Sin título - Edy G

Vista previa del material en texto

DIAGNOSTICO VIRAL 
CARRERA DE 
LABORATORIO CLINICO 
MsC. Mercedes Tapia 
Diagnóstico Viral 
Detectar e identificar agente etiológico, inf 
viral, clínica, y /o la Rsta inmune. 
 
1) dg. Viral clínico - orienta ( sarampión, 
varicela, hepatitis, etc.) 
2) lab. Clínico general. 
 
 
Técnicas de Diagnóstico 
Ofrecen ayuda directa 
– médico clínico. 
– Facilita la investigación 
El Dg definitivo correlaciona 
– antecedentes personales, familiares, 
epidemiológicos 
– Rtds de laboratorio virológico: calidad de la muestra 
– Técnicas utilizadas . 
– Experiencia 
Depende trabajo profesional, multidiciplinario / moderna 
máquina automatizada. 
 
 
 
 
Métodos de Diagnóstico 
 DIRECTOS: Virus como agente 
infeccioso. 
Detección del agente viral completo o sus 
componentes 
 1.- Aislamiento Viral 
Visualización de la partícula viral total / parcial 
2.- La Presencia de Ag virales ( técnicas 
inmunológicas: inmunoflorescencia (IF), 
Enzimoinmunoanálisis (EIA), test de 
aglutinación. 
METODOS DIAGNOSTICO 
DIRECTOS 
3.- la presencia de ácidos nucleicos virales 
(PCR) 
4.- El virus como partícula viral (microscopía 
electrónica) 
 
METODOS DE DIAGNOSTICO 
INDIRECTO 
Son aquellos que reconocen la respuesta 
inmune (humoral o celular) por parte del 
huésped. 
1.- Detección de Ac. Específicos antivirales 
por técnicas inmunológicas (EIA, 
IFI,WB,etc) 
2.- Producción de anticuerpos in vitro . 
Toma de muestra 
“Un Buen Dg empieza con una buena 
muestra” 
 _ Definición del momento 
– Forma de recolección 
– Transporte 
– Conservación 
Esenciales para el Rtdo del estudio. 
 
 
Recolección Sitio u órgano lesionado 
Sec. Respiratorias, deposiciones, sangre, 
orina y LCR 
Los medios de transporte especiales y el 
traslado al lab. Se hace en frio (hielo) 
Los virus deben mantenerse en frío a Tº 
+4 y -180ºC. 
Los virus con manto más lábiles 
(VRS,Influenza, CMV,VHB y C, etc) 
Los procesos de congelación y 
descogelación viabilidad 
 
 
Dependiendo del virus a estudiar 
Mantener pocos días a 4º 
Si no se procesa Congelarse a -20ºC y -
180ºC. 
Los virus desnudos son viables por varios 
años congelados a -20ºC 
(enterovirus, rotavirus, adenovirus, etc) 
Estudio sérico 
Dos muestras 
1.- Etapa aguda de la inf. 
2.- Etapa de la convalecencia 
Intervalos 2 a 4 semanas entre ellas para 
demostrar la seroconversión. 
Inf. Reciente IgM 
Inf. antigua IgG 
 
 
Detección del Agente 
Aislamiento Viral 
Huéspedes biológicos empleados animales de 
experimentación. 
Se usan lauchas para la preparar la vacuna 
antirrábica. 
Dg de arbovirus y estudios epidemiológicos de 
enterovirus. 
Los animales se usan para preparación 
específica de Ac antivirus (policlonales o 
monoclonales) 
El virus de la influenza del huevo embrionado 
para producir la vacuna. 
Embriones de 10-12 días 
Mb. Carioalantoidea virus 
de la ringotraqueitis aviar, 
Pseudorrabia 
Cavidad alantoidea V de 
la bronquitis 
infecciosa,encefalitis 
Cavidad Amniótica 
Saco vitelino Enf. 
Venéreas, 
neumonía,Ricketsia 
Vía intravenosa. Virus de 
la Leucemia 
 
Una vez que se duplican los virus dentro 
de las células de las mbs o del embrión, 
se libera a los líquidos vecinos ( fuente de 
virus) Ejm v influenza se duplica en el Sist. 
Respiratorio del embrión y en las cels. de 
la meb. amniótica. 
V de la viruela, herpes forman pústulas, 
Muelen y se deshacen con una sol. 
Isótonica. Las mb liberan le virus. 
Cultivos celulares 
 
Los virus provocan la muerte del embrión 
ejm. V de la encefalitis . Pruebas de 
hemaglutinación. 
Hemagutinación (+) existe la p. alta de la 
presencia del v. de la influenza A 
paramxovirus aviar. 
Los (-) se inoculan nuevamente en otro 
lote de huevos. 
Cultivos celulares 
Trata de multiplicar y mantener las cels, in 
vitro. 
Fragmentos de órganos y embriones de 
pollo 
Trituración 
Disgregación con tripsina (enzima) 
Obtener cels. Aisladas. 
Frascos con medios de cultivo líquidos 
(botellas o placas petri) 
El medio de Ctvo. Complejo 
aminoácidos,vitaminas, sales, glucosa, y 
buffer de bicarbonato, antibióticos impiden 
la contaminación bacteriana. 
Indicador de pH que evidencia la 
contaminación 
Acción citopática. Lesión de algunos virus 
Las cels. Infectadas por virus Evidencian 
cuerpos de inclusión 
Tinción hematoxilina- eosina 
Masas con morfología localización 
nuclear y citoplasma típicos. 
 
 
Detección de la partícula viral 
Microscopía electrónica Observar la morfología 
de la mayoría de los virus Familia y subfamilia 
Tinción (-) visualizar las partículas virales/ 
muestra 
Limitaciones: 
Necesita Alta concentración de la partícula viral. 
Disponibilidad del microscopio electrónico 
Operador experimentado 
Mejoramiento del método 
inmunomicroscopía electrónica, 
Agregaciòn de Ac específicos a la muestra 
que aglutinan y concentran los virus. 
Facilitando la visualización e identificar la 
partícula viral. 
La reacción Ag-Ac es específica. 
 
Detección de componentes 
macromoleculares 
Detección de Ag o proteínas virales 
(inmunoanálisis) 
Se basa en la especificad de la reacción Ag-Ac. 
Clara definición del componente antigénico a 
inv. (Interno-externo, estructural o 
temporal,completo o parcial , etc) 
Tipo de Ac. (monoclonal,policlonal, 
biosintético,etc) 
Presencia de Ag y/o Ac. Por métodos 
Directos o indirectos 
Método directo: Ac tiene acoplado un 
marcador y solo se usa para detectar Ag. 
Método Indirecto: Ac específico ( Ac. 
Primario) no está marcado. 
La formación del complejo Ag-Ac se 
evidencia con un Ac marcado anti-especie 
del Ac primario (Ac secundario conjugado) 
se usa para detectar Ag como Ac. 
 
 
Aglutinación 
Aglutinación Inmunodiagnóstico simple: 
Se observa a simple vista 
Se ha perfeccionado con la adsorción de 
Ag o Ac a fases sólidas (esferas de latex, 
placas, hematíes pretratados) Ejm 
rotavirus, rubeola.