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1 LABORATORIO CLÍNICO COMPARADO Carrera: Microbiología Clínica e Industrial Plan de estudios: 2013 Ciclo: Especial Año: Cuarto Régimen de Cursada: Cuatrimestral Carácter: Obligatoria Carga Horaria: 70 horas OBJETIVOS GENERALES Adquirir los conceptos de las prácticas clínicas de laboratorio, su importancia y aplicación en el campo de la salud, tanto humana como veterinaria, entendiéndose esta bajo el concepto de Una Salud. Seleccionar dentro de los diferentes métodos analíticos el/los más adecuados al diagnóstico presuntivo y de acuerdo a los recursos disponibles. Identificar la/s muestra/s más adecuadas a los efectos de poder encauzar la resolución de los diferentes estados fisiopatológicos, tanto en la especie humana como en los animales, para establecer un diagnóstico definitivo y diferencial. Describir la obtención, manejo y conservación de las diversas muestras según el examen que a realizar. Implementar los programas de control y gestión de calidad más apropiados en cada área de laboratorio, poniendo énfasis en el bienestar y capacitación de los recursos humanos y en el cuidado del medio ambiente en consonancia con el concepto de Desarrollo Sostenible. Interpretar y correlacionar los resultados obtenidos en las diferentes practicas analíticas con el estado fisiopatológico del paciente en estudio. Verificar la validez de los resultados. CONTENIDOS MÍNIMOS Importancia de las prácticas clínicas de diagnóstico de laboratorio. Hematología. Hemostasia. Hidratos de carbono. Substancias nitrogenadas no proteicas. Proteínas. Lípidos. Enzimología clínica: Hígado. Páncreas. Medio interno: ionograma y nomograma. Nefrología. Funciones de reproducción. Espermograma. Líquido amniótico. Líquido cefalorraquídeo. 2 PROGRAMA ANALÍTICO UNIDAD Nº 1: HEMATOLOGÍA Importancia, características y delimitación de los exámenes hematológicos. El laboratorio de análisis clínicos en su aspecto hematológico en medicina humana y veterinaria. Instrumental y equipamiento. Gestión de controles de calidad y validación de resultados. Importancia de los exámenes hematológicos en el diagnóstico, caracterización y seguimiento de anemias, leucemias, policitemias, hemoglobinopatías, y otras patologías en medicina humana y veterinaria. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras de sangre, suero, y plasma para análisis hematológicos. Extracción de sangre en el ser humano y en los animales. Técnicas y métodos correctos de extracción. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías diagnósticas de los análisis hematológicos. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores normales de referencia, desvíos patológicos, y correlación fisiopatológica de cada determinación en medicina humana y veterinaria. Uso de anticoagulantes: heparina, EDTA, oxalatos, citratos, otros, empleo correcto, causas de error. Hemograma completo. Fórmulas leucocitarias absoluta y relativa. Preparación de frotis o extendidos. Alteraciones morfológicas ocasionadas por el anticoagulante. Coloración de frotis (May Grümwald-Giemsa, otras tinciones). Tamaño, forma y estructura de los hematíes. Macrocitosis, microcitosis y anisocitosis. Poiquilocitosis. Esquizocitos, leptocitos, esferocitos, eliptocitos, etc. Hipocromía, hipercromía y anisocromía. Cuerpos de Howell Jolly, anillos de Cabot, punteado basófilo, cuerpos de Heinz, siderocitos, fluorocitos, etc. Leucocitos en sangre periférica. Granulocitos, linfocitos y monocitos. Caracteres morfológicos y estructurales. Variaciones cuantitativas normales y patológicas: leucocitosis, leucopenia, neutrofilia, neutropenia, eosinofilia, eosinopenia, basofilia, etc. Alteraciones leucocitarias nucleares y citoplasmáticas: defectos de técnica, alteraciones patológicas, anomalías congénitas. Progenies hemáticas. Blastos. Células inmaduras. Signos de evolución y maduración. Hematocrito. Recuento manual y automatizado de células sanguíneas (eritrocitos, leucocitos, plaquetas, reticulocitos). Hemoglobina. Derivados de la hemoglobina en el plasma. Oxihemoglobina. Metahemoglobina. Sulfohemoglobina. Hemoglobinas anormales. Hematimetría. Índices hematimétricos. Reticulocitos. UNIDAD Nº 2: HEMOSTASIA Principales reactantes de hemostasia: factores, cofactores, activadores, inhibidores, células. Importancia en diagnóstico, tratamiento y seguimiento de hemorragias y trombosis en medicina humana y veterinaria. Preparación del material, limpieza y siliconado Preparación del paciente. Extracción de la muestra de sangre y separación del plasma. Acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras. Técnicas y métodos correctos de extracción en el ser humano y en los animales. Precauciones. Causas de error. Anticoagulantes de elección y proporciones correctas del mismo. Técnicas y metodologías diagnósticas para análisis de coagulación y fibrinólisis. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. 3 Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlación fisiopatológica de cada prueba en medicina humana y veterinaria. Pruebas globales de orientación del sistema de coagulación: tiempo de sangría, prueba del lazo, prueba del petequiómetro, retracción del coágulo, tiempo de protrombina en una etapa (TP, tiempo de Quick), definición de ISI y de RIN, tiempo de Tromboplastina Parcial Activado (APTT, KPTT), tiempo de trombina (TTr), tiempo de Reptilasa, dosaje de fibrinógeno. Pruebas de corrección con plasma normal. Distintos algoritmos. Pruebas específicas. Estudios funcionales. Dosaje de factores. Determinación de actividad enzimática. Estudios inmunológicos. Marcadores de actividad el sistema hemostático. Dímeros D y PDF/pdf. Estudio del sistema fibrinolítico. Pruebas de orientación. Pruebas específicas. Plasminógeno/plasmina. Activador tisular del plasminógeno. Inhibidores del sistema fibrinolítico: alfa 1 antiplasmina, alfa 2 macroglobulina, inhibidor del activador tisular del plasminógeno (PAI-1), glicoproteína rica en histidina. Inhibidores adquiridos, específicos y no específicos, de coagulación. Diagnóstico de inhibidores. Plaquetas: técnicas y metodologías de estudio. Recuento manual y automatizado. Estudio de la capacidad funcional de las plaquetas. Anticuerpos plaquetarios. UNIDAD Nº 3: PROTEÍNAS Proteínas plasmáticas. Proteínas totales. Albúminas y globulinas. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras requeridas para su análisis. Técnicas y métodos correctos de obtención de las mismas en las diferentes especies. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías diagnósticas de análisis de proteínas (proteinograma electroforético; inmunoelectroforesis; inmunodifusión radial; determinación de proteínas totales por método de Biuret; determinación por métodos físico- químicos [refractometría, precipitación iónica]; métodos turbidimétricos; electroforesis sobre distintos soportes [papel, acetato de celulosa gelatinizado, agar, acrilamida, etc.]). Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlación fisiopatológica de cada prueba en medicina humana y veterinaria. Hipoproteinemia. Hipoalbuminemia. Hiperalbuminemia. Relación albúmina/globulinas. Alteraciones de proteínas plasmáticas. Pseudodisproteinemias. Disproteinemias intrínsecas y extrínsecas. Paraproteinemias. Patrones electroforéticos de respuesta inmediata, de respuesta retardada, y de stress. Gammapatías mono y policlonales. Proteína C reactiva (PCR). UNIDAD Nº 4: HIDRATOS DE CARBONO Hidratos de carbono de importancia clínica en medicina humana yveterinaria. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras de sangre y orina requeridas para su análisis. Técnicas y métodos correctos de obtención de las mismas en las diferentes especies. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías diagnósticas para el análisis de los hidratos de carbono, y hemoglobina glicosilada. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. 4 Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlación fisiopatológica de cada prueba en medicina humana y veterinaria. Glucosa. Glucemia. Hipoglucemia. Hiperglucemia. Su relación con insulina y glucagón. Glucosuria. Glucosuria diabética y no diabética. Curvas de tolerancia a la glucosa. Curvas normales y curvas de tipo diabético. Glucemia postprandial. Hemoglobina glicosilada (HbA1c). Glucosa en líquido cefalorraquídeo. UNIDAD Nº 5: LÍPIDOS Lípidos de importancia clínica. Colesterol total. Esteres del colesterol. HDL. LDL. VLDL. Quilomicrones. Lipoproteínas. Lipoproteínas poco comunes. Triglicéridos. Ácidos grasos no esterificados (AGNEs). Lipemia. Riesgo coronario. Fórmulas de Friedewald. Perfil lipoproteico. Dislipidemias, estudio y clasificación de las mismas. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras requeridas para su análisis. Técnicas y métodos correctos de obtención de las mismas según especie tratada. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías de determinación de cada analito. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlación fisiopatológica de cada prueba en medicina humana y veterinaria. UNIDAD Nº 6: SUBSTANCIAS NITROGENADAS NO PROTEICAS Nitrógeno no proteico (NNP). Urea. Ácido úrico. Creatina. Creatinina. Clearance de creatinina. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras requeridas para su análisis. Técnicas y métodos correctos de extracción de las mismas según especie tratada. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías de determinación de cada compuesto en sangre y orina. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlación fisiopatológica de cada prueba en medicina humana y veterinaria. UNIDAD Nº 7: NEFROLOGÍA El laboratorio en el diagnóstico de las enfermedades renales. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras requeridas para análisis en cada caso. Técnicas y métodos correctos de obtención de las mismas según especie tratada. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías de diagnóstico de laboratorio en cada caso. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlaciones fisiopatológicas de cada prueba en medicina humana y veterinaria. Aparición de substancias anormales en la orina. Concepto de umbral renal. Exploración de la capacidad funcional del riñón. Depuración de urea y creatinina. Orina completa. Examen físico de la orina: volumen, color, olor, turbidez, espuma, sedimento macroscópico, densidad, reacción. Examen químico de la orina: pH, glucosa, proteinas, urea, cuerpos cetónicos, pigmentos biliares y bilirrubina, urobilina, sangre, hemoglobina, nitritos, indol, cloruros, etc. Empleo de tiras reactivas para la determinación de diversos analitos. Examen microscópico del sedimento urinario: 5 sedimento microscópico de la orina normal y patológica, elementos organizados de origen hemático y epitelial (hematíes, leucocitos, células), elementos neoformados (cilindros), elementos no organizados (cristales), otros elementos (gérmenes, parásitos, células neoplásicas, cuerpos extraños, etc.). Proteinuria glomerular, prerrenal y tubular. Ionograma urinario. Marcadores de lesión tubular renal en el ser humano y en los animales. Recuento cuantitativo de elementos figurados de Addis. Litiasis renal. Factores predisponentes. Formación. Composición. Clasificación. Aspecto. Caracteres físicos. Marcha analítica para su identificación química. Diferencias entre especies. UNIDAD Nº 8: IONES E IONOGRAMA Electrolitos. Desequilibrio electrolítico. Cationes y aniones: Sodio. Potasio. Cloro. Calcio. Fósforo. Magnesio. Hierro. Consideraciones bioquímicas. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras requeridas para análisis en cada caso. Técnicas y métodos correctos de obtención de las mismas según especie tratada. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías diagnósticas de laboratorio en cada caso (técnicas químicas, colorimétricas, espectrofotometría de llama, espectrofotometría de absorción atómica, métodos volumétricos de titulación, etc.). Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlaciones fisiopatológicas de cada prueba en medicina humana y veterinaria. Calcio. Hipocalcemia. Su relación con hipoparatiroidismo, con deficiencia de vitamina D, síndrome de malabsorción, tetania, epilepsia, retraso de crecimiento, etc. Hipercalcemia. Su relación con hiperparatiroidismo, intoxicación por vitaminas A y D, patologías oncológicas. Marcadores bioquímicos en osteoporosis: Osteocalcina en sangre. Deoxipiridinolina e hidroxiprolina en orina Fósforo. Hipofosfatemia. Su relación con hiperparatiroidismo. Hiperfosfatemia. Su relación con el hipoparatiroidismo. Sodio plasmático y urinario. Hipernatremia. Hiponatremia. Potasio. Hipopotasemia. Hiperpotasemia. Potasio urinario y relación Na: K. Relación con la enfermedad renal. Cloro, Hipocloremia. Hipercloremia. Bicarbonato. Magnesio. Hipomagnesemia. Hipermagnesemia. Hierro. Capacidad de fijación del hierro sérico. Ferritina, transferrina y % de saturación de la transferrina. Ionograma. Nomograma. UNIDAD Nº 9: ENZIMOLOGÍA CLÍNICA. PÁNCREAS. HÍGADO Fundamento de los métodos de medida de actividades enzimáticas (colorimétricos, espectrofotométricos, cinéticos, etc.) Unidades de medidas. Factores de conversión de unidades. Holoenzimas. Apoenzimas. Coenzimas. Fundamentos de la enzimología diagnóstica en suero. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de las muestras de requeridas para análisis de laboratorio en cada caso. Extracción de sangre en el ser humano y en los animales. Técnicas y métodos correctos de extracción. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías diagnósticas de los análisis enzimáticos. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlaciones fisiopatológicas de cada prueba en medicina humana y veterinaria. 6 Amilasa. Isoenzimas de amilasa. Fosfatasas. Fosfatasa alcalina sérica. Fosfatasas ácidas (total y prostática). Deshidrogenasa láctica (LDH o DHL). Isoenzimas de LDH. Transaminasas (GOT/AST- GPT/ALT). Creatinfosfoquinasa (CPK, o creatinkinasa [CK]). Aplicación del estudio de las enzimas al diagnóstico de hepatopatías, afecciones pancreáticas y cardiopatías. Otras enzimas: sorbitol deshidrogenasa (SoDH), glutámicodeshidrogenasa (GLDH), colinesterasa sérica (pseudocolinesterasa sérica, butirilcolinesterasa, o acilcolina acilhidrolasa), aldolasa, 5´nucleotidasa, gamma glutamil transpeptidasa, leucino-amino peptidasa. Proteínas troponina I (TnI) y troponina T (TnT). Páncreas. Pancreatitis. Pruebas funcionales pancreáticas. Diagnóstico de laboratorio de afecciones pancreáticas en medicina humana y veterinaria. Perfil cardíaco.Hígado. Pigmentos biliares. Bilirrubina. total, directa e indirecta. Sales biliares. Ictericia prehepática o hemolítica. Ictericia hepática. Ictericia post-hepática u obstructiva. Síndrome de colestasis. Síndrome de necrosis o histólisis. Síndrome de insuficiencia hepática. Hepatograma. Pruebas funcionales hepáticas. Pruebas destinadas a revelar colestasis, necrosis, insuficiencia e inflamación hepática. Aplicación de las diversas pruebas de laboratorio al diagnóstico y seguimiento de las hepatopatías. UNIDAD Nº 10: FUNCIONES DE REPRODUCCIÓN. ESPERMOGRAMA Evaluación de semen en medicina humana y veterinaria. Obtención de la muestra, material requerido, técnicas de recolección, indicaciones y precauciones. Acondicionamiento y conservación de la muestra. Técnicas y metodologías de estudio de los diferentes parámetros. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlaciones fisiopatológicas de cada prueba en medicina humana y veterinaria. Caracteres físicos y químicos. Examen fresco del esperma. Análisis macroscópico: volumen, aspecto, color, viscosidad, reacción (pH), licuefacción. Examen microscópico: concentración espermática, recuento de espermatozoides, motilidad, morfología, viabilidad, estudio citológico. Examen citomorfológico: morfología de los espermatozoides, caracteres normales y patológicos. Capacidad fecundante del esperma. Pruebas funcionales. Valoración e interpretación de las pruebas de fecundidad y esterilidad. Estudio de vitalidad espermática. Estudio bacteriológico del semen. Antígeno prostático (PSA). Otras Evaluación de: zinc, ácido cítrico, fosfatasa ácida, fructosa, ácido ascórbico. Examen inmunológico del semen. UNIDAD Nº 11: LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO Composición normal y patológica del líquido cefalorraquídeo. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de la muestra. Técnicas y métodos correctos de extracción. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías de estudio del LCR. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlaciones fisiopatológicas de cada prueba en medicina humana y veterinaria. 7 Análisis físico (cantidad, aspecto, color, coagulación, sedimento, turbidez), citológico, químico (determinación cuantitativa de proteínas totales, determinación cualitativa de globulinas, determinación de glucosa, determinación cuantitativa de cloruros, proteinograma del LCR), citológico (recuento de los elementos celulares, conteo diferencial de los elementos celulares). Examen bacteriológico. Electroforesis del LCR. Contribución del laboratorio al diagnóstico de las afecciones del sistema nervioso central. Bioperfiles proteicos del LCR. UNIDAD Nº 12: LÍQUIDO AMNIÓTICO Composición normal, y patológica del líquido amniótico. Obtención, acondicionamiento, conservación, y estabilidad de la muestra. Técnicas y métodos correctos de extracción. Precauciones. Causas de error. Técnicas y metodologías diagnósticas del análisis del líquido amniótico. Amnioscopía. Amniocentesis. Lectura e interpretación clínica de los resultados obtenidos en cada determinación analítica según especie tratada. Valores de referencia normales, desvíos patológicos, y correlaciones fisiopatológicas de cada prueba en medicina humana y veterinaria. Parámetros que determinan madurez y sufrimiento fetal. Bilirrubina. Gráfico de Liley (grado de enfermedad hemolítica por inmunización Rh). Evaluación del estriol. Evaluación de creatinina. Relación lecitina/esfingomielina. Examen citológico: estimación de maduración fetal. BIBLIOGRAFÍA OBLIGATORIA Gutiérrez Vázquez, I. R. (2011) La Fisiopatología como Base Fundamental del Diagnóstico Clínico. Editorial Médica Panamericana. Henry, J. B. (2007) “El laboratorio en el diagnóstico clínico”. Edición homenaje a Todd-Sanford & Davidsohn. Marbán Libros S.L. Edición en español. Meyer, D. J.; Harvey, J. W. (2004) “El laboratorio en medicina veterinaria. Interpretación y diagnóstico”. Intermédica Editora. 2° Edición. Mundt, L. A.; Shanahan, K. (2011) Graff. Análisis de orina y de los líquidos corporales. 2da edición. Editorial Médica Panamericana. Roca, Pilar; Oliver, Jordi; Rodríguez, Ana María. (2003). Bioquímica: técnicas y métodos. Editorial Hélice. ……………………………………………………………………………………………………………………………....... OBJETIVOS GENERALES CONTENIDOS MÍNIMOS PROGRAMA ANALÍTICO
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