inbound6786541994269098563 - pesca rupestre

Vista previa del material en texto

Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
1 
Métodos de detección de organismos indicadores de contaminación 
Se dispone de procedimientos básicos para la detección y enumeración de 
microorganismos indicadores en el agua. Estos métodos son: 
 Método de tubos múltiples 
 Método de membrana filtrante 
Debe destacarse que los resultados obtenidos con un método o medio en particular 
pueden no ser estrictamente comparables con otro método o medio para el mismo 
grupo de organismos. Por lo tanto, el método que se elija deberá utilizarse siempre 
de manera consistente con el fin de asegurarse que la comparación de resultados es 
válida. 
Detección de coliformes 
Debido a que las bacterias del grupo de coliformes están presentes en grandes 
cantidades en los excrementos y pueden detectarse en concentraciones de hasta 1 
ufc por 100 ml, constituyen un indicador de una gran sensibilidad para comprobar la 
contaminación fecal. 
Definición de los microorganismos del grupo coliformes 
El término microorganismos coliformes o coliformes totales se aplica a todo bacilo 
gramnegativo, capaz de desarrollarse en presencia de sales biliares u otros agentes 
tensioactivos de propiedades similares, y sea capaces de fermentar la lactosa 
temperaturas entre 35°-37°C, con producción de ácido, gas, y aldehído, en un lapso 
de 24 a 48 horas también son oxidasa negativas y no forman esporas. Aquellas que 
poseen las mismas propiedades a una temperatura de 44° o 44,5°C se conocen como 
bacterias fecales termotolerantes. Estas últimas cuando fermentan tanto la lactosa 
como otros sustratos o como el manitol, a temperaturas e 44° o 44,5°C, con 
producción de ácido, gas y que también forman indol a partir de triptófano, se 
consideran como presuntas E. coli. Esta se puede confirmar si se trata de una E. coli 
mediante la prueba bioquímica positiva de rojo de metilo al no producir 
acetilmetilcarbinol y no utilizar citrato como única fuente de carbono. 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
2 
La selección de pruebas para detectar y confirmar la existencia de este grupo de 
microorganismos se considera como parte del juicio profesional basado 
principalmente en el tipo ce agua, en el propósito del examen y en la capacidad del 
laboratorio. 
Técnicas para la detección de coliformes totales 
 Método de tubos múltiples 
Se considera que la prueba inicial es presuntiva debido a que la reacción de ácido y 
gas que se observa a menudo puede deberse a otro microorganismo o combinación 
de otros microorganismos. Esta presunción se confirmara luego mediante las pruebas 
adicionales capaces de alcanzar mayor nivel de confirmación y diferenciación. Con las 
pruebas bioquímicas correspondientes para el caso. 
Se puede obtener un estimado del número de coliformes totales presuntivos 
presentes en un determinado volumen de agua mediante la inoculación de 
volúmenes apropiados en un número de tubos de ensayo conteniendo un medio de 
cultivo. Al incubarse se supone que cada tubo que recibió bacterias viables en la 
inoculación mostrara desarrollo de microorganismos y reacciones positivas acordes 
con el medio empleado. Teniendo en cuenta que siempre se producirán algunos 
resultados negativos, se puede calcular el número más probable (NMP) de 
microorganismos en la muestra original a partir de un número de tubos que dieron 
una reacción positiva. Para esto se emplean tabas de probabilidad estadísticas. 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
3 
 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
4 
 
Este procedimiento puede aplicarse a cualquier tipo de agua, en especial en aquellas 
que presentan mucha turbidez. El equipo es relativamente económico y sencillo y 
resulta fácil leer las reacciones positivas. Sin embargo, se trata de una técnica que 
solo proporciona un cálculo del número de bacterias en una muestra, y por lo tanto 
puede estar sujeto a errores inherentes considerables. Deben realizarse subcultivos 
en medios confirmatorios y también en medios sólidos a fin de asegurarse la pureza 
antes de proceder a mayores diferenciaciones. 
 
 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
5 
Procedimiento: 
Para este método se prepara una batería de tubos con los medios según su elección. 
Si bien la técnica se puede realizar con 3 o con 5 tubos. En este apartado se detallara 
la técnica con 3 tubos. 
Técnica: Se inoculan 9 tubos de diferentes concentraciones. 
 Tres tubos se realizan en tubos con 10 ml de caldo en doble concentración y se 
añaden 10 ,0 ml de muestra. 
 Tres tubos de 9,0 ml de caldo simple concentración se añade 1 ml de muestra. 
 Tres tubos de 9,9 ml de caldo simple concentración se añade 0,1 ml de muestra. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
6 
 
Elección de medios de cultivo 
Para esta prueba podemos utilizar tres medios de cultivo diferentes; el medio de 
caldo Lauril sulfato (CAA), caldo MacConkey. 
Luego de la inoculación con el medio seleccionado se incuban los tubos a 
temperaturas de 35-37°C, y se inspeccionan a las 24 ± 2 horas y 48 ± 3 horas para la 
observación de las reacciones. 
Lectura e interpretación de resultados 
Para la lectura e interpretación de resultados utilizamos las tablas de probabilidad 
estadística ya mencionadas. Dependiendo la cantidad de tubos utilizados será la tabla 
a tener en cuenta (según 3 o 5 tubos). 
Para esto tenemos que tener en cuenta la cantidad de positivos y negativos que 
tenemos en cada batería de tubos (según 3 o 5). Según estos resultados buscamos en 
la tabla y determinamos el valor de NMP/100 ml según corresponda. 
 
Caldo Mac Conkey: 
Negativo: tubo purpura sin formación de gas 
Positivo: tubo amarillo con formación de gas 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
7 
Caldo Lauril sulfato y Caldo lactosado: 
Negativo: tubo sin turbidez y sin producción de gas. 
Positivo: tubo con turbidez y producción de gas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Pruebas confirmatorias: la presencia de coliformes presuntiva positiva deberá 
confirmarse. Puesto que la muestra original puede contener una mezcla de 
microorganismos es preciso utilizar un medio selectivo 
Los tubos que muestran reacciones positivas a las 24 y 48 horas se subcultivan 
directamente en tubos con medios selectivos que contengan lactosa, incubándose 48 
± 3 horas a las mismas temperaturas que se incubaron las pruebas presuntivas. Para 
el caso confirmatorio utilizamos un medio selectivo; caldo verde brillante (CVB). La 
presencia de gas confirmara la presencia de bacterias coliformes en la prueba 
presuntiva original. De esta manera, tomando en cuenta los tubos positivos y los 
negativos, se busca el valor del resultado en las tablas de NMP antes mencionados. 
Para la confirmación de presencia de coliformes totales, deberán realizarse 
subcultivos a partir de los tubos con reacciones presuntivas positivas empleando 
medios como CVB o caldo EC, que contienen sales biliares e incubar a 44°C ± 0,25 °C 
por un periodo de 24 ± 2 horas. La producción de gas confirmara la presencia de 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Cursode Control microbiológico del agua– Unidad 4 
8 
bacterias coliformes fecales en los tubos originales. De esta manera buscamos el 
resultado obtenido en las tablas de NMP. Por otro lado, puede confirmar el numero 
presuntivo de E. coli inoculando tubos de caldo EC-MUG y verificar bajo luz UV (365 
nm) fluorescencia luego de transcurridas 24 ± 2 horas a 44 ó 44,5°C de incubación. 
Si el resultado es positivo, entonces, confirma la presencia de E. coli en la muestra de 
agua analizada. 
 
Técnica de membrana filtrante 
El número de coliformes totales presentes en el agua puede determinarse también 
mediante filtración de volúmenes específicos de muestra a través de filtros de 
membrana. En su mayoría están compuestos de esteres de celulosa, típicamente con 
poros de 0,45 µm de diámetro, que retienen las bacterias. Después estas membranas 
se incuban hacia arriba en un medio de cultivo selectivo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Membrana de nitrocelulosa 
 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
9 
En la membrana se desarrollan colonias características que producen acido o 
aldehído y son las que, luego, se contaran ya sea como organismos coliformes 
presuntivos o bacterias coliformes fecales según la temperatura de incubación. 
Puesto que la producción de gas no puede ser detectada en las membranas, se 
asume que todas las colonias con crecimiento característico (productoras de ácido y 
aldehído) producen gas. Sin embargo la formación de gas podrá demostrarse más 
adelante a través de la técnica de confirmación que se apliquen subsecuentemente. 
En este caso los resultados se expresan por número de microorganismos por 100 ml 
demuestra original. 
En la práctica, el método de membrana filtrante ofrece resultados comparables a los 
que se obtienen con la técnica de tubos múltiples. 
Una de las ventajas del método de membrana filtrante es el menor tiempo en el que 
se pueden obtener resultados. El recuento en las mismas se hace de manera directa, 
contando las colonias individualmente, pero todavía estará sujeto a errores de tipo 
estadístico. Además del recuento, se puede también analizar la morfología de las 
colonias y efectuar subculturas directas, reduciéndose así la probabilidad de 
reacciones falsas y positivas a partir de cultivos mezclados. 
Este método no es recomendable para aguas excesivamente turbias, debido a que 
podría obstruirse la membrana y por otro lado, si el recuento es muy alto no se 
distinguen las colonias por unidad imposibilitando el recuento de las mismas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
10 
Equipos y técnicas de filtración 
Equipo de filtración para muestra única 
 
 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
11 
Equipo de filtración para siembras múltiples 
 
 Método de filtración con membrana 
Consiste en hacer pasar un volumen determinado de una muestra líquida a través de 
un filtro de membrana de filtración en cuya superficie quedarán retenidos los 
microorganismos, colocado en un equipo de filtración. 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
12 
El primer paso para este 
procedimiento es colocar la 
membrana estéril en el soporte. 
 
Quedando la disposición de la 
siguiente manera. 
 
Luego se hace pasar un volumen 
determinado de agua (100 ml) a 
través del filtro aplicando vacío 
en el matraz kitasato. 
 
 
 
 
 Contacto: baristimuno@elearning-total.com 
Web: www.elearning-total.com 
 
ELEARNING TOTAL Curso de Control microbiológico del agua– Unidad 4 
13 
Tras la filtración del agua, se 
coloca el filtro sobre la superficie 
de una placa de Petri o pad 
nutritivo con el medio de cultivo 
apropiado y se incuba el 
tiempo/temperatura adecuados 
según el tipo de microorganismos 
que se necesite analizar. 
 
Las bacterias formarán colonias 
sobre la superficie de los filtros. 
 
 
Medio de cultivos de elección 
Los medios que se utilizan para este caso son Violeta Rojo y Bilis Agar (VRBA) para 
coliformes totales, Violeta Rojo y Bilis Glucosa agar (VRBG) para coliformes fecales, 
medios deshidratados en Pad listos para usar. 
Las pruebas confirmatorias corresponden a las pruebas mencionadas en el apartado 
anterior.