Practica 7 Actividad enzimatica - Rosa Aurora Rosas

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PRACTICA Nº 9ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Actividad enzimática
Las enzimas son proteínas (excepto las ribozimas), que catalizan las reacciones químicas que ocurren en las células
La catalisis la realizan disminuyendo la energía de activación.
Factores que influyen en la actividad enzimática:
Temperatura
pH
Concentración de la enzima
Concentración del sustrato
Inhibidores
Alguna enzimas se encuentran inactivadas y reciben el nombre de Apoenzimas, para su activación estas enzimas requieren de un cofactor o de una coenzima. 
La enzima activa unida a los cofactores o a las coenzimas se denomina Holoenzimas.
Apoenzimas + Coenzima/Cofactor Holoenzima
(Inactiva) (Activa)
Coenzimas (moléculas orgánicas, como vitaminas)
Cofactores (moléculas inorgánicas, iones metálicos)
Se unen por interacción electrostática, puentes hidrógeno o fuerzas de Vander Waals.
La actividad catalítica de una enzima sobre un sustrato puede ser descrita en dos parámetros:
Vmax velocidad máxima de la reacción en concentraciones saturantes del sustrato
Km La constante de Michaelis que es una medida de la afinidad de la enzima para el sustrato. Esta esta definida como la concentración de sustrato en la cual se obtiene la mitad de la velocidad máxima.
Las concentraciones de las moleculas en la celula varian, asi como el valor del Km de las enzimas que actuan sobre ellas. Generalmente la concentracion intracelular del sustrato es aproximadamente la misma o mayor al valor del Km de la enzima a la que se une.
Clasificación de las enzimas:
1 Oxidoreductasas Transfieren electrones (iones hidronios o átomos de H)
2 Transferasas Transfieren Grupos
3 Hidrolasas Reacción de hidrólisis (transfiere una molécula de agua)
4 Liasa Adiciona grupos a dobles enlaces o forma doble enlaces por remoción de grupos
5 Isomerasas Transfiere grupos dentro de moléculas para obtener formas isomericas
6 Ligasas Forma enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por reacción de condensación acoplada a ruptura de ATP
La mayoría de las enzimas cataliza la transferencia de electrones, atomos o grupos funcionales. 
Las enzimas se clasifican en base a códigos y su nombre es asignado de acuerdo tipo de reacción 
PRIMERA PARTE: Actividad de la enzima CATALASA EC 1.11.1.6
OBJETIVO. 
Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal 
La catalasa es una enzima oxidoreductasa que se encuentra en altas concentraciones en los compartimientos intracelulares llamados peroxisomas
Las células contienen catalasa para eliminar el exceso de H2O2 que es un agente oxidante y es dañino para las células
PRIMERA PARTE: Actividad de la enzima CATALASA EC 1.11.1.6
La reacción enzimática se evaluara por el desprendimiento de O2 determinada por la formación de burbujas en el tubo de reacción 
SEGUNDA PARTE: Actividad de la enzima Alfa AMILASA EC 3.2.1.1.
La amilasa es una hidrolasa que digiere el glucógeno y el almidón para formar azucares simples.
Clasificación :
α-Amilasa (1,4-α-D-glucano-glucanohidrolasa; glucogenasa)
Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro. Actúan a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos, descomponiéndolos en dextrina desde la amilopectina. 
En fisiología humana tanto la procedente de la saliva como la pancreática son α-Amylasas. Puede encontrarse en algunas plantas, hongos y bacterias. 
β-Amilasa (1,4-α-D-glucano-maltohidrolasa; amilasa sacarogénica)
La β-amilasa es también sintetizada por bacterias, hongos y plantas. Actúa desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrólisis del segundo enlace α-1,4, rompiendo dos unidades de glucosa (maltosa) a la vez. Muchos microorganismos también producen amilasa para degradar el almidón extracelular. Los tejidos animales no contienen β-amilasa, aunque puede estar presente en microorganismos saprófitos del tracto gastrointestinal. 
γ-Amilasa (Glucano 1,4-α-glucosidasa; aminoglucosidasa; Exo-1,4-α-glucosidasa; glucoamilasa; α-glucosidasa lisosómica; 1,4-α-D-glucano glucohidrolasa)
Además de romper el último enlace α(1-4)glicosídico en el extremo no reductor de la cadena de amilosa y amilopectina, liberando glucosa, la γ-amilasa puede romper los enlaces glicosídicos α(1-6). 
AMILASA SALIVAL (PTIALINA): Reduce el almidón a maltosa y dextrina. Se inactiva con los jugos gástricos del estómago.
Condiciones óptimas de la Ptialina: 
pH 5.6 - 6.9
Temperatura corporal 37ºC
AMILASA PANCREÁTICA: Reduce el almidón a dextrina, maltosa o glucosa. No se inactiva con el jugo gástrico. 
SEGUNDA PARTE: Actividad de la enzima Alfa AMILASA EC 3.2.1.1.
OBJETIVOS. Comprobar que sólo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan 
óptimamente catalizando una reacción enzimática con su sustrato
ALMIDON + AMILASA GLUCOSA MALTOSA DEXTRINA
1 2 3 4
Almidón Almidón Almidón Sacarosa
+ + +
Saliva Saliva Saliva
T Amb T Amb 37 C T Amb 
Actividad de la enzima amilasa
ALMIDON + AMILASA GLUCOSA MALTOSA DEXTRINA
1 2 3 4
Almidón Almidón Almidón Sacarosa
+ + +
Saliva Saliva Saliva
T Amb T Amb 37 C T Amb 
La reacción enzimática se evaluara por la observación del cambio de coloración de intensidad del reconocimiento del almidón por el lugol