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INSTITUTO TECNOLÓGICO Y DE ESTUDIOS
SUPERIORES DE MONTERREY
DIVISIÓN DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN
PROGRAMA DE GRADUADOS EN QUÍMICA
ESTUDIO QUÍMICO DE:
Agastache breviflora, Cucurbita foetidíssima,
Maximowiczia sonorae y Stillingia sanguinolenta
TESIS
PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL
PARA OBTENER EL GRADO ACADÉMICO DE:
MAESTRO EN CIENCIAS
ESPECIALIDAD EN QUÍMICA ORGÁNICA
POR
ELDA GRACIELA GÓMEZ LÓPEZ
MONTERREY, N. L. MAYO DE 1992
INSTITUTO TECNOLÓGICO Y DE ESTUDIOS SUPERIORES DE MONTERREY
DIVISIÓN DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN
PROGRAMA DE GRADUADOS EN QUÍMICA
ESTUDIO QUÍMICO DE: Agastache breviflora, Cucurbita foetidíssima,
Maximowiczia sonorae y Stillingia sanguinolenta
TESIS
PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL
PARA OBTENER EL GRADO ACADÉMICO DE:
MAESTRO EN CIENCIAS
ESPECIALIDAD EN QUÍMICA ORGÁNICA
POR
ELDA GRACIELA GÓMEZ LÓPEZ
MONTERREY, N. L. MAYO DE 1992
INSTITUTO TECNOLÓGICO Y DE ESTUDIOS SUPERIORES DE MONTERREY
DIVISIÓN DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN
PROGRAMA DE GRADUADOS EN QUÍMICA
Señor Director del Programa de Graduados:
La Tesis desarrollada por la Licenciada en Química Industrial
ELDA GRACIELA GÓMEZ LÓPEZ
Titulada: ESTUDIO QUÍMICO DE Agastache breviflora, Cucurbita foetidíssima,
Maximowiczia sonorae y Stillingia sanguinolenta.
ha sido aceptada como requisito parcial para optar el grado académico de:
MAESTRO EN CIENCIAS
ESPECIALIDAD QUÍMICA ORGÁNICA
Dr. Xorge A. Domínguez Dra. Elsa Ma. Guajardo T. Dr. Jorge Reyes López
Asesor Sinodal Sinodal
Dr. Xorge A. Domínguez S.
Director de Programa de Graduados
en Química
"La vida de cada hombre es como un cuento de hadas
escrito por la mano de Dios".
Hans Christian Andersen
A Dios
Porque eres mi luz, refugio y camino,
quien siempre me da fortaleza para seguir adelante,
con todo mi amor.
"Tú, Señor eres fiel con el que es fiel,
irreprochable con el que es irreprochable,
sincero con el que es sincero,
pero sagaz con el que es astuto.
Tú, Señor, eres mi luz
tú, Dios mío, alumbras mi oscuridad"
2 Sam 22:26-29.
Con amor y profundo agradecimiento a mis padres
Patrocinia López de Gómez
y
Víctor Gómez Martínez
A mis hermanos:
Rosalva
Olivia
Silvia
Miguel
Víctor
Isaac
y Eloísa
Con mucho cariño
A mis sobrinos (as) y cuñados (as)
Al Dr. Xorge A. Domínguez
Con cariño y agradecimiento
por sus valiosas enseñanzas.
A mis sinodales:
Dra. Elsa Ma. Guajardo T.
por su amistad y consejos.
Dr. Jorge Reyes López
por su valiosa ayuda y amistad.
Dr. Teófilo A. Dieck A.
por su ayuda brindada.
A mis amigos:
Con mucho cariño.
Hermelinda, Dora, Lorena, Gladys, Tere,
Sergio, Alfredo y Guillermo.
Yolanda (Gracias por tu amistad y paciencia).
CLAVES Y ABREVIATURAS
Ab
Ac
AcOEt
ae
Bz
br
CCD
CCDC
CCDP
CCL
CDCI3
Cf
CH2CI2
CHCI3
C0CI2
13CRMN
d
desc.
E
ED
EHEIM
ejem.
EM
EMD
etc.
EtOH
Et2O
e
Fig.
g
Hex
Hz
iHRMN
i
Agastache breviflora
Acetona
Acetato de etilo
Aerea
Benceno
Ancha
Cromatografía en capa delgada
Cromatografía en capa delgada comparativa
Cromatografía en capa delgada preparativa
Cromatografía en Columna Líquida
Cloroformo deuterado
Cucúrbita foetidissima
Cloruro de metileno
Cloroformo
Cloruro de cobalto
Resonancia Magnética Nuclear de ^C
Doblete
Descomposición
Extracto
Dosis efectiva
Extracto hexano, éter isopropñico, metanol
Ejemplo
Espectro de masas
Extracto Metanólico Directo
Etcétera
Etanol
Éter etílico
Coeficiente de extinción molar
Figura
Gramo
Hexano
Hertz
Resonancia Magnética Nuclear protónica
Absorción intensa
ID
IR
J
KBr
X
L.B.
LÍAIH4
log.
m
M+
máx
MeOH
m/z
mg
min.
mL
Ms
nm
NaBH4
NOE
pag
PM
ppm
q
Ref.
Rf
[a]
Rz
s
SC
SH
SM
Ss
t
TMS
UV
Dosis untante
Infrarrojo
Constante de Acoplamiento
Bromuro de potasio
Longitud de onda
Liebermann-Burchard
Hidruro de aluminio y litio
Logaritmo base 10
Multiplete
Ion molecular
Máxima
Metanol
Masa/carga
Miligramos
Minuto
Mililitro
Maximowiczia sonorae
Nanómetro
Borohidruro de sodio
Efecto Nuclear Overhauser
Página
Peso Molecular
Partes por millón
Cuarteto
Referencia
Razón de la velocidad de flujo de la muestra
Rotación óptica
Raíz
Singulete
Soluble en Cloruro de Metileno
Soluble en Agua
Soluble en Metanol
Stilingia sanguinolenta
Triplete
Tetrametilsilano
Ultravioleta
v/v
VIS
w
Relación volumen/volumen
Visible
Peso
ÍNDICE
Pag.
1.- Introducción
1.1. Familia Labiatae 1
1.2. Familia Cucurbitaceae 2
1.3. Familia Euphorbiaceae 6
2.- Quimiotaxonomía
2.1. Agastache breviflora 8
2.2. Cucúrbita foetidissima y Maximowiczia sonorae 15
2.3. Stillingia sanguinolenta 26
3.- Materiales y Métodos
3.1.
3.2.
3.3.
3.4.
3.5.
3.6.
Agastache breviflora
Cucúrbita foetidissima
Maximowiczia sonorae
Stillingia sanguinolenta
Preparación del Material
Métodos de aislamiento, purificación e identificación
3.6.1. Métodos cromatograficos
3.6.2. Métodos de purificación
3.6.3. Métodos de identificación
3.6.3.1. Métodos físicos
3.6.3.2. Métodos químicos
33
35
37
39
43
44
46
47
48
4. Parte Experimental
4.1. Agastache breviflora 50
4.2. Cucúrbita foetidissima 66
4.3. Maximowiczia sonorae
4.3.1. Extracción de la raíz (HEIM) 86
4.3.2. Extracción de la raíz con metanol 89
4.4. Stillingia sanguinolenta
4.4.1. Extracción con HEIM parte aérea 108
4.4.2. Extracción con metanol parte aérea 111
4.4.3. Extracción con HEIM de raíz 114
4.4.4. Extracción con metanol de raíz 117
4.4.5. Extracción con hexano de raíz 120
5.- Discusión y Resultados
5.1. Agastache breviflora 171
5.2. Cucúrbita foetidissima 176
5.3. Maximowiczia sonorae 180
5.4. Stillingia sanguinolenta 185
6.- Conclusiones
6.1. Agastache breviflora 203
6.2. Cucúrbita foetidissima 205
6.3. Maximowiczia sonorae 206
6.4. Stillingia sanguinolenta ' 207
7.- Bibliografía
1. INTRODUCCIÓN
1.1.- Familia Labiatae (9)
La labiatae (o lamiaceae) es una familia natural de hierbas y arbustos
principalmente, conteniendo plantas como la salvia y la menta.
Se compone de aproximadamente 200 géneros con 3000 especies. Su distribución
es cosmopolita, se encuentra en todas altitudes desde el Ártico a las Himalayas, del Sureste
de Asia a Hawai y Australia, atravezando África. (9).
Un gran número de labiataes son cultivadas para uso ornamental, (por ejem. los
géneros Mentha, Monarda, Nepeta, Origanum, Phlomis, Salvia, Thymus y Ajuga. Otras
son cultivadas por sus virtudes combinadas de flores atractivas y agradables fragancias: el
aceite esencial de Lavandula es principalmente obtenido de plantas silvestres. En los
trópicos, Coleus y Plectronthus, mejor conocidos como plantas de jardín en regiones frías,
se cultivan por su colorido y follaje abigarrado. Así, otras se cultivan para
comercializarlas, ya que muchas son hierbas aromáticas de origen Mediterráneo, tales como
la menta, mejorana y timo que son comunmente usadas como condimento, algunas otras
son fuente importante de aceites esenciales usados en perfumería y farmacia, como algunas
especies de Pogostemon que es la fuente de pachouli que se usa en el Sureste de Asia. (9).
Agastache.
Este género se caracteriza por contener aceites esenciales compuestos
principalmente por sesquiterpenos, monoterpenos e hidrocarburos, del tipo d-limoneno (5-
10%), metilchavicol (82-93%), trazas de a-pineno y sesquiterpenos mono y bicíclicos.
Dichos aceites son usados en perfumería o como materia prima para sintetizar compuestos
más complejos. (13, 14).
1.2. Familia Cucurbitaceae
La familia Cucurbitaceae es de dimensión media, posee cerca de 90 géneros con
aproximadamente 700 especies; es una familia altamente especializada desde el punto de
vista botánico, son plantas principalmente trepadoras. Es de importancia para el hombre
por ser fuente de alimento. (9).
Se encuentra distribuida en regiones húmedas y trópicos moderadamente secos.
Su clasificación comprende dos subfamilias: la Cucurbitoideae con ocho tribus y la
Zanonioideae con una sola tribu. (9).
Las mayores cosechas para alimento son producidas en regiones tropicales,
subtropicalesy templadas de especies de Cucúrbita (calabaza), cucumis (melón) y Citrullus
(melón de agua). Otras fuentes importantes de alimento son: Cucumis anguria, Lagenaria
siceratia, etc. (9). También se usan como ornamentales como: Cucúrbita pepo, pero en
menor grado.
Su mayor contenido son las cucurbitacinas que son sustancias amargas.
Cucúrbita y Maximowiczia
Por pertenecer a la familia Cucurbitaceae los géneros Cucúrbita y Maximowiczia se
caracterizan por contener entre sus metabojitos secundarios sustancias amargas, llamadas
cucurbitacinas.
Dichas cucurbitacinas son triterpenos tetra y pentacíclicos que poseen un esqueleto
biogenético: 10a-cucurbit-5-en[9(10 -» 9|5)abeo-10a-lanostano] que con frecuencia se
encuentra altamente oxigenado. Existen variaciones en este tipo de compuestos, en donde
hay una ciclización entre Ci6 y C24 en donde se forma un anillo extra (ejem. Cucurbitacina
S (32).
Cucurbitacina S.
Estos compuestos y sus glicósidos tienen una larga y bien conocida actividad
biológica lo que hace que el uso de estas plantas sea extenso en la medicina popular de
regiones tropicales y semitropicales. (32).
Recientemente, se ha renovado el interés en miembros de este tipo por sus
propiedades: citotóxica, antitumoral (60), antiinflamatoria, actividad antifertilidad, efectos
inmunoestimulantes (32), también exhiben un aumento en la permeabilidad capilar, acción
preventiva de hepatitis, cirrosis, etc. (32) (31).
Se hicieron estudios anticáncer con cucurbitacinas aisladas de Elaeocarpus
dolichostylus, (Elaeocarpaceae), encontrando una significativa actividad citotóxica en KB
y P-388 en sistemas de cultivo de células in vitro con los siguientes resultados (ED50
0.074 y 0.04 mg/mL respectivamente), usando cucurbitacina F, sin embargo en pruebas
con 23,24-dihidrocucurbitacina F y hexanorcucurbitacina F, fueron inactivas en los dos
sistemas de prueba (ED50 > 50 mg/mL). (35).
HO
HO
HO 24
OH
Hexanorcucurbitacina F
De estos resultados se postula que el doble enlace en la cadena lateral de la
cucurbitacina es necesaria para la actividad citotóxica (35).
Por poseer un sabor amargo muy característico se ha encontrado que ejercen una
actividad antagonista-giberelina en germinación de arroz, efectos estimulantes y
antialimentario para insectos, además actúan como reguladores de crecimiento en plantas.
(59).
Se encuentran reportes del aislamiento de un nuevo principio antileucémico con
actividad antitumoral (33), Datiscósido de Datisca glomerata Baill.
HO
HO
Datiscósido
6
1. 3. Familia Euphorbiaceae
La familia Euphorbiaceae comprende aproximadamente 300 géneros distribuidos en
5000 especies entre hierbas, arbustos y árboles. Algunos de sus géneros son muy grandes
como: Phyllanthus, Euphorbia, Crotón y Acalypha. (9).
Esta familia (Euphorbiaceae) es predominantemente tropical en su distribución, pero
con algunas especies en regiones templadas (9).
Se encuentra dividida en 8 subfamilias: Phyllanthae, Bridelieae, Crotoneae,
Acalypheae, Ricineae, Jatropheae, Suregadeae y Euphorbieae. (9).
Un gran número de especies tienen una considerable importancia enconómica, por
ejem: la Hevea brasiliensis, es la mayor fuente de caucho del mundo, Aleurites moluccana
es la fuente del aceite de candelilla usado en la fabricación de jabones, pinturas y vamices;
y Ricinus communis, de donde se extrae el aceite de ricino entre otras. También se usan
como purgativos, plantas para ornato y fuentes maderables.
En algunas plantas de esta familia el látex es venenoso, cáustico o urticante y las
semillas con frecuencia tienen propiedades purgantes o son venenosas.
Los usos medicinales y acciones toxicológicas de estas plantas son atribuidos a tres
grupos de diterpenos conocidos como tiglianos, dafnanos e ingenanos. (6).
Tigliano Dafnano Ingenano
Diterpenos tigliano, dafnano e ingenano.
Stillingia
El género Stillingia, pertenece a la tribu Hippomaneae, al igual que los géneros:
Sebastiana, Triadica, Sapium, Gymnanthes e Hyppomane (1).
De la Stillingia sanguinolenta, no se encuentran reportes a la fecha (1992), sin
embargo de la Stillingia sylvatica "quee's-delight" se encuentran estudios donde se reporta
que un extracto fluido es usado en grandes dosis como emético y catártico, y en dosis bajas
como un alternativo. También es empleada para afecciones de sífilis, enfermedades
cutáneas y afecciones hepáticas crónicas. (1).
De dicha planta se han aislado esteres diterpénicos, que causan irritaciones e
inflamaciones en piel y membranas mucosas (42). Estos compuestos poseen el esqueleto
de tigliano o dafnano, que están considerados como promotores tumorales (6,42).
2. QUIMIOTAXONOMIA
2. 1. - Agastache breviflora
La familia Labiatae tiene importancia económica por su alto contenido de aceites
esenciales en la mayoría de sus tribus (13,14,20).
También se han encontrado compuestos del tipo diterpénico, flavonoides,
antocianinas, esteróles, aminoácidos, triterpenos y azúcares. Se encuentra reportada la
presencia de iridoides como glicósidos en las tribus: Prostantheroidea, Ajugoideae,
Stachydoideae, Stachydeae, sin embargo no se han encontrado en: Rosmarinoideae,
Ocimoideae y Lavanduloideae.
A esta familia (Labiatae) pertenece el género Agastache, del cual las especies más
estudiadas son: foeniculum (Lophantus anisatus) y rugosa, de la especie breviflora no se
encuentran estudios en la bibliografía.
Los géneros Stachys y Betónica están relacionadas quimiotaxonómicamente por
pertenecer a la misma tribu (Stachydeae).
En el género Agastache se han encontrado principalmente: aceites esenciales, (14,
21) diterpenos (16) esteróles (18), triterpenos (18, 15) y flavonoides (17).
Aceites Esenciales.
Se analizó el aceite esencial por cromatografía de gases y espectrometría de la
especie Agastache foeniculum, encontrando 29 componentes. De los cuales los más
abundantes fueron: (14)
d- Limoneno (5.7%)
OCH,
Metileugenol (43.7%)
OCH3
Estragol (43.7%)
10
Al analizar cromatográficamente el aceite esencial de 14 especies de Labiatae
canadiences, se encontraron 30 componentes, de los cuales se identificaron los que estaban
en mayor porcentaje. (13)
a-Pineno P-Pineno
Cariofileno d-Limoneno
Diterpenos
De la raíz de Agastache rugosa se aisló un nuevo diterpeno con P.f. 178-180°C
(16).
OH
También de A. rugosa se aisló el ácido rosmarínico (16).
OH
OH
11
Esteróles
De seis especies estudiadas se encontraron esteroides del tipo de P-sitosterol (18).
Triterpenos
De Agastache rugosa se han aislado triterpenos del tipo de oleanano como: (18)
AcO
COOH
Acido 3-O-Acetiloleanólico.
AcO
CH2OH
3-O-Acetato de Eritrodiol P.f. 238-240°C
12
AcO
CHO
Aldehido -3-O-AcetiloleanóIico P.f. 223-225°C
a-Amirina
13
Antocianinas
1 De los pigmentos de flores azules-de constituyentes de las Familias Liliaceae y
Labiatae, se han identificado antocianinas (19).
OH
O-Glu-p-Coum.
O Glc.
O-Glu-p-Coum.
O
Glu-malonyl
Iridoides.
En once especies del género Stachys se encontró en la parte aérea: Ajugol,
Harpagido y 3-O-acetao de harpagido. Este es el primer reporte de iridoides en este género
(22).
H9, H
HOr z
O Glc.
Ajugol
H
CH3
II Vk-'-c-ort H T
, 0
O Glc.
Ajugosido
HO
OH
\ H
O Glc.
Harpagido
HO OH
Ac
O Glc.
3-O-Acetato de harpagido
14
Flavonoides
Se han encontrado diferentes tipos de flavonoides altamente oxigenados. (17)
OCH
CH3O
OH O
Thymonina
CH3O
OH O
5,6,4'Tr¡hidroxi-7,3'D¡metoxiflavona
OCH
CH3O
OH O
OCH
CH3O
OCH,
OH O
Pebrellina
CH3O
OH O
5,6-Dihidrox¡-7,8,3',41-TetrametoxifIavona 5,6-Dihidroxi-7,3\4'-Trimetoxiflavona
15
2. 2. Cucúrbita foetidissima y Máximo wiczia sonorae
Familia: Cucurbitaceae
La familia cucurbitaceae comprende aproximadamente 90 géneros y cerca de 700
especies que se encuentran distribuidas en los trópicos y en algunos lugares desérticos (9).
Se caracteriza por contener sustancias amargas, (cucurbitacinas) que son un grupo de
triterpenos tetracíclicos altamente oxigenados caracterizadospor un esqueleto lOa-cucurbit-
5-en[19(10 9(5) abeo-10a-lanostano]. Este grupo de compuestos ha sido estudiado
químicamente y se encuentran reportes de estudios de difracción de Rayos X. (33).
Un número de compuestos de este grupo (Cucurbitacinas) ha sido investigado por
sus propiedades citotóxicas, actividad antifertilidad, antitumoral y antiinflamatoria, así
como reguladores de crecimiento de plantas. (31)
A esta familia pertenecen la Cucúrbita foetidissima y Maximowiczia sonorae, que
están intimamente relacionadas desde el punto de vista quimiotaxonómico.
Del género Cucúrbita se han reportado estudios de sus consituyentes sin embargo
no se encuentran reportes de Maximowiczia.
A nivel familia se encuentran reportadas las siguientes cucurbitacinas.
Cucurbitacina A P.f. 207-208°C (34)
506051
16
R'Oi
Fig. 1 Estructuras de Cucurbitacinas B y D
Nombre Estructura P.f. °C Ref.
B
D
R = Ac
R = R1 = H
184-186
151-152
34
34
OAc
Cucurbitacina C P.f. 208°C (34)
17
Fig. 2. Estructuras de Cucurbitacinas E, I y L.
Nombre Estructura P.f. (°C) Ref.
E
I
L
R = Ac R!=H 235-236
R = R 1 = H " 148-149
23,24-dihidrocucurbitacina I 140
34
34
34
Cucurbitacina F P.f. 245°C (34)
18
Cucurbitacina G P.f. 149°C (34)
Fig. 3. Estructuras de Cucurbitacinas G y H
Nombre Estructura Ref.
H 24-epímero 34
Cucurbitacina J P.f. 202°C (34)
Fig. 4. Estructuras de Cucurbitacinas J y K
Nombre Estructura P.f. Ref.
K 24-epímero 195°C 34
19
R'O
Fig. 5. Estructuras de Cucurbitacinas O y Q
Nombre Estructura P.f. Ref.
O
Q
R1 = R2 = H
R1 = H R2 = Ac 118°C
30
30
HO.
Cucurbitacina P P.f. 156-7°C (30)
20
Además se han aislado del extracto clorofórmico del fruto de Citrullus colocyinthis,
cuatro glicósidos de cucurbitacinas (29).
HO-CH2 .OH
OH
2-0-P-D-glucopiianosdl-(22-27)-hexanorcucurb¡tacina I (29).
Glc-O,
OAc
2-O-P-gluoopiranosil cucutbitacina E (29)
21
Glc-
2-0-P-D-glucopiranosil cucurbitacina I (29)
Fig. 6. Estructuras de Glicósidos de Cucurbitacinas I y L.
Nombre Estructura Ref.
2-O-P-D-glucopiranosol
cucurbitacina L.
25-24 dihidro 29
Se han aislado nuevas cucurbitacinas como la cordifolina A, que se obtuvo de las
semillas de Fevilla cordifolia (Cucurbitaceae), esta planta se usa en Jamaica como emético,
purgativo y es altamente tóxico por ingestión. En recientes investigaciones de esta planta
(semillas) se aislaron las siguientes nor-cucurbitacinas 1 y 2 (32).
HO
OAc
1 R = H Fevicardina A (32)
2 R = P-O-glucósido (32)
22
m u
••"•OH
CordifolinaA(32)
Fig. 7. Estructuras de Gratiogenina y 3-O-glucósido
Nombre Estructura Ref.
Gratiogenina
3-O-glucosido
R1 = H R = H
R1 = Glucosil R = H
R1 = H R = OH
32
32
32
23
Fig. 8. Estructuras de Cucurbitacinas S y T
Nombre Estructura Ref.
Cucurbitacina S
Cucurbitacina T
R1 = H R = H
R1 = OH R = Me
32
32
De la Cucwnaria echinata se ailslaron tres nuevas agliconas triterpénicas de tipo
holostano. (27)
m
24
A nivel Género: Cucúrbita se han reportado los siguientes compuestos:
- Cucurbitacina B (Fig. 1) y su 2-O-glicósido (25)
- Cucurbitacina E (Fig. 2) y su 2-O-glicósido (25)
- Cucurbitacina D (Fig. 1) (25)
- Isocucurbitacina B (Fig. 1) (25)
También se aisló una nueva saponina tiriterpénica, Foetidisimosido A (25) (Acido
3-O-(i-D-glucopiranosido 28-O-[(J-D-xylopiranosil (1 —> 4) oc-L-rhamnospyranosyl (1
2)]-a-L-arabinopiranósidoechinocístico)
HO
«>H0
Foetidissimosido A
25
También se han podido aislar: el ácido bryonólico (26, 34).
HOOC.
y otros triterpenos como:
22-dihidroespinasterol (26,34)
(24a-etil-5oc-colesta-7-en-3|3-ol)
Glc
24-a-etil-5a-colesta-7-en-O-P-D glucósido (26, 34).
26
2. 3.- Stillingia sanguinolenta
La familia Euphorbiaceae ha sido ampliamente estudiada en especial los géneros:
Euphorbia, Jatropha y Crotón, de los cuales se han aislado una diversidad de compuestos
como:
1) Diterpenos (Tipo Kaureno) (44)
2) Diterpenos Macrocíclicos del tipo de Latirano (47), Jatrofano, Crotofolano(48),
Casbanoy Rhamnofolano.
3) Triterpenos tetra y pentacíclicos. (46,49)
4) Esteróles (50)
5) Flavonoides (51,52))
6) Coumarinas (53)
7) Lignano-coumarinas (54)
El género Stillingia ha sido poco estudiado y en especial la especie sanguinolenta
no se encuentra reportada en la bibliografía.
Sin embargo por pertenecer a la familia Euphorbiaceae, se puede pronosticar el tipo
de metabolitos secundarios presentes.
Se han encontrado en la especie sylvatica, compuestos altamente tóxicos e irritantes,
que causan inflamaciones en la piel y membranas mucosas (42). Dichos compuestos son
esteres diterpénicos con estructuras tipo dafnano y tigliano con cadenas de ácidos grasos
poli-insaturados. (42)
27
Diterpenos (Esqueleto Kaurano) (44).
1
2
Rl = H
Ri = H
W
R3 = CO2H
R3 = CH2OH
Diterpenos Macrocíclicos
CurculatiranoA(47)
(Tipo Latirano)
CrotofolinaA(48)
(Tipo Crotofolano)
Triterpenos
28
a—Amirina (46)
Esteróles
Eufol (49)
Estígmasterol (50)
29
Flavonoides
OH o
Apigemna (51)
OH O
Quercetina (52)
Coumarinas (53)
HO
Esculetina Escopoletína
Lignano-coumarinas (54)
OH
H3
H3CO
30
O
p-C-(CH=CH)3-(CH2)3-OR
(CH=CH)2(CH2)2CH3
= CH2
. H
O' OH 1 f— O
OH CH2OH
Fig. 9. Esteres Diterpénicos tipo Dafnano
Compuesto
1
2
3
R = H
0
II
R = C-(CH2)1 2-CH3
KXCCH-^.CH,
Ref.
42
42
42
31
(CH=CH)2(CH2)nCH3
CH3
:=CH 2
H
O
OH CH2OH
Fig. 10. Esteres Diterpénicos tipo Tigliano
Compuesto
4
5
6
7
R = H n = 2
O
II
R = C - (CH-CH)3 - (CH2)3 - OCOCH3H27 n = 4
R = CO - (CH= CH)3 - (CH2)3 - OCOC14H27 n = 4
R = COCtHs n = 4 (gnidilatidin)
Ref.
42
42
42
42
32
O
CH20H
Fig. 11. Esteres Diterpénicos tipo Dafnano
Compuesto
8
9
R1 = COCH3; R
2 = H (prostratin)
R1 = CO-(CH2)14-CH3; R
2 = OH
Ref.
42
42
Los ID50 para Sj, S^Sy SJS5, Sg/S7 y Sg que fueron determinados en ratones dieron
0.16,0.08,0.12,0.11 > y 0.06 nmol/ear de respuesta.
33
3.- MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. Planta: Agastache breviflora
CLASIFICACIÓN BOTÁNICA
Reino: Vegetal
División: Angiospermae
Clase: Dicotiledónea
Orden: Tubiflorae (Polemoniales)
Familia: Labiatae
Tribu: Stachydeae
Género: Agastache
Especie: A. breviflora (Gray) Epling
DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Sus tallos son de 60 cm de alto con ramificaciones, las hojas son en forma ovada
con pecíolos menores a 1 cm., de 2-4 cm de largo, el cáliz normalmente es rosa, la corola
es de color rosa a púrpura o blanca, bilabiada, con lóbulos cortos, los estambres son de 1.5
a 2.5 de largo. (3)
Se le encuentra en los meses de julio a octubre. (3)
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
Nuevo León, Norte de Coahuila, Arizona, Nuevo México y Texas. (3) Fig. 16a.
LUGAR DE RECOLECCIÓN
Se colectó en junio de 1988 en las orillas de la Presa "Rodrigo Gómez", del
Cercado, N. L.
Fig. 12. Agastache breviflora (Gray) Epling
35
3.2. Planta: Cucúrbita foetidissima
CLASIFICACIÓN BOTÁNICA
Reino: Vegetal
División: Angiospermae
Clase: Dicotiledónea
Orden: Cucurbitales
Familia: Cucurbitaceae
Tribu: Cucurbiteae
Género: Cucúrbita
Especie: C. foetidissima
Nombre común: "calabacilla loca"
DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Es una planta herbácea, anual, silvestre, crece durante los meses de mayo-agosto en
lugares arenosos.
Tiene una gran raíz fusiforme, tallos principalmente rastreros de 2 a 4 m de largo
con pecíolos cortos.
Las flores masculinas son de 10-12 cm de largo pubescentes, las femeninas son de
9.10 cmMe largo, la corola es amarilla con lóbulos anchos.
Los frutos son esféricos de 7-10 cm de diámetro, de color verde con machas o
rayas blancas, de pulpa filamentosa y amarga de color blanco. (1)
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
Tamaulipas, Nuevo León, Coahuila, San Luis Potosí, Zacatecas, Hidalgo, Durango
y Zacatecas. (3) Fig. 16b..
LUGAR DE RECOLECCIÓN
Se colectó en mayo de 1986 en Cd. Satélite, N. L.
36
Fig. 13. Cucúrbita foetidissima
J, 
¡ 
"i
j 
I 
37
3.3. Planta: Maximowiczia sonorae
CLASIFICACIÓN BOTÁNICA
Reino: Vegetal
División: Anthophyta
Clase: Angiospermae
Orden: Cucurbitales
Familia: CucurbitáceaeGénero: Maximowiczia
Especie: M. sonorae
Nombre común "Huareque"
DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Es una planta trepadora o rastrera, con zarcillos, sus raíces son abultadas, salientes
del suelo, con aspecto de piedra. Las hojas están partidas con los lóbulos con picos
desiguales. Sus flores son amarillas, monopétalas. El fruto es globoso de 2.5 cm. (4).
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
Se encuentra en el Noroeste de la República Mexicana, en Sonora, Sinaloa y Baja
California. (4) Fig. 16b.
LUGAR DE RECOLECCIÓN
Se colectó en Hermosillo, Sonora en los meses de Octubre de 1989 y enero de
1990.
3B
Fig. 14. Maximowiczia sonorae
39
3.4. Planta: Stillingia sanguinolenta
CLASIFICACIÓN BOTÁNICA
Reino: Vegetal
División: Embriofita
Subclase: Dicotiledónea
Clase: Angiospermae
Orden: Euphorbiales
Familia: Euphorbiaceae
Tribu: Hippomaneae
Género: Stillingia
Especie: 5. sanguinolenta (Muell, Arg.)
DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Es un arbusto de aproximadamente 1 metro de altura o menos. Sus hojas son
opuestas, lineales de 2.5 cm de longitud, aserradas. Las flores son monoicas. (1).
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
Se encuentra en los estados de Nueyo León, San Luis Potosí y Veracruz. (1).
Fig.lóa.
LUGAR DE RECOLECCIÓN
Se colectó en Junio de 1989, en Puerto Genovevo (cercano a Villa de Santiago, N.
L.). Otra colecta se hizo en mayo de 1990 y marzo de 1992 en Valle Alto, N. L.
4 0
Fig. 15. Stillingia sanguinolenta (Muell, Arg.)
41
MEXICANA.
Fig. 16a. Distribución Geográfica
Agastache breviflora (1)
Stillingia sanguinolenta (8)
42
REP. MEXICANA.
Fig. 16b. Distribución Geográfica
Cucúrbita foetidíssima (1)
Maximowiczia sonorae (4)
43
3.5. PREPARACIÓN DEL MATERIAL
Una vez recolectado el material vegetal se separó la parte aérea de la raíz en algunos
casos (Stillingia sanguinolenta), en otros se separó la corteza de la raíz (Maximowiczia
sonorae), posteriormente se les dio diferente tratamiento antes de la extracción.
1.- El material seco y molido se extrajo durante 7 días en caliente en Soxhlet,
usando metanol. Las solución obtenida se evaporó a sequedad en un rotaevaporador tipo
Flash (Burchler Instruments).
2.- Otra técnica usada para la preparación de extractos fue la maceración, en la cual,
el material se pica o muele y se pone a reposar en una mezcla de hexano: éter
isopropflico:metanol (1:1:1) v/v durante 7 días a temperatura ambiente, después la solución
resultante se evapora hasta sequedad.
44
3.6. MÉTODOS DE AISLAMIENTO, PURIFICACIÓN E
IDENTIFICACIÓN PARA LOS METABOLITOS
SECUNDARIOS.
Los métodos de aislamiento y purificación, se llevaron a cabo utilizando técnicas
cromatográficas (CCL, CCD y CCDP) y de cristalización.
La identificación se hizo con ayuda de mediciones físicas y químicas.
3.6.1. Métodos Cromatográficos.
Cromatografía en Columna Líquida (CCL)
Se utilizaron columnas de vidrio Pyrex de diferentes dimensiones: (según la
cantidad de extracto)
50x7; 5 5 x 5 y 5 5 x 3 c m .
Como fase estacionaria se utilizó gel de sílice, 60 (230-400 mallas Aldrich), y (35-
70 mallas, Merck) en una proporción de 20:1 con respecto al extracto. En otros casos se
utilizó mezcla de Tonsil Ceuta (80:20) y como fase móvil (eluente), se usaron solventes de
diferente polaridad así como mezclas de ellos. También se utilizó Sephadex LH-20,
usándose Hex:CH2Cl2:MeOH en las siguientes proporciones 3:1:1 y 1:1:1 como sistema
de eluente.
Cromatografía en Capa Delgada (CCD)
Esta técnica se utilizó como medio de grado de pureza de un compuesto, así como
de comparación y avance de una reacción.
Las placas de vidrio que se usaron tienen las siguientes dimensiones:
Base (cm)
2.6
5
10
10
Altura (cm)
7.6"
10
10
20
Espesor (mm)
2
2
2
2
45
Las placas se prepararon mezclando 25 g de gel de sílice 60 G (Merck) con 50 mL
de agua destilada. Después de agitar la mezcla por unos minutos, se aplica sobre las placas
con un aparato "Desaga-Hedelberg", se dejan reposar unos minutos y posteriormente se
ponen a activar (secar) en estufas durante 1 ó 2 hrs. a una temperatura de 100°C.
El material a analizar se disuelve en un disolvente adecuado y se aplica en la placa
por medio de una micropipeta (capilar) a 1 cm aproximadamente del borde de la placa
posteriormente se introduce la placa en una cámara cromatográfica.
Los sistemas de eluentes más utilizados son los siguientes:
Bz:Ac 9:1; 8:2 y 7:3
CH2CI2: MeOH 9:1; 8:2 y 7:3
CH2Cl2:MeOH H2O (64:40:8) y (75:25:2)
Bz:Hex 8:2
Como agentes reveladores se usaron luz visible y ultravioleta y como agente
cromogénico solución de CoCl2(2%).
Cromatografía en Capa Delgada Preparativa (CCDP)
Esta técnica es parecida a la CCD, solo que varía en el espesor de la fase
estacionaria. Se emplea para separar mezclas no muy complejas, pero con solubilidad muy
parecida.
La dimensión de las placas preparativas es de 20 x 20 cm (b x a) y un espesor de 5
mm.
46
3.6.2. Métodos de Purificación
Cristalización (12)
Constituye uno de los mejores métodos para la purificación de compuestos sólidos
a temperatura ambiente. Se efectúa formando una solución saturada, a temperatura elevada
el compuesto a cristalizar en un disolvente adecuado, del cual al enfriarse se separe éste en
forma cristalina.
La selección del disolvente adecuado se basa en las siguientes características:
a) Que disuelva el soluto (compuesto) rápidamente a temperatura elevada.
b) Que el soluto sea muy poco soluble en él a baja temperatura.
c) Que no reaccione con el soluto.
d) Que sea lo suficientemente volátil para permitir su eliminación de los cristales con
facilidad.
e) Que las impurezas sean mas solubles en frío que el soluto.
Con frecuencia es necesario repetir el proceso de cristalización varias veces para
obtener los compuestos completamente puros. A este proceso se le conoce como
recristalización.
En algunos casos se requiere la decoloración con carbón activado, adicionando una
pequeña cantidad de carbón y después se deja enfriar la solución para permitir la
cristalización.
47
3.6.3. Métodos de Identificación.
3.6.3.1. Métodos Físicos
Punto de Fusión.- Se determinaron en capilar cerrado, en un aparato Melt-Temp y
en un Metüer.
Rotación óptica.- Se utilizó un polarímetro Perkin-Elmer, Mod. 141 y como
disolvente se usaron: cloroformo, metanol y dimetilsulfóxido.
Espectro UV-VIS.- Se utilizó un espectrofotómetro Perkin-Elmer, Modelo Lambda
3P y como disolvente metanol, etanol, agua y dimetilsulfóxido según el compuesto.
Espectro IR. Se realizaron en un espectrofotómetro Perkin-Elmer Mod. 137 y en
un espectrómetro de IR con Transformada de Fourier Perkin-Elmer Mod. 1710. Las
muestras fueron hechas en pastillas de KBr.
Espectros de 1HRMN.-Se registraron en un espectrómetro Varían, Mod. EM-360A
de 60 MHz y otros se determinaron en Technischen Univ. Berlin, D-1000 Berlin 12,
Alemania por cortesía del. Dr. J. Jakupovic, se usaron como disolventes CDCI3, CD3OD,
CD3COCD3, DMSO-d6, Py-d6 y D2O, el TMS se usó como estandard interno.
Espectros de 13CRMN. Se determinaron en un espectrómetro JOEL FX-900, en el
Institute of Pharmacy and Food Chemistry, Universitat Erlangen, Rep. Federal de
Alemania, se usaron como disolventes, CDCI3, CD3COCD3 y DMSO-dfr
Espectros COS Y y NOE. Fueron determinados en Technischen Universitat Berlin,
D-1000 Berlin 12, Alemania, por cortesía del Dr. J. Jakupovic.
Espectros de Masas.- La determinación se hizo en un espectrómetro Finnigan
4500,70eV y fueron cortesía del Dr. J. Jakupovic.
Difracción de Ravos X.
48
3.6.3.2. Pruebas Químicas.
1) Ignición
Se utiliza para diferenciar un compuesto orgánico de uno inorgánico. La prueba se
hace colocando 1-2 mg del compuesto en una asa de platino y se lleva a la flama de un
mechero, si arde y deja cenizas como residuo el compuesto es orgánico. (12).
2) Insaturaciones.
- KMnO4. Se disuelven 1-2 mg de la muestra en 1 mL de agua, acetona o metanol
y se le añade gota a gota una solución de KMnO4 al 2% en agua, la prueba es positiva si se
observa decoloración oformación de un precipitado café (MnO2) (12).
- BnJCCU. Se disuelven 1-2 mg de la muestra en 1 mL de CCk y se agrega gota a
gota una solución de bromo en CCk al 2%, si se observa una rápida decoloración de la
solución la prueba es positiva. (12)
3) Grupo Carbonilo.
Se prepara una solución saturada de 2,4-dinitrofenilhidrazina en HC1 6N. Se
añaden unas gotas del reactivo a 1-2 mg del compuesto disuelto en etanol y si se forma un
precipitado naranja rojizo, la prueba es positiva. (12)
4) Oxhidrilos fenólicos.
Prueba del cloruro férrico.
Se disuelve la muestra (1-2 mg) en 1 mL de etanol y se le añaden unas gotas de
cloruro férrico al 5% en etanol, una coloración, verde, azul o formación de un precipitado
se considera una prueba positiva. (7,12)
5) Grupo carboxilo.
Prueba del Bicarbonato de Sodio.
Se añaden unas gotas de una solución de bicarbonato de sodio al 10% en agua a
la muestra (1-2 mg). La prueba es positiva si se observa desprendimiento de burbujas de
CO2. (12)
49
6) Esteroides y Triterpenos.
Prueba de Liebermann-Burchard.
El reactivo se prepara agregando una gota de ácido sulfúrico a una mezcla de
anhídrido acético con 1 mL de cloroformo a 0°C. Una gota del reactivo se le añade a la
muestra (1-2 mg), disuelta en 1 mL de cloroformo, con la aparición de una coloración azul,
verde, roja, anaranjada o violeta la prueba es positiva. (7)
7) Carbohidratos.
Prueba de la Antrona.
En un tubo de ensaye se colocan 1-2 mg de la muestra disuelta en agua, después
se deja resbalar por las paredes del tubo una solución recién preparada de antrona al 2% en
H2SO4 conc, la prueba es positiva si en la interfase aparece un anillo azul verdoso. (7)
8) Flavonoides.
Prueba de Shinoda.
Se disuelven 1-2 mg de la muestra en 1 mL de etanol y se le agregan unas gotas
de HC1 conc, y unas limaduras de magnesio, si la solución toma coloración anaranjada,
roja, roja azulosa o violeta, la prueba es positiva. (7)
9) Saponinas.
En un tubo de ensayo se colocan 1-2 mg de muestra, se disuelve en 1 mL de
agua, se sacude y si se forma una espuma abundante y permanece por más de un minuto, la
prueba es positiva. (7)
10) Coumarinas.
Se disuelven 1-2 mg de la muestra en una solución de NaOH 10%, si aparece
una coloración amarilla y desaparece al acidular, la prueba es positiva.(7)
50
4. PARTE EXPERIMENTAL
4.1.- 8368 Agasíache breviflora (Gray) Epling
4.1.1. Extracción directa con metanol de la parte aérea.
El material vegetal 8368 Agastache breviflora (475 g) previamente seco y molido se
puso a extraer en soxhlet con CH3OH durante 7 días en caliente, después se procedió a
filtrar la solución resultante, que posteriormente se llevó a sequedad en un rotaevaporador
rotatorio tipo "flash", obteniéndose 63.2 g (13.3%) de un residuo verde. A dicho residuo
se le hizo una partición con CH2Cl2:H2O 1:1; resultando tres fases, una acuosa 34.5 g
(54.58%), una capa intermedia 3.5 g (5.5%) y otra soluble en CH2C12 25.2 g (39.8%). La
fase acuosa se liofilizó.
A la parte soluble en CH2CI2 se le hizo un reflujo con CH3OH durante 1 h.,
obteniéndose 10.1 g (40.07%) de parte soluble y 15.1 g (59.9%) de insoluble.
Lo soluble en CH3OH como 8368 AbEMSMae., se le hizo CCD en dos sistemas
cromatográficos para observar su composición, estos resultados se resumen en las tablas 1
y 2.
Tabla 1. Resultados de CCD en Bz:Ac 9:1 (v/v) de 8368 AbEMSMae
Mancha
1
2
3
4
Vis.
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
UV
N.R.
Café
Café
Amarilla
C0CI2
Morada
Amarilla
Amarilla
Verde-Am.
51
Tabla 2. Resultados de CCD en CH2Cl2:MeOH 9:1 (v/v)de 8368 AbEMSMae.
Mancha
1
2
3
4
5
Vis.
Amarilla
Amarilla
Amarilla
N.R.
Amarilla
UV
Café
Café
Negra
Amarilla
Amarilla
C0CI2
Amarilla
Amarilla
Amarilla
Amarilla
Café
Después del anterior tratamiento al extracto metanólico, se procedió a realizar una
CCL de la parte soluble en CH3OH (del reflujo). Se mezclaron los 10 g de extracto con
igual cantidad de gel de sílice (60 230-400 mallas Aldrich) para la preparación del extracto,
estos se montaron en una columna cromatográfica de 50 x 7 cm., la cual fue previamente
empacada con gel de sílice de las mismas características.
El sistema de elución utilizado fue: hexano, acetona, metanol y mezclas de ellos.
El progreso de la CCL se siguió por CCD, vanándose la polaridad según las
observaciones en las placas y se recogieronfracciones de 125 y 250 mL.
En la Fig. 17 se muestra la secuencia de obtención de 8368 AbEMSMae.
Agastache breviflora
8368
475 g (aérea)
J.
52
Extracción
Soxhlet MeOH
7 días
MARCO
1
8368AbEMae
63.2 g
(133%)
8368AbEMSCae
25.2 g
(39.87%)
Partición
CH2Ch:H2O 1:1
8368AbEMIHIC
3.5 g
(5.53%)
1
8368AbEMSH
34.5 g
54.58%)
Reflujo
con MeOH 1.5 h.
8368AbEMSMae
Ins. MeOH
15.1 g (59.9%)
8368AbEMSCae
Sol. MeOH
10.1 g (40.07%)
8368AbEMSC
P.f. 134°C
Cristales blancos
W = 35 mg
(3-sitosterol
Gel de Sílice
8368AbEMSC
P.f. 132°C
Polvo amarillo
W = 18 mg
5-hidroxi-3,4-,7-
trimetoxiflavona
8368AbEMSC
P.f. 242°C
Polvo amarillo
W = 10 mg
4',5-dihidroxi-
3,7-dimetoxifla-
vona
8368AbEMSC
P.f. 253°C
Polvo blanco
W = 50 mg
Fig. 17. Secuencia de extracción y aislamiento de 8368AbEMSC
53
Obtención de 8368AbEMSMael32 (5-hidroxi-3,4',7-trimetoxi
flavona)
De las fracciones de la CCL del sistema Hex:Ac 9.5:0.5 se cristalizó un polvo
amarillo, al concentrar las fracciones se lavó con metanol para purificarlo, se obtuvieron 12
mg y con P.f. 132-134°C.
CCD
Vis =
UV =
C0CI2 =
Rf
Amarilla
Café oscuro
Amarillo limón
0.76 Bz:Ac. 9:1
Pruebas Químicas
Shinoda = Coloración anaranjada
FeCb/EtOH = Coloración café oscuro
Análisis Espectroscópicos.
UV. Fig. 18
C = 0.1 mg/mL, CH3OH
Tratamiento
CH3OH
CH3ONa
A1C13
A1C13+HC1
CH3CO2Na
H3BO3+CH3CO2Na
IR (v, cm-l) ]
2950
1640
1590
1550
1470
1450
ECBr. Fig. 19
C-H
C=O a,P
C=C Ar
C=C Ar
CH3
CH3
370
330
360,
360,
330
335
insat.
320
310
1360
1260
1250
1170
1090
1025
A-max(nm)
280
280
290
290
278
285, 270, 265
CH3
C-O
C-O
C-0
C-O
C-O
970
920
840
820
760
230
250
238
C=C
c=c
c=c
c=c
c=c
54
iHRMN (8, ppm) CD3OD 60MHz) Fig. 20.
3.9 s, 3H -OCH3
3.95 s, 3H -OCH3
4.15 s, 3H -OCH3
7.0 s, 1H H-Ar
7.15 s Ar-H
7.3 s Ar-H
8.15 s Ar-H
8.3 s Ar-H
12.4 s, 1H -OH
5 5
Fig. 18. Espectro UV 8368 AbEMSMae 132
5 6
4000 3000 2000 1500
. . I . l - I i _ L
300 700
10 11 12 13 14 15
Fig. 19. Espectro IR 8368 AbEMSMae 132
:••• , , -
5 o ;.,-.,,.•
É
C
O
; 1
c >
S7ART OF SWífP
,200 . :
€0":
300
120
60
30
' 10
1000
' . < : ' • : •
100
2r,
8.3
9 e
7.3
i 7,t5
1 1 70
7
' - • • >
12.4
.~k
_ _
4 0 0
3.95 ?00
1 0 0
4 0
2
3 . . . ,
0
4.15
h
4 3
l ü ü
50
20
10
5
2 1
i
ENO OF SWEEP
0
f»
r
A/LY
1
0
1R
 
S
P
E
C
T
R
O
M
E
T
E
R
6
0
 M
H
•3
6
0
5
LU
Fig. 20. Espectro'HRMN 8368AbEMSMae 132
57
Obtención de 8368 AbEMSM(ae) 242 (4',5-dihidroxi-3,7-
dimetoxiflavona)
Al estar eluyendo la CCL con el sistema Hex:Ac. 9:1 y concentrar las fracciones
queda un residuo café amarillento, que al tratar con CH2CI2, cristalizó un polvo amarillo
verdoso, que pesó 8 mg., el P.f. es de 242-244°C.
CCD
Vis
UV =
C0CI2 =
R.f. =
Amarilla
Café oscuro
Amarillo limón
0.55 Bz:A 9:1
Pruebas Químicas
Shinoda = Coloración
FeCb/EtOH = Coloración
anaranjada
café oscuro
Análisis Espectroscópicos
UV. Fig. 21 .
(c=0.1mg/mL, CH3OH)
Tratamiento A max (nm)
MeOH 350 270
CH3ONa 390 250
A1C13 390, 350, 300, 270
A1C13+HC1 390, 350, 300, 275, 265
CH3CO2Na 350 265
H3BO3+CH3CO2Na 350 260,265
58
IR (v, cm-1) KBr Fig. 22.
3200
2950
1650
1600
1580
1550
1500
1450
1370
OH
C-H
C=O y,p\ insat.
C=C
C=C
c=c
c=c
CH3
CH3
• 1340
1270
1200
1180
1050
1000
910
870
820
CH3
C-O
C-O
C-O
C-O
C=C
C=C Aromaticidad
C=C
c=c
iHRMN (8, ppm) Acetona d6, 90 MHz. Fig. 23.
8.10
7.999
7.070
6.968
6.661
6.637
6.304
6.330
3.923
3.879
Masas.
M+ = :
1H
1H
1H
1H
1H
1H
1H
1H
3H
3H
d J = lOHz Ar-H
d J = 10 Hz Ar-H orto
•
d J = 3Hz. Ar-H metad J=3Hz Ar-H meta
s OCH3
s OCH3
. (70 eV) IE Fig. 24.
314
Fórmula Molecular C17H14O6
m/e
314
295
285
271
% Intensidad m/e %
100 167
12 143
17 121
30 44 '
Intensidad
10
10
22
37
59
Fig. 21. Espectro UV 8368 AbEMSMae 251
60
4000 3000
'001 '""""1"
2000 1500 CM' 1000 900 800
U . ,i i • 1 ,
10 11 12 13 14 15
WAVELENGTH (MICRONS)
Fig. 22. Espectro IR 8368 AbEMSMae 242
7.07
6.968
Fig. 23. Espectro 'HRMN 8368 AbEMSMae 242
61
C . M I : ' , E ! t"•?••:• « EI1SÍ
CWIOS.i El 5ST
ieo.0-1
30.0-
TIUÍMJMK ,ii.,i
100
143 IC7
131
S9CJI51 ••II R ( t h-El 314
PUt 3"P?l".
271
228 j4) 355
285
EIC*.
150 200 250 300
Fig. 24. Espectro de Masas 8368 AbEMSMae 242
62
Obtención de 8368AbEMSMac 134 (p-Sitosterol)
Al concentrar las fracciones eluídas en el sistema Hex:Ac. 9.5:0.5, quedó un
residuo verde, del cual al cristalizar con CH3OH se obtuvieron unos cristales blancos de
p.f. 134-136°C, con un peso de 35 mg.
CCD
Vis. =
UV =
C0CI2 =
Rf
No revela
No revela
Morada
0.59 B:A 9:1
Pruebas Químicas
L-B = Coloración morada
Rotación Óptica
[OC]D = -33 (c = 7.5 mg/mL, CHCb)
Análisis Espectroscópico
IR (V, cm-1) KBr Fig. 25.
3450
2950
1450
1370
OH
CH
CH2, CH3
C(CH3)2
1360
1053
960
gem-dimetilo
C-O
c=c
63
14 S 1380
M=a.ee T
4886 3500 3(ien3 2588 2888 1588 1688 C(1-1 588
Fig. 25 Espectro IR 8368AbEMSMae 134
64
Obtención de 8368 AbEMSMae 253
Al eluir la CCL con hexanoracetona 1:1 y concentrar las fracciones se obtuvo un
polvo blanco que se recristalizó con metanol, tuvo un p.f. de 253-262°C, se obtuvieron
50 mg.
CCD
Vis :
UV :
CoCl2 :
Rf :
No revela
No revela
Morada
0.61 CH2Cl2:MeOH 9:1
Pruebas químicas
Antrona : Anillo azul
Análisis Espectroscópico
IR (v, cnr1) KBr Fig. 26
3400
2930
2900
1450
OH
CH
CH
CH2, CH3
1350
1250
1000-1020
870
CH3
C-O
C-O
C=O
65
4000 3000 2000 700
•Í60
7 8 9 .10 11
WAVELENGTH (MICRONS)
14 15
Fig. 26. Espectro IR 8368 AbEMSMae 253
Fig. 26a.. Espectro IR Deriv. Acetilado 8368 AbEMSMae 253
66
4.2. 7561 Cucúrbita foetidissima
4.2.1. Extracción con metanol de la raíz de 7561 Cucúrbita
foetidissima
Se pusieron a extraer 5600 g de raíz de 7561 Cucúrbita foetidissima previamente
seca y molida, en un extractor soxhlet con CHsOH durante siete días, después se filtró y el
filtrado se concentró en un rotaevaporador rotatorio tipo "flash" obteniéndose 1200 g
(21.42%) de un material resinoso de color rojizo. Se tomaron 100 g de dicho material y se
reflujaron durante 1.5 h. la solución se dejó enfriar y posterionnente se filtró, se obtuvieron
15 g (15%) de unos cristales incoloros insolubles en CH3OH y 85 g (85%) de un material
rojizo soluble en CH3OH, a esta parte se le identificó como 7561 CfRzEMSM.
A la parte soluble en CH3OH se le hizo CCD en dos sistemas cromatográficos para
observar su composición, estos resultados se resumen en las tablas 2a y 2b.
Tabla 2a. Resultados de CCD en Bz:Ac 9:3 (v/v) de 7561 CfRzEMSM
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
5
Tabla 2b. Resultados de CCD en CH2Cl2:MeOH 9:1 (v/v) de 7561 CfRzEMSM
Mancha Vis. U.V. C0CI2
1
2
3
4
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
Amarilla
Amarilla
N.R.
N.R.
N.R.
Morada
Morada
Morada
Morada
Morada
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
Amarilla
Amarilla
N.R.
N.R.
Morada
Morada
Café
Morada
67
Se tomaron 40 g del extracto de CH3OH (7561 CfRzEMSM) (del reflujo) y se
preparó el extracto mezclándose con gel de sílice 60 (230 400 mallas Aldrich) para
posteriormente montarse en una columna cromatográfica de 50 x 7 cm, la cual fue
previamente empacada con una mezcla de Tonsil-Celita 8:2.
El sistema de elución fue con hexano, acetona, metanol y mezclas de ellos.
El progreso de la CCL se siguió por CCD, cambiándose el sistema de elución,
cuando había cambio apreciable en las CCD; se recogieron fracciones de 250 mL.
En la Fig. 27a y 27b se muestra la secuencia de obtención de 7561CfRzEMSM.
68
Cucúrbita foetidíssima (7561)
Raíz
5600 g
Extracción Soxhlet
7 días, MeOH
1
MARCO • 7561CfRzEM
1200 g
(21.42%)
7561CfRzEMIM
15 g
Reflujo
MeOH, 1.5 h
7561CÍEMS
Soluble
Tonsil-Celita 8:2
7561CfRzEMSM
P.f. 300°C
Cristales blancos
W = 1.5 g
Ac. Echinocístico
7561CÍEMSM
P.f. 154°C
Polvo blanco
W = 50 mg
7561CÍEMSM
Frs. Incristalizables
W = 5g
Fig. 27a. Secuencia de extracción de 7561CfRzEM
69
Frs. Incristalizables
7561 CfRzEMSM
Hidrólisis
H2SO4 2N
2h.
7561 CfRzEMSM
Soluble. Hidrol.
Cromatografía en
Papel Comparativa
7561 CfRzEMSM
Insoluble de Hidrol.
i
Reflujo
CH2CI2,2 h.
Insoluble 7561 CfRzEMSMIH
S - CH2CI2
CCL
TonsihCelita
8:2
7561 CfRzEMSM
IH
P.f. 295°C
Cristales blancos
W = 100 mg
Ac. Echinocístico
7561 CfRzEMSM
IH
P.f. 143-149°C
Mezcla
Fig. 27b. Secuencia de aislamiento de compuestos de 7561 CfRzEMSM
70
Obtención de 7561 CfRzEMSM300 (Ac. Echinocístico)
Al eluir la CCL con el sistema Hex:Ac 9:1 y concentrar las fracciones se obtuvo un
residuo amarillo que se cristalizó con metanol, obteniéndose 300 mg de un compuesto
blanco en forma de polvo de P.f. 300-302°C.
CCD
Vis =
UV =
C0CI2 =
Rf
No revela
No revela
Morada
0.50 Bz:Ac 8:2
Pruebas Químicas
L-B = Morada, al minuto cambia a azul
Rotación óptica
[cc]D = 5S9 578 546 436 365
+30.28 +29.71 +34.14 +60.71 +60.71
(c = 7.5 mg/mL, CH3OH)
Análisis Espectroscópicos
UV Fig. 28
X max = 230 nm. (log. e = 2.62) c = 0.2 mg/mL, CH3OH.
IR (v cm-l)KBr Fig. 29.
3658
3619
2945
1677
1466
1450
OH
OH
CH
C = O
CH2, CH3
CH2
1386
1377
1287
1044
999
C(CH3)2
C(CH3)2
C-O
c-o
c=c
71
RMN (8, ppm) CD3OD, 400 MHz. Fig. 30
0.66
0.67
0.79
0.80
0.85
0.86
1.23
s
s
s
s
s
s
s
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
1.5
1.8-1.6
2.02
2.91
2.08
4.21
5.27
m
m
dd
dd
m
t
t
CH
CH2
CH
CH
CH
CH
C = CH
!3CRMN (8, ppm) CH3OD. Fig. 31
17
17.5
18.0
20.0
25.0
25.5
28.0
28.5
29.0
29.5
32
33
34
35
37.5
CH3
CH3
CH2
CH3
CH2
CH3
CH2
CH3
CH3
CH3
C
CH2
CH2
CH2
C
38.0
39.0
40
41
41.5
43.0
43.5
43.5
48
58
76
81
124.5
145
182
CH2
CH2
C
C
C
C
CH
CH
CH2
CH
CH
CH
CH
C
C=O
72
Masas (IE) 70 eV. Fig. 32.
PM472
Pico base 246
nVe
454
410
264
246
218
201
% intensidad
5
24
46
100
30
76
m/e
173
119
105
69
57
55
% intensidad
66
60
36
60
44
62
Difracción de Rayos-X. Fig. 33.
73
220 230
Fig. 28 Espectro UV 7561 CfRzEMSM 300
74
Fig. 29. Espectro FTIR 7561 CíRzEM 300
Fig. 30. Espectro 'H RMN 7561 CfRzEM 300
"1 1 " ' " "T I '""V—r--r—. — - ) — ^ ( • • - | - * — t " " | 1 "
CH • CH,
CH,
M
Fig. 31 Espectro I3C RMN 7561 CfRzEM 300
75
WQ
80;
60;
4OÍ
ao-
ol.,
80
S5
LdkUULi
189,
,1
I
4
3
2
410 1
454
43»
i
415
454 41J
U. lllll«ll|'l»»lillllfMIIII'H illHylf MI) • |l,UI«ll;¡ 1 11̂ .. , _ , i r" .1' .1 ll il, ^ _
120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 340 360 380 400 4 2 0 4 4 0 460 480 600
Fig. 32. Espectro de Masas 7561 CfRzEM 300
76
Fig. 33 Espectro de Difracción de Rayos X 7561 CfRzEM 300
77
Derivado acetilado de 7651 CfRzEMSM300 (Ac. 3-acetil-
Echinocístico)
Se pusieron a acetilar 100 mg del ácido echinocístico de P.f. 300°C, con 1 mL de
anhídrido acético y 0.5 mL de piridina a reflujo durante 1.5 h., después se cristalizó
agregándole agua helada, posteriormente se filtró el precipitado obtenido, se lavó con agua
acidulada (HC1 10%) y por último con agua destilada para eliminar todo el ácido y
reactivos en exceso. Se obtuvieron 110 mg de un polvo blanco de P.f. 263°C.
CCD
Vis. =
UV =
C0CI2 =
Rf
Pruebas
L-B =
Rotación
MD =
No revela
No revela
Morada
0.4 Bz:Ac. 8.5:1.5
Químicas
Morada
óptica
589 578 546 436
-14.4 -9.33. -11.86 -20.53
(c = 7.5 mg/mL, CH3OH)
Análisis Espectroscópico
IR (v, cm-l) KBr. Fig. 34
3200
2900
1730
1700
1440
1370
OH
CH
C=O (de acetato)
C=O
CH2, CH3
CH3
1230
1150
1080
1030
960
C-O (de ester)
C-O
C-O
C-O
c=o
78
RMN (8, ppm) Acetona d^ Fig. 35.
0.8
0.9
0.92
0.98
1.05
1.08
1.28
s
s
s
s
s
s
s
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
2.05
2.15
3.18
3.28
4.5
5.45
5.75
s
s
d
s
m
s
s
-OCOCH3
-OCOCH3
CH
CH
CHC = C
C = CH
13C RMN (8, ppm) Acetona. Fig. 36.
16
17
18
18.5
19.5
22
23
27
29
29.5
31.5
32
33
34
34.2
38
CH3
CH3
CH3
CH2
CH3
CH3
CH2
CH3
CH2
CH3
CH3
CH3
CH2
CH2
CH2
CH2
36
39
40
41.5
42.0
47
47.2
47.8
56
76
80.5
122
141
168
169
175
C
CH2
CH2
C
C
C
C
CH2
CH
CH
CH
CH
C
C=O
C=O
C=O
79
4000 3000 2000 1500
"00
CM1 1000 900 800
10 11 12 13 14 15
WAVELENGTH (MICRONS)
Fig. 34 Espectro IR 7561 CfRzEM Acet. 263
2948
1741
Fig. 35 Espectro !H RMN 7561 CfRzEM Acet. 263
80
Obtención de 7561 CfRzEMSM154
Al eluir la CCL con hexano:acetona 9.5:0.5 y concentrar las fracciones se obtuvo
un residuo amarillo que se cristalizó con cloruro de metileno y metanol obteniéndose un
polvo blanco de P.f. 154-156°C y un peso de 35 mg.
CCD
Vis. =
UV =
C0CI2 =
Rf
No revela
No revela
Café (morada al enfriarse)
0.50 Bz:Ac.9:l
Pruebas Químicas
L-B = Morada
Rotación óptica
[a ] D = +1.6 (7.5 mg/mL, CHCI3)
Análisis Espectroscópico.
UV.
X max = 240 nm c=0.1 mg/mL, CHCI3
IR (v, cm-1) KBr. Fig. 36
3430
2900
1700
1450
1350
OH
CH
C=O (débil)
CH2, CH3
CH3
1150
1075
1025
960
C-O
C-O
C-O
C=C
81
lH RMN (8, ppm) CDCI3, 60MHz. Fig. 37
0.68 s 1.6 s, ancha
0.89 s 1.7-2.1 m
0.98 s 3.5 señal ancha
1.05 s 5.2 m
1.3 s
13c RMN (8, ppm) Acetona. Fig. 38.
13
14
20
21
22
22.5
24
26.5
28
32.6
33.7
35.5
35.7
38.0
39.0
40
41
42
42.3
45
47
51
51.5
56
57
71
118
131
139
140.5
82
dOOO 3000
-oo
2000 1500 CM' 1000 900 800 700
10 11 12 13 14 15
WAVELENGTH (MICRONS)
Fig. 36. Espectro IR 7561 CfRzEM 154
J
95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 1-5 10 -5
PPM
Fig. 37 Espectro ]H RMN 7561 CfRzEM 154
83
^ ^
CH •
Wwi
CH3
Fig. 38. Espectro 13C RMN 7561 CfRzEMl54
84
Derivado acetilado de 7561 CfRzEMSM154
Se pusieron a acetilar 30 mg del polvo blanco de p.f. 154°C con 1 mL de AC2O y
0.5 mL de piridina en reflujo durante 1 h, después se le agregó agua helada para
cristalizarlo, obteniéndose un polvo blanco al filtrar la mezcla de reacción, la cual se lavó
con HCl 10% y agua para eliminar todas las impurezas/ El compuesto acetilado tuvo un
p.f. 174°C.
CCD
Vis :
UV :
C0CI2 :
Rf :
No revela
No revela
Café (morada
0.40 Bz: Hex
al
8:
enfriarse)
2
Análisis Espectroscopia)
IR (v, cm-1) KBr. Fig. 39
2900
1730
1450
1370
C-H
C=O (de acetato)
CH2CH3
(CH3)2CH
1360
1250
1030
990
(CH3)2CH
C-O (de ester)
C-O
c=c
85
4000 3000 2000 1500 CM1 1000 900 800 700
-H100
7 8 9 10
WAVELENGTH (MICRONS)
14 15
Fig. 39. Espectro FTIR Der. Acetilado 7561 CfRzEM 154
86
4.3. 8532 Maximowiczia sonorae (Wats).
4.3.1. Extracción de la raíz con hexano:eter isopropílicormetanol.
Se pusieron a extraer por maceración 716.7 g de la raíz seca y molida de 8532
Maximowiczia sonorae durante 7 días en frío, con una mezcla (1:1:1) v/v de hexano:eter
isopropüicormetanol. Después de este tiempo, se procedió a filtrar la solución obtenida,
para concentrar hasta sequedad en un rotaevaporador rotatorio tipo "flash", obteniéndose
8.5 g (1.18%) de un residuo café rojizo resinoso, el cual se identificó como
8532MsRzEHEIM.
Una vez obtenido el extracto se procedió a reflujar con metanol durante 1 h.,
después de la cual se dejó enfriar para luego filtrar y concentrar la solución en un
rotaevaporador. De la parte soluble en CH30H se obtuvieron 5.8 g (68.2%) y 2.7 g
(31.7%) de insoluble.
La parte soluble se identificó como 8532MsRzEHEIMSM, se le hizo CCD en dos
sistemas de eluentes que se describen en las tablas 5 y 6.
Tabla 5. Resultados de CCD en Bz:Ac 9:1 (v/v) de 8532 MsRzEHEIMSM
Mancha Vis UV C0CI2
1 N.R. N.R. Amarilla-naranja
2 N.R. N.R. Café-claro
3 N.R. N.R. Amarilla
4 N.R. N.R. Amarilla
5 N.R. N.R. Morada
6 N.R. N.R. Morada
7 N.R.. Celeste Morada
87
Tabla 6. Resultados de CCD en CH2Cl2:CH3OH 9:1 (v/v) de 8532 MsRzEHEIMSM
Mancha Vis UV C0CI2
1
2
3
4
5
6
7
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
Café
Morada
Morada
lila
Morada
Morada
Morada
Una vez obtenida la parte soluble en CH3OH se mezclaron los 5.8 g de extracto con
gel de sílice (60 230-400 mallas Merck) para preparar el extracto que posteriormente se
montó en una columna cromatográfica de 50 x 7 cm, la cual se empacó con gel de sílice de
las mismas características anteriores.
El sistema de eluente utilizado fue: benceno, acetona, metanol y mezclas de ellos.
La elución de la CCL se siguió por CCD, recogiéndose fracciones de 125 y 250
mL, cambiándose la polaridad del eluente según observaciones en las CCD.
En la Fig. 40 se muestra la secuencia de extracción y obtención de los metabolitos
secundarios
88
8352 Maximowiczia sonorae
Raíz
716.7 g
Extracción
Hex/EI/MeOH
7 días, frío
|l MARCO l| 8532MsRzEHEIM
8.5 g
(1.18%)
8532 MsRzEHEIMIM
Reflujo
MeOH, lh
8532 MsRzEHEIMSM
5.8 g.
CCL
Gel de Sílice
Bz, Ac. MeOH
8532MsRzEHEIMSM
P.f. 248°C
polvo blanco
W = 35 mg
I
8532MsRzEHIMSM
P.f. > 350°C
cristales beige
W = 50 mg
8532MsRzEHIMSM
P.f. 215°C
polvo blanco
W = 200 mg
Fig. 40. Secuencia de separación de los metabolitos de Maximowiczia
extracto Hex:EI:MeOH
89
4.3.2. Extracción de la Raíz con Metanol de Maximowiczia sonorae
(Wats)
En un extractor tipo Soxhlet se pusieron a extraer 70-8.2 g (MARCO) de la raíz de
8532 Maximowiczia sonorae durante 7 días, la solución obtenida después de filtrar, se
concentró a sequedad en un rotaevaporador rotatorio tipo "flash", quedando 19.6 g
(2.76%) de extracto metanólico identificado como 8532MsRzEM.
El extracto metanólico (19.6 g) se reflujo con metanol por 1.5 h., se dejó enfriar, se
filtró y el filtrado se llevó a sequedad en un rotaevaporador obteniéndose 17.7 g (90.3%)
de parte soluble en CH3OH y 1.9 g de insoluble.
La parte soluble se identificó como 8532MsRzEMSM; se le hizo CCD para
observar su composición.
Fig. 7. Resultados de la CCD en Bz:Ac 9:1 (v/v) de 8532 MsRzEMSM
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
Fig. 8. Resultados de la CCD en CH2Cl2:MeOH 9:1 (v/v) de 8532 MsRzEMSM
Mancha Vis. U.V. C0CI2
1
2
3
4
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
Café
Morada
Café
Morada
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
Azul
N.R.
N.R.
Amarilla
Café
Morada
Café
Morada
90
El extracto obtenido después del reflujo (17.7 g) se mezcló con igual cantidad de gel
de sflice (60 230-400 mallas, Aldrich) para posteriormente separar sus componentes por
CCL, usando como empaque gel de sílice de las mismas características.
Se usó como sistema de elución: benceno, acetona, metanol y mezclas de ellos. El
progreso de la separación se siguió por CCD, recogiéndose fracciones de 125 y 250 mL,
cambiándose el sistema de eluente al no observar un cambio apreciable en las CCD.
En la Fig. 41 se muestra la secuencia de extracción de 8532MsRzEMSM.
91
MARCO
8532 Maximowiczia sonorae
Raíz
(708.2 g)
Extracción
Soxhlet, MeOH
7 días
MARCO
±
8532MsRzEM
19.6 g
2.76%
8532MsRzEMSM
17.7 g
(90.3 %)
I
Reflujo
MeOH 1.5 h.
8532MsRzEMIM
1.9 g
(9.69 %)
CCL
17.7 g
Gel de Sílice
8532MsRzEMSM
P.f. 215°C
Polvo blanco
W = 300 mg
8532MsRzEMSM
P.f. 248°C
Polvo blanco
W = 50 mg
8532MsRzEMSM
P.f. 154°C
Polvo blanco
W = 30 mg
Fig. 41. Secuencia de extracción y aislamiento de 8532MsRzEM.
92
Obtención de 8532 MsRzEHEIMSM215
De las fracciones eluidas en el sistema de acetona de la CCL se obtuvo un polvo
blanco 300 mg que cristalizó con (CH3)2CO:CH2Cl2, tiene un P.f. de 215°C.
CCD
Vis
UV =
C0CI2 =
No revela
No revela
Morada
Rf 0.29 CH2Cl2:MeOH 8.5 : 1.5
Pruebas Químicas
L.B.
Antrona =
Rotación óptica
[a ] D =
Coloración
Anillo azul
589
café
578
amarillento
546 436 365
-5.33 +1.6 +7.2 +40.93 +115.06
(c = 7.5 mg/mL, CH3OH)
Análisis Espectroscópicos.
UV. Fig. 42.
X max = 225 nm (c = 0.2 mg/mL, CH3OH)
IR Fig.43
(V, cm"1) KBr
3432
2978
2921
1694
1638
1467
OH
C-H
C-H
C=O
C=C
CH3
1439
1269
1127
1070
914
815
CH2, CH3
C-O
C-O
C-O
C=C
C=C
93
lH RMN (8, ppm) Acetona-d6, 500 MHz. Fig. 44
0. 905 s 2.341 m0.998 s 2.497 d
1.009 s 2.696 d
1.137 d 2.757 d
1.143 s 2.814 d
1.159 s 3.239 m
1.196 s 3.31-3.577 m
1.339 s 3.453 m
1.386 s 3.625 m
1.593-1.637 m 3.815 m
1.699-1.707 m 4.083-4.407 m
1.731 d 4.386-4.407 m
1.872 d 5.463 d
1.953 " 5.715-5.727 m
1 3C RMN (8, ppm) DMSO. Fig. 45
c
43
49
49.5
52.0
70
80.5
144
213.5
217
CH
37
45
59
69.5
71.5
72.8
73.0
74.5
76.5
77.2
80.5
84.0
101
101.2
120
CH2
25
26.5
28.0
29.5
38.8
47
50
63.8
CH3
19
20
21.0
21.7
23
26
30.5
30.7
94
Fig. 43. Espectro FTIR 8532 MsRzEMSM 215
Fig. 44. Espectro'H RMN 8532 MsRzEMSM 215
95
9° 80 70 60 ¿o
[ I [ l 1 1
i T '—••• i " - r ¡—•••••! i , . . - . . . x — . - | 1 1 i i p
2 ° 0 150 100 50
Fig. 45. Espectro 13CRMN de 8532 MsRzEMSM 215
96
Obtención del derivado acetilado de 8532 MzRzEMSM 215
Se pesaron 17.3 mg de 8532 MzRzEMSM 215 y se mezclaron con 21.4 mg de
acetato de sodio en 1.5 mL de anhídrido acético, se calentaron en "baño maría" por 3.5 h a
90-95°C. a la mezcla se le agregaron 10 mL de benceno, se lavó con agua y se secó con
sulfato de sodio. Al evaporar el benceno quedó un sólido blanco, con P.f. 147-150°C. y
peso 15 mg.
CCD
VIS
uv
C0CI2
Rf
No revela
No revela
Café
0.52 Bz:Ac 8:2
Datos Espectroscópicos
IRCvcnr^KBr Fig. 46
3483
2968
2937
2877
1752
1747
1697
OH
C-H
C-H
C-H
C=O
C=O
C=O
1664
1451
1433
1245
1229
1040
C=C
CH3
CH3
C-O
C-0
C-O
RMN (5, ppm) CDCI3, 60 MHz. Fig. 47
0.8 s
0.85 s
0.9 s
1.2 s
1.66 s
1.92 d
2.0 s
2.10 d
2.25 d
3.8 m
4.2 m
4.5 d
4.6 d
5.1 m
5.7 m
6.92 d
7.1 d
97
Fig. 46. Espectro FTIR Deriv. Acetilado 8532 MsRzEMSM 215
START OF SWEEP
z^zqp
ENE OF SWEEP
— i'- I . " ' I •
O
ce
o
LU
O.
o
O
Fig. 47. Espectro !H RMN Deriv. Acetilado 8532 MsRzEMSM 215
98
Obtención de 8532MsRzEHEIMSM248
Al eluir la CCL en el sistema Bz:Ac 7:3 y concentrar las fracciones, cristalizó con
acetona un polvo blanco, insoluble en la mayoría de los solventes, al recristalizarlo su P.f.
es de 248-250°C, se obtuvieron 50 mg.
CCD
Vis
UV
C0CI2
= No revela
= No revela
= Morada
Rf = 0.65 CH2Cl2 = MeOH 9:1
Pruebas Químicas
L.B. = Coloración morada-azul-verde
Rotación óptica
[oc]D
Análisis Espectroscópicos.
IR. (Vcnr^KBr Fig. 53.
3450
2930
1650
1450
1360
1370
OH
C-H
C=C
CH2, CH3
C(CH3)2
C(CH3)2
1160
1100
1060
1040
970
c-o
C-0
C-0
C-0
c=c
99
-1100
4000 3000 2000 1500 CM' 1000 900 800
10 11 12 13 14 15
WAVELENGTH MICRONS)
Fig. 48. Espectro FTIR 8532 MsRzEMSM 248
100
Derivado acetilado de: 8532MsRzEHEIMSM248
Se pusieron a reaccionar 10 mg del polvo blanco con 0.5 mL de piridina y 0.8 mL
de anhídrido acético. Se calentó a reflujo 1.5 h., se cristalizó con agua helada y se filtró, se
lavó con agua acidulada y por último con agua para eliminar el resto de compuesto sin
reaccionar, el P.f. es de 144-146°C.
CCD
Vis =
UV =
C0CI2 =
Rf
No revela
No revela
Café
0.84 Bz:Ac 9.5:0.5.
Análisis Espectroscópicos.
IR. Fig. 49.
(V , cm-1) KBr
3489
2921.8
2865
1751.6
1524.6
1467.7
1439.5
OH
C-H (vinflico)
C-H
C=O
C=C
CH2, CH3
CH3
1382.8
1240.9
1180
1042
900.4
701.8
gem-dimetilo
C-O (de acetato)
C-O
C-O
c=c
c=c
lH RMN (8, ppm) CDCI3, 60MHz. Fig. 50.
0.75 s 3.4-3.55 m
0.85 d 4.15 t
1.2 s 4.6 m
1.53 m 5.15 m
2.0 s
101
Fig. 49. Espectro FTIR Acetato de 8532 MsRzEMSM 248
2Onn™,
lOpum
!,,,,,m
2ppm
1ppm
O.5ppm
STAR! OF SWttF
6 0 0
3 0 0
120
J. .
60
i
30
1000
5 0 0
250
10O
50
25
200
1¿0
ENDfOF SWE6P
J
ce
o
cr
ce
Fig. 50. Espectro »H RMN Acetato de 8532 MsRzEMSM 248
10 2
Obtención de 8532 MsRzEM 154
De la CCL eluída con CH2CI2 se obtuvo una fracción amarilla que cristalizó con
hexano, dando un polvo blanco, de P.f. 154-156°C y peso de 30 mg.
CCD
Vis = No revela
UV = No revela
C0CI2 = Morada
R.f. =
Pruebas Químicas
L.B. = Coloración morada
Antrona = Negativa (no se forma anillo verde)
Rotación óptica.
[ a ] D = +6.6° (c = 7.5 mg/mL, CHCI3)
Análisis Espectroscópico.
IR. Fig.
(v, cnr1)
3436
2955
2870
1640
1631
1470
1447
OH
CH
CH
C=C
C=C
CH2, CH3
CH2
1382
1371
1041
CH(CH3)2
CH(CH3)2
C-O
103
Fig. 51. Espectro FTIR 8532 MsRzEHEIMSM 154
104
Derivado acetilado de 8532 MsRzEMSM 154
Se pusieron a reaccionar 20 mg de 8532 MsRzEMSM 154 con 1 mL de anhídrido
acético y 0.4 mL de piridina, calentando a reflujo durante 30 min., se cristalizó en agua
helada y la recristalización se hizo con cloruro de metileno, obteniéndose un polvo blanco
de P.f. 144-146°C.
CCD
VIS
uv
C0C12
R.f.
=
=
=
No revela
No revela
Amarillo ocre
0.65 Bz:Ac
(al enfriarse
8:2
cambia a morado)
Análisis espectroscopia)
IR. Fig. 52
(v, cm-1) KBr
2951
2869
1734
1640
C-H
C-H
C=O
C=C
1446
1382
1249
1041
CH2, CH3
CH(CH3)2
c-o
C-0
*H RMN. Fig. 53
(8, ppm), 60 MHz, CDCI3
5.1
4.6
2.0
1.5
1.2
1.0
0.9
0.8
m
m (señal ancha)
s
m
m
s
s
s
C=C-H
C-H
O-COCH3
CH2, CH
CH2
CH3
CH3
CH3
105
Fig. 52. Espectro FTIR Deriv. Acetilado 8532 MsRzEMSM 154
_ j
Sv.if- > r f-Nlfi OF SWEEf»
O
ppm (/,] 10
Fig. 53. Espectro 'H RMN Deriv. Acetilado 8532 MsRzEMSM 154
106
Obtención de 8532 MsRzEMSM > 350
Al concentrar las fracciones de la CCL eluidas con acetona: metanol 1:1 cristalizó
un polvo amarillo que por recristalización con acetona se obtuvieron unos cristales amarillo
pálido que no funden a menos de 350°C, se obtuvieron 150 mg.
Pruebas químicas
Antrona : Formación de anillo azul
Ignición : Arde y deja cenizas
Análisis Espectroscopia).
IR (v, cm-l) KBr Fig. 54.
3450 OH
1650 C=C (ancha)
1370 CH3
10540-1150 C-O (ancha)
107
4000 3000 ?000
' o o r '•'''"•'•:-'--' • —•,-••
1500 CM' 1000 900 800 700
7 8 9 10 11 12 13 14 15
WAVELENGTH (M1CRONS)
Fig. 54. Espectro IR 8532 MsRzEMSM > 350
108
4.4. 8482 Stillingia sanguinolenta (Muell. Arg.)
4.4.1. Extracción con hexano-eter isopropílico-metanol de parte
aérea.
Se pusieron a extraer por maceración 1940 g de 8482 Stillingia sanguinolenta
(aérea), previamente picada; con hexano-eter isopropílico-metanol en iguales proporciones,
por siete días a temperatura ambiente . La solución extraída se filtró y se evaporó a
sequedad en un rotaevaporador rotatorio tipo "flash", obteniéndose 85.4 g (4.27%) de un
material resinoso de color verde, el cual se identificó como 8482 S.s.EHEIMae.
Tabla 9. Resultados de CCD en el sistema Bz:Ac 9:1 de 8482 S.s.EHEIMae.
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
5
Tabla 10. Resultados de CCD en el sistema CH2CI2-CH3OH 9:1 de 8482 SsEHEIMae.
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
5
6
café
verde
am.
verde
am.
N.R.
roja
negra
roja
am.
café
verde
am.
verde
café
café
am.
am.
verde
am.
verde
am.
am.
negra
roja
negra
roja
café
mor.
am.
verde
am.
verde
109
El extracto obtenido (85.4 g) se reflujo con metanol durante 2 h., la solución se
dejó enfriar, se filtró y el filtrado se llevó a sequedad en un rotaevaporador, obteniéndose
82.9 g de extracto soluble en metanol (8482SsEHEIMSM), del cual se tomaron 20 g y se
mezclaron con 20 g de gel de sílice 60 230-400 mallas (Merck).
Ya preparado el extracto se montó en una columna de vidrio de 50 x 7 cm,
previamente empacada con 150 g de gel de sílice de las mismas características.
Los eluentes que se utilizaron fueron: benceno, acetona, metanol y mezclas de ellos.
El progreso de la CCL se siguió por CCD, recogiéndose fracciones de 250 mL y
cambiándose la polaridad del eluente al no apreciar cambio considerable en CCD.
En la Fig. 58 se muestra la marcha de separación de los compuestos.
110
Stillingia sanguinolenta
(8482)
Aérea 1740 g
Extracción
Hex/EI/CHaOH
7 días, frío
MARCO 8482SsEHEIM(ae)
85.8 g
(4.27%)
Reflujo
CH3OH,2h
8482SsEHEIMIM
2.9 g
1
8482SsEHEIMSM
82.9 g
(96.6%)
CCL
20 g
Gel de Sílice
Bz,Ac,CH3OH
8482SsEHEIMSM
P.f. 244-246°C
polvo amarillo
W = 25.5 mg
Dihidromiricetina
8482SsEHEIMSM
P.f. 292°
Agujas blancas
W = 80 mg
Ac. 3-acetil-
aleuritólico
Fig. 58. Secuencia de Extracción de parte aérea de 8482 S.s. EHEIMSM
1114.4.2. Extracción con metanol de la parte aérea. Stillingia
sanguinolenta (Muell. Arg.)
En un extractor tipo Soxhlet se puso a extraer, con metanol, en caliente durante 7
días la parte aérea de 8482 Stillingia sanguinolenta que quedó de la extracción con hex:eter
isopropílico:metanol (Marco). La solución obtenida se evaporó a sequedad en un
rotaevaporador rotatorio tipo "flash" obteniéndose 145 g (7.47%) de un material verde
resinoso que se identificó como 8482SsEMae.
A este extracto se le hizo una CCD en dos sistemas Bz:Ac 9:1 y CH2Cl2:MeOH 9:1
(v/v). (Tablas 11 y 12).
Tabla 11. Resultados de CCD en el sistema Bz:Ac 9:1 (v/v) de 8482 SsEMae
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
5
6
7
Tabla 12. Resultados de CCD en sistema CH2Cl2:MeOH 9:1 (v/v) de 8482 SsEMae
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
5
6
7
Verde
N.R.
N.R.
N.R.
Am.
Am
Café-claro ,
Roja
N.R.
Celeste
N.R.
N.R.
N.R.
Negra
Am.-Naranja
Lila
Morada
Morada
Café
Morado
Café
Am.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
Am.
Café
N.R.
N.R.
N.R.
Celeste
N.R.
N.R.
N.R.
Café
Morada
Amarilla
Morada
Café
Café
Morada
112
Se pusieron a reflujar con metanol 145 g del extracto metanólico durante 1.5 h.,
después se dejó enfriar, se filtró la solución quedando 140 g de parte soluble y 5 g de
insoluble.
Se tomaron 30 g de la parte soluble en metanol y se mezclaron con igual cantidad de
gel de sílice (60 230 400 mallas (Aldrich)); una vez preparado el extracto se montó una
columna cromatográfica de 50 x 7 cm., previamente empacada con gel de sílice de las
mismas características.
Para eluirla se usaron: benceno, acetona, metanol y mezclas de ellos.
El progreso de la CCL se siguió por CCD, recogiéndose fracciones de 125 y 250
mL. La polaridad (sistema de eluente) se cambió cuando había una diferencia en CCD
En la Fig. 59 se muestra la secuencia de extracción y obtención de metabolitos
secundarios
113
MARCO
después de macerar
Stillingia sanguinolenta
8482 (Aerea)
Extracción
Soxhlet
CHaOH, 7 días
MARCO
8482 SsEMIMae
5g
Reflujo
CH3OH 1.5 h
8482 SsEMSMae
140 g
J
8482SsEMSMae
P.f. 292°C
Cristales Blancos
W = 100 mg
Ac. 3-acetil aleuritólico
8482SsEMSMae
P.f. 246°C
Polvo beige
W = 100 mg
8482SsEMSMae
P.f. 314°C
Polvo amarillo-
pálido
W = 75 mg
Fig. 59. Secuencia de extracción y obtención de metabolitos
secundarios de 8482 SsEMae
114
4.4.3. Extracción con Hexanoreter isopropílico:metanol de la Raíz
de Stillingia sanguinolenta (Muell. Arg.).
Se pusieron a extraer por maceración 900 g. de la raíz de 8482 Stillingia
sanguinolenta, previamente picada, con una mezcla de hexano:eter isoprmetanol (1:1:1
v/v), durante siete días a temperatura ambiente. La solución extraída se filtró y el marco se
preparó para la siguiente extracción, el filtrado se concentró a sequedad en un
rotaevaporador rotatorio tipo "flash", obteniéndose 27.3 g (3.03%) de un material
resinoso de color rojizo, el cual se identificó como 8482SsRzEHEIM.
Después de obtenido el extracto se procedió a reflujar con metanol durante 1.5 h.,
se dejó enfriar y se filtró, la parte soluble se concentró a sequedad en un rotaevaporador, la
cual pesó 23 g. (84.24%), a este producto se identificó como 8482SsRzEHEIMSM.
Se le hizo CCD en dos sistemas de eluente para observar su composición. (Tablas
13 y 14)
Tabla 13. Resultados de CCD en Bz:Ac 9:1 (v/v) de 8482SsRzEHEIMSM
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
N.R.
N.R.
Amarilla
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
N.R.
N.R.
Amarilla
N.R.
N.R.
Azul
Azul
N.R.
N.R.
Café
Café-am.
Morada
Amarilla
Morada
Morada
Lila
Lila
Morada
Am-Café
Café
115
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
Amarilla
Amarilla
Amarilla
N.R.
Azul
N.R.
N.R.
Azul
N.R.
N.R.
Negra
Café
Morada
Amarilla
Café
lila
Café
Morada
Morada
Café
Tabla 14. Resultados de CCD en CHCl2:MeOH 9:1 (v/v) de 8482SsEHEIMSM.
Mancha Vis. UV C0CI2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Los 23 g obtenidos del reflujo con CH30H se mezclaron con gel de silice para la
preparación del extracto, que se montó en una columna cromatográfica de 50 X 7 cm, que
fue previamente empacada con gel de sílice (60 230-400 mallas, Aldrich).
La elución de la CCL fue hecha con benceno, acetona, metanol y mezclas de ellos.
El progreso de la CCL se siguió por CCD y se colectaron fracciones de 125 y 250
mL.
En la Fig. 60 se muestra la secuencia de extracción y separación de
8482SsRzEHEIMSM.
116
Stillingia sanguinolenta
8482 (Raíz)
900 g
MARCO 1|
Extracción
Hex/EI/MeOH
7 días, T. amb.
8482SsRzEHEIM
27.3 g (3.03%)
Reflujo
MeOH 1.5 h
Insoluble
8482 SsRzEHEIM
8482SsRzEHEIM
Sol. MeOH
23.0 g
(84.24%)
I
CCL
Gel de Sílice
8482SsRzEHEIMSM
P.f. 184°C
Polvo beige
W = 18.4mg
Abbeokutona
8482SsRzEHEIMSM
P.f. 292°C
Cristales blancos
W = 150 mg
Ac. acetil aleuritólico
8482SsRzEHEIMSM
P.f. 314°C
Polvo Am-verde
W = 150 mg
Fig. 60. Secuencia de extracción y separación de 8482SsRzEHEIM
117
4.4.4. Extracción con metanol de la Raíz de Stillingia sanguinolenta
(Muell. Arg.).
Se puso a extraer en Soxhlet de 8482 Stillingia sanguinolenta con CH3OH durante
siete días, el material que quedó después de la extracción con hexanoreter
isopropílico:metanol (marco), la solución obtenida se filtró y se concentró hasta
evaporación del metanol obteniéndose 45 g (5.17%) de extracto identificado como
8482SsRzEM.
Posteriormente se sometió a un reflujo con CH3OH durante 1 h., se dejó enfriar y
se filtró, el filtrado se concentró en un rotaevaporador rotatorio tipo "flash" quedando 43 g.
A dicho extracto se le hizo CCD para observar su composición, los resultados se muestran
en las tablas 15 y 16.
Tabla 15. Resultados de CCD en Bz:Ac 9:1 (v/v) de 8482 SsRz
Mancha Vis. ÜV C0CI2
í
2
3
4
5
6
Tabla 16. Resultados de CCD en CH2Cl2:MeOH 9:1 (v/v) DE 8482 SsRzEMSM
Mancha Vis! ÜV C0CI2
_
2
3
4
5
6
7
8
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
N.R.
Amarilla
N.R.
N.R.
Azul
Azul
N.R.
Café
Café
Morada
Morada
Morada
Morada
Café
N.R.
Amarilla
N.R.
N.R.
Amarilla
N.R.
Amarilla
Amarilla
N.R.
Azul
N.R.
N.R.
Azul
N.R.
Azul
Café
Café
Amarilla
Café
Morada
Morada
Morada
Morada
Café
118
Se pusieron a reflujar con metanol 145 g del extracto metanólico durante 1.5 h.,
después se dejó enfriar, se filtró la solución quedando 140 g de parte soluble y 5 g de
insoluble.
Se tomaron 30 g de la parte soluble en metanol y se mezclaron con igual cantidad de
gel de sílice (60 230 400 mallas (Aldrich)); una vez preparado el extracto se montó una
columna cromatográfica de 50 x 7 cm., previamente empacada con gel de sílice de las
mismas características.
Para eluirla se usaron: benceno, acetona, metanol y mezclas de ellos.
El progreso de la CCL se siguió por CCD, recogiéndose fracciones de 125 a 250
mL. La polaridad (sistema de eluente) se cambió cuando había una diferencia en CCD.
En la Fig. 61. se muestra la secuencia de extracción y obtención de metabolitos
secundarios.
119
Stillingia sanguinolenta
8482 (Raíz)
870 g
MARCO
Extracción
Soxhlet
MeOH, 7 días,
8482SsRzEM
45 g.
(5.17 %)
Reflujo
MeOH 1 h.
8482 SsRzEM
Ins. MeOH
8482 SsRzEM
Sol. MeOH
43 g.
(95.5%)
CCL
Gel de Sílice
8482SsRzEMSM
P.f. 314°C
Polvo Am-Verde
W = 50 mg
8482SsRzEMSM
P.f. 246°C
Polvo beige
W = 150 mg
8482SsRzEMSM
P.f. 292°C
Cristales blancos
W = 200 mg
Ac. 3-acetil aleuritólico
Fig. 61. Secuencia de extracción de separación de 8482SsRzEM
120
4.4.5. Extracción con Hexano de la Raíz de Stillingia sanguinolenta
(Muell. Arg.).
Se pusieron a extraer con hexano en Soxhlet 800 g de la raíz de 8482
Stillingia sanguinolenta durante siete días, después se filtró y la solución se concentró
hasta sequedad en un rotaevaporador rotatorio tipo "flash", obteniéndose 8 g (1%) de
extracto color rojizo.
Posteriormente se hizo un reflujo con metanol por 30 min., separando por filtración
lo soluble e insoluble., se obtuvieron 5 g de extracto soluble (40%) y se le identificó como
8482SsRzEHSM.
Se le hizo CCD en dos sistemas, para ver su composición, los resultados se
muestran en las tablas17 y 18.
Tabla 17. Resultados de CCD en Bz:Ac 9:1 (v/v/) de 8482 SsRzEHSM
Mancha Vis. U.V. C0CI2
1
2
3
4
Tabla 18. Resultados de CCD en CH2Cl2:MeOH 9:1 (v/v) de 8482 SsRzEHSM
Mancha Vis. • U.V. C0CI2
1
2
3
4
5
Amarilla
Amarilla
N.R.
Amarilla
Amarilla
Amarilla
Azul
Amarilla
Morada
Morada
Morada
Café
N.R.
Amarilla
N.R.
Amarilla
Amarilla
N.R.
Amarilla
Azul
Amarilla
Negra
Morada
Amarilla
Morada
Café
Café
121
Los 5 g obtenidos después del reflujo con metanol se mezclaron con igual cantidad
de gel de sílice (60 230-400 mallas, Aldrich) para posteriormente montarlos en una
columna de vidrio de 55 x 3 cm previamente empacada con gel de sílice de las mismas
características.
El sistema de elución se hizo con hexano, acetona, metanol y mezclas de ellos,
recogiéndose fracciones de 125 mL.
Se utilizó CCD para el seguimiento de la CCL.
En la Fig. 62 se muestra la secuencia de extracción de 8482 SsRzEHSM.
122
StilUngia sanguinolenta
8482 (Raíz)
800 g
MARCO
Extracción
Soxhlet- Hexano
7 días
MARCO 1|
Reflujo
MeOH 1 h.
8482SsRzEMSM
5g
(40%)
8482SsRzEHSM
P.f. 176°C
Cristales incoloros
W = 40 mg
Metil senociato
de tonantzitlolona
8482SsRzEHSM
P. f. = 160-162°C
W = 7mg
8482SsRzEHSM
P.f. 234°C
Polvo blanco
W = 18.5 mg
Ac. 3-ceto
kauran -17- oico
Fig. 62. Secuencia de extracción y separación de 8482SsRzEH
123
Obtención de 8482 SsEHEIMSM292 (Acido acetil aleuritólico)
Al eluír la CCL con el sistema Bz:Ac 9.8:0.2 y concentrar las fracciones, cristalizó
un compuesto en forma de agujas blancas, que por recristalización con metanol se
obtuvieron 80 mg del compuesto, el cual tiene un P.f. 292-293°C.
CCD
VIS =
uv =
C0CI2 =
Rf
N.R.
N.R.
Morada
0.75 Bz:Ac9:l
Pruebas Químicas
L.B. = Morada
NaHCO3
Rotación Óptica
[OC]23° 589 5J8 546 436 3J5
+6.6 +25.3 +28.53 +49.6 +49.2
c = 7.5 mg/mL, CHC13
Análisis Espectroscopia)
UV Fig. 63
Amax =206nm (Log e = 3.65) (c=2 mg/mL, CH30H)
IR (V, cm-1) KBr Fig. 64.
2950 C-H 1450 CH2, CH3 1360 gem-dimetilo
1700 C=O 1260 C-O (ester)
1675 C=O 1025 C-O (alcohol)
124
IHRMN (5, ppm) CDC13, 400 MHz. Fig. 65.
0.65
0.85
0.92
0.95
0.98
1.02
1.15
1.2
d
s
s
s
s
s
s
d
(CH3)
(CH3)
(CH3)
(CH3)
(CH3)
(CH3)
(CH3)
(CH2)
1.35
1.6
1.766
. 1.92
2.1
2.52
4.65
5.75
m
m
s
dd
d
Sext
dd
dd
(CH2)
(CH2)
(OAc)
(CH)
(CH)
(CH2)
(CH)
(CH=C)
13CRMN (8, ppm) CDC13, lOOMHz. Fig. 67.
183.982 C=0 ácido 37.914 C
170.989 C=O acetato 37.656 C
160.545 C=C 37.368 CH2
116.815 C=C 37.292 C
80.855 C 35.303 CH2
55.567 CH 33.649 CH2
51.469 C 33.300 CH2
49.040 CH 31.842 CH2
41.375 CH 31.296 CH2
40.722 CH2 30.674 CH2
39.022 C 29.687 CH2
Masas. Fig. 68.
M+ 498
Pico base 439 (M-77)
(Masa) (Intensidad)
M % M %
481 30 249 6
439 100 234 11
393 12 191 18
29.292
28.649
27.941
26.181
23.448
22.449
21.293
18.712
17.301
16.587
15.631
C
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
125
202 204 2 06
Fig, 63. Espectro UV 8482 SsEHEIMSMae 292
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i i ¡9ÍJ
1730 1698
3(00
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Fig. 64. Espectro FTIR 8482 SsEHEIMSMae 292
126
Fig. 65. Espectro 'HRMN 8482 SsEHEIMSM 292
l
Fig. 67. Espectro 13CRMN 8482 SsEHEIMSMae 292
127
Fig. 66. Espectro COSY 8482SsEHEIMSMae 292
Mus Í9100M 17: ExSE HE:
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'. 511
Fig. 68 Espectro de Masas 8482 SsEHEIMSMae 292
129
Hidrólisis de 8482 SsRzEHEIMSM 292
Se hidrolizaron 35 mg de 8482 SsRz EICISM 292 con 3 mL de NaOH 10%, la
mezcla se mantuvo en agitación por 40 min a temperatura ambiente. Terminada la reacción
se hizo una extracción con CH2CI2 y se lavó con agua. Después de cristalizar se
obtuvieron 29 mg de cristales incoloros de P.f. 276°C.
CCD
VIS =
uv =
C0C12 =
R.f. =
No revela
No revela
Color laca carmin
0.48 Bz^c 9:1
Análisis Espectroscopia)
IR. Fig. 69
(v.cnr1) KBr
3386
2934
2866
1688
1465
OH
C-H
C-H
C=O
CH2, CH3
•
1388
1297
1215
1032
CH(CH3)2
C-O
c-o
C-O
130
Fig. 69. Espectro FTIR Ptdo. Hidrólisis 8482 SsRzEHEIMSM 292
131
Obtención de 8482SsEHEIMSM244 (Dihidromiricetina)
Al evaporar las fracciones eluidas con el sistema Bz;Ac 9:1 se precipitó un polvo
amarillo-verdoso, que se lavó con CH2CI2 y después se recristalizó con metanol y cloruro
de metileno quedando un polvo amarillo con P.f. 244-246°C, y un peso de 25.5 mg.
CCD
VIS =
UV =
C0CI2 =
Rf
Amarilla
Negra
Amarilla
0.35 Bz:Ac 8:2
Rotación Óptica
[a]D = +11.5° (c = 0.61 M, CH3OH)
Pruebas Químicas
Shinoda = Coloración roja
FeCl3/EtOH = Coloración verde oscuro (casi negra)
Análisis Espectroscópicos
IR (V, cm-1) KBr. Fig. 70.
3350
1670
1450
1300
OH
C=O y
CH2
CH2
,P insat.
1175
1075
960
C-0
C-O
C=C
132
!HRMN (8, ppm) Acetona-d6, 90MHz) Fig. 71.
4.54
4.95
5.94
5.99
6.62
1H
1H
1H
1H
2H
d
d
d
d
s
J=11.4Hz
J=11.4Hz
J = 2.1Hz
J = 2.1Hz
H-C-O
H-C-O
Ar-H
Ar-H
Ar-H
!3CRMN (8, ppm) Acetona-d6 MHz) Fig. 72.
73.166
84.678
96.055
97.003
101.50
108.055
Í29.183
C-O
c-o
c=c
c=c
c=c
c=c
c=c
C3
C2
C8
C6
Cío
CT,6'
Cr
134.113
146.28
167.836
164.179
164.803
197.93
C=C
C=C
C=C
C=C
C=C
C=O
C41
C3',5
C7
C9
C5
C4
Masas (70 eV) (IE) Fig. 73.
M + 320 (53%)
Pico base 153(100%) (M-167)
Masa
305
291
166
153
138
124
% (Intensidad)
8
45
20
100
42
10
96
81
69
64
55
44
5
4
27
8
12
26
133
4000 3000
ioo ["•-•-• ~
2000 1500 CM' 1000 900 800
7 8 9 10 11 12 13 14 15
WAVELENGTH (MICRONS)
Fig. 70 Espectro FTIR 8482 SsEHEIMSMae 244
134
6.623 S
,1
3
7
ID
O
M
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Espectro 'HRMN 3482 SsEHEIMSMae 244
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Fig. 72. Espectro 13CRMN 8482 SsEHEIMSMae 244
135
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100.0-
50,0-
153
133
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245 163
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3164,
Fig. 73. Espectro de Masas 8482 SsEHEIMSMae 244
136
Obtención de 8482 S.s.RzEHEIMSM184 (3-oxo-13p-kauran-16a-17
diol).
Al eluir la CCL con el sistema Bz:Ac 9.5:0.5 y concentrar las fracciones se obtuvo
un residuo amarillo-café el cual se trató con CH2CI2 y cristalizó con hexano obteniendo
unos pequeños cristales beige de p.f. 180-184°C, y peso de 18.4 mg.
VIS =
uv =
C0C12 =
Rf
N.R.
N.R.
café
0.23 Bz:Ac 8.5:1.5
Pruebas Químicas
L.B. = coloración café-amarillento
Rotación Óptica
[OC]D = 5_g9_ 528. 546 436 365
-77.8 -81.2 -92.8 -164.4 -218.0
(c = 5 mg/mL, CHC13)
Análisis Espectroscópicos
UV Fig. 74
X máx = nm (c = 0.1 mg/mL, CEbOH)
IR (v, cm-1) KBr. Fig. 75.
3300 OH 1370 C (CH3)2
2900 C-H 1050 C-O
1770 C=O 1025 C-O
1450 CH2, CH3
JHRMN (8,ppm) CDC13, 400Mhz. Fig. 76.
3.8 d 1H 1.65 d 1H
3.65 d 1H 1.6 d 1H
1-95 d 1H 1.1 s 6H (H-18, H-19)
1.7 s 1H 1.15 s 3H(H-20)
137
!3CNMR (8 ppm) CDCb, 100 MHz. Fig. 77.
215
81.713
66.328
55.439
54.437
52.919
47.177
Masas.
C=O C3
C Cl6
CH2 Cl7
CH C9
CH2 C5
CH2 Ci5
C C4
Fig. 78.
M+ 320
Pico base 289
M/E
305
290
289
271
247
137
121
Intensidad (%)
10.0
18.65
10.0
14.77
5.55
4.80
6.62
45.363
44.470
40.975
39.269
38.912
36.9
33.987
CH
C
CH2
CH2
C
CH2
CH2
107
95
81
69
55
43
Cl3
C8
C7
Cl
Cío
Cl4
C2
27.268
26.1
21.588
20.929
18.844
17.733
9.51
16.04