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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA Escuela profesional de tecnología médica especialidad laboratorio clínico y anatomía patología TEMA: Colección, Preservación y Transporte De Muestras Fecales. Examen Macroscópicoy Microscópico y Métodos De Concentración en el Diagnóstico de Enteroparásitos ALUMNO: Tasayco Laura Kevin Josseph. DOCENTE: GIANCARLO JESUS JARA PISCONTI CHINCHA – PERU 2023 INTRODUCCION En esta parte vamos a ver las diferentes metodos de obtencion de muestra correctamente, conservacion, transporte y procesamiento de las diversas muestras que obtenemos de las muestras en los laboratorios. Lo principal de esto es poder procesar las muestras lo antes posibles y no fuera el caso aplicar un fijador para conservar la muestra con las diversas estructuras parasitarias para su estudio para el analisis de dichas muestras. Ademas veremos las diversas tecnicas para aplicarlas para el procesamiento de las diversas muestras, como tecnicas de sedimentacion rapida, sedimentacion con fuerza centrifuga entre otras muchas tecnicas que se explicaran en este informe. DESARROLLO I. Bases Teoricas I.I Examen directo macroscopicos El examen directo macroscopios es principalmente para describir aspectos a siemple vista de las diferentes muestras fecales que se obtienen de los pacientes. Esta descripcion incluye coloracion de las heches, formas, consistencia y peso de la la heches. I.II Examen directo microscopico El examen directo microscopico es para poder distinguir las diversas formas evolutivas de los parasitos a nivel microscopico comopuden ser los quistes y trofosoitos. II. Bases Practicas II.I EXAMEN DIRECTO O DEL MONTAJE HUMEDO II.I.I Generalidades. - Trofozoitos o quistes de protozoarios, huevos o larvas de helmintos en buena cantidad. - Util para el primer despistaje. - Es sencillo y rapido, adecuado para muestras diarreicas con sospechas de amebiasis - Insuficiente para elcmpleto diagnostico parasitologia. II.I.II Procedimeinto. o Colocar en un extremo de la lámina portaobjeto una gota de suero fisiológico y, con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal, emulsionarla y cubrirla con una laminilla cubreobjeto. o Colocar en el otro extremo de la lámina portaobjeto, una gota de lugol y proceder a la aplicación de l a muestra fecal como en el párrafo anterior. o Con el suero fisiológico, los trofozoítos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, núcleos y vacuolas. o En algunos casos, se recomienda el uso de colorantes vitales, debido a que no alteran la actividad del trofozoíto. Los más usados son verde brillante 0,2% y rojo neutro 0,01% o Observar al microscopio a 10X ó 40X. No es aconsejable usar objetivo de inmersión (100X), pues se puede ensuciar el microscopio o Recorrer la lámina siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a izquierda, o de arriba a abajo. II.II. TECNICA DE SEDIMENTACION ESPONTANEA EN TUBO II.II.I Generalidades - Empleado para despistaje definitivo de enteroparasitos - La sensibilidad de triplica - Facil reproducible y economico. II.II.II Procedimientos o Tomar la muestra de heches y homogenizar con suero fisiologico en un tubo o en el mismo recipiente de la muestra o Colocar gasa, hundiendola en la abertuda del tubo y sujetarlo con una liga. o Filtrar el homogeneizado por la gasa llenando el tubo hasta la cuarta parte del tubo. o Agregar suero fisiologico hasta 1cm por debajo del borte del tubo. o Ocluir la abertura del tubo con una tapa. o Agitar el tubo por 15 sg aproximadamente o Dejar reposar de 30 a 40 min. En caso el sobrennadante siga tubo repetir los pasos anteriores hasta tener un sobrenadante claro. o Aspirar la parte media del tubo con pipeta y colocar una gota en la lamina portaobjeto. o Aspirar el sedimento y colocarlo en un portaobjeto o Agregar una gota de lugol y cubrirlos con una laminilla de celofan y observar al microscopio. II.III TECNICA DE SEDIMENTACION RAPIDA DE LUMBRERAS II.III.I GENERALIDADES - Concentracion de huevos a mayor densidad entre los helmintos. - Es de diagnostico mas certero por la diferencia de densidades. - Requiere: Placa petri, coladera, reciiente 10ml y agua corriente. II.III.II PROCESAMIENTO o Homogeneizar 3 a 6g de heces con 10 a 20ml de agua destilada. o Colocar colador y dos capas de gasa en un vaso y filtrarla. Llenar la copa con agua destilada de 1cm debajo del borde. o Dejar sedimentar la muestra 30 min o Decantar la 2/3 parte del contenido, agregar nuevamente agua, repetir cada 10 min por 3 a 4 veces hasta que el sobrenadante quede limpio. o Tranferir lo sedimentado a un placa petro ayudada con una pipeta pasteur. o Observar el esterooscopio o miscroscopio a menor aumento. II.IV TECNICA DE FAUST II.IV.I GENERALIDADES - Basado en que los quistes y huevos de parasitos floten en la superficiene por menor densidad. - Uso principal el sulfato de zinc II.IV.II PROCEDIMIENTO o Primero se homogeniza con solucion salina 10ml o Filtrarlo en una gasa a un vaso precipitado o Colocar en un tubo de 15ml y centrifugar o Decantar el sobrenandante y agregar sulfato de zinc o Homogenizar y centrifugar. o Agregar sulfato de zinc hasta el tope del tubo o Colocar un cubre objetos en el tope del tubo y colocarlos en un portaobjetos y hacer la lectura en el microscopio. II.V TECNICA DE RITCHIE II.V.I GENERALIDADES - Basado en uso de la fuerza centrifuga para poder sedimentar huevos y quistes de parasitos - Ayudado de de formol y eter para separar y visualizar los elementos parasitarios. II.V.II PROCESAMIENTO o Primero se homogeniza con solucion salina 10ml o Filtrarlo en una gasa a un vaso precipitado o Colocar en un tubo de 15ml y centrifugar o Decantar el sobrenandante y formol eter o Homogenizar y centrifugar. o Verificar la presencia de 4 capas o Descartar el sobrenadante o Preparar las laminas con el sedimento y observar en el microscopio. II.VI TECNICA DE BEARMAN MODIFICADO EN COPA POR LUMBRERAS II.VI.I GENERALIDADES - Capaz de recuperar trofozoitos y helmientos de las muestras - Migracion al fondo de copa por induccion de tropismo - Examen seriado por tres veces - La sensibilidad de diagnostico de strongyloides stercoralis es del 90% II.VI.II PROCEDIMIENTO o Colocar la coladera o rejilla metálica con la gasa doblada (2 a 3 capas) dentro de la copa o Colocar sobre la gasa, 4 a 6 g de la muestra de heces en fresco o Verter solución salina a 37ºC en cantidad suficiente por el borde de la copa. o Dejar a temperatura ambiente o en estufa a 28ºC - 37°C de 30 a 50 minutos. o Sacar la coladera o rejilla y con ayuda de una pipeta Pasteur obtener 1 mL de sedimento. o Colocar el sedimento en una luna de reloj o lámina cavada y observar al microscopio o esteroscopio. II.VII. TECNICA DE KATO KATZ II.VII.I GENERALIDADES - Cuantificacion de carga parasitaria de heces - Las heces son tamizadas - El numero de huevecillos encontrados se multiplica por 14 para el reporte por gramo de heches. II.VII.II PROCEDIMEINTO. o Con un aplicador (bajalengua) transferir la muestra fecal (0,5-1g) sobre el papel absorbente. o Colocar una malla o nylon de 2 x 3 cm. sobre la muestra. o Con el aplicador del kit comprimir la malla para tamizar la muestra. o Colocar el molde de plástico sobre la lámina portaobjeto y rellenar la perforación con la muestratamizada. o Levantar el molde dejando el “cilindro” de la muestra en la lámina portaobjeto. o Colocar la laminilla glicerinada con verde de malaquita sobre la muestra y con ayuda de un tapón de jebepresionar sobre la laminilla, buscando extender la muestra. o Dejar para la diafanización a temperatura ambiente de 30 a 45 minutos. II.VIII. TECNICA DE GRAHAM II.VIII.I GENERALIDADES - Empleado para el diagnostico de enterobiasis en pacientes preescolcares. - Se ralizan toqyes anales con cinta adhesiva - Huevos o adultos se quedan adeheridos - Realizar tres veces alcanza una sensibilidad del 90% II.VIII.II PROCESAMEINTO. o Separar los glúteos del paciente para que quede expuesta la región perianal, donde se localizan los huevos del nematodo. o Aplicar la superficie adhesiva a la región anal y perianal. o Retirar la cinta adhesiva y pegarla a lo largo del portaobjetos. o Retirar los guantes y lavarse las manos tras la recogida de la muestra. II.IX TECNICA DE ZIEKL NEELSEN MOFIFICADO II.IX.I GENERALIDADES - Se basa en el compartameinto de acidos resistentes de la cubierta de parasitos - Son teñidos de rojo con fondo verde o azul dependiendo el contraste usado. II.IX.II PROCEDIMEINTO o Colocar las láminas portaobjetos sobre el soporte de las varillas de vidrio. o Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de heces en la lámina portaobjeto y dejar secar. o Fijar la lámina con alcohol metílico de 2 a 5 minutos y dejar secar. o Agregar hidróxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el exceso y lavar con agua. o Cubrir la lámina con la fucsina fenicada (previa agitación del frasco) por 5 minutos, diluida previamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2 mL de agua). o Lavar suavemente la lámina portaobjeto con agua corriente. o Decolorar con alcohol-ácido, cubriendo el portaobjeto por unos segundos hasta quitar el colorante. o Lavar suavemente el portaobjeto con agua. o Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1-1,4% durante 5 minutos, diluidas previamente al tercio. o Lavar la lámina suavemente con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente. o Realizar el montaje con cytoseal, CONCLUSIONES En conclusion lo visto aquí refleja las diversas variedades de metodos y tecnicas utilizados para poder cuantificar, identificar u diagnosticas a a un pacientes por medio de estos metodos, hay algunos metodos especializados que son especificamente para ciertos parasitos como otros su son para parasitos helmintos o protozoos. Todo formato de respuesta de resultados debe contener los datos de identificación: nombre, edad, sexo, fecha, las características organolépticas de las heces (consistencia, color, presencia de sangre y moco), datos de la observación microscópica (presencia de leucocitos, eritrocitos, levaduras, fibras musculares no digeridas y parénquima de células vegetales en cantidad considerable), ya que esta información facilitará un mejor diagnóstico clínico Para terminar todos los metodos explicados en este informe nos ayuda a poder identificar a diversas estrcuturas parasitarias y poder dar un resultado con lo observamos en la diversas muestras de heces que nos manden procesar. BIBLIOGRAFIA De Parasitología, M. (s/f). 5.2 Método de Baermann modificado. Bvs.hn. Recuperado el 11 de mayo de 2023, de http://www.bvs.hn/Honduras/Parasitologia/ManualParasitologia/flash/files/res/do wnloads/page_0079.pdf FAPap - Test-de-graham. (s/f). Fapap.es. Recuperado el 11 de mayo de 2023, de https://fapap.es/articulo/395/test-de-graham Un nuevo método, más sensible, para detectar huevos de helmintos en heces. (2002). Revista panamericana de salud publica [Pan American journal of public health], 12(2), 126–127. https://doi.org/10.1590/s1020-49892002000800011 (S/f-a). Org.co. Recuperado el 11 de mayo de 2023, de http://www.scielo.org.co/pdf/iat/v26n1/v26n1a02.pdf (S/f-b). Gob.pe. Recuperado el 11 de mayo de 2023, de http://bvs.minsa.gob.pe/local/INS/165_NT37.pdf http://www.bvs.hn/Honduras/Parasitologia/ManualParasitologia/flash/files/res/downloads/page_0079.pdf http://www.bvs.hn/Honduras/Parasitologia/ManualParasitologia/flash/files/res/downloads/page_0079.pdf https://fapap.es/articulo/395/test-de-graham https://doi.org/10.1590/s1020-49892002000800011 http://www.scielo.org.co/pdf/iat/v26n1/v26n1a02.pdf http://bvs.minsa.gob.pe/local/INS/165_NT37.pdf ANEXOS SEDIMENTACION ESPONTANEA SEDIMENTACION RAPIDA DE LUMBRERAS TECNICA DE GRAHAM TECNICA E KINYOUNG
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