DETERMINACION DE TRANSAMINASAS TGO y TGP - Steffy Atencia

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Determinación de transaminasas TGO y TGP
DETERMINACIÓN BIOQUÍMICA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS HUMANAS II
LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA | CICLO IV
ÍNDICE
MATERIALES	2
Para la extracción de sangre	2
Para la prueba de TGO y TGP:	2
MARCO TEÓRICO	3
Transaminasas TGO y TGO	3
PROCEDIMIENTO	4
Para TGO	4
Para TGP	4
EQUIPO	4
Reactivos para TGO	5
Reactivos para TGP	6
RESULTADOS	6
CONCLUSIONES	7
ANEXOS	8
MATERIALES
Para la extracción de sangre:
	Guantes
	
	Tubos con gel activador de coagulación
	
	Pelotas de algodón
	
	Alcohol
	
	Torniquete
	
Para la prueba de TGO y TGP:
	Muestra de sangre
	
	Pipetas
automatizadas
	
	Tubo de ensayo
	
	Reactivos
	
	Centrífuga
	
	Espectrofotómetro
	
	Gradilla
	
	Punta color azul y
amarillo para pipetas
	
MARCO TEÓRICO
Las transaminasas son enzimas que se producen en diversas partes del organismo humano, sobretodo se pueden encontrar en el hígado. Un aumento muy elevado de transaminasas indicaría una inflamación en el hígado o en menor medida una insuficiencia cardíaca o enfermedades reumáticas, a su vez esta inflamación produce la destrucción de las células hepáticas que liberan estas enzimas a la sangre. Para la detección de las transaminasas altas es necesario realizar un examen bioquímico.
Transaminasas TGO y TGP
Las transaminasas conocidas como TGO (transaminasa glutámico oxalacética) y TGP (glutanato piruvato transaminasa) se encuentran presentes en los hepatocitos, la lesión de una célula con TGO o TGP desborda en la sangre estas enzimas generando un aumento en su concentración sanguínea. Las transaminasas TGO se encuentran en diferentes células del cuerpo (hígado, músculo cardíaco, músculo esquelético, páncreas, riñón, glóbulos rojos), mientras que las transaminsas TGP se encuentran sobretodo en las células del hígado, estas dos son las responsables del metabolismo de ciertas proteínas como el ácido L-aspártico, alfa-cetoglutarato, alanina, etc.
Los valores de referencia suelen ser:
a) TGO: 5 – 40 U/L
b) TGP: 7 a 56 U/L
· TGO y TGP por encima de 150 U/L indican enfermedad hepática. Las transaminasas elevadas por sí solas no pueden determinar la causa del daño hepático y se requiere más investigación.
· TGO y TGP superiores a 1000 U/L por lo general son causados por hepatitis viral, hepatitis inducida por fármacos (más comúnmente en el envenenamiento por paracetamol) o hepatitis isquémica.
Estas enzimas se utilizan para diagnosticar ciertas enfermedades asociadas con daño hepático y muscular. Las mediciones de transaminasas se realizan in vitro, y los niveles de estas enzimas se obtienen en pacientes sintomáticos de atención primaria junto con el historial y el examen físico del paciente.
PROCEDIMIENTO
Para TGO
La transaminasa TGO se encarga de catalizar la transferencia del grupo amino de L- aspartato a 2-oxoglutarato para generar oxaloacetato y L-glutamato, la función catalítica se determinó acoplando malato deshidrogenasa a MDH del espectrofotómetro a 340 nm después de la desaparición de NADH, el MDH extingue el cetoacidogeno, evitando así su interferencia.L- Aspartato + 2 - Oxoglutarato
Oxalacetato + NADH + H+
GOT
Oxalacetato + L - Glutamato
MDH
L – Malato + NAD +
Para TGP
La reacción impulsada por la transaminasa TGP procede a la formación de piruvato, que responde inmediatamente con LDH (lactato deshidrogenasa), de esta manera la tasa de oxidación de NADH medida a 340 nm es directamente proporcional a la actividad de TGP en la muestra. Un exceso de LDH en el medio de cultivo ayuda a reducir los cetoácidos endógenos y así evitan su interferencia.
L – Alamina + α-Cetoglutarato
TGP
Piruvato + Glutamato
 Piruvato + NADH
LDH
Lactato + NAD +
EQUIPO
El equipo necesario consta de un espectrofotómetro manual o automático que pueda leer 340 nm., baño termoregulado, timer y pipetas.
· Posteriormente a la obtención de la muestra de sangre a través del procedimiento de flebotomía se deben realizar los siguientes pasos.
1. Mezclar 1mL del reactivo 1 con 0.2 mL del reactivo 2 (no usar en caso de que se observe que la absorvancia sea menor de 0.8 OD a 340 nm).
2. Se debe dejar reposar la muestra de sangre a temperatura ambiente durante 30 minutos (no usar muestras en donde se presente una hemólisis).
3. El reactivo debe ser puesto a una temperatura de 30° a 37° C.
4. El espectrofotómetro debe ser llevado a 0 con agua destilada.
5. Mezclar 1.0 mL del reactivo con 0.1 mL de la muestra y transferir a la cubeta del espectrofotómetro.
6. Incubar 60 segundos a la temperatura de reacción.
7. La absorbancia inicial tiene que ser leída a 340 nm
8. La lectura debe ser repetida en intervalos de 60 segundos durante 3 minutos.
Factor de conversión:
Factor = Concentración Calibrador 
*A/min Calibrador
Actividad GPT (UI/L) = Factor x &A/min. muestra
Factor 1768 =	Vt	x	1000 	
 	∑NADH 340 x P x Vm
· Vt = Volumen total de reacción
· ∑NADH 340 = Coef. de extinción milimolar del NADH a 340 nm.
· P = Espesor del paso de luz en la cubeta
· Vm = Volumen de muestra utilizado
Reactivos para TGO
a) Reactivos 1
· TRIS: 110 mmol/L, pH 7,65
· L-Aspartato: 320 mmol/L
· MDH (malato deshidrogenasa): >/= 800 U/L
· LDH (lactato deshidrogenasa): >/= 1200 U/L
b) Reactivos 2
· 2-Oxoglutarato: 65 mmol/L
· NADH: 1 mmol/L
Reactivos para TGP
c) Reactivos 1
· Buffer pH 7.5 ± 0.1 120 mM
· α -Cetoglutarato 18 mM
· L-Alanina	600 mM
· Azida 0.3%
· LDH (lactato deshidrogenasa): >/= 2300 U/L
d) Reactivos 2
· Estabilizadores c.s.
· NADH: 1.5 mM
RESULTADOS
Los valores se derivan en función del "coeficiente de extinción micromolar de absorbencia" de NADH a 340 nm (0,0063). Unidades por litro (U/L) de actividad, AST/GOT es la cantidad de enzima que oxida un µmol/L de NADH por minuto.
Este factor puede variar en los analizadores automáticos debido a las diferencias en el grosor del camino óptico. En este caso, se deben utilizar calibradores de suero compatibles con el método de prueba.
Valores de referencia
· Hombres hasta 41 U/L
Mujeres hasta 31 U/
CONCLUSIONES
El hígado lleva a cabo varias funciones bioquímicas, de síntesis y de excreción, por lo cual no hay una prueba que tenga la capacidad de detectar el estado de la función total del hígado. Para esto se utilizan un conjunto de pruebas, denominadas pruebas de función hepática. Para una correcta interpretación de las pruebas hepáticas, es necesario acompañarlas de una historia clínica completa y de un examen físico apropiado, y muchas veces recurrir a las pruebas imaginológicas e incluso a la biopsia.
ANEXOS