Reporte práctica 11 Farmacognosia - Diana Becerril

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Escuela de Ciencias de la Salud
Práctica No. 11: Detección de taninos y saponinas en material vegetal.
Becerril García Diana María, Contreras Reynoso Maricielo, Juárez Espinosa
Fernanda Elizabeth, López Vilchis Ximena, Polo Contreras Sabrina, Ramírez
Romero Karime.
Asignatura: Farmacognosia.
Licenciatura: QFBT.
Periodo: 2021-01
Fecha de entrega: 26 de mayo de 2021
Docente: MANCP. Aura Isabel Cruz Rangel.
INTRODUCCIÓN
El tamizaje Fitoquímico o “Screening”
Fitoquímico es una de las etapas
iniciales de la investigación
Fitoquímica del potencial biológico y
farmacológico que poseen las
plantas., que permite determinar
cualitativamente los principales grupos
de constituyentes químicos presentes
en una planta y a partir de allí, orientar
la extracción o fraccionamiento de los
extractos para el aislamiento de los
grupos de mayor interés.
(Olvera, s.f)
El tamizaje Fitoquímico consiste en la
extracción de la planta con solventes
apropiados y la aplicación de
reacciones de coloración y
precipitación. Debe permitir la
evaluación rápida con reacciones
sensibles reproducibles y de bajo
costo. Los resultados del tamizaje
fitoquímico constituyen únicamente
una orientación y deben interpretarse
en conjunto con los resultados de un
screening farmacológico. La cantidad
de material vegetal necesario para
hacer las pruebas varía de 5g a 200 g.
(Cabrera, 2010)
Taninos
Figura 1. Estructura de un tanino.
Los taninos son compuestos
polifenólicos, más o menos complejos,
de origen vegetal, masa molecular
relativamente elevada, sabor
astringente, conocidos y empleados
desde hace muchos siglos por su
propiedad terapéutica como
cicatrizantes en uso externo y
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antidiarreicos como uso interno, por su
propiedad de ser capaces de convertir
la piel en cuero, es decir de curtir las
pieles. Esto se debe a su capacidad
para unirse a macromoléculas como
hidratos de carbono y proteínas.
Precipitan con sales de metales
pesados, proteínas y alcaloides.
Clasificación
Taninos hidrolizables o
hidrosolubles (pirogálicos). En estos
se distinguen los taninos gálicos.
Figura 2. Unidades estructurales de
los taninos hidrolizables.
Taninos condensados o
proantocianidinas: no hidrosolubles,
son polímeros flavónicos, están
constituidos por unidades de
flavan-3-oles o catequinas unidos
entre sí por enlaces C-C. Se
diferencian de los taninos hidrolizables
en que sus moléculas son más
resistentes a la ruptura.
Figura 3. Unidades estructurales de
los taninos condensados.
Taninos mixtos o complejos: Son
taninos elágicos modificados que son
resultado de la adición de un derivado
2-fenil-cromano con una molécula de
éster y glucosa. Es decir, estructuras
intermedias entre las 2 categorías
clásicas de taninos.
Finalmente se han aislado de algas
Feoficeae los llamados florotaninos,
polímeros del floroglucinol.
Los taninos son sustancias amorfas
solubles en agua, que forman
soluciones coloidales, en alcohol y en
acetona. Son insolubles en solventes
no polares como éter y cloroformo.
Precipitan con numerosos reactivos
(sales de hierro, plomo, cobre),
alcaloides y proteínas.
(Villar, 1999)
Aplicaciones Farmacológicas:
● Astringentes en cosmetología
en la preparación de lociones y
tónicos.
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● Antidiarreicos y además de
disminuir el peristaltismo tienen
acción antiséptica, esta acción
se ejerce también en uso
externo, por lo que son útiles en
tratamiento de dermatosis y
quemaduras.
● El efecto antidiarreico lo ejercen
en el intestino y para evitar
ardor en el estómago que
producirían, se administran
combinados con albúmina o
gelatina. De esta forma el
tanino no se libera hasta llegar
al intestino donde hay medio
básico.
● Antifúngicos
● Vasoconstrictores: tratamiento
de várices y hemorroides (en
supositorios, por ejemplo). o
Inhibidores enzimáticos.
● Antídotos de alcaloides y
metales pesados.
El efecto antinutriente de los taninos
presentes en muchos alimentos ha
sido objeto de numerosas
investigaciones. Son factores
antinutrientes que disminuyen el peso
y la eficacia de los alimentos y
aumentan el nitrógeno fecal. Las
causas de estos efectos pueden ser
varias, parece que la más importante
es la formación de complejos con
proteínas de la dieta.
Los taninos tienen también
aplicaciones industriales en la
preparación de barnices, pinturas,
adhesivos, plásticos y resinas.
(Bruneton, 2001)
Tabla 1. Características de taninos
hidrolizables y condensados.
Tabla 2. Reacciones cualitativas de
identificación de taninos.
Saponinas
Las saponinas (del latín sapo que
significa jabón) son heterósidos o
glucósidos de esteroides o de
triterpenoides, llamadas así por sus
propiedades como las del jabón: cada
molécula está constituida por un
elemento soluble en lípidos (el
esteroide o el triterpenoide, llamado
sapogenina) y un elemento soluble en
agua (el azúcar), y forman una
espuma cuando son agitadas en agua.
Se forma espuma debido a que las
saponinas disminuyen la tensión
superficial del agua. Son por lo tanto
tensoactivos naturales.
Las saponinas son tóxicas, se cree
que su toxicidad proviene de su
habilidad para formar complejos con
esteroles: Las saponinas podrían
interferir en la asimilación de esteroles
por el sistema digestivo, o romper las
membranas de las células luego de
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ser absorbidas hacia la corriente
sanguínea.
Además de sus propiedades
detergentes, también poseen
propiedades hemolíticas, si se
inyectan en el torrente sanguíneo. No
todas las plantas que contienen
propiedades hemolíticas contienen
saponinas.
Las saponinas tienen un elevado peso
molecular y su aislamiento en estado
puro ofrece ciertas dificultades. Como
heterósidos que son, se hidrolizan con
ácidos, dando una genina
(sapogenina) y diversos azúcares y
ácidos urónicos relacionados.
Según la estructura de la sapogenina
se conocen dos grupos (Saponinas
triterpénicas): Tienen el aglicón con 30
átomos de carbono llamados
triterpeno. Dicho aglicón procede de la
ruta biosintética de la condensación
isoprénica también denominada ruta
del ácido mevalónico. Las saponinas
triterpénicas derivan todas del
dammarano.
Figura 4. Estructura del Dammarano
(precursora de las saponinas).
● Triterpenos pentacíclicos
Con enlaces heterósidos en el C3 que
tienen un origen biogenético común
(vía del ácido mevalónico y unidades
isoprenoides). Son las saponinas más
frecuentes.
Figura 5. Saponinas pentacíclicas.
● Terpenoides tetracíclicos
Conservan la estructura básica del
dammarano con 3 ciclos de 6
miembros y un ciclo de 5 miembros.
Figura 6. Saponinas tetracíclicas.
● Saponinas de tipo esteroidal
Se biosintetizan también por la ruta del
ácido mevalónico y son menos
frecuentes que las saponinas
triterpénicas pentacíclicas.
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Figura 7. Saponinas esteroidales.
(Kuklinski, 2000)
Es frecuente también encontrar
saponinas por ejemplo (Solanum sp)
que en vez de O en el anillo F o de OH
en la cadena unida a en la posición 22
tienen Nitrógeno (amina), por lo cual
se consideran saponinas y alcaloides
a la vez.
Figura 8. Estructura de un heterósido
de saponina.
Figura 9. Planta Solanum sp.
Figura 10. Alcaloides esteroidales
aislados e identificados de los frutos
de Solanum jamaicense.
En dicotiledóneas hay principalmente
saponinas triterpénicas y
ocasionalmente saponinas
esteroideas. En monocotiledóneas
rara vez hay saponinas triterpénicas y
hay casi exclusivamente saponinas
esteroideas. Las saponinas pueden
estar localizadas en cualquier órgano
del vegetal, pero tienen tendencia a
acumularse en mayor concentración
en las partes subterráneas (raíz,
rizoma).
Las saponinas tienen una acción
hemolítica, característico de las
saponinas triterpénicas, variable
según los sustituyentes de la
estructura (los grupos carboxílicos
disminuyen el poder hemolítico. Las
saponinas esteroideas
monodesmosídicas son hemolíticas,
mientras que las bidesmosídicas no lo
son. Debido a su poder hemolítico
resultan muy tóxicas si se administran
por vía intravenosa,mientras que por
vía oral su toxicidad es muy baja.
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Al ser heterósidos, son solubles en
agua y en disolventes orgánicos
polares como etanol y metanol e
insolubles en disolventes orgánicos
apolares como cloroformo, éter y
hexano). Los aglicones libres
(sapogeninas) no son solubles en
agua y sí en disolventes orgánicos
apolares.
Las saponinas se pueden valorar por
métodos físicos como el llamado Test
e índice afrosimétrico; o por métodos
biológicos como el Índice Hemolítico o
el Índice del Pez.
● Índice de espuma o
afrosimétrico
Es la máxima dilución del extracto de
la droga a la que se produce una
espuma persistente en determinadas
condiciones. Se determina utilizando
una serie de tubos donde se coloca el
extracto acuoso y agua, haciendo
diferentes diluciones. Se agita cada
tubo durante 15 segundos y se deja en
reposo 15 minutos. Debido a la
agitación se forma espuma y al
reposar el nivel de espuma desciende.
Se considera espuma persistente, si
transcurridos los 15 min la espuma
tiene una altura superior a 1 cm. Si
este índice es menor a 20 min puede
decirse prácticamente que la muestra
no contiene saponinas.
● Índice de hemólisis
Es la máxima dilución del extracto de
la droga a la cual se produce hemólisis
total. Se determina haciendo
diferentes diluciones del extracto y se
añade una suspensión de sangre
citrada.
● Índice de pez
Es una constante propuesta por
Kobert y se define como la
concentración de saponina que en 100
mL de solución determina la muerte de
un pez de una especie determinada y
un peso dado después de una hora de
inmersión en la solución.
Los peces que se emplean para este
índice son generalmente Leuciscus
rutilis o Carassius vulgaris, de dos a
cuatro cm de longitud
aproximadamente.
(Palma, 2005)
Aplicaciones Farmacológicas
● Acción irritante de las células
que se manifiesta a nivel
○ Pulmonar: produciendo
un aumento de las
secreciones, efecto
expectorante y
antitusivo.
○ Renal: Aumentan la
circulación sanguínea a
nivel renal aumentando
consecuentemente la
filtración glomerular y
surtiendo un efecto
diurético.
● Efecto antiedematoso y
antiinflamatorio: Sobre todo a
nivel de insuficiencia venosa en
extremidades inferiores.
● Acción antihemorroidal y
cicatrizante.
● Acción antimicrobiana:
antimicótica, antivírico y
molusquicida: Resultan tóxicos
para moluscos, lo cual es de
interés para luchar contra la
esquistosomiasis de países del
tercer mundo, ya que
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Schistosoma sp utiliza como
huésped intermediario a un
molusco (caracol) son
molusquicidas únicamente las
saponinas monodesmosídicas,
pero por hidrólisis las
bidesmosídicas se pueden
compartir en
monodesmosídicas. Dichas
acciones son debidas
mayoritariamente a las
saponinas triterpénicas.
● Las saponinas se utilizan en la
industria farmacéutica como
espumantes y emulgentes. Las
saponinas esteroideas se
utilizan sobre todo
industrialmente para obtener los
aglicones esteroídicos que son
precursores por hemisíntesis de
los fármacos esteroídicos
(hormonas sexuales,
glucocorticoides).
Figura 11. Fórmula de glucocorticoide.
Figura 12. Medicamentos
glucocorticoides.
Figura 13. Hormonas sexuales.
Figura 14 y 15. Levonorgestrel
medicamento y su fórmula química.
(Kuklinski, 2000)
MÉTODO
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RESULTADOS Y ANÁLISIS
Véase los resultados obtenidos de las
pruebas para taninos y saponinas en
la Tabla 4 en la sección de ANEXOS.
● Extracto de Ajo y canela
Figura 16. Maceración de la canela y el
ajo en agua.
Figura 17. Maceración de la canela y el
ajo en acetona-agua.
Figura 18. Resultado del test
afrosimétrico.
Figura 19. Resultado de la prueba de
precipitación con grenetina y NaCl.
Figura 20. Resultado de la prueba de
hipoclorito de sodio.
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En la figura 16, se puede apreciar el
macerado de agua de la canela y del
ajo; mientras que en la figura 17, se
logra observar el macerado de los
mismos vegetales pero en
acetona-agua. En ambas figuras se
aprecia cierta coloración y turbidez; sin
embargo, el ajo presente en el
macerado de agua se abrió un poco
para que de él surgiera la planta de
ajo.
De acuerdo con Vélez-Terranova
(2014), al contrario del ajo, la canela
tiene presente como compuesto
bioactivo a las saponinas; es decir, se
obtuvieron resultados correctos en el
test afrosimétrico, los cuales se
pueden apreciar en la figura 18 y en la
tabla 4 en ANEXOS.
Por otro lado, las figuras 19 (prueba
de precipitación con grenetina y NaCl),
20 (prueba de hipoclorito de sodio) y
en la tabla 4 (véase en ANEXOS), se
puede apreciar precipitación en ambas
pruebas, por lo que se puede
determinar que tanto la canela, como
el ajo tienen taninos presentes; pero
gracias a los resultados obtenidos de
la prueba de hipoclorito de sodio, se
conoció que los taninos presentes en
la canela y ajo son hidrolizables. De
acuerdo con Gabriela Gottau (2009),
los resultados obtenidos en ambas
pruebas son correctas; debido a que
los taninos están presentes tanto en la
canela como en el ajo.
● Extractos de manzanilla y
espinaca
Figura 21. Macerado de manzanilla y
espinaca en agua.
Figura 22. Macerado de manzanilla y
espinaca en una mezcla de acetona-agua.
Figura 23. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) del Test
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Afrosimétrico para la identificación de
saponinas, en donde no se presentó la
formación de espuma en ningún extracto.
Figura 24. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba de
precipitación con gelatina y NaCl, en
donde no se observó la presencia de un
precipitado en ningún extracto.
Figura 25. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba con
agua de cal, en donde se puede apreciar
la formación de precipitado para ambos
extractos.
Figura 26. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba con
hipoclorito de sodio en donde se observa
un ligero cambio de color en el extracto.
Como se observa en la figura 21 y 22,
podemos encontrar los frascos con los
extractos macerados de espinaca y
manzanilla en agua (figura 21) y en
una mezcla acetona-agua (figura 22).
En la figura 23 podemos apreciar el
antes y después del test afrosimétrico
de saponinas tanto en el extracto en
agua de manzanilla, como en el
extracto en agua de espinaca; como
se puede apreciar tanto en la figura 8
como en la tabla 4 en ANEXOS, en
ninguno de los dos extractos se
presentó la formación de espuma; sin
embargo, de acuerdo a la Academia
de Ciencias de la Región de Murcia
(s.f), las saponinas son productos
naturales de las plantas, de naturaleza
triterpenoide, que están presentes en
la avena, soja y en otros vegetales,
desde las legumbres y las papas a las
espinacas, el tomate y el aceite de
oliva, por lo que el resultado de este
test para el extracto de espinaca debió
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haber sido positivo, sin embargo, se
pudo haber presentado inconvenientes
con la prueba tal vez debido a las
condiciones en las que se realizaron,
que al ser una práctica casera y no
contar con el equipo adecuado, los
resultados se pudieron haber visto
afectados.
En la figura 24 podemos encontrar el
antes y después de la prueba de
precipitación con gelatina y NaCl, en
donde no se observó la presencia de
un precipitado en ninguno de los dos
extractos, por lo que en la tabla 4 en
ANEXOS se catalogó como una
prueba negativa.
En la figura 25 podemos observar el
antes y después de la prueba con
agua de cal para ambos extractos, en
donde se puede observar la formación
de un precipitado, por lo que es
positivo para taninos hidrolizables, los
cuales al formar el precipitado quiere
decir que pueden sufrir una hidrólisis
básica; estos resultados fueron
marcados en la tabla 4 en ANEXOS.
Finalmente, en la figura 26 podemos
encontrar el antes y después de la
prueba de hipoclorito de sodio, en
donde se pudo apreciar un ligero
cambio de color en los extractos, el
cual tanto para la manzanilla como
para la espinaca se intensificó,por lo
que los taninos presentes en estos
extractos pueden sufrir una hidrólisis
ácida, por lo que son taninos
hidrolizables; estos resultados fueron
marcados en la tabla 4 en ANEXOS.
Finalmente, a partir de los resultados
obtenidos, se obtuvo que en la
manzanilla hay presencia de taninos al
igual que en la espinaca.
● Extractos de eucalipto y quinoa.
Figura 27. Macerado de eucalipto de agua
y acetona-agua.
Figura 28. Macerado de quinoa de agua y
acetona-agua.
Figura 29. Aparición de espuma en test
afrosimétrico de eucalipto y quinoa.
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Figura 30. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba de
precipitación con gelatina y NaCl.
Figura 31. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba con
hipoclorito de sodio.
En la figura 27 y 28 se pueden
observar los distintos extractos de
eucalipto y quinoa, en donde se logra
apreciar un color más intenso del
extracto de eucalipto de acetona-agua
y por otro lado los extractos de quinoa
parecen no tener una diferencia de
coloración significante.
En la figura 29 podemos observar la
creación de espuma la cual de
acuerdo a la tabla 4 en anexos,
logramos tener un + el cual significa
que para los dos extractos hubo un
presencia de espuma entre 5-20 min
indicando que estos extractos
contienen saponinas. Lo cual esto se
confirma de acuerdo a Juárez (2018) y
Muñoz (s.f) los cuales confirman la
presencia de este compuesto.
En la figura 30 podemos apreciar el
antes y después de la prueba de
precipitación con gelatina y NaCl del
eucalipto y la quinoa. De acuerdo a las
observaciones visuales podemos
encontrar un precipitado grande en el
eucalipto y un precipitado poco
abundante en la quinoa. La aparición
de este precipitado indica la presencia
de taninos y retomando los resultados
de esta prueba (vea tabla 4 en
anexos) se entiende que el eucalipto
contiene una gran cantidad de taninos
a comparación de la quinoa ya que en
la quinoa se precipitó en una baja
cantidad y en la experimentación este
tardó un poco más de tiempo a
comparación del eucalipto que
precipitó rápidamente y tuvo una gran
cantidad de este.
En la figura 31 logramos observar el
antes y después de la prueba con
hipoclorito de sodio en donde se
identifica una coloración más oscura o
más intensa en los dos extractos. Este
cambio de coloración más intenso nos
indica la presencia de taninos
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hidrosolubles, los cuales estos son,
como su nombre lo indica, fácilmente
hidrolizables en este caso, en
condiciones ácidas (Gomez, 2012).
Finalmente, recaudando los resultados
de todas la pruebas realizadas, se
puede observar en la tabla 4 que los
dos extractos de eucalipto y quinoa
fueron positivos para taninos y
saponinas ya que presentaron una
espuma duradera, un precipitado y un
cambio de coloración. Por lo cual se
también se puede decir que estos
extractos pueden contener la misma
cantidad de saponinas pero en
cuestión de taninos la quinoa tiene un
menor contenido, aunque las dos son
del mismo tipo.
● Extracto de café y de frijol
Figura 32. Extractos de café.
Figura 33. Extractos de frijol.
Figura 34. Agua y extractos (de izquierda
a derecha) café-acetona, café-agua,
frijol-agua, y frijol acetona.
Figura 35. Prueba de taninos mediante
precipitación con grenetina y NaCI.
Figura 36. Prueba de taninos mediante la
adición de hipoclorito de sodio en el
extracto café-acetona.
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Figura 37. Prueba de taninos mediante la
adición de hipoclorito de sodio en el
extracto frijol-acetona.
Figura 38. Prueba de identificación de
saponinas en extracto de frijol-agua.
En la figura 32 (de izquierda a
derecha), se encuentran los extractos
de café-agua, y café-acetona;
respectivamente.
En la figura 33 (de izquierda a
derecha), se encuentran los extractos
de frijol-agua, y frijol-acetona;
respectivamente, este último se repitió
ya que la acetona se evaporó la
primera vez que fue elaborado.
En la figura 34 se pueden observar las
distintas coloraciones de los extractos
de frijol y café, además de una
muestra control de agua.
En la figura 35, se encuentran los
extractos de café-acetona y
frijol-acetona después de que se les
realizará una prueba con NaCI y
grenetina para observar su
precipitación. Los dos extractos
presentaron formación de precipitado;
en el extracto frijol-acetona se observa
poco precipitado blanquecino-
grisáceo; y, en el extracto de
café-acetona se formó un precipitado
café claro.
En las figura 36 y 37, puede
observarse que, tras la adición de
hipoclorito de sodio, los extractos
café-acetona y frijol-acetona se
blanquean. Cuando se agrega
hipoclorito de sodio, y la sustancia se
blanquea, se indica la presencia de
taninos condensados.(Anónimo, 2014)
En la figura 38, se encuentra el
resultado de la prueba de
identificación de saponinas en extracto
frijol-agua; se puede observar la
formación de una espuma pequeña y
breve, pues duró aproximadamente 2
minutos.
En la tabla 4, se encuentran los
resultados de las sustancias presentes
en los extractos de café y frijol, en los
de café se encontró la presencia de
taninos; mientras que, en los de frijol
negro hubo presencia de taninos y
saponinas.
● Extractos de Hojas de Laurel
y Té verde.
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Figura 39. Macerados de hojas de Laurel
en agua (derecha) y acetona-agua
(izquierda).
Figura 40. Macerados de bolsas de Té
verde en agua (derecha) y acetona-agua
(izquierda).
Figura 41. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) del Test
Afrosimétrico para la identificación de
saponinas en maceración de hojas de
Laurel (izquierda) y Té verde (derecha).
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Figura 42. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba de
precipitación con gelatina y NaCl para la
identificación de taninos en maceración
de hojas de Laurel (izquierda) y Té verde
(derecha).
Figura 43. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba con
agua de cal para la identificación de
taninos en maceración de hojas de Laurel
(derecha) y Té verde (izquierda).
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Figura 44. Antes y después (de arriba a
abajo respectivamente) de la prueba con
Hipoclorito de sodio para la identificación
de taninos en maceración de hojas de
Laurel (derecha) y Té verde (izquierda).
Como se observa en las figuras 39 y
40, los macerados con acetona-agua
fueron los más concentrados y de un
color más oscuro con respecto a los
macerados con agua, esto puede
deberse a que la acetona es un
solvente orgánico mucho más potente
que el agua por sí sola.
En la figura 41, se muestra el Test
Afrosimétrico para la identificación de
saponinas, donde se aprecia la
formación de una capa de espuma en
ambos extractos; de 0.6 mm para el
extracto de Té verde y de 0.4 mm para
el extracto de hojas de Laurel, con una
duración de entre 20 y 25 minutos en
ambos, tal y como se muestra en la
tabla 4 en Anexos.
En cuanto a la identificación de
taninos, se realizaron tres pruebas; la
primera consistió en la Prueba de
precipitación con gelatina y NaCl como
se observa en la figura 42, donde solo
se observó una ligera turbidez en
ambas maceraciones al cabo de 40
minutos. En la figura 43 se aprecian
los resultados de la segunda prueba,
la cual fue con cal en agua, donde la
maceración de hojas de Laurel se
tornó color ámbar y se formó un
precipitado rojizo, a diferencia del
macerado de Té verde, el cual se
tornó marrón-verdoso y con
precipitado verdoso.
Por último en la figura 44 se observa
la última prueba, la cual fue con
Hipoclorito de sodio, donde el
macerado de hojas de Laurel se tornó
color ámbar con precipitado café, a
diferencia del macerado de Té verde,
el cual se tornó de un tono café-rojizo
más oscuro.
Según la literatura, los componentes
reportados del Té verde, donde los
principales principios activos a los que
debe su actividad son: bases xánticas
y polifenoles (flavonoides, catecoles,
taninos catéquicos y ácidos fenólicos).
Los taninoscatéquicos son fácilmente
hidrolizables formados por una
molécula de azúcar (en general
glucosa) unida a un número variable
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de moléculas de ácidos fenólicos
(ácido gálico o su dímero, el ácido
elágico) (Toledo, 2015). Al igual que el
Té verde, las hojas de Laurel también
contienen taninos en sus principios
activos, además de cineol y eugenol.
(Herráiz, 2009)
Además de taninos, también se
reporta la presencia de saponinas en
el Té verde proveniente de la planta
Camellia sinensis (Kyusu, 2009) y en
las hojas de Laurel, esto explica la
presencia de espuma en la prueba
afrosimétrica, ya que las saponinas
son sustancias que rebajan la tensión
superficial y producen espuma al
contacto con el agua. (Nuñez, 2014)
● Extracto de Hojuelas de
Avena y lentejas
Figura 45. Macerados de hojuelas de
avena y lentejas en agua (de izquierda a
derecha).
Figura 46. Macerado de hojuelas de
avena y lentejas en acetona-agua. (De
izquierda a derecha).
Figura 47. Macerado de hojuelas de
avena y lentejas en agua después de 48
hrs. (De derecha a izquierda)
Figura 48. Macerado de hojuelas de
avena y lentejas en agua-acetona
después de 48 hrs.
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Figura 49. Extractos de lentejas y hojuelas
de avena antes del reposo de la prueba
de Taninos. (De izquierda a derecha).
Figura 50. Extractos de lentejas y hojuelas
de avena después del reposo de la
prueba de Taninos. (De izquierda a
derecha).
Figura 51. Extractos de lentejas y hojuelas
de avena antes del reposo de la prueba
de saponinas. (De derecha a izquierda).
Figura 52. Extractos de lentejas y hojuelas
de avena después del reposo de la
prueba de saponinas. (De derecha a
izquierda).
Como se puede observar en la figura
45 se muestra el macerado de los
extractos de hojuelas de avena y
lentejas en agua. En la figura 46, se
muestra el macerado de los mismos
extractos pero con acetona-agua. En
la figura 47, se muestra el resultado
del macerado de los mismos extractos
en agua, donde se dejó durante 48
hrs. Así mismo, en la figura 48, se
muestran los resultados de los
extractos de hojuelas de avena y
lentejas una vez dejado el macerado
por 48 hrs en acetona-agua.
En la figura 49, se observan los
extractos utilizados para la prueba de
Taninos, en donde se dejó reposar 40
minutos. En la figura 50, se muestra
estos mismos extractos pasado el
tiempo de reposo. En el extracto de
lenteja (izquierda) no se observó
ningún cambio, mientras que en el
extracto de avena (derecha) se puede
observar una muy ligera turbidez casi
imperceptible dando un resultado
negativo, lo que significa que no se
encontró presencia de Taninos en
estos extractos.
Para los extractos de hojuelas de
avena y lentejas en agua, se realizó la
prueba de Saponinas. En la figura 51,
se muestran los extractos
mencionados una vez acabado el
baño maría. En la figura 52, se
muestra el resultado final de los
extractos mencionados donde dieron
negativo.
De acuerdo a la Fundación Española
para el Desarrollo de la Nutrición
Animal (s.f), la lenteja contiene
19
Escuela de Ciencias de la Salud
factores antinutritivos, de los cuales
dos de ellos, precisamente son los
Taninos y Saponinas, por lo cual, el
que diera un resultado erróneo pudo
haber sido ocasionado por las
cantidades a utilizar debido a que no
se cuenta con el material adecuado.
Así mismo, de acuerdo con Zanin, T
(2020) las saponinas se pueden
encontrar en la avena , por lo que en
esta, se debió haber visto una
presencia de espuma pero no en las
lentejas.
CUESTIONARIO
1. Describir la ruta biosintética
para la síntesis de saponinas
esteroidales y triterpénicas.
La ruta biosintética de las saponinas
comienza con la ruta de isoprenoides
en la que dos moléculas de isopentenil
pirofosfato (IPP) se condensan con
una de dimetilalil pirofosfato (DMAPP)
vía un enlace covalente tipo
cola-cabeza para formar el farnesil
pirofosfato (FPP) luego la enzima
escualeno sintasa (ES) cataliza la
unión de dos FPP mediante un enlace
cola-cola para formar el ES.
Seguidamente la escualeno oxidasa
cataliza la oxidación del escualeno a
2,3-oxidoescualeno. Este es el primer
paso que lleva a las reacciones de
ciclación de la biosíntesis de
triterpenoides y esteroides
(Mastrogiovanni, 2012).
La biosíntesis de esteroides es una vía
metabólica que produce esteroides
anabólicos a partir de precursores
simples. la biosíntesis de esteroides
sigue la vía del mevalonato que utiliza
acetil-CoA como bloques de
construcción para formar pirofosfato
dimetilalilo y pirofosfato isopentenil. En
los pasos subsiguientes, DMAPP e
IPP se unen para formar pirofosfato de
geranilo, que a su vez se utiliza para
sintetizar el lanosterol esteroides.
(Ruiz, M. 2014)
Las saponinas triterpénicas presentan
una estructura policíclica. La
biosíntesis de las saponinas discurre
por la vía isoprenoide en la que 3
unidades isoprenoides se unen
cabeza-cola resultando un compuesto
de 15C, el farnesil difosfato (FPP). Se
admite la formación del FPP donde se
produce por condensación de una
molécula de dimetilalil difosfato
(DMAPP) con 2 de isopentenil
difosfato (IPP) sintetizados a partir de
la ruta citoplasmática de formación de
terpenos que tiene como intermediario
clave el mevalonato. La unión de 2
moléculas de (FPP) dará lugar al
escualeno sintasa. Esta enzima
cataliza uno de los principales puntos
de ramificación de la vía de terpenos
canalizando el flujo de carbono hacia
la formación de triterpenos por ello
puede estar sometida a un estricto
control metabólico.
(Mangas, S. 2009)
20
Escuela de Ciencias de la Salud
Figura 53. Esquema de los principales
pasos conocidos de la biosíntesis de las
saponinas triterpénicas. (Mangas, 2009).
2. Buscar productos herbolarios
a base de saponinas
disponibles en el mercado
mexicano.
Existe una gran variedad de vitaminas
y suplementos en el mercado
mexicano, tales como:
Tabla 3. Productos a base de
saponinas disponibles en México
(Mercado libre.com)
Nombre Ingredientes Imagen
Madness
Lab
Tribulus.
Cápsulas
550 mg.
Extracto de
Tribulus
terrestris
(90%
Saponinos)
Planetary
Herbals,
Kudzu.
Comprimid
os 750
mg,
Raíces del
kudzu
común
(Pueraria
lobata)
Ashwagan
dha. En
Polvo.
Withanólidos
, alcaloides
y saponinas.
3. Investigar la metodología de
la prueba de hemólisis para la
identificación de saponinas.
Para la determinación de saponinas
en plantas de uso medicinal una de las
pruebas que se realizan es la de
hemólisis, ésta puede llevarse a cabo
de dos maneras: mediante ensayos en
tubo en los cuales se utilizan
eritrocitos humanos lavados y
mantenidos en suspensión con
amortiguador glicina-NaCl (glicina
0.1M en cloruro de sodio al 0.6%) a
pH 5.8. La actividad hemolítica de los
extractos puede ser evaluada en tubo
y en placa por métodos directos e
indirectos.
Hemólisis en tubo.
Se realiza determinando la cantidad
de hemoglobina liberada mediante la
técnica de la cianometahemoglobina
que emplea el reactivo de Drabkin. La
actividad hemolítica se puede
expresar como Unidad Específica de
Hemólisis Directa (UEHD) o Indirecta
(UEHI) según sea el caso:
𝑈𝐸𝐻𝐷 = % 𝑑𝑒 𝐻𝑒𝑚ó𝑙𝑖𝑠𝑖𝑠 𝑑𝑖𝑟𝑒𝑐𝑡𝑎𝑚𝑔 𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜
21
Escuela de Ciencias de la Salud
𝑈𝐸𝐻𝐼 = % 𝑑𝑒 𝐻𝑒𝑚ó𝑙𝑖𝑠𝑖𝑠 𝑖𝑛𝑑𝑖𝑟𝑒𝑐𝑡𝑎𝑚𝑔 𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜
% 𝐻𝑒𝑚ó𝑙𝑖𝑠𝑖𝑠 = 𝐻𝐿𝐻𝑇 𝑥 100
Donde:
HL= Hb liberada por tratamiento
HT= Hb Total (con Tritón X-100)
Hemólisis Directa
La hemólisis directa se lleva a cabo en
tubos conteniendo eritrocitos lavados y
amortiguador glicina-NaCl a los que se
adiciona el extracto vegetal, esta
solución se incuba, se centrifuga y
luego se realiza una cuantificación de
la hemoglobina liberada en el
sobrenadante.
Hemólisis indirecta
Se realiza con una mezcla del extracto
vegetal y la suspensión de yema de
huevo al 6.4% en amortiguador
Tris-HCl 50mM pH 7.5, ésta mezcla se
pre incuba obteniéndose un
hidrolizado que es ensayado por el
sistema de hemólisis directa,
posteriormente se incuba la mezcla y
se centrifuga, midiéndose la
hemoglobina liberada en el
sobrenadante.
(Hernández& Hermosilla, 2014)
4. Investigar si hay otras
pruebas para la identificación
y cuantificación de saponinas
y taninos a parte de las
mencionadas en la práctica y
describir en qué consisten.
Saponinas
- Análisis cromatográfico HPLC:
Técnica utilizada para separar
los componentes de una
mezcla. Consiste en una fase
estacionaria no polar (columna)
y una fase móvil. La fase móvil
actúa de portador de la
muestra. La muestra en
solución es inyectada en la fase
móvil. Se compara con
estándares de saponinas
esteroidales.
- Espectrofotometría UV: técnica
analítica que permite
determinar la concentración de
un compuesto en solución. Se
basa en que las moléculas
absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez
que la cantidad de luz
absorbida depende de forma
lineal de la concentración.
(Mena, 2015)
Taninos
- Ensayo de cloruro férrico.
La “prueba del cloruro férrico”
es una prueba colorimétrica
tradicional para fenoles, que
usa una disolución al 1 % de
cloruro de hierro (III) que ha
sido neutralizada con hidróxido
sódico hasta que se forme un
leve precipitado de FeO(OH).
Coloración verde intenso:
Indicativo de taninos
pirocatecólicos
Coloración azul: Indicativo de
taninos pirogalotánicos.
(Hernández, 2014)
CONCLUSIONES
Mediante distintas pruebas de
tamizaje fitoquímico, se lograron
identificar saponinas y taninos en
algunos extractos de diferentes drogas
vegetales. Se identificó la presencia
22
Escuela de Ciencias de la Salud
de taninos en los extractos de ajo,
manzanilla, espinaca y café; y, de
taninos y saponinas en los de canela,
quinoa, eucalipto, hojas de laurel, té
verde y frijol.
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https://es.slideshare.net/eduardonunez90663/extractos-de-plantas
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https://sites.google.com/site/bq2014iruizcruzmariaconcepcion/v-metabolismo-de-lipidos/5-4-metabolismo-de-lipidos-de-membrana/5-4-3-metabolismo-de-esteroides
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https://es.slideshare.net/FranKlinToledo1/determinacin-de-taninos
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https://www.tuasaude.com/es/saponinas/
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Escuela de Ciencias de la Salud
ANEXOS
Tabla 4. Resultados obtenidos de las pruebas para taninos y saponinas.
Droga
vegetal
Test
afrosi-
métrico*
Precipitación
con grenetina
y NaCl
Agua
de
cal
Hipoclorito
de sodio
Positivo para
Taninos Saponinas
Ajo No
presentó
X N/A X X
Canela + X N/A X X X
Manzanilla No
presentó
No precipitó X X X
Espinaca No
presentó
No precipitó X X X
Quinoa + Precipitado
ligero
N/A X X X
Eucalipto + X N/A X X X
Café No
presentó
Precipitado
ligero
N/A X X
Frijol negro + Precipitado N/A X X X
Hojas de
Laurel
++
Altura:
0.6 mm
Ligera
turbidez
X X X X
Bolsas de
Té verde
++
Altura:
0.4 mm
Ligera
turbidez
X X X X
*NOTA1: Se valoró la presencia de la aparición de la espuma de la siguiente
manera.
● 5 - 20 min (+).
● 20 - 25 min (++).
● > 30 min (+++).
NOTA2: Se marcó con una “X” en las pruebas donde los resultados dieron positivo.
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