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1 ANTIBACTERIAL EFFECT OF THE ESSENTIAL OIL OF Origanum vulgare AGAINST Enterococcus faecalis EFECTO ANTIBACTERIAL DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare FRENTE A Enterococcus faecalis Grecia Silvanna Bohórquez Becerra1, María Camila Suárez Camargo2 Viviana Rodríguez Salazar3, Adiel Alberto Vásquez Quijano4, Blanca Lynne Suárez Gelvez5 Jesús Arturo Ramírez-Sulvarán6 ,Oscar Orlando Vera Roces7 1* Odon., grbohorquez@uan.edu.co, Universidad Antonio Nariño, Cúcuta, Colombia. 2 Odon., mariacsuarez@uan.edu.co, Universidad Antonio Nariño, Cúcuta, Colombia. 3 Odon., vivianrodriguez@uan.edu.co, Universidad Antonio Nariño, Cúcuta, Colombia. 4 Esp. en computación para ciencias de la educación, adiel.vazquez@uan.edu.co, Universidad Antonio Nariño, Cúcuta, Colombia. 5. MSc. Ciencias Médicas, bsuares@uan.edu.co, Universidad Antonio Nariño, Cúcuta, Colombia. 6. Ph. En educación, jesusr@uan.edu, Universidad Antonio Nariño, Universidad Francisco de Paula Santander, Cúcuta, Colombia 7. Esp. En periodoncia, overa57@uan.edu.co, . Universidad Antonio Nariño, Cúcuta, Colombia RESUMEN En diversos estudios se ha demostrado que el aceite esencial de origanum vulgare posee una amplia actividad antimicrobiana, inclusive superior a la ampicilina. Por tal razón debe ser considerado un potente antimicrobiano natural. El Enterococcus faecalis es un microorganismo responsable del fracaso endodóntico, posee capacidad de penetrar los túbulos dentinarios, formar biopelículas y sobrevivir en condiciones hostiles. Se ha demostrado que el orégano (Origanum vulgare) tiene acción antimicrobiana frente a diversos microorganismos. Objetivo: determinar el, efecto antibacteriano del aceite esencial de Origanum vulgare frente al Enterococcus faecalis (E. faecalis). Materiales y métodos: Se realizó extracción del aceite esencial de O. vulgare por arrastre de vapor utilizando un sistema soxhlet y como diluyente etanol al 96%, luego de obtener el aceite se realizaron diluciones del 0.5% al 100%. Se utilizó cepa de referencia de E. faecalis ATCC® 29212 sembrada en agar sangre 5% La sensibilidad fue evaluada a través del método de difusión en agar con formación de un halo de inhibición >18 mm. Se determinó concentración mínima inhibitoria (CMI), concentración mínima bactericida (CMB) y dosis letal 50% (DL50), partiendo del patrón de turbidez de la escala de Mc Farland 0.5 equivalente a una concentración de 1.5 x 108 UFC/ml. Resultados: Concentraciones superiores al 5% de aceite esencial de O. vulgare generó halos de inhibición ≥ 18 mm contra E. faecalis una CMB) 70% y DL50 equivalente al 40%. Conclusión: El aceite esencial de Origanum vulgare tiene efecto antibacteriano sobre el Enterococcus faecalis a partir de la concentración del 5%. mailto:grbohorquez@uan.edu.co mailto:vivianrodriguez@uan.edu.co mailto:adiel.vazquez@uan.edu.co mailto:bsuares@uan.edu.co mailto:jesusr@uan.edu 2 Palabras clave: Enterococcus faecalis, Origanum vulgare, resistencia microbiana, concentración mínima inhibitoria (CMI), concentración mínima bactericida (CMB), dosis letal 50 (DL50). ABSTRACT In several studies it has been demonstrated that the essential oil of origanum vulgare has a broad antimicrobial activity, even superior to ampicillin, for this reason it is considered a potent natural antimicrobial. Enterococcus faecalis, a microorganism responsible for endodontic failure, has the capacity to penetrate the dentinal tubules, form biofilms and survive in hostile conditions. It has been demonstrated that oregano (Origanum vulgare) has antimicrobial action against various microorganisms. Objective: To determine the antibacterial effect of Origanum vulgare essential oil against Enterococcus faecalis (E. faecalis). Materials and methods: O.vulgare essential oil was extracted by steam extraction using a Soxhlet system and as diluent 96% ethanol. After obtaining the oil, concentration of 0.5% to 100% were made. A certified strain of E. faecalis ATCC® 29212 seeded on 5% blood agar was used. Sensitivity was evaluated using the agar diffusion method with the formation of an inhibition halo >18 mm. Minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (CMB) and lethal dose 50% (LD50) were determined, based on the turbidity pattern of the Mc Farland scale 0.5 equivalent to a concentration of 1.5 x 108 CFU/ml, Results: Concentrations higher than 5% of essential oil of O. vulgare generated inhibition halos of 18 mm against E. faecalis (CMB) 70% and LD50 equivalent to 40%. Conclusion: The essential oil of Origanum vulgare has antibacterial effect on Enterococcus faecalis from 5% concentration. INTRODUCCIÓN El aceite esencial de origanum vulgare es considerado un antimicrobiano natural de amplio espectro, incluso mejor que la ampicilina, esto se debe al poder de inhibición total sobre microrganismos Gram positivos. Enterococcus faecalis es un anaerobio facultativo Gram positivo, que habita el tracto gastrointestinal y genitourinario de humanos y animales. Este microorganismo es un agente patológico que se encuentra implicado en infecciones nosocomiales alrededor del mundo, responsable hasta el 90% de las infecciones enterococcicas en humanos, la prevalencia de E faecalis es variable según su muestra (saliva, conductos radiculares y placa) y la población estudiada, oscila del 0 al 50%. E. faecalis es resistente a múltiples fármacos. Este microorganismo se ha encontrado asociado a patologías de la cavidad oral, particularmente como caries, abscesos dentales, infecciones periodontales, periodontitis apical, e infecciones endodónticas persistentes [1,2,3,4,29] El E. faecalis en un microorganismo altamente virulento que cuando se presente en cavidad oral se relaciona con el fracaso del tratamiento endodóntico. También se ha demostrado que reside dentro de las diferentes capas de la biopelícula oral, lo que lleva al fracaso de la terapia endodontica Se ha encontrado en los canales radiculares de dientes no vitales, este microorganismo resiste a los irrigantes desinfectantes comúnmente usados en endodoncia, se mantiene por largos periodos, incluso sin alimentación, los cambios que se puedan presentar dentro del canal radicular permiten su crecimiento, lo cual permite hacerse más fuertes y resistentes dentro del conducto. Siendo el agente causal y etiológico de las infecciones endodónticas persistentes. El tratamiento de los 3 conductos radiculares consiste en la desinfección de los conductos radiculares y la prevención de una infección persistente. Los Enterococcus en biopeliculas son más resistentes a los antibióticos que las cepas que crecen planctónicamente. [2,5,6,7,8,9,10]. El uso de antibióticos ha sido efectivo en el tratamiento de infecciones causadas por patógenos. No obstante, el abuso de estos fármacos han creado resistencia en microorganismos, causando dificultades en la salud general de los seres humanos, lo cual resulta de gran interés profundizar en esta temática de salud pública [11]. Particularmente, los enterococos en las biopelículas son resistentes a antibióticos [12]. El papel de la adhesión y la colonización celular de este grupo bacteriano es un factor de virulencia que está asociado con infecciones enterocócicas [13]. Por lo anterior se hace necesario explorar e identificar nuevos compuestos con propiedades antibacterianas sin toxicidad, las plantas tienen gran actividad antibacteriana [14]. Origanum vulgare que pertenece a la familia ¨Labiatae¨ es una planta aromática de uso decorativo, culinario y fitoterapéutico en todo el mundo. El aceite derivado de esta planta podría utilizarse para tratar patologías infecciosas causadas por microorganismos resistentes a los antimicrobianos convencionales. El carvacrol 78% y el timol 85% son los dos fenoles responsables de la mayor actividad antimicrobianay antioxidante del aceite de Origanum vulgare [15]. En el presente estudio tiene como objetivo determinar el efecto antibacteriano del aceite esencial Origanum vulgare frente a Enterococcus faecalis. Materiales y Métodos La presente investigación es de tipo experimental, in vitro. Para el proceso de extraer el aceite esencial de O. vulgare se adquirieron las plantas en un abasto herbario naturista de la ciudad de Cúcuta, luego se procedió a desprender manualmente las hojas y se recolectaron aproximadamente 1000 g, luego se lavaron con agua corriente, se secó en un medio aislado de contaminación durante 7 días hasta que se obtuvo el producto completamente seco. Material vegetal (hojas) de Origanum vulgare se maceraron en un mortero y con este producto se alimentaron los cartuchos de papel filtro que se metieron en el extractor Soxhlet40 cubierto con un algodón. Se efectuó la extracción por 4 horas, utilizando 100 ml. de etanol 96°G.L40, en un balón de fondo plano de 250 ml y se ajustó la temperatura hasta que se consiguió 8 ciclos por hora. Usando el baño serológico se realizó la operación de evaporación del extracto etanólico hasta 20 mL, se continuo la evaporación en una estufa a 80ºC hasta obtener un extracto blando. Posteriormente se pesó 0,1 g de extracto blando en un vaso de precipitación de 10 CC disolviéndose con 5 mL de etanol de 96ºG.L. y se llevó a baño serológico por 3 minutos, frio y filtrado hasta que midió 10 mL. Una vez obtenido el aceite esencial de Origanum vulgare, se realizaron las diluciones; utilizando como diluyente aceite de oliva virgen, se trabajaron concentraciones descendentes desde el 100%, hasta una dilución del 0,5%. para obtener la dilución del 90% se agregó, en un tubo de ensayo, 9 ml del extracto puro y 1 ml de disolvente aceite de oliva, mezclándolo y homogenizando la muestra, para la dilución de 80% se tomaron 8ml de aceite esencial puro aceite de oliva y se homogenizo con 2 ml del aceite de oliva virgen, para la dilución de 70% se tomaron 7ml de aceite puro y se 4 homogenizo con 3ml de aceite de oliva virgen y así sucesivamente hasta que se obtuvo una dilución del 0.5% donde se tomaron 0,5 ml de aceite puro y se homogenizo con 9.5 ml del aceite de oliva virgen. Cepa bacteriana Se obtuvo una cepa de referencia de E. faecalis ATCC®29212. Se preparó el medios de cultivo agar sangre siguiendo las indicaciones de la casa fabricante, se disolvieron 44,5 g del polvo en 1000 ml de agua destilada, se homogenizo y se calentó hasta obtener una mezcla homogénea, esta mezcla se esterilizo a 121°C 15 libras de presión por pulgada cuadrada durante 15 minutos, luego se dejó enfriar hasta de 50°C y se agregó sangre de cordero desfibrinada en una proporción del 5%, se mezcló muy bien y se sirvió en cajas de Petri, se dejó enfriar para que coagulara y se almaceno en nevera guardando las normas de bioseguridad, para evitar la contaminación. El caldo trypticase soya se preparó disolviendo 30 g del polvo en un litro de agua destilada, se distribuyó en tubos de ensayo, y se procedió a su esterilización en las mismas condiciones que el agar base sangre [16]. La reactivación de la cepa certificada se realizó de acuerdo con las indicaciones del laboratorio fabricante, se conservó el cultivo madre en tubo de ensayo con caldo trypticase soya mientras se realizó la siembra en agar. Se activó la cepa de E. Faecalis de la siguiente manera: se tomó la cepa sellada y se rompió la muesca, se abrió la bolsa que contenía el vial con la cepa liofilizada, el cual se retiró para humedecer este liofilizado, presionando en la parte superior donde se encontraba la ampolla con el fluido hidratante para liberarlo, se agito verticalmente para facilitar el flujo de fluido a través del eje hacia la parte inferior de la unidad que contenía el liofilizado, se oprimió el sedimento y se mezcló el líquido usando una acción de presión luego se impregno inmediatamente el hisopo con la suspensión hidratada, con el mismo se inoculo la placa de cultivo primario (agar sangre Schaedler) mediante el uso de presión y se froto el hisopo sobre toda la superficie de la caja de Petri, se incubo a 37°C durante 18-24 horas. Terminado este proceso se procedió a sembrar en cajas de Petri con agar sangre Schaedler, utilizando asa en L esterilizada [17]. Se tomaron 2 ml de cada disolución y en cada una se agregaron 6–8 sensidiscos ya esterilizados, posteriormente se dejaron secar durante un día, repitiendo el proceso hasta que se observó los sensidiscos totalmente impregnados de la solución aplicada. Luego se procedió a preparar un tubo de vidrio con caldo trypticase soya una concentración equivalente a los estándares de turbidez de Mc Farland 0.5 la cual equivale aproximadamente a una concentración de 1.5 x 108 UFC/ml, para esto, se tomó una muestra de E. faecalis y se inoculo en un tubo con solución salina, con una micropipeta, se inocularon las cajas de Petri con 250 µL del homogenizado y se procedió a esparcirlo sobre la caja con un asa en L estéril. Luego se llevó el sensidiscos correspondiente a cada caja con una pinza estéril se procedió a incubación de 18 a 24 horas a 37ºC, hasta observar el crecimiento bacteriano y después de esta incubación se midió el diámetro de los halos de inhibición (mm). Este procedimiento se repitió 3 veces con cada dilución obtenida. Para la interpretación de los halos de inhibición se midieron en todas las cajas de Petri los diámetros de los mismos que se formaron, con un medidor de halo antibacteriano, teniendo como referencia: halos ≥18 mm de diámetro 5 determinarán sensibilidad del microorganismo ante las sustancias en estudio, halos de diámetro ≤17 mm determinarán resistencia, se comparó cada uno de las sustancias y se evaluó la CMI que corresponde a la concentración que presente un halo de inhibición promedio a los 18 mm o más (Tabla 1). Tabla 1. Halos de inhibición registrados por cada una de las concentraciones evaluadas del aceite esencial de orégano frente a E. faecalis. R/1 R/2 R/3 CONCENTRACIONES Halos (mm) Halos (mm) Halos (mm) 100% 35 (S) 36 (S) 35 (S) 90% 33 (S) 34 (S) 34 (S) 80% 32 (S) 32 (S) 33 (S) 70% 31 (S) 31 (S) 32 (S) 60% 29 (S) 29 (S) 30 (S) 50% 25 (S) 25 (S) 25 (S) 40% 24 (S) 24 (S) 26 (S) 30% 23 (S) 23 (S) 22 (S) 20% 22 (S) 22 (S) 20 (S) 10% 21 (S) 22 (S) 23 (S) 7,5% 19 (S) 19 (S) 18 (S) 5% 18 (S) 18 (S) 18 (S) 2,5% 12 (R) 12 (R) 12 (R) 1.25% 9 (R) 9 (R) 8 (R) 0.5% 0 - 0 - 0 - S – Sensible >18 mm de diámetro R – Resistente ≤ 17 mm de diámetro Para la concentración mínima bactericida y dosis L50, se procedió a preparar en un tubo de ensayo con caldo trypticase soya, una concentración equivalente a los estándares de turbidez de Mc Farland 0,5 la cual equivale aproximadamente a una concentración de 1,5 x 108 UFC/ml, para esto, se tomó una muestra de E. faecalis y se inoculo en un tubo con solución salina, a cada tubo de ensayo, que contenía 2 ml de cada concentración, se le agrego 25µl del concentrado de E. faecalis, y se sometió a un periodo de incubación de 18 a 24 horas a 37° C. Una vez finalizado el período de incubación se tomó de cada tubo de ensayo 250µl y con un asa en L estéril se extendió en cada caja de agar sangre, se incubaron las cajas de Petri en la jarra de anaerobiosis por un tiempo de 18 a 24 horas a una temperatura de 37°C. Se realizó 3 repeticiones por cada concentración 47 (Tabla 2). Luego del período de incubación se sacaron las cajas de Petri y se realizó un conteo de la cantidad de unidades formadoras de colonias [18]. 6 Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de orégano frente a E. faecalis. Del aceite esencial de O. vulgare se prepararon concentraciones de 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 7,5%, 5%, 2,5%, 1,25% y 0,5%.y se realizaron 3 repeticiones por tratamiento, se determinó por medio de halos de inhibición y sensidiscos impregnados en cada una de las concentraciones, CMI frente al E. faecalis. En la figura 1 se presentan los resultados obtenidos, en la cual se observa que concentraciones iguales o mayores de 1,25% son sensibles a O. vulgare y menores a esta concentración son resistentes, y existe una relación directa entre la concentración y el halo de inhibición. Tabla N°2 Halos de inhibición registrados por cada una de las concentraciones evaluadas del aceite esencial de orégano frente a E. faecalis. En la figura 1 se presenta la evidencia de los halos de inhibición de aceite esencial de orégano frente a E. faecalis. Del mismo modo en la figura 2 se presenta la evidencia fotográfica de la medición del halo de inhibición de aceite esencial de orégano frente a E. faecalis. Figura 1. Presencia de halos de inhibición de E. faecalis en soluciones concentrada de O. vulgare. CONCENTRACIÓN ACEITE ESENCIAL ORÉGANO (%) 0,50 1,25 2,50 5,00 7,50 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00 100,00 HALO DE INHIBICIÓN EN mm 9 18 18 18 19 22 21 23 25 25 29 32 32 34 35 7 Figura 2. evidencia fotográfica de la medición del halo de inhibición de aceite esencial de orégano frente a E. faecalis . Concentración mínima bactericida y dosis letal 50 Para determinar la CMB y DL50, se tuvo en cuenta el patrón de turbidez de la escala de Mc Farland 0.5 la cual equivale aproximadamente a una concentración de 1,5 x 108 UFC/ml. Se observó que la concentración mínima bactericida (con una inhibición de 99.9%) en la cual se obtuvo en la dilución 70% (Tabla 3) y la dosis letal 50 se observó en la dilución del 40% (Tabla 4). Concentración UFC 10% 6,1x107 20% 5,2x107 30% 5,6x107 40% 4,9x107 50% 9,2x105 60% 8,5x105 70% 0,0 80% 0,0 90% 0,0 100% 0,0 Tabla 3. CONCENTRACIÓN MÍNIMA BACTERICIDA (CMB) 8 Concentración UFC 10% 7,8x107 20% 6,1x107 30% 5,2x107 40% 4,9x107 50% 9,2x105 60% 8,5x105 70% 0,0 80% 0,0 90% 0,0 100% 0,0 Tabla 4. UFC de E. faecalis en soluciones de O. vulgare. La dosis letal 50 (DL50) se obtuvo en una concentración del 40%. DISCUSIÓN Las infecciones endodónticas son responsables del dolor agudo bucofacial y la perdida dental, llegando a producir infecciones graves. El objetivo del tratamiento endodóntico es la desinfección de los conductos, aunque se ve limitado, ya que los microorganismos pueden resistir la acción de la instrumentación, los irrigantes, medicación intracanal. Esta acción es afectada debido a la capacidad de penetrar y resistir en los túbulos dentinarios, conductos accesorios y áreas apicales profundas [19]. Enterococcus faecalis es el microorganismo patógeno responsable del fracaso en el tratamiento endodóntico ya que es el más resistente que se encuentra especialmente en la biopelícula, tiene una gran capacidad de penetrar los túbulos dentinarios, es capaz de formar biopelículas maduras y sobrevivir en condiciones hostiles, lo que hace que este microorganismo sea multirresistente a los tratamientos de conductos y responsable del fracaso endodóntico [20]. La fitoterapia actualmente se muestra como alternativa en el tratamiento de múltiples infecciones, incluso infecciones que se originan en el medio oral, ya que tienen propiedades antiinflamatorias, antioxidantes, curativas, antifúngica, incluso antibacterianas. El O. vulgare tiene propiedades aromáticas, usadas en alimentos y medicina. Su acción antibacteriana se ha demostrado sobre bacterias responsables de infecciones orales, por tanto, se cree que su acción antibacteriana por medio de sus componentes puede ayudar a tratar la resistencia frente a E. faecalis [21]. El estudio realizado por Man et al (2019), comprobaron que los aceites esenciales presentaron un buen componente bioactivos con propiedades antioxidantes y antimicrobianas. Se estudiaron los aceites de incienso mirto tomillo, limón y orégano sobre los microorganismos E. faecalis, Escherichia coli, K. neumoniae y Pseudomonas aeroginosa. Determinaron la concentración mínima inhibitoria y bactericida, en la cual observaron que los aceites más activos fueron, orégano, tomillo limón y lavanda. Mientras que los menos activos fueron incienso y mirto. Solo los extractos de orégano y lavanda presentaron actividad bactericida. En el presente estudio se observó que el 9 aceite esencial de O. vulgare presenta una muy buena actividad bactericida frente a E. faecalis, hecho que coincide con el trabajo de Man et al [22]. Benbelaid F. et al en 2014 evaluaron la eficacia de los aceites esenciales en el tratamiento de infecciones orales complejas, principalmente causadas por la biopelícula formada por Enterococcus faecalis, resistente a múltiples fármacos, en las infecciones endodónticas. Los aceites de Origanum glandulosum y Thymbra capitata tienen buena actividad antimicrobiana y una alta capacidad en la erradicación de la biopelícula formada por E. faecalis, ya sea para cepas sensibles o resistentes a múltiples fármacos [23]. En el presente estudio se determinó que el aceite esencial de O. vulgare tiene efecto antibacteriano frente al E. faecalis, coincidiendo con el estudio realizado por Benbelaid F. et al en 2014 [23]. Fournomiti M et al, demostraron que los aceites esenciales de Origanum vulgare, Salvia officinalis y Thymus vulgaris tienen actividad antimicrobiana frente a los patógenos Escherichia coli, Klebsiella oxytoca y Klebsiella pneumoniae. Comprobando que el aceite de tomillo posee una fuerte acción antibacteriana. El aceite esencial de O. vulgare mostró mayor acción antibacteriana contra K. oxytoca [24]. En este estudio se demostró que el aceite esencial de O. vulgare también presenta actividad antimicrobiana frente al E. faecalis, comprobando que el aceite de tomillo, su principio activo, es un amplio agente antibacteriana frente a múltiples bacterias. Benbelaïd et al. En su estudio demostraron que el aceite esencial de Origanum glandulosum fue efectivo, inhibiendo el crecimiento de la biopelícula de las cepas de E. faecalis y puede erradicar todas las células microbianas encontradas en biopelícula. Demostraron que el aceite esencial de Thymbra capitata y Origanum glandulosum son efectivos como agentes antimicrobianos frente a E. faecalis [23]. En el presente estudio se demostró que el aceite esencial de O. vulgare tiene efecto inhibitorio frente a E. faecalis a partir de una concentración del 5%, concordando con el estudio antes mencionado. Cândido C.et al., realizaron un estudio en el año 2010 para determinar la eficacia antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de Myrcia ovata Cambess, comúnmente utilizado en Brasil para el tratamiento de enfermedades gástricas, sobre el microorganismo E. faecalis, demostrando que, el aceite esencial mostró actividad antimicrobiana contra E. faecalis, mostrando una CMI a partir de la concentración que oscilan entre 0.0625 - 1%. [25]. En este estudio se demostró que el aceite esencial de O. vulgare también presenta una inhibición antibacteriana a partir de una concentración del 5%. Martos J. et al. [25] Realizaron un estudio donde investigaron la actividad antimicrobiana del aceite esencial de Eucalipto, Naranja y cloroformo solo y en asociación con diversas concentraciones de Cetrimida, contra la biopelícula de E. faecalis. Estos aceites lograron porcentajes de reducción de biopelículas de más del 85% con el aceite de naranja y el 70% con el aceite de eucalipto [26]. En este estudio se demostró que el aceite esencial de O. vulgare presenta actividad antimicrobiana, presentando sensibilidad a partir de la concentración del 5%. Zomorodian K. et al., Estudiaron la actividad antimicrobianade Satureja khuzestanica, satureja bachtiarica, Ocimum sanctum, Artemisia sieberi, Zataria multiflora, Carum copticum y Oliveria 10 decumbens, sobre bacterias encontradas en la cavidad oral incluyendo E. faecalis, encontraron que los aceites esenciales estudiados mostraron efecto antibacteriano frente el E. faecalis [27]. En este estudio se demostró que el aceite esencial de O. vulgare si tiene actividad antibacteriana frente a E. faecalis, incluso en concentraciones del 5%. Seghatoleslami y col. Realizaron un estudio evaluando los efectos antibacterianos de un aceite esencial endémico iraní, Satureja Khuzistanica Jamzad, usándolo, como antiséptico intracanal: Dando como resultado que el aceite esencial Satureja Khuzistanica Jamzad con una concentración de 0,31 mg / ml es eficaz contra la mayoría de patógenos orales que incluyen E. faecalis [28]. Se demostró, por medio de este estudio que el aceite esencial de O. vulgare también cuenta con actividad bactericida frente a E. faecalis, lo que lleva a concluir que, la fitoterapia puede ser usada como alternativa en el tratamiento de infecciones bucales. CONCLUSIONES El aceite esencial de Origanum vulgare tiene efecto antibacteriano frente al E. faecalis. Este estudio permitió determinar que el aceite esencial de Origanum vulgare tiene efecto antibacteriano frente al E. faecalis, con halo de inhibición de 18 mm en concentración del 5%, mostrando que el E. faecalis es sensible al aceite esencial de orégano. La concentración mínima bactericida (CMB) del aceite esencial de O. vulgare, siendo el 70%, para erradicar el 99.9% de E. faecalis. La Dosis Letal 50 (DL50) del aceite esencial de orégano, siendo el 70%, para erradicar el 50% de E. faecalis. Agradecimientos Los autores agradecen a la universidad Antonio Nariño por facilitar las instalaciones los laboratorios de Ciencias Básicas para el desarrollo de la presente investigación. También los autores agradecen a todas las personas que contribuyeron en el proceso de elaboración de este trabajo de investigación. Referencias Bibliográficas. 11 [1] Ardizzoni A, Pericolini E, Paulone S. 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