vacunas virales I _ II

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VACUNAS ANTIVIRALES
https://www.youtube.com/watch?v=8kuMF8MADHg&feature=youtu.be 	
me salteo toda las primeraas partes que son historia de todos los hitos historicos de la vacunacion. Arranco desde el min 13:37
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El fundamento de la vacunacion sostiene en la induccion de una respuesta dee memoria; es decri, una vacunacion induce en el hospedero vacunado una rta inmune de memoria que frente al ingreso del organismo vacunado de un microorg patogeno, esa reta inmune dee memoria se activa rapidamente y lo proteje de la enfermedad asociada a lla infeccion con ese morg patogeno.
A los antígenos inmunogenos capaces de inducir una rta que proteja al hospedero frente a la posterior infeccion con un patogeno, se lo denomina antigeno protectivo. Y a la rta inmune inducida por estos Ag protectivos se la denomina rta inmune protectiva. Porque hablamos de Ag protectivos, como saben, los virus son partículas mas o menos complejas pero que presentan numerosos Ag en su estructura. Ya sea en la estructura de los viriones ose Ag estructurales, como AG que se generan en el ciclo de replicacion debido a la prod de prot virales durante la replicacion. No todos estos Ag tienen la capacidad de ser protectivos, es decir de establecer una rta inmune protectiva. Luego vamos a ver que en la medida de los procedimiento para la elaboracion y preparacion de vacunas s fueron sofisticando, se torno mas importante la identificacion de aquelloss Ag capaces de establecer una rta inmune protectiva en un hospedero vacunado. 
Que caracteristicas tienen que presentar el tpo de rta que a nosotros nos interesa inducir, es decir que tipo de rta es capas de inducir un Ag protectivo-
 Una Rta inmune protectiva, en principio tienen que tener como destino final la capacidad de proteger al hospedero de la enfermedad asociada a la infeccion con un determinado patogeno, para ello, idealmente una rta protectiva tienen que estar dirigida hacia dttos Ag del patogeno, si bien algunos de esos Ag del patogeno tienen mayor relacion con la actividad de proteccion, cuanto mas extenso sea el espectro de Ag reconocidos por la rta inmune en patogenos, mayor sera la probabilidad de que la rta inducida sea protectiva. Por otro lado, las rtas inmune protectivas tienden a involucrar la participacion de dttos mecanismos efectores a dttos niveles; rta intrinseca, innata, adquirida y con la participacion de mecanismos humorales y celulares, cuanto mayor sea el espectro de efectores involucrados en una rta frente a un patogeno, mayor sera la proobabilidad de que esa rta tenga caracteristicas protectivas. 
Ahora, no solo es necesario que se involucren dttos mec efectores, sino que también es necesario que el balance entre esos mec efectores sea adecuado, es decir que la forma y el vigor con el cual esos mec efectores se activan frente a la presencia del patogeno guarde un balance adecuado que en principio se debe parecer lo mas posible al balance de una rta inmune natural, es decir, el tipo de rta inmune que se establece frente a la infeccion con el patogeno. Cuanto mas se parece el balance de la rta generada por la vacunacion a la generada por la infeccion del patogeno, mayor es la probabilidad de que la rta inducida sea protectiva.
Por otro lado, una rta inmune protectiva debe ser cruzada, es decir que debe tolerar cambios en la estructura antigénica del patogeno, debe ser duradera idealmente. En la practica sabemos que no todas las vacunas son capaces de establecer vacunas duraderas, por ejemplo la vacuna de la gripe protege por un año y eso se debe a la s variaciones que sufren las cepass circulants del virus influenza que van mutando constantemente cuando no cambian integramente algún Ag. Ese fue justamente uno de los aportes de hilleman, que reconocio esa variacion permanente de los virus influenza y predijo que iba a sernecesario la revacunacion anual para proteger contra la gripe.
Por otro lado, por definicion, toda vacuna que intente establecer una rta protectiva debe impoer una memoria para que la activacion de la rta de memoria se ala que proteja al hospedero vacunado. Si una rta inmune cumple con todas las caracteristicas o con la mayor parte de ella va a ser capaz de proteger a un hospedero dee la enfermedad asociada a la infeccion con un patogeno.
La primera es qu debe ser capaz de inducir una rta protectiva, es decir, tiene que protagener contra la enfermedad producida por el patogeno contra el cual se esta vacunando.
Tiene que ser seguna, no tiene que provocar patologias, algunos de los problemas mas importantes que se presentaron en la historia del dedarrollo de vacunas estan ligados a problemas de seguridad en la inactivacion, reversion de la atenuacion de virus vacunales atenuados.
Idealmente una vacuna no debe provocar efectos colaterales indeseables o estos deben ser minimizados.
Las vacunas deben ser biologicamente estable, sobre todo para las vacunas atenuadas, que estan formuladas por virus que conservan la capacidad de replicarse, aunq han perdido total o parcialmente su virulencia, esto no siempre ocurre, y esa es la razon por la cual algunas vacunas han sido reemplazadas en algún momento.
Una vacuna debe ser de bajo costo, porque tienen que llegar a toda la población, una vacuna es efectiva cuando puede abarcar a la mayor parte de la población suceptible, osea tiene que ser capaz de establecer proteccion en la mayor parte de la población suceptible, cosa que no sucederia si las vacunas fuerran de alto costo. Por eso en muchos paises, los programas de inmunizacion, de vacunacion son gratuitos para las personas. Cuando la imunizacion con una vacuna alcanza una gran proporcion de la población, eso implica que el agte patogeno reduce sus probabilidadesde circulacion en esa población, y en esa población se establece la inmunidad de rebaño, esta implica que al presentar inmunidad la mayor parte de una población suceptible, el virus u otros patogenos encuentran menos hospederos suceptiles para replicarse y hacer su ciclo de transmision, de tal manera que se reduce la circulacion del patogeno y quedan protegidos no solo aquellos que se vacunaron, sino los que no se pudieron vacunar. Tengamos en cta que en toda población hay unaproporcion de individuos que por alguna razon no pueden ser vacunados, principalmente en el caso de vacunas atenuadas que no se le puede administrar a personas inmunodeficientes, entonces estas personas no vacunadas quedan protegidas directamente por la proteccion de aquellas personas vacunadas y que limitan la circulacion del patogeno en el conjunto de la población. Razon por la cual las vacunas nesesariamente tienen que ser de bajo costo. 
Una vacuna viral efectiva, tienen que ser de facil administracion, o deberia serlo, en este punto se engloban una cantidad de aspectos que tienen que ver no lsolamente con la administracion en si, sino también con la distribuion, necesidad de cadena de frio para su preservacion, cuanto ams facil sea llegar a administra la vacuna a la población seceptibl, mayor sera la probabilidad de alcanzar el efecto protectivo en esa población.
 Hoy se conocen 4 tipos grales de vacunass virales diferentes. Las que no contienen virus activos. Las vacunas genicas. Lasvacunas que contienen virus activos. Y aquellas vacunas con formulas apartir de vectores virales no replicativos.
Para cada uno de estos tipos de grupos, hay distintos subtipos que vamos a analizar. 
Se preparan a partir de la inactivacion de viriones por tto químico o fisicos, gralmente o preferentemente por tto químico, elfisico puede dar lugar a una inactivacion revesible, sobre todo si se utiliza UV como agente inactivante, por eso se prefiere la inactivacion por tto qco con aldehidos como el formaldehido. Esta inactivacion tiene que tener como resultado la incapacidad del virion para infectar y replicarse en un hospedero suceptible. La inactivacion entonces, debe eliminar la capacidad del virus para replicarse, pero este debe conservar la actividad antigénica. Es decir los antígenos y especificamente los protectivoslocalizados en el virion no debe verse afectados estructuralemente, no deen perder su cap inmunogenica por la inactivacion.
 La primer ventaja es la seguridad, es decir, al vacunar con un virion inactivo, si la inactivacion fue correcta, yo estoy seguro de que ese virus no va a replicar y producir una patologia, siempre y cuando la vacuna este bien inactivada, algunos de los eventos desfavorable durante la historia de las vacunas virales estuvo ligadas al defecto de la inactivacion de lotes dee vacunas inactivadas que dieron lugar a la emergencia de brotes de enfermedad como consecuencia de la inoculacion de estos lotes defectuosos, esto ocurrio con algunos dee los primeros lotes de la vacuna contra la poliomelitis.
Estas vacunas se pueden utilizar sin riesgos en personas inmuno deficientes y por otro lado son capaces de estimular una buena rta humoral cuando se administran dosis repetidas, en gral estas vacunas se deben administrar en una dosis inicial y varias de refuerzo que se suministran con una periodicidad variable de acuerdo al tipo de vacuna.
Las limitaciones: en principio como utilizamos un virion inactivado como agte inmunizante, la rta inmune que se genera es diferente a la rta inmune que se genera en una infeccion natural, es decir, va a presentar un balance diferente al de una inmunizacion natural, la rta generada es de menor magnitud, duracion y no es cruzada, es decir, no reconoce a agtes antigenicamente relacionados, osea patogenos relacionados.
Por otro lado, estas vacunas no inducen o inducen una pobre rta en mucosa que como vamos a ver mas adelante es una ventaja que pueden presentar algunas vacunas atenuadas. La induccion de la rta de Ltcitotoxico es pobre, no hay una buena rta humoral como consecuencia de la inmunizacion con vacunas inactivadass, y la rta celular contribuye significativamente al establecimiento de una rta protectiva y es algo qu no ocurre cuando uno utiliza una de estas vacunas inactivadas.
En gral como son inmunogenos pobres en relacion a las vacunas atenuadas, se requiere del uso de adyuvantes para potenciar la respuesta inmune. Hay que tener en cta que muchas de las sustancias que pueden ser adyuvantes, pueden ser toxicos, asi q es un aspecto a tener en cta. y un problema que puede surgir en el uso de este tipo de vacunas, esta ligado a los defectos de inactivacion, algo que hoy ya no ocurre porque los procesos de ianctivacioon viral quimica han sido muy puestos a punto, son muy bien conocidos. 
→ Una variante de las vacunas inactivadas son las vacunass a subunidades proteicas, aca en vez de utilizar como agte vacunal un virion completo, se utiliza un antigeno viral, en general una proteina viral o un Ag mas complejo, en gral hoy estas proteínas virales con capacidad Ag se producen en sistemas de expresion inv vitro, hay dttos tipos de sist de expresion, bacterias, levaduras, cel de insectos, cel de mamiferos; que de acuerddo al tipo de Ag que uno quiere expresar, uno puede elegir el sist de expresion que mas le convenga. Para poder desarrollar una vacuna a partir del uso de sub unidades proteicas es un requisito tener identificado cuales son los Ag protectivos. Cuando uno utiliza una vacuna a virus inactivado, osea con viriones inactivados, una vacuna va a contener a todos los Ag estructurales, y entre estos estan los Ag con capacidad de inducir la rta protectiva. Cuando uno va a inmunizar solo con una proteina tiene que estar seguro que esa proteina es un Ag protectivo osea que tienen la capacidad de inducir una rta protectiva. La ventaja de este tipo de vacunas esta ligada a la seguridad, a la posibbilidad de producir Ag en grandes cantidades en sist de expresion que hoy se pueden escalar a miles de litros capaces de producir cientos y miles de gramos de proteina inmunogenicas, y la capacidad de producir esto en cualquiera de los sist de expresion, el que mejor se adecue al tipo de Ag.
En cuanto a las limitaciones, los Ag protectuvos tienen que estar identificado, la expresion tiene que ser eficiente, es decir el sist en el cual produsco la prot inmunogena tienen que ser eficiente con altos rendiminetos. Este inmunogeno necesariamente debe ser purificado para aislarlo de otras proteínas y Acidos nucleicos contaminantes que aparecer. La purificacion en ocaciones se lleva una parte considerable, la mas importante del costo final de produccion de un Ag que se va a utilizar con fines vacunales. Y los procedimientos de purificacion deben ser capaces de conservar al inmunogeno en estado nativo, es decir aquella estructura terciaria o cuaternaria que sea capaz de inducir una rta protectiva, si la prot qu utilizo como inmunogeno, en lugar plegarse como se pliega en un Ag nativo, se esta plegando de manera anormal, es posible que no indusca una rta protetiva, o inclusive indusca una rta anormal que een vez de proteger, incusca una rta que acelere o aumente la patogeneicidad del agte patogeno. 
Por otro lado, estas vacunas, a sus unidades nesesitan ser inyectadas con adyuvantes, lo que también incrementa el costo. 
Esta es una variante de las vacunas proteicas, aca no solo hay que tener identificado al Ag protectivo, sino que también al epitople o a los epitopes protectivos inmunodominantes. Y estos epitopes deben ser para poder ejercer siu inmunogeneicidad deben ser suministrados con una prot transportadoras, sobre la cual se van a presentar estos peptidos inmunogenicos, alternativamente, el peptido en lugar de exponerce sobre una prot transportadora, puede presentarse sobre la superficie de una particula viral no infecciosa correspondiente a otro virus que simplemente va a actuar como carrier. Es decir una particula viral de otro virus al cual se le va a adherir la particula inmunogenica, la particula viral solo va a ser vir como transporte que ademas de ser particulado tiene mayor chances de generar una rta inmunogenica.
La ventaja de peptidos sinteticos sobre las proteínas recombinantes, es el bajo costo. Los peptidos se pueden sintetizar por métodos quimicos produciendo muchas cantidad, y una vacuna formulada a base de peptidos es segura porque en ninguna etapa esta involucrada la participacion del virus patogeno o atenuado. 
Las limitaciones estan ligadas a la falta de exposicion de epitopes conformacionales, aunq si se puede reproducir on vitro la estructura de un epitope conformacional, teoricamente poddria existir la posibilidad de producir estos epitopes conformacionales y formular una vacuna con los mismos. 
Los peptidos sinteticos perse tienen baja inmunogenicidad y necesariamente tienen que ser infectados por una pprot o particula transportadora qu ayuden a sobrepasar esta limitacion. Y el tipo de inmunidad que genera da origen a una proteccion de muy corta duracion, en la practica si bien se ha experimentado mucho en la formulacion de vacunas sobre la base de peptidos sinteticos, no existen vacunas producidas mediante esta tegnologia.
A mitad de camino enntre las vacunas a virus inactivados y las vacunas recombinantes a sub unidades proteicas estan las vacunas a VLP. Estas siglas, es el acronimo a partículas similares a virus. 
Las VLP son partículas pseudovirales que carecen de ácidos nucleicos basicamente, son o capsides vacias o estructuras membranosas similares a envolturas virales que no contienen en su interior un core con los ácidos nucleicos, por lo tanto no tienen ni la cap de infectar ni de replicarse, pero si tienen la estructura particulada capaz de mimetizar la estructura del virion. Y por lo tanto tienen una capacidad inmunogenica identica a la de una vacuna inactivada. Con dos ventajas a su favor. La seguridad porque no necesitan ser inactivadas y el coosto de produccion porque al no necesitar la inactivacion, el costo disminuye. 
Por otro lado, estas VLP se pueden producir en grandes cantdades en sist de expresion, levadurass, cultios de cel de insectos. El fundamento de la produccion de VLP se basa en la capacidad de las proteínas virales de auto ensamblarse para formar partículas virales o en este caso pseudovirales.
Supongamosque yo conosco cuales son las prot estructurales que forman el virion de un virus, y yo tengo clonados en un sist de expresion los genes que codifican para estas prot estructurales y yo expreso estos genens en algún sistema, cuando los productos de la expresion de estos genes se encuentren en las celuals de mi sistema de expresion, vana tender a asociarse formando unidades estructurales y luego a partiir de esas unidades estructurales se vana asociar formando pseudoparticulas virales que a continuacion voy a poder utilizar como agtes vacunales.
Las ventajas de utilizar estas pseudoparticulas virales es que presentan epitopes conformacionales al igual qu un virion inactivado, son sumamente seguras porque no contienen Ac nucleicos y tienen una muy buena inmunogenecidad.
La limitacion ams importan te es que vana requerir de la administracion de multiples dosis.
 Aca vemos el concepto explicado para el papiloma. La prot principal para la capside del papiloma es la L1, en el sist de expresion que se utilice que puede ser levaduras o cel de insecto inf con vaculovirus recombinante, se va a expresar L! Que expontaneamente se asocian entre si para formar capsomeros, los cuales también se asocian espontaneamente para formar estas partículas pseudovirales que son las que se utilizan como agtes vacunales. En la parte inferior para que veamos cual es la diferencia con el virus autentico, se ve que se le integra a esta particula una prot minoritaria que se ubica ene l vertice de las subunidades estructurales de la capside del papiloma virus, y ademas se le incorpora a esta particula una doblecadena circular de DNA superenrrollado que constituye el genoma del papiloma. 
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En las vacunas genicas, el agte inmunizante o inmunogeno se genera insitu en el orgnaismo vacunado, y esto se consigue a través de la inoculacion de un elto genico que es adecuadamente diseñado, luego se incorpora a las células del oorganismo vacunado y en ese organismo in situ se va a expresar y generar el inmunogeno responsable de inducir una rta protectiva. 
Las centajas son en principio que estas vacunas admiten la implementacion de plataformas vacunables, es decir, sistemas pre existentes en los cuales uno tiene preparado el soporte, el armazon genica y lo unico que tiene que incorporar es el gen expecifico qu desea expresar para cada vacuna, es decir, un unico soporte general qu luego adite la posibilidad de incorporar dttos genes e ir ambiandolos de acuerdo a cual es el Ag contra el cual uno desee generar una rta inmune; esto obviamente s refleja en que uno puede producir rapidamente una nueva vacuna por ejemi ante la emergencia de un nuevo patogeno como el caso del sarcov-2. Tener estos soportes preparados de antemano y tener la posibilidad de rapidamente insertar el gen que codifica para el Ag protectivo y rapidamente poder generar una vacuna, permite atender este tipo de emergencias de manera significativamente mas rapida. 
Por otro lado, este tipo de vacuna permite la prod a gran escala a un costo reducido, también los gastos de distribución administracion son menores, porque este tipo de vacunas genicas, sobre tdo aquellas formuladas a base de DNA sonmuy estableees lo que permite el almacenamiento a temp ambiente, y la reconstitucion al momento que resulte necesario. 
Como el inmunogeno en este caso se genera insitu en el mismo organismo, la forma en que este inmunogeno es procesado, me refiero a los procesamiento post transcripcionales y post traduccionales son identicos a los que sufre el inmunogeno en un infeccion natura, por lo tanto es reconocido por el sist inmune de igual manera a una infeccion natural dando origen a una rta con un balance similar al de una infeccion natural. También es posible inocular con mezclas de plasmidos qu permite la posibilidad de inducir rtas a varios inmunogenos al mismo tiempo o utilizar un mismo soporte genico e insertar varios genes sobre ese mismo soporte de tal manera de expresar varios Ag al mismo tiempo a partir de una unica inoculacion genica.
Respecto a la sguridad desde el punto de vista infectologico, son seguras porque no utilizan ningun agente infeccionso, pero existe la posibilidad de integracion potencial de estos eltos genicos en el genoma de la cel huesped o la posibilidad de que se den eventos dde recombinacion que podrian tener consecuencias no deseadas en el org vacunado. Y desde el punto de vista de la generacion de efectos no deseados, estas vacunas al no contener proteínas, en gral no tienen problemas de generacion de alergias, pero por otro lado si puedn inducir rtas del tipo autoinmunes, la generacion de Ac anti DNA.
Como en este caso el inmunogeno se genera insitu en cel modificadas del propio organismo, hay una buena induccion de rta celular con produccion de LT citotoxicos,y ademas de una rtaa humoral, tiene una uena rta celular.
Este es un ejemplo de una vacuna genica de Dna, a la izq se ve el plasmido que es el soporte genico en el cual se va a insertar el gen que codifica al Ag protectivo que nos interesa expresar insitu, esto por un sistema de transaccion que puede ser a través de una pistola genica o utilizando liposomas. Se introduce el plasmido modificado recombinante en las células del organismo a vacunar y esas celuals, en las cuales el gen contenido en el plasmido se empiezan a xpresar, producen los Ag protectivos y estos se expresan, enventualmente se secretan y inducen una rta inmune que si el Ag esta adecuadamente seleccionado, sera una rta sastifactoria.
El otro tipo de vacunass genicas es el que emplea ácidos ribonucleicos, es decir ARNm, entre las cuales se diferencian dos tipos.
Por un lado, las no amplificantes que consisten unicamente en una estructura genica similar a un RNAm, es decir, un RNA que contiene en el extremo 5’ una estructura con cap, en el 3’ una cola polyA, tienen eltos regulatorios que no se traducen en 5’ y 3’ terminales que son eltos regulatorios, y el gen del Ag que se desea expresar. 
Este tipo de RNAm no amplificante se diferencia del RNAm autoamplificante o replicos, en este caso a la estructura tipica del RNAm eucariota, se le suma los genes correspondientes a las proteínas no estructurales de un alfa-virus, que se van a coexpresar junto con el gen correspondiente al Ag protectivo, la expresion de estos genes dan origen a una RNA polimeraza RNA dependiente que va a replicar este RNA, de tal manera que ademas de expresar el Ag, este RNAm se va a amplificar amplificando a su vez la expresion del Ag y por lo tanto en principio generando una rta inmune, o induciendo la expresion de una rta inmune mas robsta y duradera.
La estructura de este RNAm autoreplicante deriva de la estructura del genoma de un alfa-virus, es decir, es la estructura del genoma de un alfa-virus que ees un RNAsc + que carece de los genes que codifican para las proteínas estructurales de este alfa-virus.
Las vacunas que se ensayan actualmente, (covid), la vacuna para prevencion del covid 19 son del modelo no amplifficantes. Estas vacunas RNA autoamplificantes deben atravesar aun algunas etapas de evaluacion de la seguridad de su uso, sobre todo en relacion a la capacidad de recombinarse en las células del hospedero y de integrarse eventualmente en caso de ser retrotranscripstas por ejemplo, de recombinarse con el genoma de la cel huesped. Este RNA ya sea para las vacunas no amplificantes o para las pseudoamplificantes se encapsulan en una nanoparticula generalmente de naturaleza lipidica, una especie de liposoma y con este se inocula al hospedero, la idea es que la nano particula conteniendo el RNAm llegue y se introdusca en la cel dendritica (CPPA) y sea conducida a los gaanglios linfáticos, y se exprese la información contenida en esos RNA m se exprese y sea capaz de inducir una rta humoral por un lado y una rta celular por otro, que como ya sabemos, estas dos rtas se integran entre si y si el niel de inducion de inmunidad es adecuado, en conjunto daran origen a una rta protectivade memoria.
https://www.youtube.com/watch?v=D1_dFQiEW9w&feature=youtu.be		17:22
En ninguna de estas vacunas que comentamos hasa el momento habia virus activos, son todas vacunas generadas a partir de virus inactivados o de proteínas recombinantes o de peptidos, o de eltos genicos como DNA o RNAm. Las vacunas existentes hasta el momento que no poseen virus activos en su formulacion, son las vacunas inactivadas para la polio tipo salk. La vacuna contra el virus de la rabia, la mayoría de las vacunas para prevenir la gripe, la vacuna contra la hep A. estas 4 son vacunas a virus inactivados, y la vacuna contra la hep B y para la prevencion del cancer de cuello uterino asociadas a la infeccion con el papiloma, son vacunas VLP?.
El segundo gran grupo de vacunas son las vigentes actualmente , que son a virus atenuado. Un virus atenuado es aque que conservando su cap de replicarse a perdido total o parcialmente su virulencia en el hospedero. Los virus atenuados existen en la naturaleza, uno si busca para cada virus qe circula en la naturaleza va a encontrar cepas atenuadas en la amplia diversidad que existe en la naturaleza, se van a encontrar un espectro de virulencia que va desde aquellos altamente virulentos a los atenuados. Osea la naturaleza es una fuente de virus atenuados. Aunque se han desarrollado procedimientos para obtener virus atenuados mediante métodos artificiales o acelerados, por ejemplo mediante el pasaje seriado en un hospedero animal no habitual para el virus que sea, o a través del pasaje seriado en cultivos de células animales. 
Un pasaje seriado consiste en inocular un cultivo celular con un virus, esperar que replique, cosechar el prod de esa repli y con esa primera cosecha volver a infectar a otro cultivo; y as sucecivamente durante la cantidad de pasajes necesarios, decenas o centenas; hasta que se genere una progenie de virus con caracteristicas atenuadas. Esto ocurre porque se van produciendo modificaciones del genoma viral que conduce a la generacion, selección y expancion de una progenie viral que presenta caracteristicas diferentes al virus original; en este caso la caracteristica que nos interesa es obtener una progenie viral con una virulencia reducida.
También es posible utilizar como fuente de virus atenuado: virus relacionado que infectan a otros hospederos de la naturaleza, por ejemplo para la prevenvion de la fiebre hemorragica arg, cuyo agte etiologico es el virus junin que circula de manera persistente en ratones de la zona central de la arg incluyendo el sur de stafe. Se propuso en algún momento la utilizacion de un virus de la misma flia que circula en roedores, pero que no infecta naturalmente a sres humanos, el virus tata nll como un posible agte vacunal para la prevencion de la fiebre hemorragica arg.tambien se pueden utilizar virus antigenicamente relacionados, osea que infectan elmismo hospedero pero que son menos virulentos y que son capaces de inducir una rta protectiva contra el virus patogeno.una estrategia posible pero mas riesgosa es la inoculacion de un virus no atenuado, pero en sitios corporales especifico en el que este virua, cuando es inoculado en esa via sea capas de inducir una rta pero no sea capas de diseminarse y producir una patologia; obviamente que antes de utilizar esta estrategia hay que estar seguros de que ese virus no va a acceder a aquellas localizaciones en el org en donde va a ejercer su efecto patogenico.
La fuente mas racional de virus atenuados es la atenuacion molecular que tiene como prerequisito la identificacion de los genes responsables de la virulencia, es decir, el fundamento de la atenuacion molecular es inducir la formación de mutaciones en aquellos genes responsables de la virulencia de un determinado virus, y inducir mutaciones capaces de conferirle la condicion de atenuado a un virus que sin esa mutacion o combinacion de mutaciones seria virulento. Recordar que siempre que uno introduce una mutacion, existe la posibilidad de que esta mutacion se revierta, si este virus atenuado se replica en el hospedero vacunado, es posible que durante esa repli se genere una mutacion que revierta esa mutacion original y por lo tanto revierta también el fenotipo de atenuado a virulento.
Las ventajas de la utilizacion de vacunas atenuada. 
La primera es que la rta que se genera frente a la inoculacion de un virus atenuado se parece mucho a la rta que se genera frente al ingreso al organismo del agte patogeno, y por lo tanto se genera una rta sobre dttos antígenos estructurales y no. como el virus se replica se va a generar una rta humoral y una celular sistemiaca en mucosa scon un balance que se parece mucho a la rta natural y que por lo tanto tiene mayor probabilidad de alcanzar un nivel de eficiencia requerido para que esa rta sea protectiva. Por lo tanto estas vacunas son efectvas, generan una inmunidad de larga duracion, y en gral el costo de produccion es menor que las vacunas inactivadas porque, para las inactivadas, los costos de inactivacion y control de la inactivacion son altisimos y son costos que en el caso de las vacunas atenuadas no existen y disminuyen el costo total de produccion.
Por otro lado, estas vacunas atenuadas, si completan un ciclo en el hospedo vacunado, tendran la posibilidad de salir al ambiente externo y disminarse mediante el contacto, amplificando la accion vacunal entre individuos que no han sido previamente vacunados, esto por un lado es una ventaja que ayidaria a establecer la inmunidad de rebaño, pero por otro es riesgoso, y ese riesgo se ha concretado, porque entre esos contactos puede haber individuo que no sean inmunologicamente eficientes, (inmunodeficientes) y que ante la infeccion con una cepa atenuada respondan por su condicion de inmunodeprimido como si se tratan de la infeccion con una cepa virulenta, entonces en esas personas se va a producir lo que se conoce como una enfermedad de origen vacunal, esto se ha dado de manera repetida con las vacunas atenuadas contra la poliomelitis. Y esa es la razon por la cual la vacunas atenuadas que fueron muy importantes en el control inicial de los brotes de polio, en la actualidad que estamos en la etapa de erradicacion de la polio, esas vacunas estan siendo dejadas de lado, reemplazadas por vacunas inactivadas.
Asi que la diseminacion entre contactos puede ser una ventaja, pero también una potenial limitacion.
Entre las limitaciones debemos mencionar que tanto las vacunas inactivadas y atenuadas pueden contener agtes infecciosos adventicios, un agte adventicio es aquel que esta presente sin que se tenga conocimiento de su presencia, es decir es un agte infeccioso desconocido, o que cuya presencia en la vacuna no es conocida. Estos agtes adventicis pueden provenir de los sustratos celulares, donde se producen estas vacunas, por ejemplo, los primeros lotes de vacunas antipolio se producian en cultivos de riñon de mono verde africano, estas células venian infectadas de manera persistente con un virus siniano SD40 y ese virus SD40 paso a los lotes vacunales y aquellos chicos que fueron vacunados contra la polio con esos lotes, ademas fueron infectados con este virus simiano. También el origen de estos agtes infecciosos adventicios pueden estar en las materia primas que se utilizan durante la produccion de las vacunas, por ejemplo el suer fetal bobino que es un suplemento utilizado para promover el crecimiento de las cel animales en los cultivos, puede ser una fuente de agtes infecciosos adventicios.
Las patologias vacunales pueden ser por reversion de la mutacion o en aquellos casos en donde los ptes no son inmunologicamente competentes, y lo que para la mayor parte de los receptores de la vacuna va a transcurrir como un virus atenuado, en ptes inmunocomprometidos, esto se puede transformar en un problema, por lo que las vacunas a virus atenuados no se pueden aplicar a ptes no inmunocompetentes.
Otro problema son los transportes, almacenamiento y uso de estas vacunas porque hay que manter viable mediante cadena de frio al virus atenuado. 
 
Esotro tipo de vacunas que usan virus con capacidad de replicacion. Utiliza los virus como vectores, por un lado tenemos al virus contra el cual uno desea generar una rta inmune protectiva, en ese virus se identifica cual o cuales son los Ag protectivos, se identifican los genes que codifican a esos AG protectivos, se aislan, se clonan y se van a subclonar en el genoma de otro virus, el vector viral. Este vector viral es un virus cuyo genoma ha sido modificado para hacerlo no virulento, hacerlo atenuado y que admite la integracion a su genoma de uno o mas genes que codifiquen para aquellos Ag contra los cuales se desea generar una rta inmune protectiva. Uno de los virus mas utilizado para este proposito es el axina, es de la flia postviridae, de la misma flia del viruela, de echo esta relacionado con el virus de la viruela bobina, no se sabe el origen del virus vaxinia; pero este puede ser manipulado invitro comodamente y ppor ser un genomas de gran tamaño, admite la introduccion de varis genes al mismo tiempo y da la posibilidad de generar agtes vacunales con la posibilidad de expresar al mismo tiempo varios AG.
Las ventajas de este tipo de vectores virales replicativos, es que como se replica en el hospedero vacunado va a generar como producto de la repli una rta inmune magnificada contra el virus vacunal y contra los Ag recombinantes que se han clonado y expresado en el genoma del virus vector. De esa manera en el individuo vacunado se genera una rta que puede tener un balance parecido al de una rta naturla y por lo tanto tiene una alta probabilidad de ser una rta protectiva.
Como ventaja este tipo de vector ofrese la posibilidad de exprecion antigénica magnificada y sostenida en el tiempo dando una muy buena inmunogenecidad y también la posibilidad de expresar y generar una rta protectiva contra varios Ag.
A pesar de que hay vacunas basadas en este sistema, en el ambito veterinario que ya estan en uso en europa y ee uu y en canada, aun se plantean problemas de seguridad. La vacuna que esta en uso basada en el uso de vectores virales replicativos es una antirabica que se utilizza para la inmuniacion de hospederos silvestre; lo que se hace es inocular con este virus recombinante replicativo trozos de carne que se abandonan como cebo en los bosques donde existen especies silvestres suceptiblees a la rabia por ejemplo zorros, lobos; de tal manera que al comer la carne inoculada con el vector vacunal, estos animales se infectan con el vector, repliquen este vector, expresen el Ag de la lipoprot de la env del virus de la rabia y se indusca una rta inmunogenica protectiva que ejerza un efecto protector ene estos animale sislvstres, pero obviamente, para su utilizacion en humanos hasta el momento no hay ninguna vacuna aprobada vasada en este tipo de soporte viral.
 
En esta diapo se esquematiza como es el procedimiento para la genercacion de una vacuna recombinante basada en el uso del virus vaxinia para el herpes simplex como modelo.
A la izq arriba hay un virion de herpes simplex, se extrae el gen para una glicoprot de la envoltura del virus del herpes simplex, este gen se inserta en el genoma de vaxinia, y se obtiene un genoma recombinante que carece de algún gen de vaxinia y en el cual s ha incorporado el gen de la lipoproteina del herpes. Y a partir de un procedimiento de transfeccion, se transfectan células suceptibles a vaxinia con este genoma de vaxinia recombinante, y se vana generar en eseproceso de trasfeccion una progenie de virus vaxinia recombinante que expresa insitu el gen qu codifica para la glico proteina de la envoltura de herpes simples responsable de inducir en el hospedero vacunado una rta inmunoprotectiva.
En este caso, los vectores virales han perdido su cap de replicar y en este caso el vector oficia solamente como un carrier, como un transportador para el gen que se desea expresar insitu para producir uno o mas Ag que sera los responsables de inducir la rta inmune protectiva. El ejemplo mas vigente en la actualidad es la utilizacion de partiulas de adenovirus de chimpances para la generacion de este tipo de vacunas.
Las ventajas de las vacunas basadas en vectores no replicativos, son la calidad del Ag como en todos los sistemas en los cuales el Ag se expresa insitu en el propio hospedero vacunado, las modificaciones ppost transcripcionales y postraduccionales que sufren las prot antigenicas vana tener la misma calidad que las del Ag producido en una infeccion natural. Ademas, ese Ag va a ser presentado a través de las vias de presentacion que son utilizadas también en una infeccion natural, y por lo tanto, la probabilidad de inducir una rta con un balance similar al de la rta natural por lo menos frente a eseAg en una infeccion natural, son elevadas. Ademas, existe la posibilidad de clonar y expresar varios Ag al mismo tiempo, y lo mas importante es que este tipo de sistema se puede utilizar como plataforma polivalente, es decir, uno puede tener armado el esqueleto de este vector no replicativo y en el momento que sea necesario insertarle el gen para el Ag que resulte encesario expresar y asi generar una vacuna rapidamente cuando la emergencia lo exija.
En comparación con los vectores virales replicativos, la expresion es menos stenida y por lo tanto la expresion del Ag y la magnitud de la rta inmune generada son menos vigorosas, y esto es posible que se termine traduciendo en una inmunidad de menor duracion y en la necesidad de otras dosis o refuersos.
Aca esta esquematizado el procedimeinto para generar un adenovirus recombinante no replicativo con el potencial de ser utilizado como un agente vacunal, entonces, hay un plasmido convencional en el cual unoo tiene la posibilidad de insertar el gen que codifica para el Ag protectivo, que uno esta interezado expresar en el huesped vacunado para generar una rta protectiva.
Este plasmido recombinante se va a recombinar a su ve con un genoma de adenovirus que ha sido modificado, se ha extraido una fracccion genica lo que hace que este adeno virus sea impposibilitado de replicar en una célula, exepto que la célula le provea en trans aquella fraccion genica de la cual este genoma ha sido privado en el caso de la mayoría de los vectores adenovirales, se elimina el gen E1 total o parcialmente. Entonces cuando se recombina el plamido recombinane con el genoma del adenovirus plasmidico, se va a obtener un plasmido de adenovirus molecular recombinante que contiene el gen que deseo expresar invivo. Este vector plasmidicose puede amplificar en bacterias y luego se linealiza, se corta con una enzima de restriccion en un sitio, se linealiza y se transfecta en una linea celular especial, que en este caso es la linea celular 293 que expresa el producto que codifica el gen E1 de adenovirus, de tal manera que en la cel 293 el adenovirus se va a replicar porque en esa cel se expresa E1, si infectamos otra linea cel que no sea 293 con este mismo plasmido linealizado, no vamos a optener una progenie de adenovirus. De tal manera que vamos a tener una progenie de adenovirus que es una progenie vector, porque en el genoma de ese adenovirus vector esta inserto el gen que codifica al Ag que deseo expresar invivo. Entonces estos vectores que contienen el gen correspondiente al Ag se van a utilizar para infectar al hospedero que uno desea vacunar. De lo que se va a encargar la particula de adenovirus es introducir en la cel blanco del hospedero es el genoma de adenovirus recombinante que tiene el gen que codifica al Ag que deseo expresar.
De tal manera, que ese gen va a llegar al nucleo de la cel infectada con el vector recombinante, alli ese gen se va aexpresar, se va asinetizar el Ag recombinante, ese Ag va a sufrir las transformaciones propias que una célula efectua sobre cualquier Ag generado in situ, y lo va a expresar en su membrana de tal manera de inducir una rta de tipo citotoxica, ese Ag eventualmente se va a secretar, va a ser procesado por CPA que vana inducir una rta humoral de tal manera que en este tipo de sistema vamos a terminargenerando una rta celular y humoral con un balance bastante parecido al que se genera en una rpta frente a una infeccion natural con el virus patogenico.
La sabin, que es la vacuna contra la polio, esta siendo reemplazada por las vacunac inactivadas en el contexto de la erradicacion de polio.
La triple viral que contiene inmunogeno de paperas, sarampio y rubeola es una vacuna a virus atenuado.
La vacuna contra la varicela. Las contra rotacirus y la contra la fiebre amarilla, son todas vacunas atenuadas que contienen virus activos lpm yo me vacune.
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en esta diapocitiva podemos ver las dttas alternatvas en estudio para la generacion de vacunas contra el sars-cov-2. Arriba a la izq tenemos vacunas atenuadas, abajo en negro vacunas inactivaadas. Vacunas a DNA, vacunas a RNAm; vacunas con vectores virales replicativos; vacunas con vectores virales no replicativos; vacunas a VLP y vacunas a sub unidades. Practicamente todo el espectro de vacunas que vimos en esta clase estan en linea de desarrollo para la prod de vacunas que protejan contra sars-cov-2. Y para cada tipo de vacunas hay varios proyectos en evaluacion. El objetivo de todas estas vacunas es llegar al punto de generar una rta de memoria capaz de proteger a los individuos vacunados contra las formas severas de la infeccion por sarscov-2 almenos.