Qímica Lab deMicrobologia Guia trabajo practicos 2017 FernandezSantos Ordoñes - ariadna franco

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Escuela de Educación Secundaria Técnica N° 2 de Merlo “República 
de Venezuela” 
 
 
 
 Técnico Químico 
 
 
Laboratorio de Análisis 
Microbiológico 
Guía de Trabajos Prácticos 
 
 
 
 
Profesoras: Marina Fernández, Patricia Ordoñes, Miriam Santos 
Año 2017 
 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
 BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO 
En el laboratorio, nos enfrentamos a algunos peligros que debemos considerar para disminuir los 
riesgos de accidentes. Podríamos clasificar a estos riesgos en Riesgos Biológicos (virus, bacterias, 
parásitos u hongos) y en No Biológicos. Estos últimos incluyen los riesgos químicos (p.ej. uso de 
lavandina y solventes inflamables o cáusticos), físicos (p.ej. cortaduras), eléctricos (p.ej. descargas 
eléctricas por enchufes o cables en mal estado) y el fuego (p.ej. quemaduras), que son comunes a otros 
laboratorios. 
En general la labor del microbiólogo en el laboratorio, consiste en aislar e identificar microorganismos 
que, en algunos casos, pueden resultar patógenos. Para aislar el microorganismo de interés, se debe 
trabajar con elementos estériles (ansas, medios de cultivo, recipientes, etc.) y manipular las muestras 
con sumo cuidado, como potenciales vehículos de microorganismos patógenos. 
El estudio de los microorganismos que pueden ser patógenos para el hombre, los animales u otras 
formas de vida, trae consigo ciertos riesgos que varían según el agente infeccioso y los procedimientos 
utilizados. 
 Reglas básicas 
Manos: En algunos aspectos, son como las patas de las moscas, tocan la suciedad, las fuentes de 
infección y sin que tengamos una noción clara de sus movimientos, la llevamos a la boca o a los ojos 
que son, a su vez, la puerta de entrada de muchas infecciones. Cuando estamos trabajando en un 
laboratorio, tenemos que cambiar ciertas costumbres, como la de llevarnos lápices a la boca, ya que 
normalmente se dejan en cualquier lugar pudiéndonos infectar con cualquier microorganismo allí 
presente. 
Un paso importante en la protección de nuestra salud es aceptar e incorporar en nuestras prácticas la 
“Regla de los 4 NO” (o primer regla de oro de la bioseguridad), en ella se destaca que en el laboratorio 
se debe: 
• No fumar 
• No comer 
• No beber 
• No maquillarse 
Como una práctica diaria y en forma repetida, deben lavarse las manos con jabón (preferentemente 
líquido), cuantas veces sea necesario y deben lavarse cuidadosamente después de cualquier 
manipulación de laboratorio y antes de retirarse del mismo y secarse con papel descartable. 
 Dado que las manos son susceptibles de recibir pinchazos, heridas y abrasiones, para realizar algunas 
tareas conviene utilizar guantes, dado que la posibilidad de que lo anterior ocurra se encuentra muy 
disminuida. Dos prácticas son necesarias cuando utilizamos guantes, el lavado con jabón y el sacárselos 
cuando se vayan a realizar otras tareas diferentes a las que estamos realizando, como por ejemplo 
tomar el teléfono, lapicera, cuaderno, etc luego de trabajar. 
Cabello: Es conveniente usarlo corto o es obligación usarlo recogido durante el trabajo. Debe evitarse 
el uso de accesorios colgantes. 
Uso de ropa protectora: se deberá usar el guardapolvo de mangas largas. El uso de guardapolvo 
impide daños mayores, por ejemplo salpicaduras con material infeccioso o contaminado. Esta ropa 
debe ser higienizada periódicamente. Los zapatos deben ser cerrados. 
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Laboratorio de Análisis Microbiológico 
 Protección de ojos. Cuando se trabaja con sustancias corrosivas, es conveniente usar anteojos 
protectores o máscaras para disminuir el riesgo de lesionar la córnea con salpicaduras o por exposición 
a vapores químicos. Es importante trabajar bajo campana, al manipular solventes, como así también 
tener a mano soluciones y dispositivos especiales para el enjuague de los ojos. 
Otras protecciones: 
Desinfectar el lugar de trabajo antes de comenzar y al terminar (usar lavandina al 5%, alcohol al 70% o 
espadol) 
Es imprescindible mantener el orden y la limpieza. Cada persona es responsable directa de la zona que 
le ha sido asignada y de todos los lugares comunes. 
No apoyar sobre la zona de trabajo libros, papeles ni efectos personales (abrigos, carteras, bolsos, etc) 
En las operaciones comunes del laboratorio se generan aerosoles y dado que la mayoría de las 
bacterias y virus tienen como puerta de entrada al organismo la vía aérea, hay que evitar la producción 
de éstos y es necesario usar máscaras de protección. Debe evitarse el pipeteo directo con la boca, 
salvo que se usen pipetas protegidas con algodón; es conveniente usar aquellos dispositivos 
apropiados como lo son las pipetas automáticas, las propipetas (peras de goma), dispensadores, etc. 
Otra regla importante, considerada la segunda regla de oro de la bioseguridad es 
“Considerar que toda muestra es potencialmente peligrosa y tratarla como tal”. 
Está prohibido descartar líquidos inflamables, tóxicos, corrosivos, medios de cultivo con agar o material 
biológico por los desagües de las piletas o recipientes comunes para residuos. Separar todo el material 
usado para su posterior autoclavado, colocándolo en recipientes adecuados. 
El material y los cultivos nunca deben tocarse con las manos. 
El ansa debe ser esterilizada inmediatamente antes y después de su uso. Para evitar crepitaciones, 
inducir lentamente en la llama hasta que se torne roja y asegurarse de esterilizar todo el largo del ansa. 
Los portaobjetos usados deben descartarse en recipientes con desinfectante. 
Si se tienen heridas o abrasiones en la piel preexistentes, deben ser cubiertas adecuadamente; usar 
elementos protectores a prueba de agua. 
Cualquier accidente, aún los pequeños cortes, deben ser informados inmediatamente al docente a 
cargo. 
La caída o derrame de muestras contaminadas, diluciones, medios sembrados o inoculados, debe ser 
informada de inmediato al docente. Se procederá a tratar el área afectada con solución desinfectante 
(ej lavandina al 10%), se dejará actuar el desinfectante y se recogerá con papel absorbente que será 
luego descartado y autoclavado. Una vez limpia la zona, será tratada finalmente con desinfectante. Si 
hubiera rotura de recipiente de vidrio, proceder de igual forma. 
El material esterilizado debe abrirse en el momento de su uso. 
Trabajar siempre con el mechero encendido (llama azul) para mantener el área de trabajo estéril. 
 
Además: Se deberá conocer la ubicación de los elementos de seguridad en el lugar de trabajo. 
Mantener los corredores y pasillos libres de obstáculos que puedan entorpecer las salidas. 
 
SE DEBE TRABAJAR CON CRITERIO Y RESPONSABILIDAD, OBSERVANDO Y CUMPLIENDO 
EN DETALLE LAS REGLAS DE TRABAJO Y LAS PAUTAS DE BIOSEGURIDAD 
PREESTABLECIDAS 
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Laboratorio de Análisis Microbiológico 
 
 Trabajo Práctico N° 1 Técnicas de coloración 
Por lo general, las bacterias y otros microorganismos son transparentes, y ello dificulta el estudio de los 
detalles morfológicos cuando se los examina en su estado natural. 
Se aconseja siempre utilizar cultivos jóvenes para los métodos de coloración de rutina, ya que las 
células viejas pierden su afinidad para la mayoría de los colorantes. Los mejores resultados se deben 
esperar de un cultivo de 24 hs. 
 
Preparación del extendido o frotis: 
Para los métodosde coloración de rutina, el primer paso lo constituye la preparación del extendido o 
frotis. 
Si la muestra o el cultivo están en un medio líquido, caldo, se recoge por medio de un ansa de platino 
con hojal, previamente calentada al rojo, y se extiende o se deposita sobre una parte de un 
portaobjeto de virio, limpio, hasta formar una película delgada. 
Si la muestra o l cultivo están sobre un medio sólido, previamente se debe suspender una gota de 
agua, con ansa de platino con hojal al rojo, sobre el portaobjetos; luego, con ansa de platino con hojal, 
previamente calentada al rojo, “picar” (tomar) una colonia en crecimiento y suspenderla en la gota de 
agua, mezclando suavemente con movimientos circulares. 
En ningún momento la mezcla o el extendido se harán enérgicamente ya que pueden destruir la 
“agrupación” o disposición características de las células, dato que es importante para la identificación. 
La gota de agua destilada puede ser reemplazada por una gota de solución fisiológica. 
 
Secado de la preparación: 
Se puede secar en posición horizontal dentro de una estufa de cultivo a 37°C, o bien dejarlo secar en el 
aire a temperatura ambiente o sobre la corriente de aire caliente suave de un mechero. 
Fijado de la preparación: 
Este paso se realiza para que las células se adhieran al portaobjetos. Se efectúa pasando la cara del 
portaobjetos que no soporta la preparación, sobre la llama del mechero para que la misma adquiera 
una temperatura de 70-80°C. Esto se logra pasando tres veces sobre la llama. Debe evitarse el 
recalentamiento pues ocasiona deformaciones celulares. 
Luego se debe dejar enfriar el portaobjetos, antes de comenzar la coloración. 
 
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Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Naturaleza de los colorantes: 
Se usan generalmente “colorantes básicos” para teñir la pared celular (componentes ácidos) y los 
elementos nucleares (ácidos) de las bacterias. 
En cambio, se usan generalmente “colorantes ácidos” para teñir el citoplasma (componentes básicos). 
 
 Coloración de Gram 
La coloración de Gram es una de las facetas más importantes de la Bacteriología. Fue elaborada por 
Hans Christian Gram en 1.884 y permite distinguir diferentes bacterias que pueden tener una 
morfología similar y dividirlas en dos grandes grupos: las grampositivas y las gramnegativas. Se cree 
que la composición química en las paredes bacterianas constituye la base de la técnica de tinción. 
Fundamento de la coloración de Gram: 
Se basa en la capacidad de algunas bacterias (grampositivas) de teñirse por los colorantes de 
pararosaanilina como el cristal violeta o violeta de metilo y, después de tratarse con yodo como 
mordiente, de retener el complejo cristal violeta-yodo (CVI) cuando se trata con la mezcla decolorante 
alcohol- acetona o éter-acetona. Las bacterias que pierden el complejo por la acción del decolorante 
son las gramnegativas y para visualizarlas se agrega un contracolor como safranina o fucsina básica. 
La mayoría de los primeros trabajos sobre el fundamento bioquímico de la tinción de Gram apuntaban 
a aislar las sustancias específicas responsables de la retención del CVI en las bacterias grampositivas. 
Ahora se sabe con seguridad que existe una amplia variedad de sustancias que retienen el CVI en cierta 
medida, entre las que se encuentran lípidos, polisacáridos, ARN, lo que indica que la grampositividad 
no puede correlacionarse con la presencia en la bacteria de una sustancia específica. 
Los trabajos recientes sugieren que el fundamento de la tinción radica en diferencias de 
“permeabilidad” entre los dos grupos. En las grampositivas parece que el CVI queda retenido en la 
pared celular después del tratamiento con el decolorante, el que tal vez determina una disminución del 
diámetro de los poros del glucopéptido o peptidoglucano de la pared celular. Las paredes de las 
gramnegativas contienen una proporción menor de glucopéptido y éste a su vez está menos 
entrecuzado. Se cree que los poros del glucopéptido en las paredes de las gramnegativas quedan lo 
suficientemente amplios, incluso después del tratamiento con el decolorante, como para permitir la 
extraccón del CVI. 
 
 
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 Trabajo Práctico N° 1 
 Observación Microscópica de Microorganismos 
Objetivos: Entrenamiento en la preparación de extendidos y realización de coloraciones. Observación 
microscópica de morfología y agrupamientos bacterianos. 
Materiales: Porta objetos, ansa, mechero, microscopio óptico. 
Sustancias: 
1) Solución de contraste: a) safranina 0,5 g b) agua destilada 100 ml 
2) Solución decolorante: etanol y acetona (50 % de cada uno) 
3) Solución de Lugol: iodo 1g, ioduro de potasio 2g, agua destilada 300 ml 
4) Solución colorante: a) cristal violeta 1g, agua destilada 100ml. 
 b) Na H CO3 1g, agua destilada 20 ml 
Mezclar a y b en el momento de su uso (10 ml de solución a más 2 ml de solución b) 
Preparación de extendidos y coloración por el método de Gram: 
1- Rotular los portaobjetos. 
2- Tomar material de la colonia elegida, con un ansa previamente esterilizada a la llama y 
suspender este material en una gota de agua colocada en la mitad del portaobjetos. Extender 
el material sobre toda la superficie del portaobjeto. 
3- Dejar secar al aire junto a la llama del mechero. 
4- Fijar con calor pasando el preparado por sobre la llama SIN QUEMARLO. 
5- Cubrir el extendido con una solución del colorante de violeta cristal. Dejar en contacto 20 
segundos. 
6- Volcar el colorante. Cubrir con solución de Lugol. Dejar en contacto durante 30 segundos. 
7- Decolorar con alcohol-acetona (exhaustivamente). Lavar con agua. 
8- Cubrir con safranina (colorante de contraste). Dejar en contacto 20 segundos. Lavar con agua. 
9- Secar. 
10- Observar al microscopio óptico con objetivo de inmersión. 
11- Se deberán reconocer las características morfológicas y de tinción. Realice el dibujo de lo 
observado. 
12- Se deberá informar el agrupamiento, morfología. Gram. 
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Trabajo Práctico N° 2 
Recuento Total de Bacterias Aeróbias Mesófilas 
Marco teórico 
Prueba de la existencia de microorganismos es el crecimiento en sustancias alimenticias artificiales 
preparadas en el laboratorio. Este material se denomina MEDIO DE CULTIVO. Y el crecimiento de los 
microorganismos CULTIVO. 
Para que las bacterias se desarrollen es necesario elegir un medio de cultivo adecuado. 
La condiciones a tener en cuenta en un medio de cultivo son varias: temperatura, grado de humedad, 
presión de oxígeno, grado de acidez o alcalinidad, nutrientes y factores de crecimiento. Y debe de 
estar estéril o sea, no debe contener ningún tipo de microorganismo. 
Se pueden clasificar por su aspecto en: sólidos, semisólidos y líquidos. Y pueden ser clasificados por 
su uso en básicos y especiales y dentro de éstos, en mejorados, selectivos, diferenciales y de 
transporte. 
Muchas de las bacterias requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos 
orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de 
extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El Agar es un elemento 
solidificante muyempleado para la preparación de medios de cultivo. En los diferentes medios de 
cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, 
sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para 
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los 
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover 
el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. 
 
Clasificación de los medios de cultivo: 
Para el aislamiento, estudio y clasificación de los microorganismos, es necesario utilizar un medio de 
cultivo e el que dispongan de las sustancias orgánicas e inorgánicas necesarias indispensables para el 
normal desarrollo de su metabolismo. 
En estos medios, los microorganismos además de poder multiplicarse, pueden manifestar 
características de crecimiento y propiedades bioquímicas, aspectos de gran importancia para su 
clasificación. Estos preparados estériles que poseen los elementos necesarios para el desarrollo de un 
microorganismo, se denominan medios de cultivos y pueden dividirse por su: 
A) Aspecto: 
Medios líquidos. Se emplean fundamentalmente para:- Cultivar los microorganismos y obtener 
grandes cantidades de los mismos o bien la producción de metabolitos específicos La 
multiplicación bacteriana en los medios de cultivos líquidos se manifiesta generalmente por el 
enturbiamiento de éste. Estimular y promover la selección de algún o algunos microorganismos 
e impedir que otros se multipliquen.- Identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas 
bioquímicas. 
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Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Medios semisólidos.- Se utilizan para identificaciones bioquímicas y averiguar si el germen 
estudiado es móvil. Los medios semisólidos tienen una consistencia blanda. 
 Medios sólidos.- Se utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. Los medios 
sólidos constituyen la mayor parte de los medios de cultivo que se emplean en Microbiología. En 
los medios de cultivos sólidos la multiplicación bacteriana se manifiesta por una formación 
macroscópica denominada colonia bacteriana, que es el resultado de la multiplicación de una sola 
célula bacteriana. 
 
B) USO 
I) Medios de cultivos básicos. Se caracterizan por ser pobres en material nutritivo, de manera que 
su uso es muy restringido, constituyen la base para la preparación de otros medios. Como ejemplo 
pueden citarse el caldo peptonado y el Agar-Agar corriente. 
II) Medios de cultivos especiales. Entre estos se encuentran: 
a) Medios mejorados. En general son los mismos medios básicos a los que se les agrega una 
sustancia enriquecedora como sangre, suero, etc. El uso de estos medios es universal y está orientado 
especialmente a obtener buen desarrollo de cualquier tipo de bacteria, se utilizan en primera instancia 
en el aislamiento bacteriano, ya sea a partir de otros cultivos o de productos patológicos. Los medios 
de este tipo de uso más frecuente son: Agar para recuento total, Agar tripticasa-sangre, caldo 
tripticasa, Agar chocolate, medio de Mueller-Hinton. 
b) Medios selectivos. Son medios que contienen sustancias que impiden o limitan el crecimiento de 
algunas especies microbianas y permiten el desarrollo de otras. Consiste en aislar un microorganismo 
de un sustrato que contiene numerosas otras especies. Se incluyen en este grupo el agar cristal violeta 
para el aislamiento de bacterias Gram (-) y el agar telurito de potasio para el aislamiento de bacterias 
Gram (+). 
c) Medios de cultivos diferenciales. Se emplean para demostrar alguna propiedad bioquímica de la 
bacteria como degradación de hidratos de carbono, proteínas, hidrólisis de la urea, etc., contienen 
indicadores de ácido base, redox o sustancias que detectan cambios en el medio o en las 
características típicas de las colonias el estudio en estos medios debe realizarse empleando cepas 
bacterianas puras. Existen numerosos medios de este tipo, de uso preferencial en la bioidentificación 
de bacilos Gram (-) ya que ellos no tienen características muy distintivas en las colonias o cultivos en 
general. Entre los de uso más corriente se encuentran: Agar hierro-triple-azúcar (TSI agar Medio de 
SIM, Caldo glucosado, fosfatado, Voges-Proskauer o del rojo de metilo, Medio agar-citrato de sodio 
(Medio de Simmons- Medio caldo urea. 
d) Medios de transporte. Sirven para transportar los especimenes que contienen a los 
microorganismos, del sitio de la toma del producto hasta el laboratorio donde va a efectuarse el 
estudio. Estos medios impiden que se altere la proporción original de la flora microbiana en los 
especimenes. 
 
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Laboratorio de Análisis Microbiológico 
La población microbiana 
La población microbiana existente en nuestro entorno es grande y compleja. Cientos de especies 
microbianas habitan normalmente en distintas partes de nuestro cuerpo, incluidas la boca, el tracto 
intestinal y la piel. Al nacer, los microbios inmediatamente empiezan a colonizar nuestros cuerpos, así 
como a casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan alrededor hasta que entran en contacto con una 
superficie que ofrezca comida y resguardo. Se encuentran más frecuentemente en la oscuridad, en 
objetos húmedos que a menudo entran en contacto con la comida, la suciedad o la vegetación. Las 
superficies del baño, los cepillos para el cabello, los refrigeradores, los lavaplatos y las tablas de 
cocina tienen a menudo muchos microbios. Las manijas y las paredes tienen menos porque son 
pobres en nutrientes y secos. 
Un estudio adecuado de microorganismos que hay en estos hábitat requiere técnicas que permitan 
conocer y ordenar la compleja población mixta o cultivo mixto, separándole en sus distintas especies 
como cultivos puros. Un cultivo puro consta de una población de células derivadas todas ellas de una 
célula parental. Los microorganismos se cultivan en el laboratorio sobre materiales nutritivos 
denominados medios. Se dispone de una gran cantidad de medios y la clase que se debe de utilizar 
depende de muchos factores, uno de los cuales es la clase de microorganismos que se va a cultivar. 
El material que se inocula sobre el medio se denomina inóculo mediante alguna técnica (siembra por 
estría en placa o siembra en masa en placa). Durante la incubación a 37:C , las células microbianas 
individuales se reproducen tan rápidamente que en un lapso de 18 a 24 horas producen masas visibles 
de células denominadas colonias. Una colonia es visible a simple vista. Cada colonia diferente es 
presumiblemente un cultivo puro de una sola clase de microorganismo. Si dos células microbianas 
procedentes del inóculo original quedan muy cerca una de otra sobre el medio de Agar, la masa de 
células observables no será un cultivo puro. La mayoría de los microbios en nuestro cuerpo y otras 
superficies son inofensivas, pero algunos son patógenos o causan enfermedad. Por esta razón, 
queremos controlar el número de microbios que nos rodea. La posibilidad de infectarnos aumenta con 
el número de microbios en los objetos circundantes. 
1. ALCANCE 
Preparar un medio de cultivo sólido para efectuar recuento total de bacterias aerobias mesófilas. 
 
2. REFERENCIAS 
IDF (Iternational Dairy Federation) 
AOAC (Asssociation of oficial analytical chemists) 
Manual de Microbiología de la Universidad Nacional de Luján 
ICMSF International Commission on Microbiological Specifications for Foods 
 
3. DEFINICION 
Bacteria que forman colonias que pueden contarse en las condiciones especificadas. 
4. PRINCIPIO 
4.1 Preparar placas utilizando agar pararecuento total utilizando una muestra líquida y una muestra de 
aire. 
4.2 Incubar las placas a 37 ºC durante 48 Hs. 
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4.3 Calcular la cantidad de microorganismos presentes en la muestras. 
 
5. MEDIO DE CULTIVO 
Agar para recuento Total = PCA (Plate Count Agar) =Agar peptona de caseína-glucosa-extracto de 
levadura. 
Composición: Peptona de caseína 5.0; extracto de levadura 2.5; D(+) glucosa1.0:; Agar-agar 14.0. 
Preparación: 
a) Leer las instrucciones del fabricante y pesar la cantidad necesaria según el volumen de medio 
de cultivo requerido. 
b) Tener en cuenta que el frasco no debe contener mas de un 80 % de su volumen total en medio 
de cultivo porque si se excede este volumen el medio se volcará del recipiente, al esterilizarlo. 
c) Hidratar el medio en agua destilada agitando suavemente el recipiente durante 30 segundos. 
Dejar por espacio de 15 minutos hasta su total hidratación. 
d) Colocar el medio de cultivo a baño maría hirviente para lograr su disolución. 
e) Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos, a menos que se indique otra cosa. 
f) Si ha de utilizarse después de esterilizado mantener en BM a 45ºC hasta el momento de su 
utilización. 
 
 
6. MATERIAL DE VIDRIO, PLASTICO OTROS 
6.1. Frasco para medio de cultivo 
6.2. Si no se dispone de 1. utilizar erlenmayer con tapón de algodón y gasa. 
6.3. Espátula cuchara. 
6.4. Recipiente para baño maría hirviente = BM (dónde se colocará el frasco con medio de cultivo) 
6.5. Autoclave u olla a presión. 
6.6. Placas de petri. Si son de vidrio deben estar correctamente empaquetadas y estériles. Sino 
pueden utilizarse placas de petri estériles descartables. 
6.7. Pipetas estériles descartables o de vidrio uso serológico de 1 ml. 
6.8. Recipiente con agua lavandina para descartar las pipetas una vez utilizadas 
6.9. Algodón. 
6.10. Alcohol. 
 
7. MUESTRA 
Muestra de agua o bebida y aire ambiente. 
8. PROCEDIMIENTO para la muestra líquida. 
El siguiente procedimiento debe efectuarse bajo mechero y en forma aséptica 
8.1 Tome una placa de petri estéril. Transfiera 1 ml de muestra con pipeta estéril dentro de la 
placa. 
8.2 Coloque dentro de la placa 10 a 15 ml de medio de cultivo (PCA) dentro de la placa. 
8.3 Cuidadosamente mezcle por rotación el medio de cultivo con el inóculo. 
8.4 Deje la placa en la superficie horizontal hasta que el medio solidifique. 
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8.5 Invierta la placa y coloque en la incubadora a 37 +/- 1ºC por espacio de 48 Hs. 
8.6 Transcurrido el lapso de tiempo cuenta la colonias (sin abrir la placa) e informe 
UFC/ml = Unidades formadoras de colonias por ml de muestra. 
9. PROCEDIMIENTO para la muestra de aire. 
El siguiente procedimiento debe efectuarse en forma aséptica 
9.1 Coloque dentro de la placa 10 a 15 ml de medio de cultivo (PCA) dentro de la placa. 
9.2 Deje la placa en la superficie horizontal hasta que el medio solidifique. 
9.3 Abra la placa y déjela expuesta al ambiente por espacio de 15 minutos. Ciérrela. 
9.4 Invierta la placa y coloque en la incubadora a 37 +/- 1ºC por espacio de 48 Hs. 
9.5 Transcurrido el lapso de tiempo cuenta la colonias (sin abrir la placa) e informe 
UFC/15 min. = Unidades formadoras de colonias/15 minutos. 
10. EXPRESION DE LOS RESULTADOS 
Elabore un protocolo de resultados de análisis conforme al modelo (ver ANEXO 1) 
 
 
11. CUESTIONARIO 
Responda el cuestionario en forma clara y precisa para ser entregado a su Profesor junto con el 
protocolo de análisis que efectuó. Una copia por grupo. 
1. ¿Qué es un medio de cultivo? 
¿Qué es un cultivo de microorganismo? 
2. ¿Qué finalidad tiene utilizar medios de cultivo sólidos? 
3. Escribe el nombre de 5 medios de cultivo que pueden ser empleados en el laboratorio de 
microbiología. 
4. ¿De dónde es obtenido el extracto Agar- Agar para la preparación de medios de cultivos? 
5. ¿Por qué es necesario esterilizar la mesa entes de realizar el vaciado del medio de cultivo en 
las cajas de petri? 
6. ¿Por qué la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y 
Peptona? 
7. Escribe la composición química para cada medio de cultivo que utilizaste 
8. ¿Qué tipo de nutrientes requieren los microorganismos para poder crecer en un medio de 
cultivo? 
9. ¿Cómo nos podemos dar cuenta que existió crecimiento de microorganismos en un medio 
líquido? 
10. ¿Cómo se manifiesta el crecimiento de los microorganismos en un medio de cultivo sólido? 
11. ¿Cuál es el elemento principal del medio de cultivo que favorece su solidificación? 
12. ¿Qué finalidad tiene guardar invertidos los medios de cultivo ya preparados en las cajas de 
petri en el refrigerador o en la estufa de incubación? 
 
 
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 ANEXO 1 
 
Protocolo Nº Fecha: 
 
Fecha de análisis: 
 
Solicitante: 
 
Muestra: 
 
Marca: 
 
Contenido neto: Estado de conservación: 
 
Fecha: 
 
Muestra extraída por: Cantidad de muestra: 
 
 
Análisis Microbiológico 
 
Tipo de análisis Resultados Norma Valores 
permitidos 
Metodología 
Recuento total de Bacterias 
aerobias totales mesófilas 
 
Observaciones: 
 
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Nombre de los integrantes del grupo 
 
Trabajo Práctico N° 3 
 Sustancias Antimicrobianas 
 
ANTI MICROBIANOS 
Son sustancias que impiden el desarrollo y la multiplicación o provocan la destrucción (muerte) 
de los microorganismos y pueden actuar sobre estructuras físicas indispensables de las células o 
sobre una o mas etapas metabólicas. 
Podemos dividir este tipo de sustancias en: 
MICROBIOSTÁTICAS aquellas que previenen el crecimiento, haciendo cero la velocidad de 
crecimiento y no arriesgan la viabilidad del microorganismo 
MICROBICIDAS: también previenen el crecimiento, haciendo cero la velocidad de crecimiento 
pero disminuyen la viabilidad del microorganismo y pueden producir su muerte. 
Son utilizados para con fines: 
1. Terapéuticos. 
2. Criterio taxonómico. 
3. Desinfección. 
4. Investigación básica. 
5. Conservadores. 
 
En general cualquier sustancia más o menos eficiente sirve para desinfección. Pero no 
cualquiera sirve con fines terapéuticos o como conservador. Esta últimas deben cumplir con el 
requisito de TOXICIDAD SELECTIVA. Lo que consiste en que el antimicrobiano sea tóxico para el 
microorganismo pero no para el huésped. 
Los conservadores son distintas sustancias con actividad microbiostática o microbicida, que solo 
se justifica cuando el producto dónde se lo utilizará es muy riesgosos en el sentido que permita una 
gran proliferación microbiana en las condiciones normales de almacenamiento o uso. Pero de ninguna 
manera es aceptado para enmascarar una mala fabricación. 
 
ANTIBIÓTICOS 
 
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Son sustancias capaces de destruir y eliminar los microorganismos causantes de una infección 
producida por bacterias (faringitis,bronquitis, otitis, neumonía, amigdalitis, etc). No son eficaces 
cuando la infección es producida por virus (gripe). 
Cada tipo de antibiótico será efectivo para destruir una clase de microorganismos en función de su 
modo de actuación. 
Se les llama antibióticos de amplio espectro a los que son efectivos frente a un gran número de 
agentes microbianos: los microorganismos causantes de la infección son capaces de desarrollar 
resistencias al antibiótico de manera que este no será eficaz para eliminarlos. 
Cada año se investiga creando nuevos antibióticos eficaces para las formas microbianas 
resistentes a sus anteriores tratamientos. Se deben usar siempre bajo prescripción médica. 
 Existen pruebas (antibiogramas) que determinan el antibiótico más eficaz para cada infección, 
pero normalmente se sigue un protocolo de actuación de los antibióticos de elección para cada tipo de 
infección. 
Es el médico el profesional que juzga la infección existente y el antibiótico eficaz para su 
tratamiento. 
Los antibióticos siempre se deben tomar bajo prescripción médica y cumplir el tratamiento 
completo. El incumplimiento del tratamiento puede dar lugar a recaídas que precisarán el tratamiento 
con otro tipo de antibiótico por haber desarrollado resistencia al primero. 
Modo de acción de los antibióticos 
1. Inhibición de la síntesis de la pared celular. 
2. Alteración sobre la membrana citoplásmica. 
3. Inhibición de la síntesis proteica. 
4. Bloqueo de la síntesis de los ácidos nucleicos. 
 
Trabajo Práctico: 
1 ALCANCE 
Determinar la eficiencia de un agente antimicrobiano en una superficie. 
2 REFERENCIAS 
Manual de Microbiología de la Universidad Nacional de Luján. 
3 DEFINICION 
Antimicrobiano sustancia capaz de provocar la inhibición o la muerte microbiana. 
4 PRINCIPIO 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
4.1 Preparar una solución antimicrobiana. 
4.2 Someter al ensayo una muestra para evaluar la efectividad de la sustancia antimicrobiana. 
 
5 MEDIO DE CULTIVO – SUSTANCIA ANTIMICROBIANA 
5.1 Agar para recuento Total = PCA (Plate Count Agar) =Agar peptona de caseína-glucosa-extracto de 
levadura. 
Composición (g/l): Peptona de caseína 5.0; extracto de levadura 2.5; D(+) glucosa1.0:; Agar-agar 14.0. 
Preparación: 
g) Leer las instrucciones del fabricante y pesar la cantidad necesaria según el volumen de medio 
de cultivo requerido. 
h) Tener en cuenta que el frasco no debe contener mas de un 80 % de su volumen total en medio 
de cultivo porque si se excede este volumen el medio se volcará del recipiente, al esterilizarlo. 
i) Hidratar el medio en agua destilada agitando suavemente el recipiente durante 30 segundos. 
Dejar por espacio de 15 minutos hasta su total hidratación. 
j) Colocar el medio de cultivo a baño maría hirviente para lograr su disolución. 
k) Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos, a menos que se indique otra cosa. 
l) Si ha de utilizarse después de esterilizado mantener en BM a 45ºC hasta el momento de su 
utilización. 
 
5.2 Agar McConkey 
 
Composición (g/l) Peptona de caseína 17.0; peptona de carne 3,0; cloruro de sodio 5,0; lactosa 10,0; 
mezcla de sales biliares 1,5; Rojo neutro 0,03; Violeta cristal 0,001; Agar agar 13,5. 
Preparación: 
a) Leer las instrucciones del fabricante y pesar la cantidad necesaria según el volumen de medio 
de cultivo requerido. 
b) Tener en cuenta que el frasco no debe contener mas de un 80 % de su volumen total en medio 
de cultivo porque si se excede este volumen el medio se volcará del recipiente, al esterilizarlo. 
c) Hidratar el medio en agua destilada agitando suavemente el recipiente durante 30 segundos. 
Dejar por espacio de 15 minutos hasta su total hidratación. 
d) Colocar el medio de cultivo a baño maría hirviente para lograr su disolución. 
e) Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos, a menos que se indique otra cosa. 
f) Si ha de utilizarse después de esterilizado mantener en BM a 45ºC hasta el momento de su 
utilización. 
 
 
5.3. Solución fisiológica en tubos para dilución. 
 Composición: Cloruro de sodio 0.85; agua destilada 100 ml. 
Preparación: Disolver 1.7 g de cloruro de sodio en 200 ml de agua destilada. 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Distibuir 10 ml en tubos de ensayo (6.4). Tapar con tapón uso bacteriológico ó tapón de algodón. 
Armar paquetes de 5 tubos, atarlos con banda elástica. Cubrirlos con papel blanco y atarlos 
nuevamente con banda elástica. Colocar en un canasto o una lata para evitar que se derramen en el 
autoclave. 
Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. 
5.3 Sustancia antimicrobiana: hipoclorito de sodio. 
Preparar una solución que contenga 200 p.p.m de Cl 
 
6 MATERIAL DE VIDRIO, PLASTICO OTROS 
6.11. Frasco para medio de cultivo. 
6.12. Si no se dispone de 1. utilizar erlenmayer con tapón de algodón y gasa. 
6.13. Tubos de ensayo vacios con sus tapones uso bacteriológico estériles. 
6.14. Tubos de ensayo vacios con sus tapones uso bacteriológico. 
6.15. Espátula cuchara. 
6.16. Recipiente para baño maría hirviente = BM (dónde se colocará el frasco con medio de cultivo) 
6.17. Autoclave u olla a presión. 
6.18. Placas de petri. Si son de vidrio deben estar correctamente empaquetadas y estériles. Sino 
pueden utilizarse placas de petri estériles descartables. 
6.19. Pipetas estériles descartables o de vidrio uso serológico de 5 ml. 
6.20. Pipetas estériles descartables o de vidrio uso serológico de 1 ml. 
6.21. Recipiente con agua lavandina para descartar las pipetas una vez utilizadas 
6.22. Algodón. 
6.23. Alcohol. 
6.24. Papel blanco. 
6.25. Bandas elásticas. 
7 MUESTRA 
Muestra: Hisopado de superficie de 100 cm2 
8 PROCEDIMIENTO 
El siguiente procedimiento debe efectuarse bajo mechero y en forma aséptica 
8.1 Tome un tubo de dilución (con 10 ml de solución fisiológica estéril) 
8.2 Coloque la muestra (7) dentro del tubo (8.1) 
8.3 Cuidadosamente mezcle por rotación el contenido de (8.2). 
8.4 Tome 5 ml con pipeta estéril y trasfiera a un tubo vacío (6.3) 
8.5 Coloque 2 gotas de solución de hipoclorito de sodio (5.3) en el tubo conteniendo la muestra 
(8.2). Deje actuar 15 minutos. 
8.6 Tome con pipeta estéril 1 ml (6.10) del tubo con la muestra (8.2) y colóquelo en una placa 
estéril (6.8).Repita la operación en una segunda placa. 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
8.7 Repita la operación 8.6 pero utilizando el tubo donde colocó la solución antimicrobiana (8.5). 
Repita la operación en una segunda placa. 
8.8 Vuelque en una placa de petri (8.6) y en una (8.7) 10 ml de medio de cultivo (5.1). Dejar 
solidificar en forma horizontal. 
8.9 Repita la operación 8.8 con medio de cultivo (5.2). Dejar solidificar en forma horizontal. 
8.9 Invierta las placa y coloque en la incubadora a 35 +/- 1ºC 
8.11 Incubar las placas 8.8 por espacio de 48 Hs. Transcurrido el lapso de tiempo contar todas las 
colonias (sin abrir la placa) e informe Recuento total de aerobios mesófilos/100 cm2. 
 8.12 Incubar las placas 8.9 por espacio de 24 Hs. Transcurrido el lapso de tiempo contar las 
colonias grandes, mucosas o no, rojas o rosadas con o sin halos de precipitación (sin abrir la 
placa) e informe Recuento total de Coliformes/ 100cm2 
 
UFC/ml = Unidades formadoras de colonias por ml de muestra. 
10 EXPRESION DE LOS RESULTADOS 
Elabore un protocolo de resultados de análisis conforme al modelo (ver ANEXO 1) 
 
 
11 CUESTIONARIO 
 
Responda el cuestionario en forma clara y precisa para ser entregado a su Profesor junto con el 
protocolo de análisis que efectuó.Una copia por grupo. 
 
1.- Defina antimicrobiano 
2.-Defina antibiótico. 
3.- Cite algunos ejemplos de sustancias desinfectantes que pudieron haber sido evaluadas en este 
práctico. 
4.- ¿Qué tipo de medio es el Agar McConkey? 
5.- ¿Por qué es necesario esperar quince minutos, antes de sembrar la muestra. 
6.- ¿Qué tipo de sustancias son las sales biliares, cristal violeta, rojo neutro y la lactosa? 
7.- Escribe la composición química para cada medio de cultivo que utilizaste 
8.- ¿Qué tipo de nutrientes requieren las bacterias coliformes para diferenciarlas del resto? 
9.- ¿Por qué se espera que en el Agar McConkey crezcan solo Coliformes? 
10.- ¿Detectó en la placas de Agar McConkey crecimiento de otro tipo de microorganismos que no 
fueran los especificados? 
11.- ¿Cuál es la función de la Lactosa en el Agar McConkey? 
 12.- ¿Si hubiera detectado en el Agar McConkey colonias incoloras qué debería interpretar al 
respecto? 
 
 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
 
ANEXO 1 
Protocolo Nº Fecha: 
 
Fecha de análisis: 
 
Solicitante: 
 
Muestra: 
 
Estado de conservación: 
 
Fecha: 
 
Muestra extraída por: Cantidad de muestra: 
 
 
Análisis Microbiológico 
 
Tipo de análisis Resultados Norma Valores 
permitidos 
Metodología 
Recuento total de Bacterias 
aerobias totales mesófilas 
 UFC/cm2 
Recuento total de coliformes UFC/cm2 
Observaciones: 
Nombre de los integrantes del grupo 
 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
 
TRABAJO PRÁCTICO N° 4 
Título de levaduras en levadura prensada uso institucional 
 
Marco Teórico: ver apuntes adicionales Microbiología de los Alimentos W.C.Frasier 
1. ALCANCE 
Establecer la cantidad de levaduras en una muestra de levadura prensada utilizada en la industria de 
alimentos 
2. REFERENCIAS 
Manual de Microbiología de la Universidad Nacional de Luján 
ICMSF International Commission on Microbiological Specifications for Foods 
3. DEFINICION 
Levaduras que pueden contarse en las condiciones especificadas. 
4. PRINCIPIO 
4.1 Preparar placas de agar para hongos y levaduras y enumerar la cantidad de levaduras por g de 
alimento. 
4.2 Incubar las placas temperatura ambiente 5 días. 
4.3 Calcular la cantidad de microorganismos presentes en la muestras. 
 
5. MEDIO DE CULTIVO 
5.1 Agar extracto de levadura – glucosa – cloranfenicol = YGC (Yeast extract glucose chloramphenicol 
agar)) 
Composición (g/l): Extracto de levadura 5.0; D(+) glucosa20; cloranfenicol - Agar-agar 14.9. 
Preparación: 
a) Leer las instrucciones del fabricante y pesar la cantidad necesaria según el volumen de medio 
de cultivo requerido. 
b) Tener en cuenta que el frasco no debe contener mas de un 80 % de su volumen total en medio 
de cultivo porque si se excede este volumen el medio se volcará del recipiente al esterilizarlo. 
c) Hidratar el medio en agua destilada agitando suavemente el recipiente durante 30 segundos. 
Dejar por 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
 espacio de 15 minutos hasta su total hidratación. 
d) Colocar el medio de cultivo a baño maría hirviente para lograr su disolución. 
e) Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos, a menos que se indique otra cosa. 
f) Si ha de utilizarse después de esterilizado mantener en BM a 45ºC hasta el momento de su 
utilización. 
 
5.2 Agua de peptona tamponada (para ser utilizado en las diluciones del material a investigar) 
 
Composición (g/l): Peptona 10,0 g; cloruro de sodio 5,0; tampón de fosfato 10,0 g 
 
Preparación: 
a) Pesar en proporción de 2 g/l y preparar la cantidad necesaria según el volumen de medio de 
disolución. 
b) Tener en cuenta que el frasco no debe contener mas de un 80 % de su volumen total en medio 
de cultivo porque si se excede este volumen el medio se volcará del recipiente, al esterilizarlo. 
c) Hidratar el medio en agua destilada agitando suavemente el recipiente durante 30 segundos. 
Dejar por espacio de 15 minutos hasta su total hidratación. 
d) Distribuir en porciones de 9 ml por tubo. La cantidad de tubos que sean necesarios. Y distribuir 
90 ml en frascos o erlenmayer. La cantidad de tubos que sean necesarios 
e) Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos, a menos que se indique otra cosa. 
 
 
6 MATERIAL DE VIDRIO, PLASTICO OTROS 
6.1. Frasco para medio de cultivo 
6.2 Si no se dispone de 1. utilizar erlenmayer con tapón de algodón y gasa. 
6.3 Espátula cuchara. 
6.4 Recipiente para baño maría hirviente = BM (dónde se colocará el frasco con medio de cultivo) 
6.5 Autoclave u olla a presión. 
6.6 Placas de petri. Si son de vidrio deben estar correctamente empaquetadas y estériles. Si no 
pueden utilizarse placas de petri estériles descartables. 
6.7 Pipetas estériles descartables o de vidrio uso serológico de 1 ml. 
6.8 Recipiente con agua lavandina para descartar las pipetas una vez utilizadas 
6.9 Algodón. 
6.10 Alcohol. 
6.11 Tubos de ensayo y sus correspondientes tapones plásticos. 
7. MUESTRA 
Muestra levadura prensada. 
8. PROCEDIMIENTO. 
El siguiente procedimiento debe efectuarse bajo mechero y en forma aséptica 
8.1 coloque en forma aséptica 10 g de muestra en 90 ml agua peptonada buferada. 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
8.2 Deje por espacio de 15 minutos que se recupere la muestra. Esta corresponde a la dilución 10-
1. 
8.3 Con pipeta de 1 ml ó de 2 ml tome una alícuota de 1 ml y colóquela en un tubo de dilución 
(agua peptonada con 9 ml). Esto corresponde a la dilución 10-2. 
8.3 Efectúe el mismo procedimiento para dos diluciones subsiguientes 10-3 y 10-4. 
8.4 Tome 2 mlde la dilución 10-4 y vuelque 1 ml en otro tubo de dilución (que corresponderá a la 
dilución 10-5) y 1 ml en una placa de Petri estéril. 
8.5 Continúe de la misma manera que en 8.4 hasta llegar a la dilución 10-10. 
8.2 Vuelque dentro de las placa 10 a 15 ml de medio de cultivo (YGC) 
8.3 Cuidadosamente mezcle por rotación el medio de cultivo con el inóculo. 
8.4 Deje la placa en la superficie horizontal hasta que el medio solidifique. 
8.5 Invierta la placa y deje a temperatura ambiente por espaci de 5 días. 
8.6 Transcurrido el lapso de tiempo cuenta la colonias (sin abrir la placa) e informe 
UFC/g = Unidades formadoras de colonias por g de muestra. 
9 EXPRESION DE LOS RESULTADOS 
Elabore un protocolo de resultados de análisis conforme al modelo (ver ANEXO 1) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
 
ANEXO 1 
 
Protocolo Nº Fecha: 
 
Fecha de análisis: 
 
Solicitante: 
 
Muestra: 
 
Marca: 
 
Contenido neto: Estado de conservación: 
 
Fecha: 
 
Muestra extraída por: Cantidad de muestra: 
 
 
Análisis Microbiológico 
 
Tipo de análisis Resultados Norma 
Criterios 
recomendado
s 
Metodología 
Recuento total de Bacterias 
aerobias totales mesófilas 
 UFC/g (1) 
Mín 10 
10 
UFC/g 
ICSMF 
(1) No existen especificaciones.Observaciones: 
 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
TRABAJO PRÁCTICO N°5 
ANALISIS BACTERIOLÓGICO DE AGUAS 
 
Objetivo: Realizar el análisis de aguas determinando bacterias aeróbias mesofilas y coliformes. 
TOMA DE LA MUESTRA 
1) Cuando se trata de agua corriente, como contiene de 1 a 2 PPM de cloro se debe agregar unos 
cristales de tiosulfato de sodio. Para sacar la muestra de la canilla se debe limpiar el grifo con 
alcohol al 70% utilizando algodón. Dejar secar. 
2) Flamear el interior del grifo con un encendedor. 
3) Dejar correr el agua durante 5 minutos. 
4) Repetir el flameado y dejar correr agua nuevamente. 
5) Llenar el frasco estéril y analizar lo más rápidamente posible teniendo en cuenta la 
multiplicación bacteriana. 
RECUENTO DE MESOFILAS 
1) Sembrar una placa con 1 ml de muestra. 
2) Sembrar una segunda placa con 0,1 ml de muestra. 
3) En cada placa anterior volcar 10 ml de agar para recuento en placa (PCA) fundido y atemperado a 
42 – 45ºC. 
4) Homogeneizar rotando las placas en forma de ochos. Dejar solidificar en mesada. 
5) Incubar en estufa a 37°C durante 48 hs. 
6) Contar las colonias. 
7) Expresar en UFC/ml. 
CALDO SELECTIVOS Y DIFERENCIALES PARA COLIFORMES. Caldo Mac Conkey 
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones 
 Bilis de buey 5.0 
Suspender 35 g de polvo por litro de agua destilada. 
Disolver y distribuir 10 ml por tubo con campanita de 
Durham. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 
minutos. 
 Peptona 20.0 
 Lactosa 10.0 
 Púrpura de bromocresol 0.01 
pH final: 7.3 ± 0.2 
 
El indicador es el púrpura de bromocresol. Será + cuando vire del violeta al amarillo turbio y halla 
presencia de gas en la campanita invertida de Durhain. Esto indica la presencia de coliformes. 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Por la Técnica del Numero mas probable NMP 
De doble concentración: Se siembran 3 tubos con 10 ml de muestra en 10 ml de caldo Mac Conkey 
De simple concentración: Se siembran 3 tubos con 1 ml de muestra cada uno y 3 tubos con 0.1 ml en 
cada uno con 10 ml de caldo Mac Conkey. 
Se incuba durante 24 a 48 Hs. A 37 ºC 
Contar los tubos positivos y referir a tabla. 
De cada tubo positivo a 37°C se pasa con ansa con rulo a un tubo con caldo Brilla de simple 
concentración. Y se incuba de 24 a 48 hs a 44°C. Si dan positivos indica presunción de Escherichia 
Coli. 
Tener en cuenta que para que el agua sea potable debe contener menos de 3 coliformes/ 100 ml 
Tabla de NMP y límites de confianza (95 %), para varias combinaciones de resultados positivos y negativos, cuando se 
siembran tres porciones de 0.1 g ó 10 ml, 
tres de 0.01 g ó 1 ml y tres de 0.001 g ó 0.1 ml 
Tubos que dan reacción positiva NMPx 
g/x 100 
ml 
Limite de 
confianza 
Tubos que dan reacción positiva NMPx 
g/x 100 
ml 
Limite de 
confianza 
0.10 g /10 
ml 
0.01g/1 
ml 
0.001g/0.1 
ml 
Bajo Alto 
0.10 g /10 
ml 
0.01g/1 
ml 
0.001g/0.1 
ml 
Bajo Alto 
0 0 0 <3.0 -- 9.5 2 2 0 21 4.5 42 
0 0 1 3.0 0.15 9.6 2 2 1 28 8.7 94 
0 1 0 3.0 0.15 11 2 2 2 35 8.7 94 
0 1 1 6.1 1.2 18 2 3 0 29 8.7 94 
0 2 0 6.2 1.2 18 2 3 1 36 8.7 94 
0 3 0 9.4 3.6 38 3 0 0 23 4.6 94 
1 0 0 3.6 0.17 18 3 0 1 38 8.7 110 
1 0 1 7.2 1.3 18 3 0 2 64 17 180 
1 0 2 11 3.6 38 3 1 0 43 9 180 
1 1 0 7.4 1.3 20 3 1 1 75 17 200 
1 1 1 11 3.6 38 3 1 2 120 37 420 
1 2 0 11 3.6 42 3 1 3 160 40 420 
1 2 1 15 4.5 42 3 2 0 93 18 420 
1 3 0 16 4.5 42 3 2 1 150 37 420 
2 0 0 9.2 1.4 38 3 2 2 210 40 430 
2 0 1 14 3.6 42 3 2 3 290 90 1,000 
2 0 2 20 4.5 42 3 3 0 240 42 1,000 
2 1 0 15 3.7 42 3 3 1 460 90 2,000 
2 1 1 20 4.5 42 3 3 2 1100 180 4,100 
2 1 2 27 8.7 94 3 3 3 >1100 420 -- 
 
 
 
 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Trabajo Práctico N°6 
 Análisis microbiológico de queso 
Para la realización de este TP solo disponemos de los medios de cultivo para efectuar Recuento total de 
aerobios, Coliformes y Hongos y Levaduras. 
Procedimiento: 
1. Para la determinación de Coliformes se utilizará Caldo Mc Conkey. A los efectos del cálculo 
deberá tener en cuenta que necesita 12 tubos con 10 ml de caldo por muestra con campana de 
Durham. 
2. Para la determinación de Coliformes fecales se utilizará Caldo Brilla. A los efectos del cálculo 
deberá tener en cuenta que necesita 12 tubos con 10 ml de caldo por muestra con campana de 
Durham. 
3. Seleccione y calcule la cantidad de medio requerido para cada determinación. 
4. Calcule la cantidad de placas, tubos, pipetas requeridas. Para lo que deberá considerar cuántas 
diluciones requiere. 
5. Considere los materiales auxiliares que necesita para efectuar los análisis. 
6. Efectúe un informe por escrito, para que el profesor le indique si ha hecho los cálculos correctos. 
7. Esquematice en un gráfico, la forma en que efectuará la siembra partiendo de 10 g de muestra. 
8. Concluido el TP informe según modelo de protocolo abajo. 
Nº de grupo: Integrantes: Fecha: 
 
Muestra: Queso muzzarella 
Identificación del lote o fecha del producto: 
Análisis Microbiológico 
Tipo de análisis Resultados Norma 
Criterios de 
aceptación 
Metodología 
Coliformes a 30ºC /g NMP/g 
C.A.A. 
Arts.618 
n= 5 c=2 m=1000 
M= 5000 
FIL 73 A: 1985 
Coliformes a 45ºC/g NMP/g 
C.A.A. Arts. 
618 
n= 5 c=2 m=100 
M=500 
 
APHA 1992 
Cap. 24 (1) 
 
Estafilococos coag. pos. 
UFC/g 
 UFC/g 
C.A.A. 
Arts.618 
n= 5 c=2 m=100 
M=1000 
FIL 145: 1990 
Salmonella spp. en 25 g en 25 g 
C.A.A. 
Arts.618 
n= 5 c= 0 
m = 0 
FIl 93A:1985 
Listeria monocytogenes 
en 25 g 
 en 25 g 
C.A.A. 
Arts.618 
n=5 c= 0 
m = 0 
FIL143:1990 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Trabajo Práctico N°7 
 Análisis microbiológico de hamburguesa 
Para la realización de este TP solo disponemos de los medios de cultivo para efectuar Recuento total de 
aerobios, Coliformes y Hongos y Levaduras. 
1- Seleccione y calcule la cantidad de medio requerido para cada determinación. 
2- Calcule la cantidad de placas requeridas y las pipetas. Para lo que deberá considerar cuántas 
diluciones requiere. 
3- Considere los materiales auxiliares que necesita para efectuar los análisis. 
4- Efectúe un informe por escrito, para que el profesor le indique si ha hecho los cálculos 
correctos. 
5- Esquematice en un gráfico, la forma en que efectuará la siembra partiendo de 10 g de muestra. 
6- Concluido el TP informe según modelo de protocolo abajo. 
Nº de grupo: Integrantes: Fecha: 
 
 Muestra: Chorizo fresco 
Identificación del lote o fecha del producto: 
Análisis Microbiológico 
 
Tipo de análisis Resultados Norma Valores 
permitidos 
Metodología 
Aerobios mesófilos UFC/g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c=3 
m=106 M=107 
ICMSF 
Coliformes Totales UFC/g (1) Máx.104 UFC/g ICMSF 
Escherichia coli UFC/g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c=2 
m=100 M=1000 
ICMSF 
Staphylococcus aureus 
coagulasa positiva 
 UFC/g 
C.A.A. 
Art. 302 
Máx. 1000 UFC/g ICMSF 
Clostridios sulfito reductores UFC/g (1) Máx. 100 UFC/g APHA 
Hongos y levaduras UFC/g (1) Máx. 2.200UFC/g ICMSF 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Eschericia coli 0157 H7 en 65 g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c=0 
Ausencia en 65 g 
BAM (FDA) 
Salmonella ssp. en 10 g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c=0 
Ausencia en 10 g 
BAM (FDA) 
(1) Recomendaciones SENASA 
Observaciones: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Trabajo Práctico N° 8 
Análisis microbiológico embutido fresco 
Para la realización de este TP solo disponemos de los medios de cultivo para efectuar Recuento total de 
aerobios, Coliformes y Hongos y Levaduras. 
1. Seleccione y calcule la cantidad de medio requerido para cada determinación. 
2. Calcule la cantidad de placas requeridas y las pipetas. Para lo que deberá considerar cuántas 
diluciones requiere. 
3. Considere los materiales auxiliares que necesita para efectuar los análisis. 
4. Efectúe un informe por escrito, para que el profesor le indique si ha hecho los cálculos 
correctos. 
5. Esquematice en un gráfico, la forma en que efectuará la siembra partiendo de 10 g de muestra. 
6. Concluido el TP informe según modelo de protocolo abajo. 
Nº de grupo: Integrantes: Fecha: 
 
Muestra: Chorizo fresco 
 
Identificación del lote o fecha del producto: 
 
Análisis Microbiológico 
Tipo de análisis Resultados Norma Valores 
permitidos 
Metodología 
Recuento total de 
aerobios mesófilos 
 UFC/g (1) 
Máx. 1.000.000 
UFC/g(2) 
ICSMF 
Coliformes Totales UFC/g (1) 
Máx. 500 
UFC/g (2) 
ICMSF 
Escherichia coli UFC/g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c=2 
m=100 M=1000 
ICMSF 
Staphylococcus 
aureus 
coagulasa positiva 
 UFC/g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c=2 
m=100 M=1000 
ICMSF 
E.E.T. N° 2 de Merlo “República de Venezuela” Técnico Químico 7mo año 
Laboratorio de Análisis Microbiológico 
Hongos y 
levaduras 
 UFC/g (1) 
Máx. 1.100 
UFC/g (2) 
ICSMF 
Clostridios sulfito 
reductores 
 UFC/g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c=2 
m=100 M=1000 
ISO 
15213:2003 
Salmonella ssp. en 10 g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c= 0 
Ausencia en 10 
g 
BAM (FDA) 
Escherichia coli 
0157: H7/NM 
 en 65 g 
C.A.A. 
Art. 302 
n=5 c= 0 
Ausencia en 65 
g 
BAM (FDA) 
(1) No se tienen especificaciones para este producto. (2) Criterios SENASA 
Observaciones.: