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Cátedra de Anatomía e Histología FFyB – UBA Entrenamiento para Exámenes Regulatorios Actividades TP 1 1) Recibís una muestra para la determinación de distintos tipos de macromoléculas. Completá el siguiente cuadro indicando en cada caso qué colorante utilizarías, a qué tipo de técnica corresponde, y qué color predominante observarás en la muestra. MACROMOLÉCULA A DETERMINAR COLORANTE TIPO DE TÉCNICA COLOR PREDOMINANTE OBSERVADO Hidratos de carbono de alto peso molecular Lípidos Proteínas ADN Glicorpoteínas 2) Estás siguiendo un protocolo para realizar la técnica histológica convencional, y te enfrentás a ciertos inconvenientes. Uní con flechas indicando cuál/es podría/n ser las posibles causas de cada uno de los problemas. Justificá en todos los casos. PROBLEMA POSIBLE CAUSA a. No se puede cortar la muestra con micrótomo. La hematoxilina y eosina no se solubilizaron en la muestra En el paso previo a la coloración utilizaste xilol en lugar de agua destilada. b. El cubreobjetos no adhirió al portaobjetos ni a la muestra. La muestra no se incluyó bien en parafina Invertiste el orden de los alcoholes de hidratación. Invertiste el orden de los alcoholes de deshidratación. c. Al ver los preparados al MO, observás que casi no tenían color. El bálsamo de Canadá no se pegó a la muestra Olvidaste el paso de aclaración con xilol. Cátedra de Anatomía e Histología FFyB – UBA JUSTIFICACIÓN: a. __________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________ b. __________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________ c. __________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________ 3) Recibís un preparado histológico para diagnosticar. Para cada una de las siguientes situaciones, indicá las posibles causas del problema y justificá cómo lo solucionarías. a. Está enfocando el preparado y al observar por los oculares ves todo negro. _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ b. Sin darte cuenta rompés el preparado histológico contra la lente objetivo. _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ c. Luego de observar el preparado con un objetivo de 10X, querés pasar a 40x y no lográs enfocarlo. _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ 4) Trabajás en un laboratorio de técnica histológica que se divide en cuatro áreas, cada una encargada de analizar distintos aspectos de los tejidos: • Ultraestructura celular • Superficie de las células • Tejidos muertos teñidos con hematoxilina y eosina • Tejidos vivos teñidos con azul de metileno Cátedra de Anatomía e Histología FFyB – UBA Te encargaron la tarea de comprar un microscopio para cada una de las áreas, y para ello disponés de un catálogo con las siguientes opciones: a. Microscopio óptico de campo claro con oculares de 10X,objetivos con aumentos entre 4X y 100X, y una apertura numérica (AN) de 0.60 en la lente de 40X. b. Microscopio óptico de campo claro con oculares de 10X, objetivos con aumentos entre 4X y 100X, y una apertura numérica (AN) de 0.40en la lente de 40X. c. Microscopio óptico de campo claro con oculares de 10X y 20X,objetivos con aumentos entre 4X y 100X, y una apertura numérica (AN) de 0.60en la lente de 40X. d. Microscopio óptico de fluorescencia con oculares de 10X, y el objetivo 40X con una apertura numérica (AN) de 0.40. e. Microscopio electrónico de transmisión. f. Microscopio electrónico de barrido. Decidí qué microscopio es el más adecuado para cada área y justificá. • Ultraestructura celular _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ • Superficie de las células _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ • Tejidos muertos teñidos con hematoxilina y eosina _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ • Tejidos vivos teñidos con azul de metileno _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________ Cátedra de Anatomía e Histología FFyB – UBA Ayuda 1) Opciones para completar en el cuadro: COLORANTE TIPO DE TÉCNICA COLOR PREDOMINANTE OBSERVADO Ácido peryódico + Rtvo de Schiff Histológica convencional Azul Ácido clorhídrico + Rtvo de Schiff Histoquímica Violeta Sudan Inmunohistoquímica Fucsia Alcian Blue Con metales pesados para ME Negro Orange G Naranja Tetróxido de osmio Sales de plata Hematoxilina Eosina 2) Tené en cuenta la secuencia de pasos de la técnica histológica convencional. ¿Cuál es el objetivo de los pasos de hidratación, deshidratación y aclaración? ¿Qué consecuencias trae olvidarse esos pasos? 3) Tené en cuenta la secuencia de pasos para enfocar un preparado histológico al MO. Posibles problemas: • El MO esta desenchufado. • Estás intentando enfocar el preparado histológico con la lente objetivo de 40x. • La platina con el preparado se encuentra alejada de la lente objetivo. • El revólver se encuentra torcido y no hay ninguna lente objetivo seleccionada. • Usaste el tornillo macrométrico con el objetivo de 40x. • El haz de luz no se encuentra atravesando el corte de tejido en el preparado histológico. • Usaste el tornillo macrométrico para subir la platina mirando por los oculares. • La fuente de luz del MO no está encendida. • El preparado se encuentra con el cubre hacia abajo. 4) Tené en cuenta la utilidad de cada tipo de microscopio. Para microscopía óptica: LR = 0.62 * λ / AN AN = senα * n
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