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89 EL DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CHACAS A TRAVÉS DE MÉTODOS CONVENCIONALES Y DE BIOLOGÍA MOLECULAR MYRIAM LORCA Departamento de Parasitología Facultad de Medicina Universidad de Chile El diagnóstico de laboratorio de la enfermedad de Chagas se basa en dos elementos fundamentales: la detección del parásito y la pesquisa de moléculas relacionadas con la respuesta del huésped inmune contra el parásito (antígenos o anticuerpos). El valor diagnóstico de los distintos métodos va a depender de su sensibilidad y especificidad, pero además, de la etapa de la infección en que se encuentre el paciente. La fase inicial de la infección denominada período agudo, generalmente es asintomática y pasa desapercibida en la infección adquirida. Mejor rendimiento se obtiene en las infecciones congénitas, cuadro agudo que requiere necesariamente de diagnóstico precoz. En estos casos, los exámenes de laboratorio de mejor posibilidad diagnóstica son aquellos que detectan al al Trypanosoma cruzi en la sangre periférica. Con posterioridad y al cabo de 1 a 2 semanas, comienzan aparecer los anticuerpos específicos y este estado imnunológico determina una disminución de la parasitemia por lo cual sólo puede ser detectada con métodos especiales. En el período crónico de la infección, el diagnóstico de laboratorio se basa en la pesquisa de anticuerpos específicos anti T. cruzi los cuales permanecen de por vida. A.EXÁMENES PARA EL DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO: Son métodos especialmente útiles en las etapas parasitémicas de la infección (fase aguda e infección congé-nita). 1. Directos: Examen enfresco (entre lámina y laminilla) y frotis sanguíneo, son métodos simples cuyo mayor rendimiento se logra en pacientes con gran número de parásitos circulantes. 2. Concentración: Gota gruesa, método de Strout y microhematocritos, son métodos especialmente útiles cuando las parasitemias son menores ya que aumentan la concentración de la muestra y con ella la probabilidad de visualizar el parásito. 3. Amplificación: Xenodiagnósticoy hemocultivos, es tos exámenes son útiles en el paciente chagásico crónico, pues en esta etapa es la única alternativa de demostrar la existencia de parásitos circulantes. Durante las fases agudas, si bien tienen buena sensibilidad, la ejecución y observación del examen es lenta, lo cual ofrece dificultades técnicas. 4. Inmunológicos: Antigenemia y antigenuria. Ambos métodos emplean antisueros anti Trypanosoma cruzi poli o monoclonales y han demostrado utilidad especialmente en infecciones congénitas, al ser empleados como métodos de captura de antígenos circulantes. 5. Biología molecular: Hibridización de DNA, yPCR. Recientemente incorporadas a las herramientas de diagnóstico parasitológico, parecieran augurar gran utilidad para la demostración del parásito, surgiendo como alternativa al xenodiagnóstico. Son métodos que detectan DNA (Kinetoplastidieo genómico) del T. cruzi en cantidades equi valentes a la presencia de un parásito por mi de sangre. B. EXAMENES SEROLOGICOS: Son aquellos métodos que detectan la respuesta inmune humoral del infectado chagásico, podemos dividirlos en: 1. Convencionales: Los que detectan inmunoglobulinas que acompañan al individuo infectado durante toda su vida y que debido a las características de los antígenos empleados, no establecen diferencias en la respuesta inmune durante las distintas fases de la infección. Los métodos más conocidos son: la Reacción de Fijación del Complemento (RFC), la Reacción de Hemaglutinación Indirecta (RHAI), la Reacción de Inmunofluorescencia Indirecta (RIFI), ELISA, Inmunodot y Radioinmunoensayo (RÍA). 2. No convencionales: son aquellos métodos que emplean antígenos definidos, los cuales permiten establecer diferencias en la respuesta inmune humoral específica durante las distintas fases de la infección, que evolucionan frente a tratamiento, etc. Entre ellos destacan la lisis mediada por complemento y los exámenes con antígenos recombinantes y péptidos sintéticos de T. cruzi. 90 C. APLICABILIDAD DE LOS MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Enfermedad de Chagas congénita Exámenes directos, xenodiagnósticos, PCR serología convencional: RIFI o ELISA IgG e IgM, serología no convencional con antígenos recombinantes para la detección de anticuerpos IgA, IgM e IgG específicos. Enfermedad de Chagas aguda Exámenes directos, xenodiagnósticos, PCR, serología convencional (RIFI o ELISA IgG e IgM) y serología no convencional con antígenos recombinantes: (IgG e IgM). Detección de anticuerpos de neoformación específicamente anti SAPA y otros. Enfermedad de Chagas crónica Xenodiagnóstico y serología no convencional: (Igg), serología no convencional con antígenos recombinantes: (IgG, anticuerpos líticos).
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