técnicas de amplificación - Dariel Isai Soria Cordova

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Grecia Anzaldo
TÉCNICAS DE
AMPLIFICACIÓN
RT-PCR, PCR MULTIPLEX Y PCR AN
Biología Molecular.
¿QUÉ ES UNA TÉCNICA
DE AMPLIFICACIÓN?
Las técnicas de amplificación conseguimos hacer
billones de copias de una secuencia corta de un gen
concreto, con lo que deja de ser una fracción
insignificante de pares bases en nuestro tubo de
ensayo y va a resultar mucho más sencilla de analizar
La Reacción en cadena de la
polimerasa es una técnica utilizada
para hacer miles y millones de
copias de una sección especifica de
ADN para poder analizarlo.
PCR, ¿QUÉ ES?
PCR...
EXTRACCIÓN Y
PURIFCACIÓN DE DNA
1
SELECCIÓN DE
SEBADORES 
2
COMIENZA EL CICLADO:
1- DESNATURALIZACIÓN.
2 - APAREAMIENTO
3- EXTENSIÓN O
ELONGACIÓN.
3
PASOS PARA HACER UNA
PCR
PASOS BÁSICOS DE LA PRUEBA PCR
RT-PCR
En esta tecnica, el primer paso es romper los
enlaces que forman las cadenas de RNA, esto se
puede lograr subiendo la temperatura. Con un
primer de poli T (primer común para esta
reacción) se establece el inicio de la cadena
complementaria. La retrotranscriptasa toma
DNTPS para sintetizar una cadena de DNAc (DNA
complementaria). Después esta se puede
amplificar con la técnica de PCR convencional.
Reacción en cadena de la polimerasa por
retrotranscriptasa.
PCR-
MULTIPLEX
Paciente con enfermedad
respiratoria
 
Cebadores de virus
respiratorios altamente
especificos
 
Resultados de la
electroforesis después de
la PCR-multiplex.
 
En este tipo de pruebas
se usan varios cebadores
al mismo tiempo, estos
tienen que ser altamente
específicos, todas las
reacciones se llevan a
cabo en un mismo tubo y
se amplifican
técnicamente al mismo
tiempo.
https://docs.google.com/spreadsheets/d/1DUF2isFWsqVSYhbaACYtbgcLi_YjDqpE3GLQIVgkKQg/edit#gid=69851113
Lo que la hace altamente sensible y especifica es que
tenemos doble reacción de amplificación, en la primera
se usa un primer para amplificar la región de interés y en
la segunda se usa un primer mucho más especifico para
evitar la amplificación de segmentos no deseados. Estas
dos reacciones la hacen mucho más sensible a la
búsqueda de una sola sección de un gen.
Se trata de un tipo de PCR utilizada porque
es mucho más sensible y especifica que la
PCR normal.
PCR ANIDADA.