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Química Biológica Tec. De Lab. Lic. Bromatología Fac. C.S. UNaF Trabajo Práctico Nº 8 DIGESTION Y ABSORCION Objetivos: 1 - Determinar la influencia de pH en el comportamiento enzimático a través de la hidrólisisis de la amilasa sobre el almidón. Específicamente, se espera que el alumno: • Obtenga los datos de tiempo correspondientes a la decoloración de tres disoluciones de almidón, previamente coloreadas con LUGOL. • Relacione la velocidad de la reacción enzimática en la degradación de los principios inmediatos, concretamente de los "glúcidos", en los procesos de digestión. • Defina las condiciones óptimas de pH. • Relacione las condiciones de pH con el proceso de desnaturalización. 2 - Analizar si existen diferencias en la actividad enzimática de la amilasa salival de distintas personas. Fundamentación La transformación de los alimentos se realiza gracias a la acción de los dientes. A medida que el alimento es fragmentado, también es empapado en saliva, secreción producida por las glándulas salivales, que contiene agua, mucus, la enzima ptialina o amilasa salival , lizozima e iones. La amilasa actúa sobre el almidón, transformándole en glucosa y maltosa; la lizozima, por su parte, ayuda a combatir las bacterias que entran junto con los alimentos a la boca. La secreción salival es controlada enteramente por el sistema nervioso. Los alimentos, masticados y empapados, forman el bolo alimenticio que es tragado, pasando a la faringe , de allí al esófago y, finalmente, al estómago. La saliva es producida por tres pares de glándulas: las parótidas, las sublinguales y las submaxilares. La composición de la saliva es 95% de agua, 5% de iones Na, K, Cloruros , Bicarbonatos, Sulfatos, Secreción mucosa y 2 enzimas, la amilasa salival y la lizosima. Cuando alguna de las glándulas salivales se inflama, a causa de un virus, se producen las papera o parotiditis, cuya característica son las fiebres muy altas. Las enzimas son biocatalizadores y actúan de manera específica en los diversos procesos químicos del metabolismo, disminuyendo la energía de activación de los mismo en condiciones celulares (temperatura, pH, etc.). Bajo estas características la actividad enzimática es óptima, pero si se varía la naturaleza del medio de reacción (pH, temperatura,agentes desnaturalizantes...), la actividad enzimática tiende a verse modificada. En caso de condiciones extremas, se puede llegar a la desnaturalización de la enzima. Por su parte, la amilasa actúa hidrolizando los enlaces a (α1-4) del almidón, rindiendo sucesivamente moléculas de maltosa hasta los puntos de ramificación. El proceso se puede evidenciar añadiendo al medio de reacción una cantidad de lugol, que tiñe selectivamente de azul a la molécula de almidón en maltosa. En consecuencia, la distinta velocidad de aclaramiento durante la hidrólisis, depende de las condiciones, en este caso del pH y del medio que aceleran, reducen e incluso eliminan, en el caso de no existir decoloración. MATERIAL: • Saliva humana • Disolución de almidón al 2% • Disolución de NAOH al 20% • Disolución de HCL al 20% • Sensor indicador de pH o papel indicador de pH • Disolución de LUGOL • Tubos de ensayo • Vasos de precipitados • Gradilla para tubos de ensayo • Testigos de almidón a distintas concentraciones • Cronómetro METODOLOGÍA: • El 1º experimento consta de los siguientes pasos: 1 Introducir en un tubo de ensayo 2 ml de la disolución de almidón de pH=2 (ajustar el pH con las disoluciones de NaOH y HCL). 2 Añadir dos gotas de LUGOL, sin diluir, a la disolución la cual quedará teñida de color azul oscuro. En el caso de que el pH del medio sea superior a ocho se deberá añadir más gotas y agitar el tubo de ensayo hasta que el color azul sea homogéneo. 3 Añadir 1 cc de saliva, agitar brevemente y, sin pérdida de tiempo, pulsar el cronómetro. 4 Anotar el tiempo que demora en decolorarse la solución. 5 Una vez finalizada la toma de datos, se realiza la misma operación con las disoluciones de almidón de pH= 7 y de pH= 10. El segundo experimento consiste en tomar saliva de distintas personas y comparar el color obtenido, mediante los testigos, en un tiempo determinado, utilizando para ello las mismas proporciones que en la experiencia anterior. Trabajo Práctico Nº 8
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