Apuntes microscopía

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Microscopía y muestras
histológicas
SEMANA 1
¿Qué es la histología (anatomía microscópica)?
Es la ciencia que estudia la disposición de los
diferentes tejidos orgánicos a nivel microscópico
concibiendo una visión estructural y fisiológica de
los diferentes órganos y sistemas corporales.
Microscopía y muestras
histológicas
¿Qué son los tejidos?
Son asociaciones celulares con diferenciación
semejante.
Importancia de la histología
Organización estructural y molecular de las
células: ayuda a la comprensión de procesos
bioquímicos y fisiológicos 
Anatomía microscópica: ayuda al
entendimiento de la morfología corporal
Buen desarrollo durante la morfogénesis:
adecuada arquitectura histológica en órganos
y sistemas 
Preparaciones histopatológicas: ayuda a la
compresión de cambios morfofisiológicos, el
origen de las enfermedades y compresión de
la patología
PARTES DEL MICROSCOPIO
GENERALIDADES
Brazo
Desplazamiento x-y
Intensidad de luz
Sistema de
iluminación
Cabezal
Brazo
Macrométrico
Micrométrico
Oculares
Revólver
Platina
Condensador
Diafragma
Objetivos
Oculares
Amplían la imagen que ha sido previamente
aumentada mediante el objetivo.
Cabezal
Contiene los sistemas de lentes oculares, puede ser
monocular o binocular
Es la pieza intermedia del microscopio que conecta
todas sus partes.
Revólver
Contiene los sistemas de lentes objetivos, permite
al girar, cambiar los objetivos.
Objetivos
4X
10X
40X
100X
Conjunto de lentes que se encuentran más cerca
de la muestra y que producen la primera etapa de
aumento.
Platina
Superficie donde se coloca la muestra que se
quiere observar.
Microscopio óptico
Tipos de microscopio electrónico
De transmisión (MET)
De barrido (MEB)
De fuerza atómica (MFA)
Alta resolución
Superficies naturales
Resolución atómica
Magnitud de diferentes células y componentes
Diafragma
Regula la cantidad de luz que entra en el
condensador.
Condensador
Concentra los rayos de luz provenientes del foco a
la muestra.
Macrométrico y micrométrico
Macrométrico: aproxima el enfoque. 
Micrométrico: consigue el enfoque correcto. 
Desplazamiento x-y
Desplaza la platina hacia adelante o hacia atrás y
de derecha a izquierda.
Hasta 1.000X
Microscopio electrónico
Magnificación: 
> 100.000X
Resolución
Ojo desnudo: 0.08 mm
0.3 μm (*1.000 veces) 0.3 nm (*1.000 veces)
Identificación
- Células
- Bacterias
- Virus
- Ultraestructuras
celulares 
- Aglomeraciones
proteicas: filamentos
citoplasmáticos
- Biopolímeros: glucógeno
Óvulo diferenciado 
Célula epitelio intestinal
Hepatocito
Linfocito
~ 250 - 300 μm
~ 20 - 25 μm
~ 15 - 30 μm
~ 8 μm
Eritrocito ~ 7,6 μm
Mitocondrias
Microvellosidades
Bacterias
Virus
Partícula de glucógeno
Filamento de queratina
~ 2 - 5 μm
~ 1 - 1,5 μm
~ 1 - 2 μm
~ 10 - 100 nm
~ 20 nm
~ 10 nm
PREPARADOS HISTOLÓGICOS Y CORTES
Pasos
1. Obtención del tejido fresco
2. Fragmentación del tejido obtenido
3. Cortes aptos para la fijación
4. Fijación: formaldehído
5. Deshidratación: etanol creciente 
6. Transición miscible: xileno/tolueno
7. Inclusión: parafina
8. Corte en micrótomo
9. Montaje del corte
10. Eliminación de parafina: xileno
11. Hidratación: etanol decreciente
12. Coloración: hematoxilina/eosina
13. Montaje del tejido
COLORACIONES Y TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
Hematoxilina
Básico (catiónico)
Eosina
Naturaleza
Ácido (aniónico)
Tiñe componentes con cargas
Negativas (aniónicos):
ADN y ARN
Coloración
Basófila (azul violeta)
Núcleos
Acidófila/Eosinófila
(rosada roja)
 
Ribosomas - Fibras de
colágeno
Positivas (catiónicos)
Eritrocitos y colágeno
Coloración tricómica de Masson
Tiñe: fibras colágenas tipo 1 y fibras
reticulares
Color: azul
Coloración tricómica de Goldner
Tiñe: fibras colágenas
Color: verde turquesa
Coloración de Azán
Tiñe: fibras colágenas, células caliciformes
Color: azul intenso
Coloración Resorcina-Fucsina / Orceína
Tiñe: fibras elásticas
Resorcina-Fucsina: negro violeta
Orceína: rojo pardo
Coloración de PAS (ácido peryódico/reactivo Schiff)
Tiñe: células que producen moco,
glucoproteínas neutras, glucógeno 
Color: 
 - Moco: púrpura intenso
 - Membranas basales: rojo violeta
MÉTODOS HISTOQUÍMICOS
Inmunohistoquímica
Técnica basada en usar anticuerpos para detectar,
amplificar y hacer visible un antígeno específico
que generalmente es una proteína.
Utilidad
Identificar marcadores antigénicos de
localización tisular o citológica
Identificar receptores de membrana
Determinar gradientes de de concentraciones
tisulares o células que responden a un
estímulo hormonal
Mejoran la precisión de un diagnóstico
Establecen un diagnóstico diferencial
Clasifican una lesión:
 - Tisular
 - Sistémica
 - Orgánica
Técnica histológica + Método inmunohistoquímico
Autorradiografía
Técnica que detecta moléculas marcadas con
radioactividad con la creación de una imagen sobre
una película fotográfica.
Utilidad
Localización de proteínas específicas de
componentes subcelulares
Determinación de la tasa/localización de
sistemas que sintetizan proteínas y ácidos
nucleicos 
Seguimiento de sustancias inyectadas en
animales de experimentación