1 Actividad Complemenaria TERMINADA

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Cátedra de Anatomía e Histología 
FFyB – UBA 
 
Entrenamiento para Exámenes Regulatorios 
Actividades TP 1 
 
1) Recibís una muestra para la determinación de distintos tipos de macromoléculas. Completá el 
siguiente cuadro indicando en cada caso qué colorante utilizarías, a qué tipo de técnica 
corresponde, y qué color predominante observarás en la muestra. 
MACROMOLÉCULA A 
DETERMINAR 
COLORANTE TIPO DE TÉCNICA 
COLOR PREDOMINANTE 
OBSERVADO 
Hidratos de carbono de 
alto peso molecular 
 
Lípidos 
Proteínas 
ADN 
Glicorpoteínas 
 
2) Estás siguiendo un protocolo para realizar la técnica histológica convencional, y te enfrentás a 
ciertos inconvenientes. Uní con flechas indicando cuál/es podría/n ser las posibles causas de cada 
uno de los problemas. Justificá en todos los casos. 
PROBLEMA POSIBLE CAUSA 
a. No se puede cortar la 
muestra con micrótomo. 
La hematoxilina y eosina 
no se solubilizaron en la 
muestra 
En el paso previo a la 
coloración utilizaste xilol en 
lugar de agua destilada. 
b. El cubreobjetos no adhirió al 
portaobjetos ni a la muestra. 
La muestra no se incluyó 
bien en parafina 
Invertiste el orden de los 
alcoholes de hidratación. 
Invertiste el orden de los 
alcoholes de deshidratación. 
c. Al ver los preparados al MO, 
observás que casi no tenían 
color. 
El bálsamo de Canadá no 
se pegó a la muestra 
Olvidaste el paso de aclaración 
con xilol. 
 
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Negro
Rojo
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Marron/Negro
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Histoquimica
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Eosina
Naranja G
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Histologica convencional
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Azul
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Fucsia
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PAS (Ac. peryodico + rvo de Schiff)
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Hematoxilina
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Tecnica Histoquimica
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SUDAN (black B; II; III; IV)
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Metales pesados p/ME
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Tetroxido de osmio
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Histologica convencional
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Rosa
Naranja
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JUSTIFICACIÓN: 
a. __________________________________________________________________________________ 
____________________________________________________________________________________ 
b. __________________________________________________________________________________ 
____________________________________________________________________________________ 
c. __________________________________________________________________________________ 
____________________________________________________________________________________ 
 
3) Recibís un preparado histológico para diagnosticar. Para cada una de las siguientes situaciones, 
indicá las posibles causas del problema y justificá cómo lo solucionarías. 
a. Está enfocando el preparado y al observar por los oculares ves todo negro. 
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b. Sin darte cuenta rompés el preparado histológico contra la lente objetivo. 
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c. Luego de observar el preparado con un objetivo de 10X, querés pasar a 40x y no lográs enfocarlo. 
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4) Trabajás en un laboratorio de técnica histológica que se divide en cuatro áreas, cada una encargada 
de analizar distintos aspectos de los tejidos: 
• Ultraestructura celular 
• Superficie de las células 
• Tejidos muertos teñidos con hematoxilina y eosina 
• Tejidos vivos teñidos con azul de metileno 
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si no se deshidrata bien la muestra el balsamo de Canada no se pega como debe y el cubreobjetos tampoco se ahiere por las particulas de agua que le quedan
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Causas: el MO esta pagado; el preparado fue mal realizado, estoy enfocando con un objetivo equivocado; Solucion: determinar que el preparado este en correctas condiciones, verificaria MO (los objetivos y la distancia del revolver al preparado)
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Causa: se piede deber a que el haz de luz no este atravezando la muestra correctamente, que la muestra este muy lejos, que se este manipulando el MO con el tonillo macrometrico
Solucion: volver al objetivo de 10X poner en foco bien la muestra y luego pasar al otro objetivo.
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si se olvida aclarar la muestra con xilol la parafina no logra incluirse bien en la muestra, porque esta es soluble en xilol y al estar anteriormente en la muestra logra la correcta inclusion
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los colorantes son soluciones acuosas por lo que el preparado debe estar correctamente hidratado en el momento de colocarlos de lo contrario no se adhieren bien al tejido y no colorean como se espera
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Causa: no se manipulo incorrectamente el MO (se utilizo el tornillo macrometrico)
Solucion: hay que realizar un nuevo preparado
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Te encargaron la tarea de comprar un microscopio para cada una de las áreas, y para ello disponés de un 
catálogo con las siguientes opciones: 
a. Microscopio óptico de campo claro con oculares de 10X,objetivos con aumentos entre 4X y 
100X, y una apertura numérica (AN) de 0.60 en la lente de 40X. 
b. Microscopio óptico de campo claro con oculares de 10X, objetivos con aumentos entre 4X y 
100X, y una apertura numérica (AN) de 0.40en la lente de 40X. 
c. Microscopio óptico de campo claro con oculares de 10X y 20X,objetivos con aumentos entre 
4X y 100X, y una apertura numérica (AN) de 0.60en la lente de 40X. 
d. Microscopio óptico de fluorescencia con oculares de 10X, y el objetivo 40X con una apertura 
numérica (AN) de 0.40. 
e. Microscopio electrónico de transmisión. 
f. Microscopio electrónico de barrido. 
 
Decidí qué microscopio es el más adecuado para cada área y justificá. 
• Ultraestructura celular 
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• Superficie de las células 
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• Tejidos muertos teñidos con hematoxilina y eosina 
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• Tejidos vivos teñidos con azul de metileno 
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f. Microscopio electronico de barrido
este microscopio por su funcionamiento de que el haz de electrones choca con la superficie de la celula creando imagenes electronicas que nos permiten ver la superficie de las celulas
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a.Microscopio optico de campo claro con oculares de 10x, objetivos con aumentos entre 4x y 100x, y una apertura numerica (AN) de 0,60 en la lente de 40x
como la tecnica de tincion esla de rutina que solo permite ver nucleos y el citoplasma general no se necesita un microscopio muy sofisticado
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e. Microscopio electronico de transmision
este microscopio por su poder resolutivo permite observar la ultras estructuras de las celulas
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b.MOCC con oculares de 10x, objetivos con aumentos entr 4x y 100x, y una apertura numerica (AN) de 0,40 en la lente de 40x
como se va a utilizar una muestra con una tecnica especifica de azul de metileno se necesita una buena resolucion para observar en la muestra lo que se tinio exactamente y detectar lo que queremos
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Ayuda 
 
1) Opciones para completar en el cuadro: 
COLORANTE 
 
TIPO DE TÉCNICA 
 COLOR PREDOMINANTE 
OBSERVADO 
Ácido peryódico + Rtvo de Schiff Histológica convencional Azul 
Ácido clorhídrico + Rtvo de Schiff Histoquímica Violeta 
Sudan Inmunohistoquímica Fucsia 
Alcian Blue Con metales pesados para ME Negro 
Orange G Naranja 
Tetróxido de osmio 
Sales de plata 
Hematoxilina 
Eosina 
 
2) Tené en cuenta la secuencia de pasos de la técnica histológica convencional. 
¿Cuál es el objetivo de los pasos de hidratación, deshidratación y aclaración? ¿Qué 
consecuencias trae olvidarse esos pasos? 
 
3) Tené en cuenta la secuencia de pasos para enfocar un preparado histológico al MO. 
 
Posibles problemas: 
• El MO esta desenchufado. 
• Estás intentando enfocar el preparado histológico con la lente objetivo de 40x. 
• La platina con el preparado se encuentra alejada de la lente objetivo. 
• El revólver se encuentra torcido y no hay ninguna lente objetivo seleccionada. 
• Usaste el tornillo macrométrico con el objetivo de 40x. 
• El haz de luz no se encuentra atravesando el corte de tejido en el preparado histológico. 
• Usaste el tornillo macrométrico para subir la platina mirando por los oculares. 
• La fuente de luz del MO no está encendida. 
• El preparado se encuentra con el cubre hacia abajo. 
 
4) Tené en cuenta la utilidad de cada tipo de microscopio. 
 
Para microscopía óptica: 
LR = 0.62 * λ / AN 
AN = senα * n