Técnicas de crecimiento de bacterias en medios de cultivo

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Técnicas de crecimiento en
medios de cultivo
Profesora Cinthya Zorrilla
2021
Cultivo de microorganismos
• Conocer la respuesta de los microorganismos a su medio ambiente es importante 
para darles condiciones óptimas de desarrollo.
• Para establecer un cultivo microbiológico se debe introducir en un medio estéril, 
es decir, inocular el medio.
• Los microorganismos que han sido inoculados se denominan inóculos.
• El contenido del inóculo no siempre se conoce, por ejemplo, cuando se utiliza una 
muestra ambiental. Esto se debe a la presencia de la variedad de bacterias y 
hongos (en el agua, las aguas residuales o el suelo). 
• Los microorganismos inoculados se mantienen en un medio (se incuban) durante 
un período de tiempo (tiempo de incubación) a una temperatura específica 
(temperatura de incubación). 
• Durante la incubación, las células inoculadas crecen y se dividen. También es 
importante recordar que hay microorganismos que no crecen en ningún medio y 
no se pueden cultivar.
Cultivo de microorganismos
• Objetivos:
– Aislamiento
– Identificación
– Conteo
– Multiplicación
• Tiempo de incubación:
– Bacterias: 24 a 48 horas
– Hongos: 24 horas a 4 semanas
• Temperatura de incubación:
– Depende del microorganismo:
psicrófilos, temperatura óptima alrededor de 20°C 
(minimo alrededor de –10°C, maximo alrededor de 
30°C),
mesófilos, temperatura optima alrededor de 37°C 
(minimo alrededor de 15°C, maximo alrededor de 45°C)
termófilos, temperatura óptima alrededor de 55°C 
(minimo alrededor de 30°C, maximo alrededor de 75°C).
La mayoría de microorganisms que vive en agua y suelo
son psicrófilos.
– Ejemplos: 
• Echericchia coli – 37C
• Agrobacterium tumefasciens – 28C
• pH
• Oxígeno
Características de crecimiento en
medio líquido
1. Las bacterias aeróbicas obligadas, aquellas que deben
tener oxígeno para extraer energía de los alimentos, se
reunirán en la parte superior del tubo de ensayo, cerca de
la superficie del caldo, para absorber la máxima cantidad
de oxígeno.
2. Las bacterias anaeróbicas obligadas, mueren en
presencia del oxígeno, se reunirán en el fondo del tubo de
ensayo, manteniéndose lo más lejos posible del oxígeno.
3. Las bacterias facultativas, aquellas que pueden vivir con
o sin oxígeno, se reunirán principalmente en la parte
superior, ya que la respiración aeróbica es la forma más
eficiente de convertir los alimentos en energía; pero
como la falta de oxígeno no daña a estos microbios,
pueden sobrevivir en cualquier parte del caldo.
4. Los microaerófilos se reúnen en la parte superior del
tubo de ensayo, pero no en la superficie. Estos microbios
requieren oxígeno, pero en concentraciones más bajas
que las que se encuentran en la atmósfera.
5. Las bacterias aerotolerantes no se ven afectadas en
absoluto por el oxígeno, por lo que se pueden encontrar
distribuidas uniformemente a lo largo del tubo de ensayo.
Bacterias
anaeróbicas
floculentas
La floculencia indica
presencia de mucílago
Características de crecimiento
en medio líquido
bacterias anaeróbicas facultativas floculentas
Staphylococcus
epidermidis
Lactococcus
lactis
Bacillus subtilis
Mycobacterium
smegmatis
(película)
bacterias aeróbicas obligadas bacterias anaeróbicas obligadas bacterias facultativas
microaerófilos bacterias aerotolerantes
medio estéril
Neisseria sicca Staphylococcus
aureus
Ejercicio 1: 
Determinación del tipo de crecimiento de bacterias
en medio líquido
 Materiales: 
 Video motivacional
▪ https://youtu.be/VO6XAd
56AuM
 Respondemos:
1. Cuáles son los materiales que se necesitan para 
realizar un cultivo en medio líquido?
2. Cuál es el procedimiento para cultivar un inóculo
en medio líquido?
3. Cuáles son los puntos críticos?
 Procedimiento:
1. Escuchamos el video
2. Analizamos el procedimiento seguido
3. Observar las imágenes y clasificamos los
microorganismos por su tipo de crecimiento
A B
Características de crecimiento en
medio sólido
• Ventajas de usar medio sólido:
– Pueden formar patrones de crecimiento característicos
– Se puede evaluar la movilidad
– Pueden formar colonias en placas
• Tipos de siembra en medio sólido:
– Siembra en tubo por picadura
– Siembra en tubo inclinado por estrías (recta u ondulada)
– Siembra en placa por estrías (recta u ondulada)
Características de crecimiento en
medio sólido por picadura
• Patrones de crecimiento característicos
en tubo inclinado por picadura.
• Objetivo:
– Evaluar la movilidad de las bacterias
– Presencia de cilios y flagelos
• Importancia:
– La mobilidad permite a la bacteria 
colonizar nuevos ambientes variados
– Ejemplo: Comparación de cepas de 
Lactobacilus agilis
The impact of motility on the localization 
of Lactobacillus agilis in the murine 
gastrointestinal tract
https://bmcmicrobiol.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12866-018-
1219-3
Características de crecimiento en
medio semi-sólido por picadura
Ejemplos:
Positivo: Lactobacillus agilis
Negativo: Staphylococcus aureus
positivo negativo
Ejercicio 2: 
Determinación del tipo de crecimiento de bacterias en
medio semi-sólido en tubo por picadura
 Materiales: 
 Video motivacional
▪ https://youtu.be/TqJ-
RxBG4Y8
 Respondemos:
1. Cuáles son los materiales que se necesitan para realizar un 
cultivo en medio sólido en tubo por picadura?
2. Cuál es el procedimiento para cultivar en tubo por picadura?
3. Cuáles son los puntos críticos?
 Procedimiento:
1. Escuchamos el video
2. Analizamos el procedimiento seguido
3. Observar las imágenes e interpretamos los resultados
A B C
Características de crecimiento en
medio sólido por estrías
Patrones de crecimiento característicos
en tubo tubo inclinado por estría recta:
• La apariencia del crecimiento de la 
siembra en una sola línea sobre la 
superficie del agar inclinado se 
designa de la siguiente forma;
– Arborescente.- Crecimiento en forma 
de árbol.
– Perlado.-Colonias formando puntos 
de crecimiento.
– Equinulado.-Crecimiento en forma de 
hilo con bordes irregulares continuos.
– Filiforme.-Crecimiento en forma de 
hilo con bordes lisos continuos.
– Rizoide.- Crecimiento en forma de 
raíz.
– Difuso.-Crecimiento difuso y 
reducido.
La siembra en tubo por estrías
onduladas se usa para conservar una
cepa
Bacillus coli
Escherichia
coli
Streptococcus
pyogenes
Bacillus
mycoides
Lactobacillus
acidophilus
https://www.researchgate.net/publication/233954579_Laboratory_Studies_in_General_
Microbiology_2nd_ed
Características de crecimiento en
medio sólido por estrías
• Patrones de crecimiento característicos en
tubo inclinado por estría recta u ondulada
Purification and characterization of cholesterol 
oxidase from novel native isolate bacillus subtilis 
YS01 isolated from meat sample
https://www.researchgate.net/publication/318900414_PURIFICATION_
AND_CHARACTERIZATION_OF_CHOLESTEROL_OXIDASE_FROM_NOVEL_
NATIVE_ISOLATE_BACILLUS_SUBTILIS_YS01_ISOLATED_FROM_MEAT_S
AMPLE
Bacterial contamination: A comparison between rural and 
urban areas of Panipat District in Haryana (India)
https://www.researchgate.net/publication/267996791_Bacterial_contamination_A_
comparison_between_rural_and_urban_areas_of_Panipat_District_in_Haryana_Indi
a
Se encontró que la calidad bacteriológica del aire de las cocinas en los 
hogares rurales era más patógena y virulenta en comparación con la 
de la cocina en los hogares urbanos.
Ejercicio 3: 
Determinación del tipo de crecimiento de bacterias en
medio sólido en tubo inclinado por estrías
 Materiales: 
 Video motivacional
▪ https://youtu.be/DuKX
V7UZ8h4
 Respondemos:
1. Cuáles son los materiales que se necesitan para realizar un 
cultivo en medio sólido en tubo por estrías?
2. Cuál es el procedimiento para cultivar en medio sólido en
tubo por estrías?
3. Cuáles son los puntos críticos?
 Procedimiento:
1. Escuchamos el video
2. Analizamos el procedimiento seguido
Características de crecimiento en
medio sólido en placa
• Siembra en placas:
Textura—Apariencia de la superficie. Puede
ser: suave,brillante, mucoide, viscoso, seco,
polvoriento, escamoso, etc.
Transparencia—Pueden ser: transparentes,
translucida, u opaco.
Color o Pigmentación (superior e inferior)—
muchas bacterias producen pigmentos
intracelulares que hacen que sus colonias
aparezcan de un color distinto, como
amarillo, rosa, púrpura o rojo. Muchas
bacterias no producen ningún pigmento y
aparecen blancas o grises.
Características de crecimiento en
medio sólido en placa por estrías
• Siembra en placas por estrías:
– Recta. Características metabólicas
– Ondulada. Obtener colonias aisladas
• Continua
• En fases
• En cuadrantes
• Radial
• Cruzada
• Importancia de la siembra en placa por estrías onduladas:
– Permite aislar colonias individualizadas
– En cada grupo de estrías la muestra se va diluyendo
– En el último grupo de estrías deben observarse colonias
individuales, de requerirse se puede hacer diluciones
Características de crecimiento en
medio sólido en placa por estrías
• Siembra en placas por estrías:
• Continua
• En fases
Características de crecimiento en
medio sólido en placa por estrías
• Siembra en placas por estrías :
• En cuadrantes
• Radial
Características de crecimiento en
medio sólido
• Siembra en placas por estrías :
• Cruzada
Ejercicio 4: 
Determinación del tipo de crecimiento de bacterias en
medio sólido en placas por estrías onduladas
 Materiales: 
 Video motivacional sobre cultivo en placa
por estrías
▪ https://youtu.be/W6xpPJZIb1E
 Video motivacional sobre cuidados antes de 
trabajar con placas
▪ https://youtu.be/Ay2hhujTuvg
 Respondemos:
1. Cuáles son los materiales que se necesitan para realizar un 
cultivo en medio sólido en placas por estrías?
2. Cuál es el procedimiento para cultivar en medio sólido en
placas por estrías?
3. Cuáles son los puntos críticos y cuidados a tener en cuenta?
 Procedimiento:
1. Escuchamos el video
2. Analizamos el procedimiento seguido
Ejercicio en casa 5: 
Crecimiento de bacterias en medio sólido en placas
por estrías onduladas
 Materiales para 1L: 
 Equipo de protección personal (mandil, guantes 
y mascarilla)
 2 cubos de caldo de pollo
 1 litro de agua embotellada
 1 sobre de gelatina sin sabor
 Yogurt
 Levadura
 Hisopo
 Vasos de plástico o vidrio resistente al calor
 Asa de siembra
 Procedimiento:
1. Disuelve el cubo de caldo y el sobre de gelatina
2. Coloca a hervir la mezcla por 10 minutos, y apagar el fuego.
3. En otra olla, poner a hervir agua, apagar el fuego e insertar los envases a usar durante 5 minutos en el 
agua hervida.
4. Coloca la mezcla en el envase y tápala hasta que se enfríe, colocar en refrigeradora hasta usar.
5. Usar como inóculo el yogurt, hisopado de manos sucias y una dilución de levadura
6. Sembrar en placa contínua y por estrías cruzadas, incubar por 48 horas
 Respondemos:
1. Cada alumno debe realizar al menos un tipo de inóculo con ambos tipos de siembra en placa
2. Comparar los tipos de siembra
3. Elaborar un cuadro con sus resultados
Importante!
Descartar microorganismos
agregando lejía con cuidado
Cuestionario
• ¿Por qué algunos microorganismos desarrollan en caldo un 
característico crecimiento tipo película. ¿Qué factores ambientales 
podrían alterar la formación de una película superficial?
• Cuando utiliza tubos de agar inclinado para el estudio de las 
características de crecimiento es preferible inocular con aguja de 
kölle y no con asa. ¿Por qué?
• ¿Qué factores influenciarán en la abundancia del crecimiento en 
caldo, agar inclinado y agar vertical?
• Informe grupal