BIOQUIMICA II INFORME 8 - Percy Humberto Paucar Cueva

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“Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia”
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
E.A.P DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
BIOQUÍMICA II
PRACTICA N° 4
TEMA: Determinación Espectrofotométrica De Acido Úrico 
DOCENTE: Mg. Enrique León Mejía 
 enrileonmejia@yahoo.es 
TURNO: MAÑANA CICLO: VII SECCIÓN: FB7M2
INTEGRANTES: 
●	GUEVARA PEREZ, Ruth
●	HURTADO SANDOVAL, Dhana
●	LEYVA LUNA, Jennifer
●	PAUCAR CUEVA, Percy
●	TICONA QUISPE, Johana
FECHA DE REALIZADA LA PRÁCTICA: 17/05/21
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 24/05/21
2021-I
Determinación Espectrofotométrica De Ácido Úrico
INTRODUCCIÓN:	3
MARCO TEÓRICO:	4
Causas de aumento y disminución de ácido úrico	5
Los exámenes que se pueden hacer abarcan:	5
Biología del ácido úrico	6
PARTE EXPERIMENTAL	7
Equipos y Materiales	7
Procedimiento	8
Resultados	10
Conclusiones:	11
Cuestionario:	13
Referencias Bibliográficas:	18
INTRODUCCIÓN:
El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas. Habitualmente la concentración de ácido úrico en suero varía de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores tales como: Sexo, dieta, origen étnico, constitución genética, embarazo. Niveles anormales de ácido úrico en suero son índice de desorden en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de inadecuada eliminación. La prueba del ácido úrico, esta prueba mide la cantidad de ácido úrico en la sangre o en la orina. 
El ácido úrico es un producto de desecho normal que se produce cuando el cuerpo descompone sustancias químicas llamadas purinas. Las purinas son sustancias que se encuentran en las células del cuerpo y también en algunos alimentos. Los alimentos con altos niveles de purinas incluyen el hígado, las anchoas, las sardinas, los frijoles secos y la cerveza.
 La mayoría del ácido úrico se disuelve en la sangre y luego va a los riñones. Desde ahí, sale del cuerpo a través de la orina. Si el cuerpo produce demasiado ácido úrico o no libera suficiente en la orina, puede formar cristales que se forman en las articulaciones. Esto se conoce como gota. La gota es una forma de artritis que causa inflamación dolorosa en y alrededor de las articulaciones. Los niveles de ácido úrico altos también pueden causar otros problemas, como cálculos renales e insuficiencia renal.
MARCO TEÓRICO:
El ácido úrico (2, 6, 8‐trihidroxipurina) es el producto de catabolismo de los nucleósidos de purina. La mayor parte de ácido úrico (AU) es reabsorbida en el sistema circulatorio después de la filtración primaria y la secreción parcial por el riñón. Los niveles de ácido úrico en fluidos fisiológicos tales como el plasma y la orina sirven como indicadores valiosos para ciertas condiciones clínicas como hipertensión, hiperuricemia entre otras. (Zhao y col., 2008, Martínez y col., 2010). De Luis y col. (2010), señalan que la gota es el síndrome clínico producido por una alteración en el metabolismo del AU, que resulta del depósito de cristales de urato en las articulaciones, tejidos blandos y tracto urinario.
 La hiperuricemia es el resultado de un incremento en la producción de AU, una disminución en su excreción o una combinación de ambos mecanismos y es un factor de riesgo para el desarrollo de gota. La hiperuricemia, además de contribuir al desarrollo de la gota, ha adquirido una gran importancia como componente del llamado síndrome metabólico. Existen relaciones significativas entre la hiperuricemia y alteraciones como hiperinsulinemia, diabetes tipo 2, hipertensión, elevación de los triglicéridos, reducción de los niveles de HDL‐c y obesidad de tipo central. Fig 1: La gota
La hiperuricemia parece ser un factor de riesgo independiente para el desarrollo de enfermedad isquémica coronaria. la asociación de estas enfermedades con el consumo de carnes. El consumo total de carnes (incluyendo como alimento principal o mezclas de: res, cerdo o cordero) carnes procesadas (salchichas, salami, tocino, hamburguesas) pollo o pavo, hígados, pescado (atún, camarones y langosta) y vegetales ricos en purinas (chicharos, frijoles, lentejas, espinacas, hongos y coliflor) está clínicamente asociado al incremento de NACAMEH Vol. 3, No. 2, pp. 15‐24, 2009 17 riesgo de gota hasta en un 21%. Este efecto es mayor en pacientes que ya tengan gota.
Causas de aumento y disminución de ácido úrico
Los altos niveles de ácido úrico en el cuerpo se denominan hiperuricemia, pueden deberse a:Fig 2: Control del acido Urico
· Acidosis
· Gota
· Dieta rica en purinas
· Insuficiencia renal
· Diabetes
Fig 3: Causantes del aumento del acido Urico
 
Los exámenes que se pueden hacer abarcan:
· Análisis del líquido sinovial (muestra cristales del ácido úrico).
· Ácido úrico en la sangre.
· Radiografía de la articulación (puede ser normal).
· Biopsia sinovial.
· Ácido úrico en la orina.Fig 4: radiografia de articulación 
 
Biología del ácido úrico
El ácido úrico es el producto final del catabolismo de las purinas en humanos producido mediante la acción enzimática de la xantino oxidorreductasa (XOR). Esta enzima se descubrió en la leche y, desde un principio, se pensó que podría participar activamente en la producción de especies reactivas del oxígeno (EROs). Existe en dos formas que son convertibles entre sí, la xantino oxidasa (XO) y la xantino deshidrogenasa (XDH). La XO reduce oxígeno molecular, mientras que la XDH reduce tanto oxígeno como el NAD+ teniendo una gran afinidad por el segundo sustrato. Además, la XDH es más abundante in vivo y puede ser convertida a XO en forma irreversible por una variedad de enzimas tales como tripsina, quimiotripsina y pancreatina. 
El hígado y el intestino delgado son las mayores fuentes de XO, pero actualmente existe evidencia que tanto el corazón como el endotelio vascular expresan XO. De hecho, su actividad se ha podido determinar a nivel endotelial humano, denominándose XO extracelular o unida al endotelio (ecXO). La principal acción enzimática de la XO es la conversión catalítica consecutiva de hipoxantina a xantina y luego desde xantina a ácido úrico.
 Por otro lado, el ácido úrico es principalmente excretado por los riñones y su concentración plasmática depende del pH de la orina, como también de otros factores tales como el volumen de orina, el volumen corporal, la función renal, dieta y el uso de ciertos medicamentos, entre otros. Los humanos poseen niveles más altos de ácido úrico que la mayoría de los otros mamíferos, pues estos últimos poseen una enzima llamada uricasa o urato oxidasa que metaboliza al ácido úrico circulante, produciendo alantoína que finalmente se elimina por la orina.Fig 4: Biologia del Acido urico 
PARTE EXPERIMENTAL
Equipos y Materiales
Materiales: 
a. Espectrofotómetro.
b. Centrifuga.
c. Baño María regulado a 37 ºC.
d. Jeringas descartables x 5mL. con aguja hipodérmica estéril.
e. Algodón, ligadura.
f. Tubos de prueba de 13 x 100 mm. 
g. Pipetas de 10 ml. Micropipetas de 0 a 50 uL.
h. Punteras amarillas, gradillas y baguetas
Reactivos
a. Set completo de reactivos para determinar ácido úrico
b. Standard de ácido úrico.
c. Alcohol medicinal.
d. Agua destilada.
Reactivo enzimático
Solución Estándar del ácido úrico 10 mg/dL
Agua destilada
Alcohol medicinal
Procedimiento
a. Se realiza una toma de muestra de sangre venosa, aproximadamente 5mL. 
b. Se lleva la muestra, colocado previamente en un tubo de ensayo, a centrífuga, por un tiempo de 10 minutos y a 3000 rpm. Se obtiene finalmente el suero.
c. Técnica operatoria: En una gradilla se dispone 3 tubos de ensayo de 13 x 100 mm., rotularlos con (S) Standard; ( P ) problema y (B) blanco.
d. Luego agregamos lo siguiente:
	
	Blanco
	Estándar
	Muestra
	
Agua destilada ml.
	
0,025 ml
	
-------------
	
--------------
	
Solución Standard de ácido úrico
	
--------------
	
0,025 ml
	
--------------
	
Suero ml.
	
--------------
	
--------------
	
0,025 ml
	
Reactivo enzimático
	
1 ml
	
1ml1ml
Agua destilada + reactivo enzimático
Estándar + reactivo enzimático
Muestra de suero + reactivo enzimático
Reacción final, se observa un cambio de coloración.
e. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o temperatura ambiente. 
d. Leer en el espectrofotómetro las absorbancias a 510 nm, llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. 
e. Finalmente con las absorbancias obtenidas, se procede a realizar el cálculo mediante una fórmula para obtener los resultados de la determinación del ácido úrico.
Resultados
Las siguientes fórmulas que vamos a utilizar son: 
Factor = 
Ácido úrico (mg/dL) = Factor x Abs. Muestra
a) Primera muestra paciente hombre
Valor estandar = 0,368
Abs. muestra o desconocido = 0,099
Factor = = 27,17 mg/dL
Ácido úrico (mg/dL) = 27.17 x 0,099
						 = 2.69 mg/dL
El paciente hombre presenta 2.69 mg/dL de ácido úrico. 
b) Segunda muestra paciente hombre
Valor estandar = 0,412
Abs. muestra o desconocido = 0,100
Factor = = 24,27 mg/dL
Ácido úrico (mg/dL) = 24,27 x 0,100
						 = 2.42 mg/dL
El paciente hombre presenta 2.42 mg/dL de ácido úrico. 
c) Tercera muestra paciente mujer
Valor estandar = 0,465
Abs. muestra o desconocido = 0,149
Factor = = 21,51 mg/dL
Ácido úrico (mg/dL) = 21,51 x 0,149
						 = 3.20 mg/dL
La paciente mujer presenta 3.20 mg/dL de ácido úrico. 
Conclusiones:
Hombres:3 a 7 mg de ácido úrico/dL. Mujeres:2 a 6 mg de ácido úrico/dL.
a) El paciente hombre presentó 2.69 mg/dL de ácido úrico y como pudimos observar los valores normales de ácido úrico en hombres es de 3 a 7mg de ácido úrico/dL por lo tanto se deduce que el paciente está por debajo de los valores normales. 
Existen varios trastornos genéticos que pueden provocar un nivel de ácido úrico bajo:
· Síndrome de Fanconi. Afecta a los túbulos renales, que no absorben correctamente el ácido úrico necesario.
· Xantinuria hereditaria. Trastorno del metabolismo de la purina causado por un déficit de la encima xantina. En ese caso, el ácido úrico es bajo, mientras que la concentración de xantina en la orina es excesiva. 
· Enfermedad de Wilson. Provoca que el cuerpo no se pueda deshacer del cobre correctamente. Ese exceso de cobre se almacena en el hígado, riñones, ojos y cerebro, pudiendo provocar un ácido úrico bajo e, incluso, la muerte de los tejidos.
b) El paciente hombre presenta 2.42 mg/dL de ácido úrico. Por lo general, un nivel bajo no es peligroso y puede considerarse como grave, pero sí que puede revelar la existencia de otras enfermedades. 
Por ejemplo, algunas enfermedades que disminuyen los niveles de ácido úrico son las siguientes:
· síndrome de secreción inadecuada de la hormona diurética,
· enfermedades hepáticas como la enfermedad de Wilson,
· una ingesta baja en purinas procedentes de la proteína.
· Síndrome de Fanconi
· alcoholismo
· enfermedades hepáticas
· enfermedades renales
Algunos medicamentos como el alopurinol , utilizado habitualmente para enfermos de gota, y otros como los corticosteroides, los estrógenos y la Warfarina , también pueden reducir los niveles de ácido úrico en sangre.
c) La paciente mujer presenta 3.20 mg/dL de ácido úrico y los valores normales para las mujeres es de 2 a 6 mg de ácido úrico/dL por lo tanto la paciente se encuentra dentro de los valores normales, y no presente ninguna alteración o problema en su organismo. 
	
Cuestionario:
a. Explique a que se debe la coloración azul que se obtiene al final de la reacción, ocurrida en la determinación de ácido úrico.
La práctica que se realizó en laboratorio la determinación de ácido úrico, el peróxido de hidrógenos que se formó en este proceso reacciona con Ac. 3-5-Dicloro-2-Hidroxi-Bencensulfónico (DCBS) y 4-aminoantipirina (4-AAP) mediante enzima peroxidasa (POD) se forma un compuesto coloreado en nuestro caso se obtuvo color rosado (Figura 2).
Figura 1: Determinación cuantitativa de ácido úrico (1)
Figura 2: complejo coloreado rosado 
Por lo que podemos decir que en nuestra practica no se obtuvo un complejo coloreado azul, pero se puede obtener complejo coloreado utilizando otros reactivos como se observa en la Figura 3:
Figura 3: determinación cuantitativa ácido úrico 
En esta reacción química el peróxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4-aminoantipirina y TOOS (N-etilo-N-(hidroxi-3-sulfopropilo)-m-toluidina) y se convierte en un colorante azul violáceo. Como se observa en esta reacción si se obtiene complejo coloreado debido a que se utilizó reactivo TOOS. Además, también se observa diferencia en absorbancia que con la reacción anterior.
	Reacción 1
	Reacción 2
	H2O2 + DCBS + 4-AAP = complejo coloreado (complejo rosado)
	2 H2O2 + TOOS + 4-AAP = complejo azul violáceo 
	Máximo de absorción a 520 nm.
	Absorbancia a 540 nm.
 
b. Enumere las causas de un incremento elevado de ácido úrico, no debidas a una patología.
El ácido úrico es el producto final de la degradación de ciertas proteínas que han sido ingeridas con la dieta, el ácido elimina por el riñón formando parte de la orina. El incremento elevado de ácido úrico se conoce como hiperuricemia está por encima de 7 mg/dl. 
Las causas incremento elevado de ácido úrico, no patológicas, son(3):
1. Exceso de entrada (dieta)
1.1. Ingesta de alcohol: bebidas alcohólicas altas en purinas como cerveza, alimentos causen incremento catabolismo de ATP
1.2. Alimentos ricos en fructosa: El exceso de fructosa-1-fosfato provoca un gran aumento tanto en ADP como AMP tiene relación formación de ácido úrico.
1.3. Alimentos ricos en purinas: son mariscos, carnes rojas (especialmente las vísceras).
2. Fármacos
2.1. Diuréticos: pueden aumentar el riesgo de tener gota, aumentan la necesidad de orinar lo cual reduce la cantidad de líquido en el cuerpo.
2.2. Agentes quimioterapéuticos: como la ciclosporina y el tacrólimus disminuyen el índice de filtración glomerular lo que cual provoca hiperuricemia.
2.3. Toxinas: afecta la excreción de ácido úrico por acción del berilio.
Tabla 1: Causas de sobreproducción de ácido úrico (4)
c. ¿Cómo se debe proceder para determinar ácido úrico en caso de sueros lipémico?
El suero lipémico consiste en el aspecto lechoso de una muestra de laboratorio debido al alto contenido de grasa plasmática.
Figura 4: Suero lipémico 
El Procedimiento de dilución en muestras lipémicas: se debe de diluir el suero lipémico con solución salina fisiológica (NaCl 0.9%) y multiplicar el resultado por la dilución efectuada, para las determinaciones de química sanguínea básica.
En el ácido úrico No se observa una mayor afectación en el resultado al usar sueros lipémicos en concentraciones de triglicéridos de hasta 1121 mg/dL. 
Figura 5: evidencia suero lipémico (5)
d. ¿Por qué no utiliza la longitud de onda de 650nn para leer la reacción coloreada?
No se utiliza esa longitud de onda porque de acuerdo a la ficha técnica del laboratorio solo puede utilizarse en un máximo de absorción a 520 nm. Tenemos que respetar ese rango porque saldría mal la muestra y afectaría en la absorbancia de determinación de ácido úrico. 
e. ¿Cómo procedería para determinar ácido úrico utilizando UV?
Para realizar la determinación de ácido úrico nos guiaremos de un trabajo de investigación(6) que utilizó un espectrofotómetro GENESYS 20. 
1. Se partió de una solución madre de 5mg/dL para preparar diferentes concentraciones de ácido úrico (Figura 6).
Figura 6: concentraciones de ácido úrico 
2. Procede leer las absorbancias a 520 nm y prepara solución colocar en tubos de ensayo.
3. Se procedió a construir una curva de calibración.
Tabla 2: preparación del reactivo del trabajo
Se preparó disolviendo el reactivo enzimático con 50mL de Buffer (Laboratorio Haiga). Luego se procedió como se indica en el cuadro (Tabla 2) se mezclaron los tubos y se incubaron a 37°C, durante 5 minutos.
Para el cálculo de ácido úrico se utilizó la siguiente formula:
Referencias Bibliográficas:
1. 	VALTEK diagnostics. ACIDO URICO (UOD-PAP) [Internet]. Santiago de Chile ; 2016 Aug [cited 2021 May 23]. Availablefrom: https://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/VTK-acido-urico.pdf
2. 	Diagnostic Systems GmbH. Ácido úrico FS [Internet]. 2005 May [cited 2021 May 23]. Available from: http://docshare04.docshare.tips/files/5094/50941947.pdf
3. 	Ríos V, Pacheco C, Rascón A, Nevárez M. Síndrome de Hiperuricemia: Una Perspectiva Fisiopatológica Integrada . Arch Med [Internet]. 2020 May 27 [cited 2021 May 23];16(2):1–9. Available from: https://www.archivosdemedicina.com/medicina-de-familia/siacutendrome-de-hiperuricemia-una-perspectiva-fisiopatoloacutegica-integrada.pdf
4. 	Bueso S, Serna B, Puig G. Un paciente con hiperuricemia . Med Integr [Internet]. 2000 Feb [cited 2021 May 23];35(3):100–11. Available from: https://www.elsevier.es/es-revista-medicina-integral-63-articulo-un-paciente-con-hiperuricemia-15362
5. 	Silva M. Incidencia del manejo de muestras lipémicas y hemolizadas en la calidad de los resultados de química sanguínea básica, obtenidos en los laboratorios clínicos del centro de la ciudad de ambato, durante el periodo enero-julio del 2014 [Internet]. Ambato; 2015 Feb [cited 2021 May 23]. Available from: https://repositorio.uta.edu.ec/jspui/bitstream/123456789/9402/1/Silva Salas%2C Mayra Maricela.pdf
6. 	Rima E, Pernía L. Niveles de ácido úrico y urea en orina de individuos consumidores de chimó utilizando técnicas de espectrofotometría visible [Internet]. [Mérida ]: Universidad de los Andes ; 2014 [cited 2021 May 23]. Available from: http://bdigital.ula.ve/storage/pdf/40079.pdf
 
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