HECTOR OWEN MOLINA CALLEJAS 220034508

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ANALISIS INSTRUMENTAL Y NORMAS
PRACTICO 2
ESPECTROFOTOMETRIA
1. INTRODUCCION.-
La espectrofotometría es un método utilizado para medir la cantidad de luz que absorbe una sustancia química mediante la medición de la intensidad cuando un haz de luz atraviesa la solución de la muestra.
El principio básico es que cada compuesto absorbe o transmite la luz en un determinado rango de longitudes de onda. Por lo tanto, la medición también puede utilizarse para medir la cantidad de una sustancia química conocida. La espectrofotometría se utiliza ampliamente en la biología, la química física, la industria y en muchos laboratorios, incluidos los clínicos. El conocimiento de la absorción de la luz por la materia es la forma más habitual de determinar la concentración de las sustancias químicas presentes en la solución.
 
Todos los compuestos químicos absorben, transmiten o reflejan la luz (radiación electromagnética) en una determinada gama de longitudes de onda. Mediante la espectrofotometría, se realiza la medición de la intensidad de la luz en longitudes de onda, y los componentes de una solución pueden identificarse por sus espectros característicos en el ultravioleta, el visible o el infrarrojo. Esta técnica utiliza la propiedad de las soluciones de absorber o transmitir la luz para cuantificar las reacciones.
En la práctica, la cantidad de luz absorbida o transmitida es proporcional a la concentración de la sustancia en la solución. Al igual que una huella dactilar, conocer exactamente la cantidad de luz absorbida nos permite identificar y cuantificar los distintos materiales. Cuanto más concentrada sea la solución, mayor será la absorción de la luz. Por otro lado, el color de la solución viene determinado por el color de la luz transmitida.
2. CONCEPTOS FUNDAMENTALES.- 
· La energía de la radiación se mide en nm (nanómetros). Letra griega λ (lambda) = longitud de onda; 
· El espectro más utilizado va desde el ultravioleta (200 nm) hasta el infrarrojo corto (1.000 nm); 
· Gama visible (percibida por el ojo humano): 40 0 a 750nm 
· Color: sensación psicofísica que asociamos a una longitud de onda predominante 
· Blanco (mezcla de colores que se anulan entre sí): refleja todos los colores 
· Negro: absorbe todos los colores
· Transmitancia: es la fracción de luz incidente a una determinada longitud de onda, que atraviesa una muestra de materia. Es la relación entre la intensidad de la luz transmitida y la intensidad de la luz incidente. 
· Absorbancia: Capacidad de un material para absorber la radiación en una frecuencia determinada. La absorbancia de una sustancia en solución es directamente proporcional a su concentración y al espesor que atraviesa la luz.
· Espectrofotometría óptica: La longitud de onda corresponde a la luz visible o ultravioleta: oscila entre 180 y 800 nm aproximadamente.
3. INSTRUMENTO.-
· El instrumento utilizado para este método es el espectrofotómetro.
· La fuente de luz tiene su haz localizado por el colimador (C) y se fracciona (descompone) sobre un prisma de cuarzo; 
· Una rendija selectora elige una porción de este espectro como Luz Monocromática (Luz MC) que pasa a través de la cubeta que contiene la solución donde una parte es absorbida y otra transmitida; 
· La célula fotoeléctrica acoplada al galvanómetro mide la luz transmitida; 
· La diferencia es la luz absorbida; -La absorbancia será proporcional a la concentración de la sustancia en la cubeta
4. TIPOS DE ESOECTROFOTOMETRO.-
Existen en la actualidad diversos tipos de aparatos con los mismos principios los hay mecánicos y digitales; unos miden solo la luz visible, otros son más precisos y miden también luz U.V., Infrarroja, de absorción atómica (AA), fluorescencia de rayos-X de emisión de plasma (ICP), multipropósitos (para medir directamente la solución con suspensión, muestras sólidas y biológicas), acoplado a masas, etc.
5. UTILIDAD.-
Un espectrofotómetro se utiliza en muchas áreas de la ciencia, incluidas la microbiología, la bioquímica, la medicina forense, la física y la salud médica. Se usa para medir ciertos ingredientes en un medicamento para asegurarse de que sea efectivo y seguro para los consumidores. Puede medir el crecimiento bacteriano o diagnosticar a un paciente en función de su orina. También se usa en el análisis de ADN, ARN y proteínas. Incluso tiene aplicaciones en áreas no científicas, como por ejemplo, los enólogos lo utilizan para medir la calidad del vino.
6. LEY DE LAMBERT BEE
Mediante esta ley, las intensidades de radiación incidente y emergente pueden relacionarse con las concentraciones del material presente en la solución. 
Los efectos de reflexión, refracción y dispersión no se consideran en esta ley. 
La radiación incidente debe ser monocromática.