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Capítulo 12: ACTIVACION DEL LINFOCITO B Y PRODUCCION DE ANTICUERPOS La inmunidad humoral esta mediada por anticuerpos secretados que producen las células de la línea del linfocito B. Dos tipos de antígenos microbianos pueden inducir respuestas firmes de anticuerpos: 1. Los antígenos multivalentes de origen microbiano pueden activar los LB a través del receptor del LB (BCR). 2. Los antígenos microbianos proteínicos pueden presentar los LB a los LT cooperadores, lo que da lugar a respuestas que dependen de los linfocitos T en las que los linfocitos T cooperadores dirigen la activación del linfocito B. En ambos casos se secretan anticuerpos que se unen a los antígenos de las bacterias, los virus y otros microbios extracelulares, y actúan neutralizándolos y eliminándolos. La eliminación de diferentes tipos de microbios requiere varios mecanismos efectores mediados por diferentes isotipos de anticuerpos. Características claves de la activación del LB y de la producción de anticuerpos: La activación de los LB induce su proliferación, lo que conduce a la expansión clonal, seguida de la diferenciación, que culmina finalmente en la generación de linfocitos B memoria y de células plasmáticas secretora de anticuerpos; - Cambio de isotipo (clase) de cadena pesada: algunos linfocitos B activados comienzan a producir anticuerpos diferentes a la IgM y la IgD. - Maduración de la afinidad: los linfocitos B activados que producen anticuerpos que se unen a los antígenos con una afinidad cada vez mayor dominan la respuesta. El tipo y cantidad de Ac producidos varía en función del tipo de Ag que dirija la respuesta inmunitaria, la implicación de los LT, el antecedente de exposición al Ag y el lugar anatómico en el que tiene lugar la activación. Las respuestas de Ac frente a los Ag proteínicos requiere que el Ag sea reconocido de forma específica e interiorizado por los linfocitos B, y que un fragmento peptídico de la proteína interiorizada se presente a los linfocitos T CD4+ cooperadores que después activan estos LB; las proteínas se clasifican en Ag dependientes del timo o de T. - LT cooperador folicular, facilita la formación de centros germinales, que son estructuras especializadas en los órganos linfáticos que se generan durante las respuestas inmunitarias humorales dependientes de T. 1 Las respuestas de Ac a Ag multivalentes no proteínicos con determinantes repetitivos, como los polisacáridos, algunos lípidos y los ácidos nucleicos, no requieren LT cooperadores específicos frente al antígeno. - Los antígenos multivalentes se llaman, por tanto, antígenos independientes del timo o independientes de T. Los LB activados se diferencian en células plasmáticas secretoras de anticuerpos. Parte de la progenie de LB activados de una forma dependiente de T puede diferenciarse en linfocitos memoria. En las respuestas inmunitarias humorales dependientes del LT cooperador frente a Ag proteínicos se observa habitualmente el cambio de isotipo y la maduración de la afinidad; ambos proceso se deben a la estimulación de los LB por los LT cooperadores. Las respuestas primarias y secundarias de Ac frente a los antígenos proteínicos difieren de forma cualitativa y cuantitativa; Las respuestas primarias se deben a la activación de linfocitos B vírgenes no estimulados antes, mientras que las respuestas secundarias se deben a la estimulación de clones expandidos de LB memoria. Distintos subgrupos de linfocitos B responden de forma preferente a diferentes tipos de antígenos; 2 RECONOCIMIENTO DEL ANTÍGENO Y ACTIVACIÓN DEL LINFOCITO B INDUCIDA POR EL ANTÍGENO Para iniciar las respuestas de Ac, los Ag deben ser capturados y transportados a las zonas de LB de los órganos linfáticos. Los Ag inician, por lo tanto, el proceso de activación del LB, trabajando a menudo en concierto con otras señales que se generan durante las respuestas inmunitarias innatas desencadenadas por los microbios durante las infecciones o con adyuvantes en las vacunas. Captura del antígeno y entrega a los linfocitos B La mayoría de los LB vírgenes maduros son LB foliculares que recirculan en la sangre. Entran a bazo, ganglios, tejido linfático mucoso y después migran a los folículos (zonas de linfocitos B). Su desplazamiento a los folículos linfáticos esta guiado por CXCL13, secretada por las células dendríticas foliculares (principal célula estromal del folículo) y otras. La CXCL13 se une al receptor para quimiocinas, CXCR5, situado en los LB vírgenes recirculantes. El Ag puede llegar a los linfocitos B vírgenes en los órganos linfáticos en diferentes formas y múltiples vías; La mayoría de los Ag de los tejidos llegan a los ganglios a través de vasos linfáticos aferentes que drenan en el seno subcapsular. Los macrófagos del seno subcapsular capturan microbios grandes y complejos ag-ac y los llevan a los folículos, debajo del seno. Muchos Ag grandes que entran al ganglio por los vasos aferentes, pueden capturarlos células dendríticas residentes presentes en la región medular y transportarlos a los folículos. Los Ag de inmunocomplejos pueden unirse a receptores para el complemento (receptor para complemento de tipo 2 o CR2) situados en los LB de la zona marginal, y estos transfieren los Ag a los LB foliculares. Los inmunocomplejos también se unen al receptor para el complemento CR2 en la superficie de las células dendríticas foliculares y los Ag se presentan a los LB específicos frente al Ag. Los microorganismos patógenos de transmisión hemática pueden ser capturados por las células dendríticas plasmocitoides en la sangre y transportados al bazo, donde se llevan a los LB de la zona marginal. Los Ag polisacáridos pueden ser capturados por los macrófagos en la zona marginal de los folículos linfáticos esplénicos y mostrarse o transferirse a los LB en esta zona. En todos estos casos, el Ag que se presentó a los LB esta generalmente en su estructura tridimensional original intacta y no ha sido procesado por las células presentadoras de Ag. DISTINCIÓN IMPORTANTE DE LINFOS B. 3 Activación de los linfocitos B por antígenos y otra señales. La supervivencia del LB folicular depende de señales del BCR así como del BAFF (factor activador del linfocito B) de la superfamilia del TNF, también conocido como BLys. BAFF y un ligando relacionado, APRIL, pueden activar otros dos receptores: TACI, BCMA. Estas citocinas se producen en las células mielocítica de los folículos linfáticos en la médula ósea. La activación de los linfocitos B específicos frente al Ag la inicia la unión del Ag a la Ig de membrana, que, en vínculo con las proteínas Ig-alfa e Ig-beta asociadas, constituyen el complejo receptor para el antígeno de los linfocitos B maduros. - Funciones del receptor para ag del LB: o La unión del Ag envía señales bioquímicas que inician el proceso de activación o El receptor interioriza el ag en vesículas endosomicas y si el ag es una proteína se procesa en péptidos que pueden presentarse en la superficie para el reconocimiento por los LT cooperadores. Este reconocimiento del ag por si solo es inadecuado para estimular una proliferación y diferenciación significativas del LB. La activación del linfocito B la facilita el correceptor CR2/CD21 situado en los LB, que reconoce fragmentos del complemento unidos de forma covalente al ag o que forman partes de inmunocomplejos que contienen el Ag. A) La activación del complemento se observa con los microbios, sin Ac, por las vías alternativas y de la lectinas, y con Ac, por la vía clásica. Se generan fragmentos del complemento que se unen a los microbios. Uno de estos fragmentos llamado C3d es reconocido por el receptor para el complemento CR2 también llamado CD21, que aumenta la fuerza de las señales del BCR. Polisacáridos no microbianostambién activan el complemento, y esta es una de las razones por las que tales ag son capaces de inducir respuestas de Ac sin ayuda del LT. Productos microbianos que se unen a receptores tipo toll de los LB, aumenta su activación. B) Los linfocitos B humanos expresan varios receptores del tipo toll (TLR); -TLR5, reconoce flagelina bacteriana -TLR7 endosomico, reconoce ARN unicatenario - TLR9, especifico del ADN sin metilar rico en CpG en los endosomas. La activación de las células mielocítica a través de receptores de reconocimiento del patrón puede promover la activación del LB indirectamente. Las células dendríticas activadas a través de TLR contribuyen a la activación del LT 4 cooperador que estimula a los LB en respuesta a ag proteínicos. Las células mielocítica activadas por el TLR pueden secretar APRIL y BAFF, citocinas que pueden inducir respuestas del LB independientes de T. Respuestas funcionales de los linfocitos B frente a los antígenos El entrecruzamiento del BCR por diferentes tipos de Ag puede inducir distintos acontecimientos: los Ag multivalentes inician la proliferación y diferenciación del LB, y los Ag proteicos los preparan para interacciones posteriores con LT cooperadores. En respuesta a Ag multivalentes, las células en reposo vuelven a entrar en estadio G1 del ciclo celular además de aumentos del tamaño celular, del ARN citoplasmático y de los ribosomas. Algunos LB se diferencian en células secretoras de Ac. La supervivencia aumenta debido a la producción de proteínas antiapoptóticas, sobre todo Bcl-2. La activación por Ag → mayor expresión de MHC clase ll y de coestimuladores B7. La expresión de receptores para citocinas derivadas de los LT, aumenta. -Los ag proteínicos globulares que poseen una sola copia de cada epitomo, tienen capacidad limitada para activar BCR, de manera que no inducen proliferación y diferenciación del LB. Promueven la endocitosis del ag. -Los ag proteínicos son interiorizados por el BCR, procesados y presentados como péptidos unidos a MHC a LT cooperadores, que son potentes estimuladores de la proliferación y diferenciación del LB. 5 RESPUESTAS DE ANTICUERPOS DEPENDIENTES DEL LINFOCITO T COOPERADOR FRENTE A ANTÍGENOS PROTEÍNICO Las respuestas de anticuerpos a los antígenos proteínicos requieren el reconocimiento y el procesamiento del antígeno por los linfocitos B, seguidos de la presentación de un fragmento peptídico del antígeno a los linfocitos T cooperadores, lo que conduce a la cooperación entre los linfocitos B y T específicos frente al antígeno. La secuencia de acontecimientos durante las respuestas de anticuerpos dependientes del linfocito T A los ag proteínicos los reconocen los linfocitos B y T específicos en los órganos linfáticos periféricos, y las poblaciones activadas se reúnen aquí para iniciar las respuestas inmunitarias humorales. Los linfocitos T CD4+ vírgenes se activan en las zonas de LT mediante el antígeno presentados por células dendríticas y se diferencian a LT cooperadores. Los LB vírgenes se activan en los folículos por el mismo ag. Ambos linfocitos activados migran los unos hacia los otros en los bordes de los folículos, donde surge la primera respuesta de Ac. Algunas células migran de nuevo a los folículos para formar centros germinales. Activación inicial y migración de linfocitos B y de linfocitos T cooperadores La activación de los linfocitos B y T específicos frente al antígeno es esencial para su interacción funcional, y los acerca para aumentar la posibilidad de que los linfocitos B y T específicos frente al antígeno se localicen entre sí. 6 Los linfocitos B y T específicos tienen que encontrarse e interactuar físicamente para generar respuestas fuertes de Ac. Los LT cooperadores reducen el receptor para quimiocinas CCR7 y aumenta la expresión de CXCR5, como resultado de ello abandonan la zona de LT y migran al folículo. CXCL13, el ligando de CXCR5, lo secretan las CD foliculares y otras estromales, y atrae a los LT activados CD4+ al folículo. Los LB activados responden a estos ag reduciendo la expresión del receptor para quimiocina CXCR5 y aumentan expresión de CCR7, como resultado de ello, los LB activados van a la zona de LT arrastrados por un gradiente de CCL19 y CCL21, los ligandos de CCR7. Presentación del antígeno por los linfocitos B y efecto hapteno-transportador Los Ag proteínicos que reconocen receptores para el ag específicos de LB son interiorizados por endocitosis y procesados para generar péptidos que se unen a la clase ll del MHC y son presentados a los linfocitos T CD4+. El BCR reconoce un epitopo de la proteína natural con elevada afinidad, los linfocitos B ligan el antígeno y lo presentan con mucha mayor eficiencia que otros linfocitos B que no son específicos frente al antígeno, razón por la que, los LB específicos frente a un antígeno responden preferentemente a ese antígeno, comparados con otras células «espectadoras». Un antígeno proteínico que desencadene una respuesta de linfocitos B dependiente de T usa, por tanto, al menos dos epítopos cuando activa linfocitos B específicos. Un linfocito B reconoce un epítopo en la superficie de la proteína natural con elevada especificidad y después libera un epítopo peptídico lineal interno de la proteína que se une a moléculas de la clase II del MHC y es reconocido por los linfocitos T cooperadores. Efecto hapteno-transportador demostró como la presentación del antígeno por los linfocitos B contribuye al desarrollo de las respuestas inmunitarias humorales. Hapteno sustancias químicas que pueden unirse a anticuerpos específicos pero no son inmunógenos. - Características de las respuestas antihapteno de los anticuerpos frente a los conjugados hapteno-proteína: a) Las respuestas requieren LB específicos frente al Hapteno y LT cooperadores específicos frente a la proteína (transportador). b) Para estimular una respuesta, el hapteno y el transportador deben estar unidos físicamente y no pueden administrarse por separado. c) La interacción está restringida por la clase II del MHC idénticas a las implicadas en la activación inicial de los LT vírgenes por las células dendríticas. 7 Los LB específicos se unen al ag a través del determinante haptenico, interiorizan por endocitosis el conjugado h + p y presentan los péptidos derivados de la proteína transportadora a los LT cooperadores específicos del transportador. De este modo, los dos linfocitos reconocen diferentes epítopos del mismo complejo. El hapteno es responsable de la captación eficiente del transportador, lo que explica por qué el hapteno y el transportador deben estar unidos físicamente. Papel de la interacción CD40L:CD40 en la activación del linfocito B dependiente del linfocito T Activados, los linfocitos T cooperadores expresan el ligando para el CD40 (CD40L), que se une a su receptor CD40 en los linfocitos B estimulados por el ag e induce su proliferación y diferenciación, al principio en focos extra foliculares, después en centros germinales. El CD40 es un miembro de la superfamilia del receptor para el TNF y se expresa de forma constitutiva en los linfocitos B. Su ligando, el CD40L (CD154), es una proteína de membrana trimérica homóloga al TNF y se expresa en la superficie de los linfocitos T cooperadores después de activarse gracias al antígeno y los coestimuladores. La unión del CD40L al CD40 da lugar a una alteración en la estructura tridimensional de los trímeros de CD40 preformados, y esto induce la asociación de proteínas citosólicas llamadas TRAF (factores asociados al receptor para el TNF). Los TRAF reclutados por el CD40 inician cascadas enzimáticas que llevan a la activación y translocación nuclear de factores de transcripción, como el NFkB y la AP-1, que en conjunto estimulan la proliferacióndel linfocito B y aumentan la síntesis y secreción de Ig. Los receptores para el TNF activan vías de transmisión de señales análogas. En la activación de la célula dendrítica y del macrófago inducida por el linfocito T también participa la interacción del CD40L situado en los linfocitos T activados cooperadores con el CD40 situado en las células dendríticas y los macrófagos. - Mutación en el gen del CD40L síndrome de la hipergammaglobulinemia M ligada a X: defectos en la producción de Ac, cambio de isotipo, maduración de la afinidad y generación de lb memoria en respuesta a ag proteínicos, inmunidad celular defectuosa. -Virus de Epstein Barr (VEB) → proliferación de LB; puede llegar a la inmortalización de las células y producir linfomas. Después de la interacción inicial entre LB y LT entre el folículo y la zona del LT, los LT cooperadores pueden activar después a los LB en un foco extrafolicular y en los centros germinales del folículo. 8 Activación del linfocito B extrafolicular La activación del linfocito B en el foco extrafolicular proporciona una respuesta temprana de anticuerpos frente a los antígenos proteínicos y determina la formación de una respuesta de desarrollo más lento pero más eficaz en el centro germinal. Los focos extra foliculares de la activación del linfocito B dependiente de T producen Ac de afinidad baja que pueden circular y limitar la propagación de una infección. La respuesta extrafolicular también ayuda a generar linfocitos T cooperadores foliculares que migran hacia el folículo necesario para la formación del centro germinal. Algunos LB activados vuelven al folículo, participan en la formación del centro germinal y sufren cambios à una respuesta de Ac más potente y duradera. En el bazo, los focos extrafoliculares surgen en las porciones externas de la vaina linfática periarteriolar rica en linfocitos T o entre la zona del linfocito T y la pulpa roja, y estos cúmulos de células, se llaman, focos PALS. Los linfocitos B que se activan por los linfocitos T cooperadores por medio del CD40L en los focos extrafoliculares sufren un cambio de isotipo limitado. La pequeña cantidad de Ac producidos puede contribuir a formar inmunocomplejos (ag, ac y quizás complemento). La reacción del centro germinal Los acontecimientos característicos de las respuestas de anticuerpo dependientes del linfocito T cooperador, incluidos la maduración de la afinidad, el cambio de isotipo y la generación de células plasmáticas de vida larga y de linfocitos B memoria, ocurren principalmente en estructuras organizadas llamadas centros germinales que se crean dentro de los folículos linfáticos durante las respuestas inmunitarias dependientes de T. Reacción del centro germinal desarrollo de centros germinales y proceso complejo de diversificación génica de LB activados y de supervivencia de los más capaces que tienen lugar en estos lugares. Los centros germinales se producen 4-7 después del inicio de una respuesta del LB dependiente de T. Algunos LB que se activaron en los focos extrafoliculares migran de nuevo al folículo y empiezan a proliferar con rapidez, formando el centro germinal, denominado así porque se creía que ahí se formaban células nuevas. Cada centro contiene células derivadas solo de uno o unos pocos clones de LB específicos frente al ag. Dentro del centro germinal hay; Zona oscura: llena de un cúmulo denso de LB que proliferan. El tiempo de duplicación de los LB en proliferación (centroblastos) es de 6-12 h aprox. La progenie de linfocitos B en proliferación en el centro germinal se compone de células más pequeñas, a veces llamados centrocitos, que se diferencian y sufren procesos de selección en la zona clara. 9 Los LB en el centro germinal expresan Bcl-6, represor de la transcripción. La arquitectura de los folículos linfáticos y reacción del centro germinal dentro de los folículos dependen de las células dendríticas foliculares, FDC. Las FDC expresan receptores para el complemento CR1, CR2, CR3 y receptores para Fc. No expresan moléculas de la clase ll del MHC ni derivan de progenitores de la médula ósea. No son iguales que las de los tejidos periféricos. Los linfocitos B en proliferación se acumulan en la zona oscura identificable con técnicas histológicas del centro germinal, que tiene pocas FDC. La pequeña progenie que no se divide de linfocitos B migra a la zona clara adyacente, donde entran en contacto con los procesos de las abundantes FDC y forman también contactos íntimos con los linfocitos TFH, y es ahí donde se producen acontecimientos selectivos. - El anillo de linfocitos B vírgenes en el folículo, que rodea al centro germinal, se llama zona del manto. La formación del Centro Germinal depende del CD40L en los LT(FH) cooperadores foliculares que interactúa con el CD40 del LB. Estas interacciones son importantes para la proliferación del LB, necesaria para su expresión en los centros germinales, el cambio de isotipo, maduración de la afinidad. Inducción de los linfocitos T cooperadores foliculares Al cabo de 4-7 días de la exposición al Ag, los linfocitos B específicos frente al Ag activado inducen a linfocitos T previamente activamos a diferenciarse en linfocitos TFH, que expresan cantidades elevadas del receptor para quimiocina CXCR5, además de este receptor también expresan; - ICOS (coestimuladores inducible) - PD-1 (muerte programada 1) - La citocina IL-21 - Factor de transcripción Bcl-6. Los linfocitos TFH tienen un fenotipo que los hace distintos a los subgrupos TH1, TH2 y TH17, su diferenciación a partir de los linfocitos T CD4+ vírgenes exige dos pasos: 1. Activación inicial por las células dendríticas presentadoras de antígeno 2. Activación posterior por los linfocitos B El coestimulador ICOS, que está relacionado con el CD28 y se expresa en los linfocitos TFH, es esencial para la reacción del centro germinal. La interacción entre ICOS y el ligando de ICOS en los linfocitos B activados promueve la diferenciación de los linfocitos T en linfocitos TFH. 10 Las interacciones entre los linfocitos B activados y los linfocitos T cooperadores están mediadas por integrinas y por miembros de la familia SLAM de coestimuladores. Una molécula transmisora de señales que se asocia a estas proteínas de la familia SLAM en los linfocitos TFH se llama, SAP y las señales de SAP estabilizan la expresión de reguladores de la transcripción, en particular de Bcl-6, que son necesarios para el desarrollo del linfocito TFH. La citocina definidora de los linfocitos TFH es la IL-21, necesaria para: ●El desarrollo del centro germinal. ●Contribuye a la generación de células plasmáticas del centro germinal. ●Facilita la selección del linfocito B en el centro germinal B y la diferenciación de los linfocitos B activados en plasmoblastos. Los linfocitos TFH desempeñan varias funciones importantes en la activación y diferenciación de los linfocitos B en la reacción del centro germinal. Cambio de isotipo (clase) de cadena pesada En la respuesta a la unión del CD40 a su ligando y a las citocinas, parte de la progenie de linfocitos B activados que expresan IgM e IgD sufre el proceso de cambio de isotipo (clase) de cadena pesada, que lleva a la producción de anticuerpos con cadenas pesadas de diferentes clases, como La capacidad de los linfocitos B de producir diferentes isotipos de anticuerpo proporciona una plasticidad notable a las respuestas inmunitarias humorales, mecanismos moleculares responsables del cambio de las regiones constantes de la cadena pesada: - Citocinas: Regula el cambio de isotipo en la respuesta a diferentes tipos de microbios, son producidas por los linfocitos T cooperadores activados por estos microbios. El IFN-Y induce en el LB el cambio a la IgG y la IL-4 induce el cambio a la IgE. - Las señales CD40 + Citocinas: inducen elcambio de Isotipo. La unión del CD40 a su ligando induce la enzima desaminasa inducida por la activación (AID), que, como veremos después, es crucial para el cambio de isotipo y la mutación somática. La necesidad de las señales del CD40 y de la AID para promover el cambio de isotipo en los linfocitos B está muy bien estudiada mediante análisis de ratones y seres humanos que carecen del CD40, su ligando o AID. El mecanismo molecular de cambio de isotipo es un proceso llamado recombinación del cambio, en el que el exón VDJ reordenado que codifica un dominio V de cadena pesada de Ig se recombina con una región génica C situada en sentido 3’ y el ADN intermedio es eliminado. La enzima clave requerida para el cambio de isotipo (y la mutación somática, descrita más adelante) es la desaminasa inducida por la activación (AID). 11 Maduración de la afinidad: mutación somática de los genes de Ig y selección de linfocitos B de afinidad alta La maduración de la afinidad es el proceso que lleva a una mayor afinidad de los anticuerpos por un antígeno particular a medida que la respuesta humoral dependiente de T progresa y es el resultado de la mutación somática de los genes de Ig seguida de la supervivencia selectiva de los linfocitos B productores de los anticuerpos con las mayores afinidades. El proceso de maduración de la afinidad genera anticuerpos con una capacidad creciente de unirse a antígenos y, por ello, se unen, neutralizan y eliminan microbios de forma más eficiente. Los linfocitos T cooperadores y las interacciones CD40:CD40L son necesarias para iniciar la mutación somática y, como resultado de ello, la maduración de la afinidad se observa solo en las respuestas de anticuerpos frente a antígenos proteínicos dependientes de T. Se producen algunas mutaciones somáticas en los linfocitos B de los focos extrafoliculares, pero la mutación somática extensa se produce en los centros germinales. En los linfocitos B en proliferación del centro germinal de la zona oscura, los genes V de Ig sufren mutaciones puntuales con una frecuencia sumamente alta. La mutación en los genes V de Ig se llama también hipermutación somática. Cualquier clon de linfocitos B puede acumular más y más mutaciones durante su vida en el centro germinal. - Características de estas mutaciones Las mutaciones se agrupan en las regiones V. Hay muchas más mutaciones en los anticuerpos IgG que en los IgM. La presencia de mutaciones se correlaciona con afinidades crecientes de los anticuerpos hacia el antígeno que indujo la respuesta. Los mecanismos que subyacen a la mutación somática en los genes de Ig se conocen parcialmente. El exón VDJ de Ig reordenado se hace muy sensible a las mutaciones, lo que indica una mayor propensión de esta región a factores ligadores del ADN que identifican la mutación en regiones V reordenadas. La enzima AID desempeña un papel esencial en la maduración de la afinidad. 12 Algunas de estas mutaciones son probablemente útiles, porque generan anticuerpos con elevada afinidad. Los linfocitos B que se unen a los antígenos en los centros germinales con afinidad alta se los selecciona para que sobrevivan. Los linfocitos B del centro germinal que han sufrido la mutación somática migran a la zona más clara rica en FDC del centro germinal .Los linfocitos B con receptores de afinidad alta por el antígeno son los más capaces de unirse al antígeno cuando está presente en bajas concentraciones, y estos linfocitos B sobreviven preferentemente gracias a: El propio reconocimiento del antígeno induce la expresión de proteínas anti apoptósicas de la familia del Bcl-2 Los linfocitos B de afinidad alta interiorizarán por endocitosis preferentemente y presentarán el antígeno e interactúan con el número limitado de linfocitos TFH en el centro germinal Algunos linfocitos TFH expresan el ligando de Fas, que puede reconocer el receptor mortal Fas en los linfocitos B del centro germinal y enviar una señal apoptótica. Los linfocitos B de afinidad alta, pueden activar inhibidores endógenos de Fas cuando sus BCR reconocen al antígeno y así protegerse de la muerte mientras que los linfocitos B de afinidad baja mueren. Los centros germinales son lugares de una tremenda apoptosis. Las roturas del ADN asociadas a la hipermutación somática y el cambio de isotipo determinan las condiciones para las translocaciones cromosómicas de varios oncogenes en los loci de los genes de Ig, lo que produce tumores de linfocitos B (linfomas). Diferenciación del linfocito B en células plasmáticas secretoras de anticuerpos Las células plasmáticas son LB diferenciados en su último estadio y con una forma diferente, comprometidos en la producción de anticuerpos abundantes. Se generan tras la activación de los linfocitos B a través de señales del BCR, el CD40, el TLR y otros receptores como los receptores para citocinas. Hay dos tipos de células plasmáticas: Las células plasmáticas de vida corta se generan durante las respuestas independientes y dependientes de T en los focos de linfocitos B extrafoliculares. Estas células suelen encontrarse en órganos linfáticos secundarios y en tejidos extralinfáticos periféricos. Las células plasmáticas de vida larga se generan en respuestas del centro germinal dependientes de T frente a antígenos proteínicos. Las señales del receptor del linfocito B para el antígeno y la IL-21 cooperan para generar células plasmáticas y sus precursores, llamados plasmoblastos. Las células plasmáticas (y sus precursores, los plasmoblastos, que pueden encontrarse en la circulación) generadas en los centros germinales adquieren la capacidad de alojarse en la médula ósea, donde las mantienen las citocinas de la familia del BAFF que se unen al receptor de membrana de la célula plasmática llamado BCMA, lo que permite a las células plasmáticas sobrevivir durante períodos largos, a menudo toda la vida del anfitrión. La diferenciación de los LB activados en células plasmáticas secretoras de Ac implica alteraciones estructurales importantes, especialmente de los componentes del retículo endoplásmico y de la vía secretora, y un aumento de la producción de Ig, así como un cambio en las cadenas pesadas de Ig de la forma membranaria a la secretada. Aunque 13 una célula plasmática deriva de un LB, sufre una transformación notable a medida que se diferencia de un LB activado a un estadio de plasmoblastos. Generación de linfocitos B memoria Los LB memoria se generan durante la reacción del centro germinal y son capaces de realizar respuestas rápidas a la introducción posterior del antígeno. Algunos de los LB que se activan en los centros germinales adquieren la capacidad de sobrevivir durante períodos largos, en apariencia sin una estimulación antigénica continua. Estos LB memoria expresan cantidades altas de la proteína antiapoptóticaBcl-2, que contribuye a su vida prolongada. Algunos LB memoria pueden permanecer en el órgano linfático donde se generaron, mientras que otros salen de los centros germinales y recirculan entre la sangre y los órganos linfáticos. La producción de grandes cantidades de Ac de afinidad alta con el isotipo cambiado se acelera mucho tras la exposición secundaria a los Ag, esto se atribuye a la activación de las células memoria en los centros germinales. Las vacunas eficaces frente a los microbios y las toxinas microbianas deben inducir la maduración de la afinidad y la formación de LB memoria, y estos acontecimientos sólo ocurrirán si las vacunas son capaces de activar los LT cooperadores. Vacunas de conjugado: - En vacunas para algunas infecciones bacterianas, el antígeno diana es un polisacárido capsular, que es incapaz de estimular los linfocitos T. En estos casos, el polisacárido se une de forma covalentea una proteína extraña para formar el equivalente al conjugado hapteno-transportador, que activa los linfocitos T cooperadores. - Inducen con mayor facilidad anticuerpos de afinidad alta y memoria que las vacunas de polisacáridos sin proteínas unidas. - Han resultado particularmente eficaces en la inducción de una inmunidad protectora en los lactantes y los niños pequeños, que son menos capaces de montar respuestas independientes de T fuertes frente a los polisacáridos que los adultos. Papel de los reguladores de la transcripción en la determinación del destino de los linfocitos B activados El resultado de la diferenciación del linfocito B está regulado por la inducción y la activación de diferentes factores de transcripción. Los principales factores de transcripción implicados en la determinación del destino de los linfocitos B del centro germinal son los siguientes: 14 Bcl-6. En los LB del centro germinal, las señales derivadas del CD40 y del receptor para la IL-21 inducen la expresión del Bcl-6, que actúa como un represor de la transcripción para mantener la reacción del centro germinal (proliferación masiva de LB en el centro germinal). Reprime la expresión de los inhibidores de cinasa dependientes de la ciclina, cooperando con activadores de la transcripción para la entrada rápida en el ciclo celular de los LB del centro germinal. También reprime p53, factor de transcripción que media la parada del ciclo celular y la muerte celular apoptósica tras el daño del ADN. Antagoniza Blimp-1, que es necesario para el desarrollo de la célula plasmática. Blimp-1 e IRF4. Se inducen en algunos LB activados. Blimp-1, represor de la transcripción. Además de suprimir el Bcl-6, para mantener la reacción de LB en el centro germinal, suprime al factor de transcripción, Pax5, necesario para mantener a los LB maduros. De esta forma permite el desarrollo de la célula plasmática IRF4, un activador de la transcripción. Contribuye a la expresión de XBP-1, factor de transcripción importante en la respuesta a las proteínas no desplegadas. Este factor protege a las células plasmáticas de las consecuencias perjudiciales de las proteínas sin plegar y contribuyen a la maduración de las células plasmáticas y a la mayor síntesis de Ig que se observa en otras células. No está claro cómo un linfocito B dado de un centro germinal elige convertirse en un linfocito B memoria o una célula plasmática de vida larga. De hecho, no se han identificado los factores de transcripción que perfilan el desarrollo del linfocito B memoria. Parece, sin embargo, que parte de la progenie de un clon de linfocitos B estimulada por el antígeno expresa cantidades bajas de IRF4, y se convierte en células memoria de vida larga autorrenovables y en reposo funcional. Mientras que las cantidades altas de IRF4 conducen a la diferenciación en una célula plasmática, las cantidades bajas de IRF4 son insuficientes para dirigir al linfocito B activado a su diferenciación en célula plasmática, y así pueden ser permisivas para la generación de linfocitos B memoria. RESPUESTAS DE ANTICUERPOS FRENTE A LOS ANTÍGENOS INDEPENDIENTES DEL LINFOCITO T Muchos Ag no proteínicos, como polisacáridos y lípidos, estimulan la producción de Ac sin los LT cooperadores, y estos Ag y la respuestas que desencadenan se denominan independientes del timo o independientes de T (TI). Estas respuestas de Ac difieren en varios aspectos de las respuestas a los Ag proteínicos dependientes del LT. Los Ac que se producen sin la ayuda del LT suelen ser de afinidad baja y consisten sobre todo en IgM con un cambio limitado de isotipo a algunos subtipos de IgG y también a IgA. Subgrupos de linfocitos B que responden a los antígenos independientes de T. La zona marginal y los subgrupos B-1 de linfocitos B son especialmente importantes para las respuestas de Ac frente a los Ag TI. Mientras que las respuestas a Ag proteínicos dependientes de T están mediadas en gran medida por linfocitos B foliculares, otros subgrupos de linfocitos B pueden ser los principales respondedores a los antígenos TI. Los linfocitos B de la zona marginal son una población diferente de linfocitos B que responden, sobre todo, a los polisacáridos. Tras su activación, estas células se diferencian en células plasmáticas de vida corta que produce, sobre todo, IgM. En los seres humanos, estas células también se llaman células memoria IgM. Los LB-1 son otra línea de LB que responde fácilmente a los Ag TI, sobre todo en el peritoneo y en las mucosas. Las respuestas TI pueden iniciarse en el bazo, la médula ósea, la cavidad peritoneal y las mucosas. Los Ag TI pueden persistir períodos prolongados en las superficies de los macrófagos de la zona marginal, donde los reconocen LB específicos. 15 Mecanismos de las respuestas de anticuerpos independientes de T Los Ag independientes de T son capaces de estimular la proliferación y diferenciación del LB sin la ayuda del LT. Los Ag TI más importantes son los polisacáridos, los glucolípidos y los ácidos nucleicos, todos los cuales inducen la producción de Ac específicos en animales que carecen de LT. Estos Ag no pueden procesarse ni presentarse asociados a moléculas del MHC y, por tanto, no pueden ser reconocidos por los LT CD4+cooperadores. Las proteínas de membrana con una densidad alta en una superficie microbiana pueden funcionar como antígenos multivalentes y actuar de un modo independiente de T, así como dependiente de T. Las citocinas producidas por células diferentes a los LT pueden estimular el cambio de isotipo en las respuestas TI. Sin los linfocitos T, BAFF y APRIL producidos por las células de origen mielocítico, como las células dendríticas y los macrófagos, pueden inducir la síntesis de AID en los linfocitos B activados por el antígeno a través de un receptor de la familia del receptor para BAFF llamado TACI. Esto puede facilitarlo también la activación del TLR en estos LB. Protección mediada por anticuerpos independientes de T. Los antígenos TI contribuyen a la generación de Ac naturales, que están presentes en la circulación de los sujetos normales y se producen aparentemente sin una exposición clara a microorganismos patógenos. La mayoría de los anticuerpos naturales son Ac contra glúcidos de afinidad baja, que se cree que producen LB-l peritoneales estimulados por bacterias que colonizan el tubo digestivo y por LB dela zona marginal en el bazo. Los Ag del grupo sanguíneo y los Ac son importantes para las transfusiones sanguíneas y el trasplante, pero no para la defensa del anfitrión. RETROALIMENTACIÓN POR AC: Regulación de respuestas inmunitarias humorales por receptores para Fc. Los Ac secretados inhiben la activación continua del LB mediante la formación de complejos antígeno- anticuerpos que se unen simultáneamente a receptores para el antígeno y a receptores para el Fcy inhibidores en los linfocitos B específicos frente al antígeno (retroalimentación por el anticuerpo), que se refiere a la reducción de la producción de anticuerpos por los Ac IgG secretados. Los anticuerpos IgG inhiben la activación del linfocito B al formar complejos con el antígeno, y estos complejos se unen a un receptor del linfocito B para las porciones Fe de la IgG, llamado receptor II para el Fcy. La retroalimentación por Ac mediada por el receptor para el Fe es un mecanismo de control fisiológico de las respuestas inmunitarias humorales, porque la induce el Ac secretado y bloquea la producción adicional de Ac. La SHP-1 elimina fosfatos de las tirosinas de varias enzimas y proteínas adaptadoras implicadas en las señales producidas por el BCR, y así anula la activación del LB. Una cepa murina llamada apolillada, sufre autoinmunidad con activaciónincontrolada del LB y la producción de auto Ac, tiene una mutación natural en SHP-1. Cuando el receptor para el Fcg de los LB se une a su ligando, se fosforilan las tirosinas de la ITIM situada en la cola citosólicas y forma un lugar de acoplamiento para la inositol 5-fosfatasa llamada SHIP (inositol-fosfatasa que contiene un dominio SH2). 16
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