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Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 1 Imagen tomada de http://www.diarioimagen.net/?p=30550 Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida Hugo Rico Bautista De sensores a biosensores En la vida cotidiana tenemos mucha necesidad de detectar, medir y contar. Cálculos comunes como contar manzanas o peces requieren sólo de saber contar, pero otros como contar las calorías de los alimentos o medir la temperatura corporal, requieren de más información o inclusive de un instrumento de medición. Cuando se trata de saber si le aumentó la bilirrubina a Juan Luis Guerra o si le subió el colesterol a Fito Olivares, es necesario llevar a cabo ciertos análisis, que en algunos casos requieren de especialistas y podrían ser costosos, para saber en qué cantidad se encuentran estas moléculas en sus organismos. Para conocer ciertos datos de algo que se desea medir se han desarrollado instrumentos para obtener información con buena precisión a un bajo costo y en el menor tiempo posible. Precisamente, un sensor tiene esta función de detectar en forma precisa cantidades muy pequeñas de algo que se desea medir. Existen sensores para medir la temperatura, el pH, contar los iones de http://www.diarioimagen.net/?p=30550 Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 2 calcio, de sodio, de potasio y magnesio, y se puede monitorear entre otras cosas la concentración de oxígeno disuelto en agua. Figura 1. Ejemplo de un sensor de oxígeno disuelto en agua, este instrumento puede medir el oxígeno de un lago, de una pecera, etc. Tomada de https://sontek.com/productsdetail.php?5000-5100-30 Cuando medimos algo lo hacemos por comparación, por ejemplo, las mamás preocupadas que colocan su mano en la frente de su hijo para saber si tiene la fiebre, comparan su temperatura con la de su hijo. Este mismo principio de comparación se utiliza en los equipos especializados – claro que sin el amor materno– por ejemplo con los sensores se pueden medir cambios de color o cambios en la corriente eléctrica, un cambio de voltaje, entre otros. Existe una gran variedad de sensores para medir distintas propiedades de los objetos: físicas, biológicas, químicas, etc. A un sensor que detecte por medio de una entidad biológica, como una célula, una enzima, una proteína, un anticuerpo o un tejido, se le llama biosensor. Generalmente esta parte del biosensor se le conoce como elemento de reconocimiento y es altamente sensible a lo que se quiere analizar usualmente llamado analito, así lo puede detectar aun cuando se tengan https://sontek.com/productsdetail.php?5000-5100-30 Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 3 mezclas de sustancias sin tener que hacer una purificación previa. Esa parte de reconocimiento no debe detectar muchos más compuestos que el que se desea medir. El biosensor debe tener también un transductor que sirva para convertir la señal obtenida y pasarla a datos cuantificables comprensibles para el usuario. Figura 2. Esquema simplificado del funcionamiento de un biosensor. Imagen tomada de Materiales Avanzados, 2009, 13, 27-32. De los coperos a la tecnología Varios ejemplos a lo largo de la historia podrían considerarse como antecedentes de los biosensores. En la edad media utilizaban personas a las que llamaban coperos para probar los alimentos de la nobleza. Si al cabo de un tiempo no se detectaba daño alguno en el copero, la comida se podía consumir con la certeza de que no estaba envenenada. Los animales se utilizaron con el mismo fin; cuando alguien moría por alguna causa extraña y súbita se daba a los perros el mismo alimento para descartar o confirmar un envenenamiento. Digamos que muchos seres vivos tuvieron el oficio de biosensor. Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 4 Figura 3. Recientemente en la serie de televisión Los Borgia, el copero del Papa Alejandro VI muere súbitamente de un envenenamiento; éste es el principio básico con el que funcionan los biosensores: una entidad biológica sufre un cambio ante un analito. Foto tomada de http://www.seriesyonkis.com/serie/the-borgias Otro biosensor vivo usado más recientemente son los canarios introducidos en las minas para salvaguardar la vida de los mineros. Estas aves son muy sensibles al aumento de gases tóxicos y letales que son inoloros, como el monóxido de carbono (CO) o metano (CH4). La muerte de los canarios indicaba la presencia de alguno de estos gases y era una alerta para los mineros. “Para el azúcar, para el alcohol, lleve su detector” Hay dos biosensores que han cobrado relevancia en la vida cotidiana actual porque uno permite medir la glucosa en pacientes con diabetes mellitus y el segundo se usa para localizar conductores con niveles de alcohol por arriba de los permitidos, el glucómetro y el alcoholímetro. El primero es importante debido al incremento considerable de personas con esta enfermedad, por lo que se destina una cantidad importante de recursos económicos en su prevención y en el desarrollo de nuevas tecnologías para detectarla y controlarla (ver “Vanadio: una esperanza para http://www.seriesyonkis.com/serie/the-borgias Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 5 los diabéticos” en Cienciorama). El segundo es un método rápido y efectivo para saber si una persona que ha consumido alcohol es capaz de manejar un automóvil. Según estadísticas de la Secretaría de Seguridad Pública del Distrito Federal, el alcoholímetro ha ayudado a reducir en un 30% los accidentes fatales asociados al consumo de alcohol y en un 70% las muertes por conducir en estado de ebriedad. El funcionamiento del glucómetro y del alcoholímetro es muy similar. Para medir la cantidad de azúcar en la sangre se coloca una gotita de sangre del paciente en una tira reactiva que contiene la enzima glucosa oxidasa (GO). En unos cuantos segundos se obtiene un número que indica la cantidad de glucosa que hay en la sangre. En el alcoholímetro la enzima que se utiliza es la alcohol deshidrogenasa (ADH). Ambas enzimas son el elemento de biorreconocimiento pues reaccionan químicamente con la glucosa y el etanol. La reacción de las enzimas GO y ADH con sus analitos es de óxido reducción, y produce un intercambio de electrones que se cuantifica en un detector o transductor. Estos equipos están calibrados para relacionar la cantidad de electrones detectados con la concentración del analito. Supongamos que hacemos la prueba del alcoholímetro, lo primero sería colocar la muestra a analizar, es decir, tendríamos que soplar en el alcoholímetro. El alcohol que se haya ingerido reaccionará con la enzima ADH del biosensor, que transforma el etanol en etanaldehído. Esta reacción de óxido reducción implica un intercambio de electrones por la oxidación de etanol. El número que nosotros observamos en la pantalla del equipo está dado por un cambio en la corriente eléctrica debido al paso de electrones provenientes de la reacción entre la enzima ADH y el etanol, y éstos son cuantificables cuando llegan al detector del equipo, por ende conociendo el número de electrones podemos conocer la concentración de etanol. Cabe mencionar que las reacciones de óxido reducción son un tipo de interacción entre el elemento de reconocimiento y el analito, pero Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 6 puede haber otro tipo de interacciones. Por ejemplo, si se utiliza un anticuerpo o una célula entera el proceso es algo diferente que si sólo se utiliza una enzima, pero incluso en las enzimas hay diferentes tipos, como las isomerasas o las hidrolasas, donde la interacción es diferente a las reacciones de óxido reducción llevadas a cabo por las oxidorreductasas. Por otrolado, en ocasiones en la interacción entre el elemento de biorreconocimiento --en este caso las enzimas oxidorreductasas GO y ADH- - y el transductor --donde se cuantifican los electrones-- puede haber interferencias, es por ello que se añade un elemento llamado mediador que sirve para transferir los electrones desde la enzima hasta el transductor. En las figuras 4 y 5 se muestran de forma esquemática las reacciones que se llevan a cabo dentro del biosensor; en ambas figuras el analito está situado en la parte inferior del lado derecho, comenzando la reacción cuando el analito reacciona con la enzima y le cede sus electrones. En otra reacción de óxido reducción la enzima pasa los electrones al compuesto llamado mediador (MED) situado al lado del electrodo, que finalmente acarrea los electrones para cuantificarlos. Figura 4. Reacción de la glucosa (parte inferior derecha) en el glucómetro. Usualmente el mediador (MED) es un compuesto que contiene un metal y que ayuda a que sea más eficiente el proceso de acarreo de electrones. GOred, GOox, MEDred, MEDox, se refieren a Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 7 sus formas reducida (cuando ganan electrones) y oxidada (cuando pierden electrones) respectivamente. Figura 5. El etanol (CH3CH2OH) reacciona con la enzima alcohol deshidrogenasa ADHox. En este caso el mediador se ejemplifica con un compuesto de hierro llamado ferroceno, que se utiliza usualmente en este tipo de biosensores. NAD+/NADH es un cofactor o coenzima utilizado de forma natural en algunas reacciones enzimáticas. La UNAM desarrolla mediadores El grupo de trabajo del Dr. Ronan Le Lagadec en el Instituto de Química de la UNAM, desarrolló una serie de mediadores para hacer más eficiente el proceso de acarreo de electrones entre la enzima y el electrodo; mientras más rápido sea el intercambio más rápida será la respuesta en el dispositivo. Actualmente los compuestos que se utilizan como mediadores en el glucómetro y alcoholímetro son los que contienen hierro dentro de su estructura. El grupo del Dr. Le Lagadec encontró que algunos compuestos de rutenio y osmio intercambian electrones mucho más rápido que los de hierro utilizados actualmente. En particular, los compuestos que mejor intercambian electrones con la enzima son los ciclometalados. Este tipo de compuestos posee una unidad básica que forma un ciclo entre tres átomos: carbono, metal y otro átomo que usualmente es nitrógeno, azufre u oxígeno, como se muestra en la figura 6B y 6C. Los enlaces metal carbono y metal nitrógeno forman Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 8 el mencionado ciclo; metalado hace referencia al enlace carbono-metal. Este enlace es muy importante ya que brinda estabilidad al compuesto y controla su facilidad de ganar o ceder electrones, que es de suma importancia al interactuar con la enzima. Figura 6. Se puede observar en la figura 6A, la estructura fundamental de los complejos ciclometalados, en 6B y 6C son ejemplos de complejos de rutenio y osmio, que sirven como mediadores con enzimas como la glucosa oxidasa y alcohol deshidrogenasa. En azul se muestra la unidad o fragmento ciclometalado. Estos compuestos de rutenio y osmio han superado a los mediadores actuales que se utilizan de forma comercial en su velocidad de intercambiar electrones con algunas enzimas como la glucosa oxidasa y la alcohol deshidrogenasa, por lo que podrían sustituir a los mediadores que se utilizan comercialmente. El desarrollo de estos compuestos tiene una amplia variedad de aplicaciones en la industria, por ejemplo en la detección de peróxidos, en el área de los alimentos, en el monitoreo del medio ambiente o en el sector salud. Estos biosensores son de respuesta rápida, fáciles de utilizar, portátiles, de tamaño adecuado y generalmente económicos. Su uso se ha ido incrementando con el paso del tiempo dadas sus ventajas y aplicaciones. Alcoholímetro y glucómetro, biosensores para la vida / CIENCIORAMA 9 Agradecimientos A la Lic. Karina García Esquivel por su amable colaboración en el diseño de las imágenes mostradas en este artículo. Referencias Divulgación - Espinoza-Jalapa, N.A., Cerón-Camacho, R., Le Lagadec, R., “Biosensores: Enzimas y compuestos organometálicos para el bienestar” Materiales Avanzados 2009, 13, 27-32. - Rico-Bautista, H., Tesis de Licenciatura. Facultad de Química, UNAM, junio, 2010. Especializadas - R. Le Lagadec, L. Alexandrova, H. Estevez, M. Pfeffer, V. Laurinavicius, J. Razumiene, A. D. Ryabov, Eur. J. Inorg. Chem. 2006, 2735–2738. - Cerón-Camacho, R; Le Lagadec, R.; Kurnikov, I.V.; Ryabov, A.D., J.Inor. Biochem. 2014, 134, 20-24.
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