ELISA Enzime Linked Immunosorbent Assay - Melissa

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E.L.I.S.A (Enzime Linked Immunosorbent Assay)
ISSN 2469-2123
Fundamento
Permite identificar la presencia de
anticuerpos (Atc) o antigenos (Atg)
mediante la unión específica con sus Atg o
Atc respectivamente, unidos éstos a un
soporte inerte. Para evidenciar la reacción
se necesita un anticuerpo conjugado
marcado con una enzima que transforma un
sustrato incoloro en un producto coloreado.
 ELISA DIRECTO
 ELISA INDIRECTO
 ELISA SANDWICH o DE CAPTURA
Clasificación
Materiales
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
5) Incubación por 1 h a 37°C.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
5) Incubación por 1 h a 37°C.
6) Lavado y Secado.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
5) Incubación por 1 h a 37°C.
6) Lavado y Secado.
7) Agregado las muestras de suero por
duplicado o triplicado.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
5) Incubación por 1 h a 37°C.
6) Lavado y Secado.
7) Agregado las muestras de suero por
duplicado o triplicado.
8) Incubación por 1 h a 37°C.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
5) Incubación por 1 h a 37°C.
6) Lavado y Secado.
7) Agregado las muestras de suero por
duplicado o triplicado.
8) Incubación por 1 h a 37°C.
9) Lavado.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
5) Incubación por 1 h a 37°C.
6) Lavado y Secado.
7) Agregado las muestras de suero por
duplicado o triplicado.
8) Incubación por 1 h a 37°C.
9) Lavado.
10) Agregado el anticuerpo anti-especie
conjugado con enzima.
Procedimiento de ELISA indirecto
1) Adsorción del Ag a la placa de 96 hoyos.
2) Incubación por 1 h a 37°C o 16 hs a 4°C.
3) Remoción del exceso de Ag lavando con
PBS-Tween. (LAVADO Y SECADO).
4) Agregado la solución bloqueante (leche
10% en PBS-tween).
5) Incubación por 1 h a 37°C.
6) Lavado y Secado.
7) Agregado las muestras de suero por
duplicado o triplicado.
8) Incubación por 1 h a 37°C.
9) Lavado.
10) Agregado el anticuerpo anti-especie
conjugado con enzima.
11) Incubación por 1 h a 37°C.
Procedimiento de ELISA indirecto
12) Lavado.
Procedimiento de ELISA indirecto
12) Lavado.
13) Agregado el sustrato de la enzima
Procedimiento de ELISA indirecto
12) Lavado.
13) Agregado el sustrato de la enzima
14) Incubación según indicaciones del
sustrato utilizado.
Procedimiento de ELISA indirecto
12) Lavado.
13) Agregado el sustrato de la enzima
14) Incubación según indicaciones del
sustrato utilizado.
15) Agregado de la solución de
frenado (depende de la enzima
utilizada). Modifican el pH y
detienen la reacción.
Procedimiento de ELISA indirecto
12) Lavado.
13) Agregado el sustrato de la enzima
14) Incubación según indicaciones del
sustrato utilizado.
15) Agregado de la solución de
frenado (depende de la enzima
utilizada). Modifican el pH y
detienen la reacción.
16) Lectura a simple vista o
cuantificada por
Espectrofotometría.
Resultado de la espectrofotometría
Y microscópicamente….
Antígeno
ELISA INDIRECTO
Antígeno
Bloqueante
ELISA INDIRECTO
Antígeno
Bloqueante
Suero (muestra)
ELISA INDIRECTO
Antígeno
Bloqueante
Suero (muestra)
Anticuerpo anti especie 
(conjugado)
Enzima
ELISA INDIRECTO
Antígeno
Bloqueante
Suero (muestra)
Anticuerpo anti especie 
(conjugado)
Enzima
Sustrato
ELISA INDIRECTO
Antígeno
Bloqueante
Suero (muestra)
Anticuerpo anti especie 
(conjugado)
Enzima
Sustrato
ELISA INDIRECTO
Antígeno
Bloqueante
Suero (muestra)
Anticuerpo anti especie
(conjugado)
Enzima
Sustrato
Solución de frenado
Otras opciones
Muestra
ELISA Directo
Posibles muestras
ELISA Sandwich