Técnica histológica 2021

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Clase 1
Técnicas Histológicas
Microscopía
Técnicas histológicas
• Histología: Estudio del tejido, análisis de la 
composición microscópica y las funciones de los 
organismos pluricelulares.
• Técnicas histológicas: Pasos necesarios para 
obtener las muestras aptas para su observación. 
-Células y tejidos vivos (cultivos)
- Material muerto o inanimado.
Un poco de Historia…
• Antonie Van Leewenhoek (1632-1723): inventor del microscopio.
• Marcello Malpighi (1628- 1694) Fundador de la histología
• Hooke (1635-1702): Descubrió que el tejido vegetal está formado por
pequeñas cámara o celdas a las que llamo células.
• 1838: Teoria celular ( reino vegetal)
• 1839: Teoria celular ( reino animal)
Célula: Elemento fundamental del organismo, los cuales están formados
por agrupaciones de las mismas.
Técnicas Histológicas
• Tejido: Agrupación de células (de distinto tipo),que
llevan a cabo determinadas funciones.
Células + matriz extracelular
4 tejidos básicos: - Epitelial
- Conectivo
- Muscular
- Nervioso
• Organos: Unidades funcionales mayores
compuestos por distintos tipos de tejidos.
TOMA DE MUESTRA
FIJACIÓN
INCLUSIÓN
CORTE
COLORACIÓN
OBSERVACIÓN
MONTAJE
Técnica histológica para MOC
TOMA DE MUESTRA
•Tamaño 1x1x1 cm
•Instrumental en buenas 
condiciones
•Evitar desgarros del material
•Incluir tejido sano y alterado 
(lesiones circunscriptas)
FIJADORES QUÍMICOS:
•Formol 10%
•Formol bufferado, 
•Bouin, 
•Alcoholes (etanol, metanol)
CONSIDERAR:
•Tamaño del frasco, cierre hermético
•Proporción volumen fijador/muestra (20:1 a 40/1)
•Tamaño de la muestra 
•Características de la muestra ¿pulmón?
•Tiempo de fijado (mín. 24hs)
•Rotular, breve reseña 
INCLUSIÓN EN 
PARAFINA
OJO!! Congelación para lípidos
DESHIDRATACIÓN
PARAFINA
Técnicas histológicas
Técnica por congelación
• Se usa para biopsias intraoperatorias.
• Rápida
• Menor variación estructural
• Conserva la actividad enzimática
• Se congela un trozo de tejido en nitrógeno líquido, 
anhídrido carbónico o se sumerge en un liquido frió 
(- 50ºC).
• Se corta en un criostato a bajas temperaturas.
• Se seca por evaporación.
CORTE CON 
MICRÓTOMO
•Cortes delgados (5 - 15Mc)
•Cuchillas de acero
•Recogidos en 
portaobjetos y se adhiere 
por calor en estufa
Crióstatos: micrótomos de congelación para muestras 
congeladas 
COLORACIÓN Y MONTAJE
Tinción de rutina: 
hematoxilina/ eosina
TINCIÓN
MONTAJE
Técnicas histológicas - Artificios
• Estructuras del preparado que no existen en el tejido vivo, 
aparecen durante el proceso de preparación.
Retracciones
Precipitados
Técnicas histológicas - Artificios
Cuchillas defectuosas
Fijación inadecuada Normal
Plegamientos
Técnicas histológicas 
Métodos histoquímicos
Permite obtener información sobre la localización de 
las estructuras celulares y tisulares. 
Se utilizan distintos métodos con diferentes 
propiedades químicas y físicas que interaccionan con 
los componentes tisulares y celulares. 
Los colorantes de rutina son Hematoxilina y Eosina
EOSINA
(rosa)
HEMATOXILINA +mordiente
(violeta)
Colorante ácido (aniónico) Colorante básico (catiónico)
Tiñe por afinidad sustancias 
básicas
grupos amino de las proteínas
Tiñe por afinidad sustancias 
ácidas
•grupos fosfato de los ácidos 
nucleicos,
•grupos sulfato de los 
glucosaminoglicanos, 
•grupos carboxilo de proteínas
ACIDOFILIA BASOFILIA
ACIDÓFILO BASÓFILO
Ej proteínas 
citoplasmáticas, fibras 
extracelulares
Ej. Núcleo, 
ribosomas, matriz 
cartilaginosa
Técnicas histológicas - Tinción 
Técnicas histológicas - tinción
Metacromasia
Si se tiñe un corte con una solución de un colorante básico ( azul 
de toluidina), el mismo forma enlaces electrostáticos con los 
componentes aniónicos y las moléculas del colorante se 
acumulan donde estos grupos están mas cercanos, en 
consecuencia el color se modifica ( Vira al rojo-purpura) 
EXCEPCIONES A LA TÉCNICA 
DE RUTINA:
•Hueso
•Citología
•Sangre
•Microscopía electrónica
TINCIONES ESPECIALES
•PAS (hidratos de carbono)
•Sudán (lípidos)
•Impregnación argéntica (fibras reticulares)
•Romanovsky-May Grünwald-Giemsa (sangre)
•Orceína/ Resorcina- fucsina (fibras elásticas)
•Tricrómico (diferenciar tejidos)
•Inmunocistoquímica (identifica proteínas-
antígenos en células o tejidos)
PAS+
Sudán
Orceína
Tricrómico
Inmunocito
química
I. argéntica
Giemsa
Técnicas histológicas - tinción
Reacción de PAS (Acido peryódico reactivo de shiff)
Tiñe carbohidratos y macromoléculas con abundancia de los 
mismos.
Color rojo-purpura.
Se usa para detectar: 
- Glucógeno en las células.
- Membrana Basal.
- Fibras reticulares
Técnicas histológicas - tinción
• Sudan:
- Rojo Sudan ------- Adipocitos. (Triglicéridos).
- Negro Sudan----- Vainas de mielina ( Lipoproteínas).
H-E Sudan Rojo Sudan negro
Técnicas histológicas - tinción
• Feulgen: Tiñe ADN
• Tricrómico de Mallory: Azul de anilina ( colageno) , Fuscina
acida (núcleos) , Naranja G ( eritrocitos). 
Microscopía
• Microscopio: instrumento que aumenta el tamaño de 
una imagen y permite ver detalles que no son posibles 
ver a simple vista. 
• El poder de resolución es la distancia que debe haber 
entre 2 puntos del objetos para verse separados. 
Ojo humano: 0.2mm 1mm 10-3 mts
MO: 0.2 µm 1µm 10-6 mts
ME: 0.05 nm/1 nm 1nm 10-9 mts
1Å 10-10 mts
PARTE
MECÁNICA
Microscopio óptico 
Tubo 
Platina
Subplatina
Columna
Pie
Revolver
Tornillos macrométrico y 
micrométrico.
PARTE
ÓPTICA
Ocular
Objetivos
Diafragma
Condensador
Fuente de luz
Microscopio Optico
La imagen que se forma es…
• Virtual
• Invertida
• Aumentada
Ocular
Aumenta la imagen de 7x a 12x ( 10x)
Ocular
Revolver
Sostiene a los objetivos y permite el cambio
Existen secos y de inmersión … 
Objetivos 
Cuando se aleja del preparado aumenta el 
contraste de la imagen
Condensador
Puede ser natural o artificial
Fuente de luz
Le da soporte y movilidad al preparado
Platina 
Charriot
Se utiliza para poder regular la distancia
Macrométrico
Micrométrico
Microscopio Optico
• Limite de resolución: 0,2 µm ( pero con los preparados de rutina
rara vez es > 0,5 µm).
• Las lentes del objetivo tienen distintos aumentos ( 4, 10, 20 y 40 
X).
• El lente ocular tiene un aumento de 10 X.
• Aumento total resultante: producto entre los aumentos del 
objetivo y el ocular
Microscopia electrónica
MET MEB 
DIFERENCIAS MOC vs MET
Pasos 
diferenciables
Microscopio 
Óptico Común
Microscopio Electrónico 
de Transmisión
MUESTRAS 1 cm 1,5 mm o menores
FIJACIÓN Formol 10% Glutaraldehido 2-2,5% y 
Tetróxido de osmio 1%
INCLUSIÓN Parafina, 
intermediario xilol
Resinas epoxi, 
intermediario óxido de 
propileno
CORTE Micrótomo , 
cuchillas de acero
5- 15 Mc
Ultramicrótomo , cuchillas 
de vidrio o diamante
50-150 nm
TINCIÓN de rutina: H/E X contraste, depósito de 
sales metálicas
OBSERVAMOS Células, estructuras 
y tejidos
ultraestructura
MET
MEB
MUCHAS GRACIAS