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Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez 
Microscopía de contraste de fases 
 
El microscopio de contraste de fases es un tipo de microscopio que permite observar 
muestras vivas sin necesidad de usar técnicas de tinción. 
La principal dificultad en la observación de células vivas es que estas son prácticamente 
transparentes. Por esto, si se miran a través de un microscopio convencional con luz 
transmitida resulta muy difícil o incluso imposible observar sus detalles y estructuras 
microscópicas. 
Las investigaciones iniciales de Frits Zernike al inicio de la década de 1930 revelaron que, 
en microscopía, al crear interferencias en la luz empleada para iluminar el espécimen se 
creaban condiciones que producían un incremento del contraste. Este descubrimiento le 
valió el premio Nobel en física en el año 1953 y revolucionó la investigación en biomedicina 
al permitir el estudio de células vivas. Con esta técnica de iluminación se aumenta el 
contraste de manera notoria entre las partes claras y oscuras de las células transparentes. 
El principio es semejante al de campo oscuro; se ilumina la muestra con un cono hueco de 
luz, pero mucho más estrecho. Se emplea un filtro en forma de anillo que disminuye la 
intensidad de la luz y al mismo tiempo provoca un retraso o desfase en la longitud de onda 
de la luz. Este método induce variaciones sutiles en el índice de refracción (determinado 
por el espesor) de los especímenes translúcidos permitiendo visualizar una riqueza de 
detalles muy finos en la estructura, los cuales pasarían desapercibidos con una iluminación 
de campo claro. 
Los heterogéneos componentes celulares absorben la luz de diferente manera y causan 
pequeñas variaciones de fase en las radiaciones luminosas, es decir, las retrasan 
ligeramente al disminuir la velocidad a la cual viajan y el retraso varía según el tipo de 
estructura. En las células y tejidos no coloreados, el escaso contraste se mejora y acentúa 
al transformar las diferencias de fase (invisibles al ojo humano) en diferencias de intensidad 
luminosa las cuales sí son detectables. 
 
 
 
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez 
Partes del microscopio de contraste de fases 
El sistema mecánico de este tipo de microscopio es equivalente 
al de un microscopio compuesto convencional. Este incluye la 
base, el brazo, el tubo, la platina, el revólver y los tornillos 
macrométrico y micrométrico. 
El sistema óptico de los microscopios de contraste de fases es similar 
al de un microscopio convencional, pero incluye también algunos 
elementos adicionales. Los elementos básicos son el objetivo, los 
oculares, el foco de luz, el condensador y el diafragma. Adicionalmente 
también es necesario un anillo de fase y un filtro. 
La luz que emite el foco de luz es dirigida hacia la muestra con el condensador y regulada 
con el diafragma. Una vez ha atravesado la muestra la luz llega al objetivo, en el que se 
produce una primera etapa del aumento. 
A continuación, solo la luz de iluminación experimenta un cambio de fase debido a la 
presencia de un anillo de fase. Posteriormente el filtro reduce la amplitud o intensidad de 
esta señal. La luz dispersada por la muestra no se ve afectada por estos dos elementos. 
Finalmente, la combinación de la luz de iluminación y la luz dispersada llega a los oculares. 
Las lentes en los oculares representan una segunda etapa de aumento y a través de ellos 
el observador puede ver la muestra con un contraste variable en función de las fases. 
 
Microscopía de campo oscuro 
La microscopia de campo oscuro es una técnica de contraste donde solo la luz difractada 
desde el espécimen se usa para formar la imagen. El espécimen aparece brillante contra 
un fondo oscuro. 
De manera similar a un cielo nocturno en el cual brillan las estrellas o al iluminar con una 
linterna un cuarto oscuro y las partículas de polvo flotantes en el aire se tornan visibles 
porque reflejan o difractan la luz, los especímenes observados al microscopio de campo 
oscuro se ven blancos y brillantes sobre un fondo oscuro (negro). 
En microscopía de campo oscuro, el contraste se crea por un espécimen brillante sobre 
fondo oscuro. Esta es ideal para revelar contornos, bordes, fronteras y gradientes de índice 
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de refracción, pero no brinda mucha información sobre la estructura interna. Los objetos 
ideales incluyen células vivas sin tinción (donde el campo oscuro brinda información no 
visible con otras técnicas), aunque también se pueden observar exitosamente células fijas 
teñidas. Las imágenes de campo oscuro son particularmente útiles en hematología para 
examinar sangre fresca. Los especímenes no biológicos incluyen minerales, cristales 
químicos, partículas coloidales, inclusiones y porosidad en vidrio, cerámicas, y secciones 
delgadas de polímeros. 
 
Partes del microscopio de campo oscuro 
-Sistema mecánico 
• Tubo: Es el dispositivo por donde viaja la imagen 
reflejada y aumentada por el objetivo hasta llegar 
al ocular u oculares. 
• Revólver: Es el soporte donde se ubican los distintos objetivos. El revólver puede rotar 
de tal manera que se puede cambiar de objetivo cuando el operador así lo necesite. 
• Tornillo macro: Este tornillo es utilizado para enfocar la muestra, se mueve hacia 
adelante o hacia atrás para acercar o alejar la muestra del objetivo y el movimiento 
es grotesco. 
• Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se mueve hacia adelante o hacia atrás 
para acercar o alejar la muestra del objetivo. El tornillo micrométrico se utiliza para 
movimientos muy finos o delicados, casi imperceptibles. Es el que logra el enfoque 
definitivo. 
• Platina: Es el soporte donde reposará el espécimen sobre el portaobjetos. Posee una 
abertura central por donde pasan los haces de luz. 
• El carro: permite que se pueda recorrer con el objetivo toda la muestra. 
 
-Sistema óptico 
• Objetivos: Tienen forma cilíndrica. Poseen una lente en la parte inferior que aumenta 
la imagen que proviene de la muestra. Los objetivos pueden ser de diversos aumentos. 
Ejemplo: 4,5X (lupa), 10X, 40X y 100X (objetivo de inmersión). 
 
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez 
-Sistema de iluminación 
• Lámpara: Es la fuente de iluminación y se ubica en la parte inferior del microscopio. 
La luz es halógena y es emitida de abajo hacia arriba. Por lo general la lámpara que 
poseen los microscopios es de 12 V. 
• Diafragma: El diafragma de los microscopios de campo oscuro carece de iris; en este 
caso este impide que los rayos que provienen de la lámpara lleguen de forma directa 
a la muestra, solo los haces oblicuos tocaran el espécimen. Aquellos haces que sean 
dispersados por las estructuras presentes en la muestra son los que pasarán al 
objetivo. 
• Condensador: El condensador de un microscopio de campo oscuro difiere del de 
campo claro. Existen dos tipos: los condensadores de refracción y los condensadores 
de reflexión. Este último a su vez se divide en dos categorías: los paraboloides y los 
cardioides. 
• Condensadores de refracción: Este tipo de condensador posee un disco que se 
interpone para refractar los rayos de luz, puede ubicarse encima del lente frontal o en 
el lado posterior. 
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez 
Bibliografía. 
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