PCR final - Dariel Isai Soria Cordova

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PCR
Alfonso Bravo García
Biología Molecular 
P olimerase
C hain
R eaction 
Reacción en cadena de la polimerasa 
Amplificar masivamente una 
region de una muestra de DNA
Tener millones de copías 
de la region de interés 
(amplicones)
Objetivo:
Kary Mullis 
Bioquímico
estadounidense
Ganador del 
Premio nobel de 
Química en 1993 
junto con Michael 
Smith por la 
invención de la 
PCR
Reactivos 
 DNA
Muestra DNA que contenga nuestro fragmento de interés.
Ión Magnesio
Cloruro de magnesio cómo cofactor para DNA polimerasa
Enzima 
Taq Polimerasa:alta capacidad para mantener su función en temperaturas altas.
Primers 
Delimitar la región de interés.
dNTP’s 
Deoxinucleótidos: ladrillos o bases nitrogenadas para la Taq Polimerasa.
Buffer 
Crear un ambiente óptimo para la reacción.
Tris-HCl (pH=8)
Reacción
Termociclador 
Crear ciclos de temperatura específicas
Desnaturalización
ADN se calienta a 95°C (20-30s).
Se rompen puentes de hidrógeno
Dos cadenas monocatenarias.
Desnaturalización
Hibridación
Los primers se alinean al extremo 3’.
Temperatura entre 50-60°C (temperatura de hibridación)
Hibridación
Extensión
La Taq polimerasa empieza agregar dNTP’s a velocidad muy rápida.
Temperatura 72°C
Dirección 5’ a 3’
Tiempo (mil bases por minuto)
Extensión
y
Tiempo de elongación final:5-10 min.
Bibliografias
Tamay de Dios L,* Ibarra C,** Velasquillo C*. (n.d.). Retrieved from https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2013/ir132d.pdf
https://www.genome.gov/sites/default/files/media/images/2021-01/Reaccio_n_en_cadena_de_la_polimerasa_PCR.jpg
alaura. (2014, September 11). Fundamentos de PCR. Retrieved March 22, 2022, from SlideServe website: https://www.slideserve.com/alaura/fundamentos-de-pcr
‌R, P. (2022). Labster Polymerase Chain Reaction (PCR) simulation - crime CSI [YouTube Video]. Retrieved from https://www.youtube.com/watch?v=X3L_LnwXhtI&ab_channel=PaolaR
‌Saiki RK et al. Primer-directed enzymatic amplifi cation of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science. 1988; 239: 487-491.
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