sabor a la que no se puede observar con otras técnicas analíticas. El utilizar panelistas entrenados para identificar y cuantificar perfiles o características sensoriales ayuda a direccionar modificaciones en el procesamiento para la obtención de alimentos con calidad mejorada. Así mismo, un análisis sensorial hedónico con consumidores expresa si el producto gusta o disgusta, si lo acepta o lo rechaza, si lo prefiere a otro o no; siendo estos estudios esenciales para saber en qué medida un producto puede resultar 2 agradable al consumidor. Con la desventaja de que todo ello conlleva a describir o definir perfiles e intensidades así como determinar el nivel de agrado de un producto de manera subjetiva, con altos gastos económicos y mayor tiempo de análisis. Existen pruebas instrumentales que son sofisticadas y sensibles, capaces de detectar, identificar y cuantificar los agentes químicos responsables de los sabores. Las nuevas técnicas de análisis son tan poderosas que a menudo pueden lograr esto conla velocidad, precisión y la fiabilidad que no es posible al utilizar el análisis sensorial por sí solo. Por ello, el relacionar la percepción sensorial con el análisis instrumental de sabores resulta bastante útil para la obtención de información más completa y confiable. Las diversas técnicas utilizadas para identificar los compuestos químicos responsables de sabores específicos, complementadas con la ayuda de un panel entrenado en la validación de un léxico, facilita la comunicación entre los diferentes miembros del panel de investigación. Conduciendo de forma precisa y coherente, a caracterizar el sabor de los productos y mejorar la calidad en cuestiones de medir y controlar la presencia de dichos compuestos. El idioma sensorial, la vinculación química y los factores de causalidad, proporcionan un terreno común en los fabricantes de alimentos para discutir las mejoras que se pueden tener al modificar los diferentes ingredientes. De lo anterior surge la necesidad industrial de desarrollar metodologías instrumento- sensoriales para la determinación, diferenciación y predicción del sabor y aroma en papa frita, reuniendo así mayor información química y sensorial para la exploración de nuevos prototipos mejorados que agraden al consumidor. 3 2. ANTECEDENTES 2.1 GENERALIDADES DE LA PAPA La papa es el tubérculo de las plantas de nombre científico Solanum tuberosum, ocupa el cuarto lugar mundial en importancia como alimento, después del maíz, el trigo y el arroz. Se cultiva en más de 100 países, en clima templado, subtropical y tropical. Los cuatro mayores productores de papa en el 2007 fueron China (70 millones de toneladas), la Federación Rusa (39 millones toneladas), India (24 millones de toneladas) y EE.UU. (20 millones de toneladas) siendo el consumo per cápita mucho mayor en Rusia (>140 kg/persona) que en los demás países (FAO, 2008). Las papas pueden ser cultivadas dondequiera que no haya temperaturas demasiado calientes (por encima de 21°C), ni demasiado frías (por debajo de 5°C), y con la adecuada agua de lluvia o riego. Actualmente existen miles de variedades con grandes diferencias de tamaño, forma, color, textura, cualidades y sabor (FAO, 2008). La buena apariencia, textura y sabor son importantes para el consumidor y para el objeto de muchas investigaciones (Taylor y col., 2007). Como un importante alimento básico, la Organización de las Naciones Unidas designó el 2008 como el Año Internacional de la Papa con el objetivo de desarrollar programas para la erradicación del hambre y la pobreza humana a través de la investigación; la papa no sólo proporciona alimento, sino también empleo e ingresos como un cultivo comercial. 2.1.1 VALOR NUTRICIONAL La papa está constituida por tres partes de agua y una parte de sólidos (carbohidratos, proteínas, lípidos, minerales y vitaminas). Es el carbohidrato (almidón) más importante en la dieta de cientos de millones de personas. También proporciona cantidades significativas de proteínas, con un buen balance de aminoácidos, vitaminas (C, B6 y B1), minerales como el potasio, fósforo, calcio y magnesio; y micronutrientes como el hierro y el zinc. Tiene un alto contenido de fibra dietética (>1%), especialmente cuando se come sin pelar, y es rica en antioxidantes que comprenden polifenoles, vitamina C, carotenoides y tocoferoles (Storey, 2007). Además las papas frescas presentan bajos contenidos de grasa. Una guía de la composición de la papa se muestra en la Tabla 1, los valores se ven afectados por el tipo de cultivo y por las condiciones de crecimiento. 4 Tabla 1. Composición química de papas en base a peso fresco. (Adaptado de Storey, 2007; Li y col., 2006) 2.1.2 USO INTEGRAL DE LA PAPA La Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO) calcula que dos terceras partes de los 320 millones de toneladas de papa que se produjeron mundialmente en el 2005 se destinaron al consumo alimentario de las personas. Una vez cosechada, las papas que se consumen frescas son menos del 50% de la producción mundial. Con el resto se obtienen alimentos e ingredientes alimentarios industriales, piensos para el ganado, almidón para la industria, y tubérculos semilla para la siguiente cosecha. La papa tiene un elevado valor nutricional, versatilidad y una gran diversidad de uso de carácter industrial. Es por ello que en el mercado mundial está pasando del producto fresco a los productos alimentarios industriales, con valor añadido, como son: papas congeladas, hojuelas Componente Contenido Materia seca 15-28% Almidón 12.6-18.2% Glucosa 0.01-0.6% Fructosa 0.01-0.6% Sacarosa 0.13-0.68% Fibra dietética 1-2% Lípidos 0.075-0.2% Proteína 0.6-2.1% Asparagina (libre) 110-529 mg/100g Glutamina (libre) 23-409 mg/100g Prolina (libre) 2-209 mg/100g Otros aminoácidos (libres) 0.2-117 mg/100g Polifenoles 123-441 mg/100g Carotenoides 0.05-2 mg/100g Tocoferoles 0.3-0.4 mg/100g Tiamina B1 0.02-0.2 mg/100g Riboflavina 0.01-0.07 mg/100g Vitamina B6 0.13-0.44 mg/100g Vitamina C 8-54 mg/100g Vitamina E ~0.1 mg/100g Ácido fólico 0.01-0.03 mg/100g Nitrógeno (total) 0.2-0.4% Potasio 280-564 mg/100g Fósforo 30-60 mg/100g Calcio 5-18 mg/100g Magnesio 14-18 mg/100g Fierro 0.4-1.6 mg/100g Zinc ~0.3 mg/100g 5 crocantes de papa, copos de papa deshidratada, harinas, almidón de papa, para la producción de bebidas fermentadas; así como también para usos no alimentarios: gomas, piensos y etanol para producir combustibles (FAO, 2008). La Figura 1 muestra un diagrama donde se resume el uso integral de la papa. En México la papa representa cerca del 4% del valor de la producción agrícola nacional; se produce en 23 estados, con un volumen de 1 millón 780 mil toneladas al año. El destino de la producción de papa en México es de 58% para el mercado fresco, para la industria el 25%, y para sembrar el 17% (SAGARPA, 2008). Figura 1. Uso integral de la papa. (Egúsquiza, 2000) Hoy en día, los productos procesados más importantes son las papas fritas y las papas a la francesa, seguidos por productos congelados y deshidratados. Los procesadores de papa requieren variedades de papa con características específicas para satisfacer la demanda de calidad de los productos. La apropiada morfología del tubérculo, adecuados contenidos de sólidos y niveles bajos de glucosa son factores muy importantes, así como la ausencia de daños mecánicos, magulladuras y defectos internos. De todos los productos de papa industrializados, el que ha tenido mayor crecimiento ha sido el de papa frita debido a que se le destina cerca del 80% del volumen total utilizado por la industria (Kirkman, 2007). La buena calidad de la papa frita depende principalmente de la composición química de la papa y por ello, es uno de los factores más utilizados para la clasificación y 6 compra de variedades para la elaboración de sus diferentes productos (FAO, 2008). Las nuevas oportunidades para estos productos están en el desarrollo de hojuelas de papas con nuevos sabores, bajas o libres de grasa y sal, naturales (directamente obtenidas del tubérculo, sin la adición de harinas en la formación de las hojuelas) y orgánicas (materia prima con la menor cantidad de químicos añadidos durante su cultivo y/o cosecha). Actualmente el mercado internacional de “snacks” está dominado por Frito-Lay, que ha sido parte de Pepsico desde 1965. La compañía opera alrededor de 67 plantas en 27 países en todo el mundo (Kirkman, 2007). 2.2 REQUERIMIENTOS PARA LA INDUSTRIALIZACIÓN DE PAPA Hay que distinguir entre la calidad interna y externa en la papa para la elaboración de los productos de mayor consumo. Ambos factores van a tener una influencia decisiva en la capacidad de elaboración de un producto y en la economía de la producción.La calidad externa de la papa viene determinada por el tipo de variedad y por las influencias del ambiente. Principalmente, las características influidas por las condiciones ambientales son: coloración verde del tubérculo, tubérculos deformados, deterioro, agujeros y corazón hueco de los tubérculos, pudriciones y rajaduras por sequía. Las características influidas por la variedad son: profundidad de los ojos, color de la piel y carne, forma y tamaño del tubérculo y rendimiento de cosecha (Andrade, 1997). La calidad interna está determinada por la composición química de la papa, que es uno de los factores más utilizados para la clasificación y compra de variedades para la elaboración de diferentes productos de papa. Los componentes más significativos para la industria de procesamiento son los altos contenidos de almidón y materia seca. Otros componentes que influyen directamente en la calidad y clasificación de variedades para diferentes procesos industriales son la glucosa, fructosa y sacarosa. Estos son los azúcares más importantes y los que se encuentran en mayor cantidad en la carne del tubérculo. Además de la composición química, en lo referente a la calidad interna de la papa, la industria procesadora considera la tendencia al oscurecimiento de las hojuelas y los bastones cuando se fríen (Andrade, 1997). 2.2.1 MATERIA SECA Y ALMIDÓN EN PAPA La determinación del contenido en materia seca y almidón se realiza mediante el cálculo de gravedad específica de las variedades. El contenido en materia seca 7 determina el rendimiento del producto terminado. Así por ejemplo, aumenta el rendimiento de las hojuelas por menores pérdidas cuantitativas de evaporación de agua, mientras que disminuye la retención de aceite en la fritura. Esto es importante, tanto para la economía como para la nutrición fisiológica. El contenido ideal en materia seca es de 25% (y del 60-80% de almidón) en el caso de papas fritas referidas a materia fresca, en caso contrario dejarían de ser comerciales (Egúsquiza, 2000). 2.2.2 AZÚCARES REDUCTORES EN PAPA El contenido en azúcares reductores (glucosa y fructosa, principalmente) puede variar desde cantidades trazas hasta más del 10% del peso seco total del tubérculo, dependiendo considerablemente de las variedades. El almacenamiento de tubérculos a bajas temperaturas (< 4°C) causa un incremento en el contenido de azúcares, lo cual es probablemente el problema más importante que enfrentan los procesadores de papa. Los azúcares reductores tienen una influencia significativa en la elaboración de productos fritos porque influyen directamente en la formación del color y del sabor de los mismos. Si el contenido en azúcares reductores es alto, aparece un producto con color marrón oscuro y sabor amargo. Por eso, la industria requiere de variedades con bajos contenidos en azúcares reductores; un valor inferior al 0.1% del peso fresco es ideal para la producción de hojuelas (Egúsquiza, 2000). El color de la papa cruda tiene una relación directa con el contenido en azúcares reductores. En su apariencia externa y estado de maduración, el color debe ser desde un color blanco amarillento (aceptable) pasando por un color amarillo-oro (deseable) hasta un color marrón-negruzco (rechazable), que viene dado por la alta concentración de azúcares reductores (2%) y que hace a un producto indeseable en sabor y apariencia. Los requerimientos de calidad que la papa cruda debe cumplir son: color aceptable (determinado por el bajo contenido en azúcares, < 0.1%), alto contenido en materia seca (> 20%), excelente textura y sabor del producto final, ausencia de enfermedades o daños, tamaño entre 40-80 mm (Egúsquiza, 2000). En el producto final obtenido, la buena apariencia, textura crujiente y sabor agradable son puntos importantes de cara al consumidor. Ello se consigue procesando papas de alta calidad, supervisadas y clasificadas para el procesamiento específico de papa frita. 8 2.3 SABOR EN PAPA FRITA La formación del sabor en la papa frita es debida, principalmente, a reacciones químicas entre azúcares reductores y aminoácidos presentes en la papa al momento de freír. Esta serie de reacciones de oscurecimiento no enzimático es conocida como reacción de Maillard. La reacción de Maillard es una de las rutas que sigue el oscurecimiento no enzimático (caramelización, reacción Maillard, y oscurecimiento por ácido ascórbico). De estas rutas, la reacción de Maillard juega un papel importante en el desarrollo del sabor. En general, la reacción de Maillard es una reacción entre carbonilos y aminas. Los carbonilos en la mayoría de los alimentos son a menudo azúcares reductores, mientras que las aminas vienen de aminoácidos o proteínas. Los productos mayoritarios finales de la reacción de Maillard son las melanoidinas y otros compuestos no volátiles (Figura 2). Sin embargo, más de 3500 compuestos volátiles se atribuyen a esta reacción y teniendo un bajo umbral sensorial son importantes en el desarrollo del aroma en el alimento. Mientras estos volátiles constituyen una porción muy pequeña (en masa) del total de los productos de la reacción, ellos son los principales contribuyentes del sabor en el alimento (Reineccius, 2006). Figura 2. Formación de compuestos de sabor por reacción de Maillard. (Vernin y Parkanyi, 1982) 3-Furanonas 3-Piranonas Pirroles Tiofeno Hidroxiacetona Ciclotene Dihidroacetona Hidroxiacetil Glicol Piruvaldehído Glicoaldehído Gliceraldehído Amino ácidos de Strecker Aldehídos y α-amino cetonas Azúcares reductores y α-aminoácidos N-glicosilaminas o N-frutosilaminas -3H2O 1-amino-1deoxicetosas o 1-amino-2-deoxi-2aldosa Furfurales (Rearreglo de Amadori o Heyns) Reductonas y dehidroreductonas Piridinas Pirazinas Oxazoles Heterociclación Tiazoles Pirroles Imidazoles Acetoina H2S NH3 9 2.3.1 FORMACIÓN DEL SABOR A TRAVÉS DE MAILLARD La reacción de Maillard inicia con la reacción entre aminoácidos y azúcares reductores para formar iminas. Estas iminas llevan a cabo un rearreglo para formar productos inestables de Amadori (precursor aldosa) o Heyns (precursor cetosa). Después pueden perder un aminoácido para formar 1- y 3-deoxiosonas, que serán sometidas a numerosas reacciones para formar compuestos heterocíclicos aromáticos (Figura 3, ruta A). Alternativamente, los productos de Amadori/Heyns se fragmentan a través de una condensación retroaldólica o por un enlace α o β. Estos fragmentos sufren condensaciones aldólicas o reacciones fragmento/aminoácido resultando en la formación de compuestos heterocíclicos aromáticos (Figura 3, ruta B). La ruta restante a seguir es la degradación de Strecker (Figura 3, ruta C). En esta ruta, dicarbonilos o los intermediarios hidroxicarbonilos y aminoácidos descarboxilados proporcionan los correspondientes aldehídos de Strecker (Reineccius, 2006). Gran cantidad de investigaciones se han hecho para determinar las diferentes rutas para la formación de clases específicas o compuestos individuales de aroma. Figura 3. Rutas para la formación de compuestos durante la reacción de Maillard. (Kerler y Winkel, 2002) AMINO ÁCIDO AZÚCAR REDUCTOR Compuestos del rearreglo de Amadori/Heyns 1- y 3- deoxisonas Productos de ciclación COMPUESTOS DE SABOR Y AROMA -amino ácido H2S reducción H2S reducción, deshidratación Productos de fragmentación Productos de condensación Productos de ciclación H2S, NH3 , fragmentos amino H2S, NH3 STRECKER Condensación retroaldólica o enlaces α (β) A C B + 10 La mayoríade los compuestos formados vía reacción de Maillard son aldehídos alifáticos, cetonas, dicetonas, y ácidos grasos de bajo peso molecular. Sin embargo, compuestos heterocíclicos que contienen oxígeno, nitrógeno, azufre, o combinación de estos átomos son mucho más numerosos y significantes para el sabor de alimentos procesados térmicamente. COMPUESTOS CON CARBONILO La principal ruta que conduce a la formación de carbonilos es la degradación de Strecker. Esta reacción se produce entre dicarbonilos y aminoácidos libres. Los dicarbonilos complejos tienen carbonilos vecinales (grupos carbonilo separados por un enlace doble) o dobles enlaces conjugados (Rizzi, 1999). Si bien estos son típicamente carbonilos intermediarios en la reacción de Maillard, también pueden ser constituyentes normales en los alimentos (por ejemplo, ácido ascórbico), ser productos finales del oscurecimiento enzimático (por ejemplo, quinonas), o productos de oxidación de lípidos (Whitfield, 1992). Los productos finales de la degradación de Strecker son CO2, una amina, y el correspondiente aldehído de cada desaminado y descarboxilado aminoácido. Estos aldehídos son los compuestos volátiles más abundantes formados a través de la reacción de Maillard. Los aldehídos de Strecker también pueden ser formados a través de mecanismos de radicales libres. La oxidación de aminoácidos por el peróxido de hidrógeno o peróxidos lípidos producen CO2, amonio, y los correspondientes aldehídos de Strecker (Sullivan y col., 1974). Los aldehídos formados pueden sufrir reacciones adicionales, tales como condensaciones aldólicas que forman aldehídos diméricos insaturados y, finalmente, polímeros de alto peso molecular (Pokorny, 1980). COMPUESTOS HETEROCÍCLICOS CONTENIENDO NITRÓGENO Más de 100 diferentes pirazinas se han identificado en diversos productos alimenticios. Las propiedades sensoriales de las pirazinas son muy diversas. Las alquil pirazinas (Figura 4) generalmente poseen notas o descriptores de sabor y aroma a tostado, nuez, mientras que las metoxipirazinas a menudo poseen notas a tierra, vegetal (Ohloff y Flament, 1979). Las acetil pirazinas suelen tener olor y sabor a palomitas de 11 maíz, y la 2-acetonil pirazina presenta una nota a tostado o quemado. Varias pirazinas bicíclicas se han identificado en los alimentos. El sabor y aroma que proporcionan estas pirazinas es a quemado, tostado y/o animal. Se han propuesto varios mecanismos para la formación de diversas pirazinas (Vernin y Parkanyi, 1982). Las alquil pirazinas probablemente se forman a partir de la reacción de α-dicetonas con aminoácidos para formar α-amino cetonas (degradación Strecker). Estas α-amino cetonas posiblemente se condensan con otras α-amino cetonas a compuestos heterocíclicos. Estos heterocíclicos pueden sufrir oxidación para formar pirazinas tri- insaturadas (Koehler y col., 1969). Los pirroles son compuestos heterocíclicos con un nitrógeno. El 2-formil pirrol y 2- acetil pirrol son los más abundantes pirroles en los alimentos. El 2-formil pirrol tiene un olor a dulce como maíz mientras que el 2-acetil pirrol tiene un olor similar al caramelo. Se ha propuesto un mecanismo de formación de pirroles el cual requiere de la participación de prolina o hidroxiprolina y un azúcar de cinco o más carbonos en la ruta de degradación de Strecker (Shibamoto, 1983). Los compuestos de piridina aparecen en menor cantidad que los pirroles y las pirazinas en los alimentos (Figura 4). Ellos poseen un amplio rango de olor, las notas verdes, dulces y de nuez son las más comunes. A bajas concentraciones, las piridinas típicamente contribuyen a notas muy placenteras. Sin embargo, resultan potentes y ofensivas a altas concentraciones (Maga, 1981). Figura 4. Clases de compuestos orgánicos volátiles heterocíclicos que contienen nitrógeno formados durante la reacción de Maillard. (Reineccius, 2006) PIRAZINA METOXIPIRAZINA PIRROL PIRIDINA PIRROLINA PIRROLIDINA PIRROLIZINA PIPERIDINA 12 COMPUESTOS HETEROCÍCLICOS CON AZUFRE Diferentes tipos de compuestos heterocíclicos que contienen azufre se producen a través de la reacción de Maillard. Los principales son los tiazoles y tiofenos (Figura 5). Los tiazoles tienen propiedades sensoriales similares a las pirazinas. Dan notas a verde, nuez, asado, vegetales, carne. El trimetil tiazol tiene nota a cacao, nuez. El 2- isobutil tiazol es uno de los más conocidos, tiene un fuerte olor a tomate verde. 2-acetil tiazol se caracteriza por tener notas a nuez, cereal, y palomitas de maíz (Ohloff y Flament, 1979). Con la excepción de los arándanos, los tiofenos sólo se han encontrado en alimentos cocidos o asados. El tiofeno tiene un carácter pungente, mientras que 2,4-dimetil tiofeno es bien conocido por su importancia para el sabor de las cebollas fritas (Ohloff y Flament, 1979). Los tiazoles y tiofenos, por lo general, se forman a través de la reacción de aminoácidos que contienen azufre con intermediarios de la reacción de Maillard. Un mecanismo alternativo implica la formación inicial de H2S a partir de los aminoácidos que contienen azufre y luego la reacción del H2S con los compuestos intermediarios del oscurecimiento (Sakaguchi y Shibamoto, 1978). COMPUESTOS QUE CONTIENEN OXÍGENO Las furanonas y piranonas que contienen oxígeno son compuestos heterocíclicos asociados con sabores tanto de Maillard como de caramelización. Los olores más característicos de este grupo de compuestos son caramelo, dulces, afrutados, mantequilla, nuez, o quemados. La nota a caramelo está muy asociada a moléculas con el grupo C-alquil-enol carbonilo (alquil-C=C(OH)-C:O) por ejemplo, el maltol, etil maltol y furaneol (Ohloff y Flament, 1979). Para este grupo de compuestos que no contienen nitrógeno, el mecanismo de formación implica el ciclado de intermediarios del oscurecimiento que no contienen nitrógeno. Éstos pueden ser productos intermedios de las principales rutas de oscurecimiento que involucran la deshidratación del azúcar o la degradación de Strecker (Weenen, 1998). Los oxazoles y las oxazolinas (Figura 5) se han encontrado sólo en los sistemas de alimentos que se han sometido a la reacción de Maillard. Los oxazoles suelen tener notas verde, dulce, floral o vegetal. Las oxazolinas tienen una amplia variedad de 13 propiedades sensoriales, mientras que algunas presentan notas como a ron y otras presentan aroma típico a cocoa (Jin y col., 1984). Figura 5. Compuestos que contienen oxígeno y azufre formados durante la reacción de Maillard (Reineccius, 2006) 2.3.2 SABOR A PARTIR DE LÍPIDOS Los lípidos también experimentan cambios durante el procesamiento de los alimentos y contribuyen al sabor. Las reacciones de lipólisis y oxidación lipídica imparten sabores tanto indeseables como deseables, dependiendo de las condiciones de procesamiento y composición del alimento. Los alimentos fritos como papa fritas, donas y aperitivos son, generalmente, bien aceptados por los consumidores debido tanto a las propiedades físicas (lubricidad, textura) que presentan como a su sabor característico a frito. Este sabor viene tanto de cambios inducidos térmicamente en los alimentos (reacción de Maillard) así como los cambios desarrollados al freír el aceite (Nawar, 1998). El mecanismo de desarrollo de sabor en aceites calentados es esencialmente debido a la oxidación de lípidos (Ohnishi y Shibamoto, 1984). La oxidación térmica implica la abstracción de un radical de hidrógeno, adición de oxígeno molecular para formar el radical peróxido, formación de hidroperóxido y después la descomposición para formar compuestos volátiles de sabor (Figura 6). Los productos de oxidaciones inducidas térmicamente difieren de los productos de una oxidación de lípidos a temperatura ambiente debido a que cada reacciónpresenta diferente energía de activación y, por tanto, las reacciones que se producen al freír el aceite y la formación de volátiles son dependientes de la temperatura de procesamiento (Ohnishi y Shibamoto, 1984). MALTOL FURANEOL CICLOTENO TIAZOL TIOFENO OXAZOL OXAZOLINA 14 Figura 6. Mecanismo propuesto para formación de compuestos volátiles a partir del calentamiento de grasas animales (Ohnishi y Shibamoto, 1984) Se han identificado muchos compuestos volátiles formados durante el freído como ácidos, alcoholes, aldehídos, hidrocarburos, cetonas, lactonas, ésteres, aromáticos y furanos (Chang y col., 1978). Estudios acerca de los compuestos más importantes que contribuyen al aroma en papas a la francesa muestran principalmente a: 2-etil-3,5- dimetilpirazina, 3-etil-2,5-dimetilpirazina, 2,3-dietil-5-metilpirazina, 3-isobutil-2- metoxipirazina, (E,E)-2,4-decadienal, trans-4,5-epoxi-(E)-2-decenal, 4-hidroxi-2,5- dimetil-3(2H)-furanona, metilpropanal, 2- y 3-metilbutanal y metanetiol. La fuente primaria de estas características de aroma son la reacción de Maillard y la oxidación lipídica (Wagner y Grosch, 1998). También existen diferencias en la formación de compuestos aromáticos dependiendo del tipo de aceite (hidrogenado, sin hidrogenar, cantidad y composición de ácidos grasos) utilizado durante el freído. Un estudio cuantitativo indicó que aceites de maíz y de soya produjeron compuestos aromáticos similares, pero hubo diferencia con el aceite de origen de coco (Wagner y Grosch, 1998). Los efectos cuantitativos del tiempo de calentamiento y la introducción de humedad durante el freído han sido también reportados. En general, la producción de compuestos volátiles individuales incrementa con el tiempo de calentamiento. La 15 presencia de humedad durante el calentamiento del aceite resulta en una reducción de compuestos volátiles. Este efecto protector del agua podría deberse a la remoción de compuestos volátiles en el vapor producido durante el freído, al desplazamiento de oxígeno por el vapor o por la combinación de ambos (Nawar, 1998). Los lípidos pueden contribuir a la formación del sabor en alimentos a través de la participación en otras rutas químicas, sobre todo, en la reacción de Maillard. Se ha reportado cómo los lípidos y sus productos de degradación pueden participar en la reacción de Maillard (Whitfield, 1992). A continuación se enumeran las principales interacciones: 1. La reacción de productos de degradación de lípidos con el amonio de la degradación de Strecker o de grupos amino de la cisteína. La oxidación térmicamente inducida proporciona una abundante fuente de carbonilos reactivos, por ejemplo, aldehídos y cetonas. Estos carbonilos pueden reaccionar fácilmente con el amoniaco libre o aminas de la reacción de Maillard (Figura 6). Los lípidos proporcionan reactivos carbonilos únicos en la medida en que pueden tener largas cadenas de carbón. Los compuestos aromáticos heterocíclicos encontrados en alimentos calentados que tienen grupos R de 4 o más carbonos se derivan de fuentes lipídicas. 2. Los lípidos también pueden contribuir a los grupos amino para la reacción de Maillard, por ejemplo, la fosfatidiletanolamina. Esto aumentaría la cantidad de NH3 libre para la reacción. Hay evidencia significativa de que la presencia de fosfolípidos disminuye la cantidad de compuestos heterocíclicos típicos formados en el calentamiento de un alimento. La hipótesis de que los productos de la degradación de lípidos compiten por la disposición de NH3 es que se reducen los compuestos heterocíclicos normalmente producidos a través de la reacción de Maillard. Esto podría cambiar la distribución de los compuestos que se encuentran en el alimento que es calentado y, por tanto, su aroma. 3. La participación de los radicales libres de la oxidación de lípidos en la reacción de Maillard. 4. La reacción de grupos hidroxi o carbonil de productos de degradación lipídica con el sulfuro de hidrógeno libre de la reacción de Maillard. Muchos de los heterociclos que contienen azufre en alimentos que son calentados son derivados de fuentes de lípidos (grupos R largos). 16 2.3.3 COMPUESTOS DE SABOR REPORTADOS EN PAPA FRITA Investigaciones anteriores reportan los compuestos naturales que se forman en la papa después de su freído. El sabor es un importante atributo de calidad y se ve afectado por diversos factores en las papas fritas como son la composición química del tubérculo, la composición del aceite de fritura, la temperatura y tiempo de freído, embalaje y almacenamiento del producto (Smith, 1975). Informes de los componentes del sabor en papas fritas que han sido estudiados (Guadagni y col., 1972; Maga y Sizer, 1973) reportan cerca de 150 compuestos volátiles identificados, incluyendo diversos aldehídos, cetonas, pirazinas, y compuestos de azufre. La reacción de Maillard y la degradación de lípidos son las principales fuentes. Como componentes importantes de aromas consideran al metional, fenilacetaldehído, 3-etil-2,5-dimetilpirazina, 3-metilbutanal, y 2,4-decadienal (Whitfield, 1992). Los aminoácidos libres y azúcares reductores en los tubérculos de papa son importantes precursores de los componentes de sabor (Whitfield, 1992). La composición del tubérculo de la papa varía en función de factores agronómicos, entre ellos cultivo, suelo, clima, riego, y la aplicación de fertilizantes, así como de las condiciones post almacenamiento (Burton, 1989). La glucosa y la fructosa son los azúcares reductores más abundantes en la papa, y tanto la asparagina como la glutamina son los aminoácidos que se encuentran en mayor proporción (Storey, 2007). Se han realizado estudios que ayudan a la comprensión del papel desempeñado por cada uno de los azúcares y aminoácidos en el desarrollo del sabor de las papas fritas. Estos trabajos han incluido soluciones acuosas calientes con azúcares reductores y aminoácidos (Herz y Shallenberger, 1960; El’ode´ y col., 1966; Yu y Ho, 1995), papel filtro frito con cualquiera de las soluciones acuosas de aminoácidos y azúcares (Talley y Eppley, 1985) y bolitas de algodón fritas en soluciones acuosas de aminoácidos para observar la formación de los diversos compuestos de sabor y color derivados del freído (Bakker y col., 1996). El papel de la matriz del alimento es con frecuencia pasado por alto cuando es diseñado un sistema modelo para la investigación de formación de sabor ya que los componentes de interacción matriz-sabor pueden afectar a la liberación de compuestos volátiles y, por tanto, no se percibe el sabor de igual manera (Lee y col., 1973; Hwang y col., 1995). Es por ello que se ha utilizado otro sistema modelo para estudiar el desarrollo del sabor en papas fritas, el basado en rodajas de papa cruda (Khanbari y Thompson, 1993; Rodriguez-Saona y col., 1997). 17 En otra de las investigaciones, los azúcares y aminoácidos fueron removidos de rodajas de papa al sumergirlos en agua y etanol. Luego fueron infundidas con diversas combinaciones de azúcares (glucosa y/o fructosa) y aminoácidos (asparagina, glutamina, leucina, isoleucina, fenilalanina, y/o metionina) y posteriormente se frieron. Los compuestos volátiles fueron identificados y cuantificados por cromatografía de gases-espectrometría de masas. Fueron monitoreadas las cantidades de 10 pirazinas, 4 aldehídos Strecker, y otros 4 compuestos. Leucina dió la mayor cantidad de su aldehído Strecker. Asparagina y fenilalanina dieron la máxima cantidad relativa de pirazinas. En el sistema que contiene todos los aminoácidos y glucosa, la cantidad relativa de 3-metilbutanal fue mayor, mientras que las cantidades de otros aldehídos de Strecker fueron inferiores. La adición de fructosa a la mezcla del sistema modelo de aminoácidos-glucosa genera aldehídos Strecker y pirazinas en proporciones que sonmás similares a las de papas fritas sin tratamiento. Tanto los azúcares como los aminoácidos presentes en la papa son cruciales para el desarrollo de compuestos de sabor en rodajas de papa fritas (Martin y Ames, 2001). Se ha determinado que además del tipo de aminoácido y el tipo de azúcar, los parámetros que influyen en los sabores y aromas generados en la reacción de Maillard son del tipo pH, temperatura, tiempo, contenido de humedad (Lane y Nursten, 1983; Schieberle y Hofmann, 1997) actividad de agua, oxígeno, azufre y el dióxido de fosfatos (Hurrell y Carpenter, 1977; Namiki, 1988; Shenoy, 1993). Muchos estudios se han realizado para aclarar los variados mecanismos en diferentes disolventes orgánicos, en lugar de solución acuosa, y la utilización de aminas no relacionadas a ingredientes de alimentos en lugar de aminoácidos (Hofmann, 1998). Estudios más recientes nos hablan de los aromas producidos en las reacciones de Maillard de glucosa-aminoácidos (individuales y combinadas); en condiciones ácidas a 100°C se determinaron y compararon por panelistas entrenados. Prolina produjo un aroma floral agradable. La fenilalanina y tirosina produjeron un aroma a rosas secas. Alanina produjo un olor afrutado y floral, mientras que el ácido aspártico y serina produjeron un agradable aroma afrutado. Arginina produjo un aroma afrutado y agrio. Glicina, lisina, treonina y valina produjeron un agradable olor a caramelo. Isoleucina y leucina dieron un aroma de caramelo quemado. Metionina desarrolló el olor a papa frita. Cisteína y metionina produjeron sabor salado, a carne y a salsa de soya. Una combinación de estos aminoácidos produjo diferentes tipos de aroma, dominando el olor la nota más fuerte de la mezcla. Este estudio ayudó a la predicción de las características de sabor de proteínas hidrolizadas de diferentes fuentes. En consecuencia, la reacción de Maillard puede ser utilizada como base para la 18 producción de saborizantes específicos seleccionando cuidadosamente los azúcares y aminoácidos, y controlando las condiciones tanto de pH como de temperatura y tiempo (Tressl y col., 1989; Wong y col., 2008). De acuerdo con la revisión de Maga (1994), se han identificado más de 500 compuestos volátiles y semivolátiles en papa (cruda, hervida, horneada y frita). Los compuestos volátiles obtenidos de los principales procedimientos de cocción de papa varían de forma significativa (Whitfield y Last, 1991). Por lo tanto, se debe distinguir entre papas crudas (Petersen y col., 1998; Adams 2001), hervidas (Josephson y Lindsay, 1987; Ulrich y col., 2000; Oruna-Concha y col., 2002b; Blanda y col., 2009), horneadas (Duckham y col., 2001; Oruna-Concha y col., 2001), cocidas en microondas (Oruna-Concha y col., 2002a), papas a la francesa (Wagner y Grosch, 1998; Van Loon y col., 2005) y papas fritas (Maga y Sizer, 1978; Martin y Ames, 2001). En los productos de papas fritas los compuestos de sabor no son sólo formados a partir de la papa, sino también del aceite para freír y de la interacción de los compuestos de la reacción de Maillard (Whitfield, 1992; Maga, 1994). La temperatura de freído es un parámetro muy importante, ya que tiene una gran influencia en la formación de pirazinas en las papas fritas (Maga y Sizer, 1978; Martin y Ames, 2001). Brewer y col. (1999) enfatiza que las características de olor en papas a la francesa y fritas reflejan las características de olor de los aceites de freído. Las pirazinas se forman principalmente de glutamina y asparagina, los cuales son aminoácidos que están presentes en la papa en grandes cantidades (Martin y Ames, 2001; Oruna-Concha y col., 2001). La degradación de los lípidos da como resultado la formación de varios aldehídos, cetonas, alcoholes, hidrocarburos, ácidos, ésteres, y furanos, muchos de los cuales son productos secundarios de oxidación. Nonanal se forma a partir del ácido oleico, que es el ácido graso principal de los aceites de fritura, y hexanal es un típico producto de la oxidación del ácido linoleico (Whitfield, 1992; Brewer y col., 1999). Los compuestos azufrados se forman en la reacción de Maillard; se han encontrado en papas cocidas, al horno y fritas, pero no en papa cruda (Wagner y Grosch, 1997). El sabor de diferentes genotipos de papa hervida han sido investigados por medio del método sensorial e instrumental para obtener información acerca de las características sensoriales y químicas de los compuestos que componen su aroma, con la finalidad de mejorar y controlar la calidad del producto (Ulrich y col., 2000; Blanda y col., 2010). Las tareas importantes fueron primeramente diferenciar entre compuestos con olor y sin olor; posteriormente cuantificar la contribución de cada sustancia en la 19 percepción total del aroma, es decir, conocer los compuestos con carácter de impacto. La contribución de un compuesto distintivo de aroma no depende de su nivel de concentración, sino de la intensidad del aroma, esto es la concentración dividida por su valor de umbral de olor. Los compuestos de aromas esenciales como alquil pirazinas, se caracterizan por umbrales de olor extremadamente bajos, por lo que dan aromas significantes a niveles de ppb (Grosch y col., 1996) El aroma y el sabor de la papa hervida son relativamente "débiles", pero muy típicos. La contribución del aroma más importante (compuestos con carácter de impacto) es debido a un pequeño número de sustancias volátiles. El metional y diferentes tipos de pirazinas son compuestos clave (Whitfield y Last, 1991; Salinas y col., 1994; Ulrich y col., 2000). Metional es un producto de la degradación térmica del aminoácido metionina. Las pirazinas surgen a partir de los aminoácidos y los azúcares en las reacciones de Maillard y Strecker. También, más de 140 compuestos volátiles adicionales han sido identificados en la contribución de impresión del aroma. El número total de componentes aumenta al aumentar el tratamiento térmico: se han identificado más de 250 compuestos volátiles en papas al horno (Whitfield y Last, 1991). El método sensorial empleado fue eficaz en la determinación de perfiles sensoriales de sabor y aroma en papa hervida a dulce, tierra, quemado, carne, atípico, moho, afrutado, y "típico". Metional, diacetilo y por lo menos cinco diferentes pirazinas sustituidas fueron reconocidos como compuestos con carácter de impacto (Whitfield y Last, 1991; Salinas y col., 1994; Ulrich y col., 2000). Adicional a estos compuestos aromáticos positivos, se encontraron compuestos con mal olor y sabor: 2-pentenal, 2- hexenal, 2-heptenal, 2-decenal, 2-pentilfuran, 2,4-heptadienal, 2,4-octadienal, 2,6- nonadienal y 2,4-decadienal (Ulrich y col., 2000; Blanda y col., 2010). Las notas de mal olor o sabor en papas procesadas son principalmente causadas por dienales (Josephson y Lindsay, 1987; Petersen y col., 1998), 4-heptenal (Josephson y Lindsay, 1987) o por una alta concentración de pirazinas (Sapers y col., 1971). El grupo de dienales surge de la degradación de varios ácidos grasos insaturados (Josephson y Lindsay, 1987). A continuación se presenta una lista (Tabla 2) de los principales compuestos de sabores generados en papa frita así como sus respectivos descriptores. 20 Tabla 2. Principales compuestos de sabor reportados en papa frita. (Martin y Ames, 2001; Van Loon y col., 2005; Majcher, 2009). COMPUESTO DESCRIPTORES A LD EH ÍD O S 2-Metilpropanal Chocolate, mantequilla, vainilla, caramelo, queso, sudor, pegamento, pintura, químico 3-Metilbutanal Dulce, caramelo, malta, melaza, cereal, cebada 2-Metilbutanal Cocoa, frutal, mantequilla, vainilla, caramelo, chocolate Hexanal Verde, hierba, fresco, dulce, cítrico, floral, madera Heptanal Hierba, verde, tierra, dulce, floral, fresco (E)-2-Heptenal Papa, tierra (E,Z)-2,4-Heptadienal Dulce, floral, fresco, papas fritas Octanal Papasfritas, grasa, dulce, floral Fenilacetaldehído Floral, dulce, miel, hierba, verde (E)-2-Octenal Grasa, hierba, verde, químico, pintura Nonanal Grasa, cítrico, floral (E)-2-Nonenal Hierba, verde, pepino, jabón, aldehídico, grasoso Decanal Hierba, verde (E,E)-2,4-Nonadienal Horneado, papas fritas, nuez, químico, pintura, pegamento, plástico (E)-2-Decenal Dulce, floral, fresco, mantequilla, vainilla, caramelo, horneado, metal, quemado (E,E)-2,4-Decadienal Grasoso, aceitoso, papa frita, rancio Butanal Rancio, chocolate, malta, cereal (E)-2-Hexenal Grasa, verde, almendras dulces 2,6-Nonadienal Pepino, verde, grasoso Benzaldehído Almendra amarga C ET O N A S 2,3-Butanediona Mantequilla, vainilla, caramelo 2,3-Pentaandiona Mantequilla, vainilla, caramelo 1,5-Octadien-3-ona Geranio, tierra 4-Hidroxi-2,5-dimetil-3(2H)- furanona Algodón de azúcar, fresa 3-Hidroxi-4,5-dimetil-2(5H)- furanona Caramelo, dulce beta-Damascenona Frutal, baya 1-octen-3-ona Setas, cremoso, terroso, pescado, vegetal 21 COMPUESTO DESCRIPTORES PI R A ZI N A S, P IR R O LE S, P IR ID IN A S Pirazina Nuez, maíz dulce, cacahuate, avellana tostada, quemado, rancio 2-Etilpirazina Mantequilla de maní, madera, mohoso, nuez 2-Metilpirazina Nuez, tostado, mohoso, astringente 2,5-Dimetilpirazina Papa, tierra, cacao, nuez tostada 2,6-Dimetilpirazina Nuez, café, cacao, tostado, tierra, carne 2,3-Dimetilpirazina Cocoa, nuez, maní, mantequilla, caramelo, frutos secos, café tostado, carne 2,3,5-Trimetilpirazina Nuez, moho, tierra, cacao, tostado, maní, papa 2,3,5,6-Tetrametilpirazina Mohoso, nuez, chocolate, café, cacao, soya, manteca, quemado, maní tostado 2,3-Dietilpirazina Tostado 3-Etil-2-metilprirazina Tostado 2-Etil-6-metilpirazina Papa 3-Etil-2,5-dimetilpirazina Papa, tierra, químico, pintura, pegamento, plástico, horneado, especia picante 5-Etil-2,3-dimetilpirazina Dulce, floral, fresco, especia picante 2-Etil-3,5-dimetilpirazina Tierra, quemado, palomitas de maíz 3,5-Dietil-2-metilpirazina Papa, tierra, raíz de perejil, dulce, floral, fresco, queso, sudor 2,3-Dietil-5-metilpirazina Pimiento asado 2,5-Dietilpirazina Dulce, floral, fresco, papa, tierra, metal, quemado, químico, pintura, pegamento, plástico Metilpropenil pirazina Horneado, nuez Dimetilisobutil pirazina Hierba, verde, dulce, floral, fresco, papa, tierra, metal, quemado Isopentilmetil pirazina Hierba, verde, papa, tierra 2-Acetilpirazina Palomitas de maíz, nuez, papas fritas, pan, café, chocolate con avellana, tostado, levadura Vinilpirazina Papas fritas, tostado, nuez, cacahuate, avellana, quemado, rancio 2-Metil-5-vinilpirazina Café, metal, quemado, nuez 2-Metoxipirazina Chocolate, cacao, dulce de nuez Tabla 2 (Continuación) 22 COMPUESTO DESCRIPTORES 2-Metoxi-3-metilpirazina Nuez, avellana, maní, almendras tostadas 2-Isobutil-3-Metoxipirazina Verde, morrón verde, pimiento, arveja, gálbano Piridina Químico, pintura, pegamento, plástico 2-Acetilpiridina Palomita de maíz, pesado, papa frita, grasoso, tabaco, harina de maíz, nuez. Pirrol Químico, pintura, pegamento, plástico, dulce, floral, fresco, papas fritas 1-Etilpirrol Papas fritas, especia picante 2-Metilpyrrol Queso, sudor, papa, tierra 1-Metil-2-pirrolidinona Papa, tierra, químico, pintura, pegamento, plástico 2-acetilpirrol Dulce, mohoso, nuez, té. 2-Acetil-1-pirrolina Palomita de maíz TI A ZO LE S Tiazol Pescado, nuez 4-Metiltiazol Nuez, verde 4,5-Dimetiltiazol Pescado, verde, nuez, rostizado 2,4,5-Trimetiltiazol Chocolate, nueces rancias, avellana, cacao, vegetales verdes, tierra, tostado. 2-Acetiltiazol Palomitas de maíz, nuez tostada, avellana, maíz, papa frita, ligeramente húmedo. A ZU FR A D O S Metanetiol Col, ajo, quemado Dimetil trisulfuro Col, aliáceas, cebolla, queso, sudor, papa, tierra 2-Furfuriltiol Café tostado Metional Papa, ajo 2,5-Dimetil-3-furantiol Carne, caldo de carne, sulfuroso, pollo rostizado Benzenemetanetiol Jardín de berros, carne, rostizado, astringente, quemado 2-Acetiltiofeno Sulfuroso Dialil disulfuro Aliáceas, metálicos, cebolla, ajo, carne FU R A N O S 2,5-Dihidro-3,4-dimetilfurano Dulce, floral, fresco 2-Pentilfurano Dulce, floral, fresco Tabla 2 (Continuación) 23 2.3.4 FACTORES QUE INFLUYEN EN LA REACCIÓN DE MAILLARD Durante la reacción se presenta una pérdida nutricional del alimento, formación de color, aromas y sabores. Las reacciones que conducen a la generación de un dado sabor son muy específicas. Por tanto, los reactivos, el medio ambiente y las condiciones de calentamiento deben ser elegidos cuidadosamente para producir el sabor deseado. Un pequeño cambio en el medio ambiente o en el proceso puede provocar un gran cambio en la velocidad y dirección de la reacción (Reineccius, 2006). TEMPERATURA Y TIEMPO DE CALENTAMIENTO Uno de los parámetros más importantes que influyen en la formación del sabor a través de la reacción de Maillard es la temperatura de procesamiento. La baja actividad de agua y las altas temperaturas en la superficie favorecen la producción de compuestos de sabor, dando mayores y diferentes notas a los alimentos rostizados que a los guisados. La influencia de la temperatura en la formación del sabor puede entenderse mejor recordando que cada ruta particular en la formación del sabor tiene su propia energía de activación. Hay información sustancial sobre la influencia de la temperatura en formación de pirazinas en sistemas modelo. Se ha reportado que las pirazinas no se forman a temperaturas inferiores a los 70°C y que la producción aumenta rápidamente con la temperatura (Shibamoto, 1983). Estudios de cinética informan una energía de activación de 35-43 kcal/mol en formación de algunas pirazinas, lo que indica que su formación tiene una fuerte dependencia de la COMPUESTO DESCRIPTORES O TR O S 1-Octen-3-ol Setas Etanol Fresco, químico, licor, alcohol Limoneno Limón (E)-Metil-2-butenoato Dulce, floral, fresco Ácido 2-Metilpropanoico Químico, pintura, pegamento, plástico, queso, sudor Ácido 3(2)-Metilbutanoico Químico, pintura, pegamento, plástico, queso, sudor Tabla 2 (Continuación) 24 temperatura y explica por qué la mayoría de las pirazinas (notas de sabor asado, tostado, nuez) no se forman durante el almacenamiento, sólo durante el tratamiento a alta temperatura (Leahy, 1985). El tiempo de procesamiento es también un factor crítico en la determinación del sabor. Si bien en muchas situaciones, un método para obtener más de algún producto es aumentar el tiempo de reacción, en el caso de la reacción de Maillard, aumentar el tiempo de reacción no aumenta necesariamente la intensidad del sabor sino que produce cambios en el balance final de los compuestos de sabor y, por tanto, cambia el sabor (Reineccius, 2006). INFLUENCIA DE LA COMPOSICIÓN DEL SISTEMA Numerosos estudios han evaluado el efecto de la elección del reactante y su concentración, en la tasa de reacción de Maillard (pérdida de reactante y/o formación del color). Se considera que el tipo de aminoácidos y azúcar influyen directamente. En general, la tasa de la reacción está influenciada por la composición del azúcar de la siguiente manera: pentosas (xilosa o arabinosa) > hexosas (glucosa o fructosa) > disacáridos (lactosa o maltosa) > trisacáridos > sólidos del jarabe de maíz > maltodextrinas > almidones. La velocidad de reacción también depende del aminoácido(s) presente(s), siendo la glicina el más reactivo. El tipo de azúcar puede tener alguna influencia en el sabor, pero la selección de aminoácidos en general desempeña un papel mucho mayor en este sentido. Los aminoácidos que contienen azufre son necesarios para formar los sabores de la carne o el café; valina, leucina, e isoleucina son necesarios para los sabores de chocolate; y la metionina es necesaria para formar los saboresen hortalizas (papa). Estos sabores demandan la presencia de aminoácidos específicos y la ausencia de otros en la mezcla de reacción para producir el sabor deseado (Reineccius, 2006). INFLUENCIA DE LA ACTIVIDAD DE AGUA La disponibilidad de agua influye en la tasa de numerosas rutas de Maillard, por tanto, influye en la tasa global de formación de sabor. Existen rutas en las que las reacciones químicas son inhibidas por el agua, mientras que otras son promovidas por el agua. Por ejemplo, la acumulación de pirazinas alcanza un máximo cuando se calienta con 25 una actividad de agua (Aw) de aproximadamente 0.75 y disminuye con el aumento o la disminución de Aw (Leahy y Reineccius, 1989). INFLUENCIA DEL pH El pH también puede influir en la tasa de rutas específicas de Maillard por lo que puede modificar el equilibrio de compuestos volátiles formados. Por ejemplo, se ha reportado que la producción total de pirazinas es aproximadamente 500 veces mayor en un sistema modelo que se calienta a pH 9.0, comparado con el mismo sistema a pH 5.0 (Leahy, 1985). Se ha observado que hay un pH óptimo para la formación de algunos compuestos volátiles, habrá compuestos cuya formación se vea favorecida al incrementar el pH y otros no (Mottram y Whitfield, 1994). INFLUENCIA DE BUFFER/SALES El tipo de sal (buffer) y su concentración puede influir también en la velocidad de reacción. En general, se acepta que el fosfato es el mejor catalizador. El efecto del fosfato en la velocidad de reacción es dependiente del pH, teniendo el mayor efecto catalizador a pH de 5-7. Se han reportado sistemas modelo para los que con fosfatos la velocidad de reacción de Miallard se incrementa hasta 15 veces más que los sistemas modelo libres del buffer de fosfatos. También se ha observado que alimentos procesados térmicamente con formulaciones con bajo contenido en sal contienen menos compuestos volátiles que los productos con sal normal. Lo que indica que el contenido de sal de un alimento puede influir tanto en aroma como en gusto (Potman y Van, 1989). INFLUENCIA DEL ESTADO DE OXIDACIÓN/REDUCCIÓN Investigaciones reportan efectos inhibitorios de los iones metálicos, oxígeno, antioxidantes e hidróxido de sodio en la formación de pirazinas en sistemas de glucosa-amonio (Shibamoto y Berhard, 1977). En general, se debe aceptar que la formación/concentración del sabor es una situación dinámica. Los compuestos de sabor se forman y reaccionan para dar una combinación que reconocemos como un determinado sabor. Este equilibrio puede ser muy sensible tanto al entorno químico como al tratamiento térmico (Reineccius, 2006). 26 2.4 ANÁLISIS INSTRUMENTAL DEL SABOR La tarea de identificar los componentes volátiles del sabor (compuestos aromáticos) en una matriz alimentaria presenta varios obstáculos. Uno fundamental es que los instrumentos de laboratorio no son tan sensibles a muchos olores como lo es el sistema olfativo humano. La nariz tiene un límite de detección de olores alrededor de 10-19 moles, que supera incluso al instrumento analítico más sensible (Reineccius, 2006). El hecho de que cantidades traza de componentes aromáticos estén distribuidos por toda la matriz alimentaria complica aún más el proceso de aislamiento y concentración. El aislamiento de bajas concentraciones de compuestos de sabor de los sistemas alimentarios que contienen azúcares, hidratos de carbono complejos, lípidos, proteínas, y agua es problemático. Métodos de aislamiento de aromas basados en la volatilidad son complicados por el hecho de que el agua es el volátil más abundante en un alimento. Por lo tanto, cualquier procedimiento que involucre una destilación aislará también extractos de agua de la muestra (Reineccius, 2006). Métodos de aislamiento basados en la solubilidad como la extracción con solventes no extraerán únicamente compuestos aromáticos sino también lípidos. El aislamiento y análisis del sabor también se complican por el hecho de que los sabores comprenden un gran número de clases químicas. El número absoluto de compuestos de sabor en un alimento dificulta aún más el análisis. Se han encontrado más de 7000 sustancias volátiles diferentes en los alimentos (TNO, 1995). Un último problema que complica el estudio instrumental del sabor es la inestabilidad. Los productos alimenticios son examinados en un sistema dinámico, que fácilmente puede presentar cambios de sabor en el tiempo en que se está almacenando para el análisis. Los procesos de aislamiento del sabor podrían iniciar reacciones químicas (degradaciones u oxidaciones) que alteran el perfil del sabor e introducen artefactos. Por tanto, debemos ser cuidadosos que los compuestos volátiles que encontremos en el alimento sean verdaderamente nativos del producto. También es importante determinar el efecto de cada uno de los compuestos volátiles en la percepción del sabor, es decir, su nivel de potencia; lo cual representa gran dificultad ya que cada compuesto tiene diferente respuesta en el sistema olfativo humano y no siempre se puede comparar con la interpretación de un instrumento analítico. Podría ser que el pico más pequeño de un cromatograma sea un aroma más importante o potente que el de un mayor pico (Reineccius, 2006). 27 Los pasos necesarios para realizar un análisis de sabores son los siguientes: 1. Preparación de la muestra 2. Extracción y concentración de los compuestos volátiles y semivolátiles. 3. Análisis e identificación de compuestos obtenidos. 4. Selección de los compuestos importantes en el sabor y aroma. 2.4.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Los puntos a considerar para la preparación de la muestra son los siguientes: • Seleccionar la muestra más representativa del alimento que contenga los sabores característicos a estudiar. • Debido a que los alimentos son sistemas dinámicos propensos a la descomposición (por acción enzimática, oxidación, presencia de microorganismos, etc.) y formación de artefactos se debe contar con un protocolo de análisis rápido y evitar periodos largos de manipulación. Aplicar condiciones para evitar resultados erróneos por la formación de artefactos o interferencias como la congelación, desecación, atmósferas inertes (N2, CO2), además de la utilización de materiales limpios, agua y solventes de alta pureza (Reineccius, 2006). 2.4.2 EXTRACCIÓN Y CONCENTRACIÓN Los factores más importantes para elegir el método de extracción de compuestos aromáticos son la solubilidad y volatilidad de los mismos. Los compuestos aromáticos tienden a ser más solubles en solventes orgánicos debido a su carácter lipofílico. Basado en el respectivo coeficiente de partición de cada unos de los compuestos para cada tipo de solvente. Por ello, se debe utilizar los solventes de acuerdo a la naturaleza de los compuestos a tratar. Debido a la diferencia de solubilidad, no todos los compuestos serán extraídos de la misma forma, y el perfil no será el mismo (Reineccius, 2006). La consideración de la volatilidad en los compuestos aromáticos es un requerimiento para determinar la cantidad de compuesto aislado en una fase gaseosa al llegar al equilibrio. El grado de volatilidad de cada compuesto dependerá de su coeficiente de partición con el gas y la matriz del alimento. Un bajo coeficiente significa una baja 28 volatilidad del compuesto, es decir, alta afinidad por la matriz del alimento debido a su alto peso molecular (Reineccius, 2006). Para separar compuestos aromáticos (mayormente hidrofóbicos) de la matriz original por medio de distintos métodos de extracción, dependiendo de los compuestos de interés, se usan varios métodos: EXTRACCIÓN CON SOLVENTES Apropiada para muestras con bajo contenido en lípidos, sino los compuestos aromáticos se extraerán con la grasa también. Los solventes a utilizar deben ser de alta pureza.
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