Coloquio 8

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QUÍMICA ANALÍTICA II AÑO 2018 
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COLOQUIO 8 
ESPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA MOLECULAR 
1- Dados los siguientes espectros de excitación y emisión de la solución sulfato de quinina en 
H2SO4 1 M, esplique: 
a) ¿Qué diferencias espera obtener en el espectro de emisión (rango: 400- 600 nm) si realiza la 
excitación a una longitud de onda de 320 nm o a 350 nm? ¿Cuál elegiría? ¿Por qué? 
b) ¿Qué es el corrimiento de Stokes? ¿Por qué ocurre? 
 
Figura 1. Espectro excitación-emisión de sulfato de quinina en H2SO41 M. 
 
2- Construcción de una curva de calibrado 
Una gragea de quinolona, indicado para uso animal, tiene un contenido declarado de 20 mg de 
componente quinolona activa/unidad. Para verificar su concentración se dispone de una técnica 
fluorimétrica que hace uso de la curva de calibrado. 
Procesamiento de la muestra: una gragea se disuelve con un solvente orgánico, enrasando a 50 
mL. De esta solución se toman 10 mL y se llevan a un volumen de 100 mL. De esta última solución 
se colocan 2 mL en un matraz de 10 mL, se le agrega 1 mL de reactivo fluorógeno y se enrasa con 
el solvente. A esta solución se le efectúa la lectura de fluorescencia a una λ de 230 nm para 
excitación y una de 365 nm para emisión. 
Efectuar los cálculos para realizar la curva de calibrado, indicando todos los pasos. 
Datos: 
- Se dispone de una solución de 120 mg quinolona/100 mL. 
- El material volumétrico disponible para las soluciones finales: matraces de 25 mL. 
 
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3- Para cuantificar el contenido de reverastrol en cereales se procedió de la siguiente manera: se 
pesaron 2,469 g de muestra, se disgregaron con 50 mL de una solución alcohol-ácida. 
Posteriormente, se extrajo reverastrol con tres alícuotas de 30 mL (cada una) de solvente 
orgánico, y el total de lo extraído se enrasa a 250 mL. 
Si: 
-El contenido de reverastrol en la muestra es aproximadamente 10mg/100g 
-La respuesta instrumental es lineal hasta 100 ppb 
-La solución patrón tiene una concentración de 100 ppm 
-Es necesario agregar 1 mL de reactivo para que se produzca la fluorescencia. 
-Se dispone de matraces de 10 ml 
Realizar los cálculos necesarios para preparar una curva de calibrado mediante el método de 
adición estándar. 
 
4- En la Tabla 1 se indican los resultados luego de evaluar la curva de calibrado de rivoflavina 
(Vitamina B12) a distintas condiciones de solvente y pH. Grafique e indique: 
a) Influencia de pH. Dato: pKa rivoflavina 10,2 
b) Elegir el mejor solvente para la rivoflavina. 
c) Si prepara una solución de rivoflavina de 3 ppm en los 3 solventes evaluados: ¿qué sucederá 
con el rango de emisión de la rivoflavina? Explique. Nota: Considere las distintas polaridades 
de los solvente. 
Tabla 1. Curva de calibrado de rivoflavina en diferentes medios 
Rivoflavina 
(ppm) 
Intensidad de emisión 
Solución tampón fosfato de 
sodio 10 mM (pH 5,5) 
Ácido acético 0,9 M 
(pH 4,0) 
Etanol 10% (v/v) 
 NaOH 0,1 M (pH 13) 
0 5; 5; 5,01 5; 5; 5 4,98; 4,98; 4,97 
1 5,91; 5,92; 5,90 5,65; 5,64; 5,66 4,99; 4,98; 4,97 
2 6,74; 6,73; 6,74 6,27; 6,25; 6,30 5,00; 4,99; 5,01 
3 7,53; 7,54; 7,55 6,88; 6,89; 6,90 5,01; 5,01; 5,00 
4 8,27; 8,28; 8,3 7,4; 7,41; 7,45 5,02; 5,03; 5,02 
5 8,83; 8,84; 8,84 8,01; 8,02; 8,00 5,04; 5,04; 5,03 
10 11,86; 10,85; 10,83 10,16; 10,17; 10,15 5,05; 5,06; 5,07 
50 17,52; 17,53; 17,50 14,09; 14,10; 14,08 5,1; 5,15; 5,21 
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5- Se quiere evaluar la variación de la señal versus concentración de la lumiflavina (producto 
fluorescente derivado de la rivoflavina) a pH 7-8. Se logró determinar que conforme aumenta 
la concentración de rivoflavina, trabajando en un rango de 0,5 a 1000 ppb, la fluorescencia 
también lo hace proporcionalmente. Sin embargo, cuando prepara la misma curva de 
rivoflavina calentando durante 3 minutos a 37°C y 45°C, respectivamente, observa un 
decaimiento de la señal analítica. Explique a que atribuye dicho fenómeno. Fundamente. 
 
6- Determinación de oxatomida (OXA) en comprimidos. 
Técnica: Se pesan 1,152 g de muestra y se disuelven en 50 mL de una solución de HCl0,01 M. Se 
filtra y el filtrado se enrasa a 200 mL (solución incógnita). Luego en matraces de 5 mL se colocan: 
Matraz Nº 1 2 3 4 5 
Sol. incógnita (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 
Sol. Patrón 60 mg OXA L-1 (mL) 0 0,25 0,5 0,75 1,0 
Sol. de HCl (mL) 3 3 3 3 3 
Enrasar con agua bidestilada, homogeneizar 
Leer en espectrofluorómetro λ exitación 280 nm y λ emisión 309 nm 
Fluorescencia 123 184 246 307 368 
Hallar el contenido de OXA en cada comprimido de 250 mg.