ESTUDIACION BACTE (1)

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Indicador Ph Neutro Ph ácido Ph Alcalino 
Rojo Fenol Rojo Amarillo Rojo o transparente 
Rojo Neutro Rojo Fucsia Ambar o transparente 
Azul de Bromotimol Verde Amarillo / naranja Azul 
Púrpura de 
bromocresol 
Morado pálido Amarillo Morado oscuro o 
Púrpura 
Rojo de metilo Rojo Rojo Amarillo 
 
H2S: Salmonella, Proteus, Citrobacter freundii 
Móvil: 
Salmonella (excepto S.gallinarum y S.pullorum) 
Yersinia a temp. Ambiente 
Enterobacter 
Serratia 
Proteus tribu protea 
Morganella 
Providencia 
Citrobacter 
E. coli 
Indol: Klebsiella oxytoca, Proteus vulgaris, Morganella, Providencia, E. coli 
Grupo KES 
 
Gas: Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Serratia (en pequeañas cantidades), Proteus es 
variable, Providencia, Citrobacter. 
Citrato: Salmonella enteritidis, Tribu protea, citrobacter 
LIA: 
Descarboxila Desamina Glucosa 
Salmonella Proteus Yersinia 
Klebsiella Morganella Enterobacter cloacae y sokasaki 
Enterobacter Providencia Citrobacter 
Serratia 
E. coli 
 
 
Rojo de Metilo Voges Proskauer 
Salmonella Klebsiella 
Shigella Enterobacter 
Yersinia Serratia 
Proteus 
Morganella 
Providencia 
Citrobacter 
E. coli 
 
Oxidasa: Permite identificar la presencia de la enzima oxidasa en los M.O. La reacción de la 
oxidasa se debe a la presencia de un mecanismo citocromo-oxidasa, que se activa por la 
oxidación del citocromo que es reducido por el oxígeno molecular produciendo agua o 
peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana. El reactivo de esta prueba es el N-dimetil 
p-fenilendiamina. 
MO fermentadores de lactosa: E. coli, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter y Serratia. 
MO no fermentadores de lactosa: Salmonella, yersinia, Shigella, Proteus, Morganella, 
Providencia. 
 
 
SIM: Sulfuro Indol Motilidad 
*Sustrato: Tripteína 
*Indicador: Reactivo de covacks y Sulfato de hierro y amonio. 
Permite identificar la enzima Triptofanasa en algunos MO debido a que esta hidrolisa y 
desamina el triptófano produciendo Indol por medio del metabolismo de este aminoácido. 
Este tiene tiosulfato de sodio como fuente de azufre. 
 
 
 
 
TSI: 
*Sustrato: Glucosa, Lactosa, Sacarosa, Tiosulfato de sodio (fuente de azufre). 
*Indicador: Rojo fenol, Sales de hierro. 
Permite identificar la presencia de las enzimas glucosidasa, sacaridasa, y betagalactosidasa 
y la producción de H2S y gas. Tiene tiosulfato de sodio como fuente de azufre. 
 
Esta K/k porque no hay fermentacion de ningun azucar, ni de h2s ni gas. 
 
A/A hay fermentacion de todas las azucares, hay produccion de gas porque se evidencia una 
ruptura del medio, no hay produccion de h2s porque no hay ennegresimiento del medio. 
 
A/A hay fermentacion de todas las azucares, no hay produccion de gas porque no se evidencia 
ruptura del medio y no hay produccion de h2s porque no hay ennegresimiento del medio. 
 
K/A solo hay fermentacion de glucosa, no hay produccion de gas porque no se evidencia ruptura 
del medio y hay produccion de h2s porque hay ennegresimiento del medio. 
 
K/A solo fermenta glucosa, hay produccion de gas porque se levanta el medio, hay un espacio, y 
no hay produccion de h2s porque no hay ennegresimiento del medio. 
 
No es una enterobacteria, es un error. 
 
k/a no es ninguna enterobacteria 
a/a hay fermentacion de todas las azucares 
 
Citrato: 
*Sustrato: Citrato de sodio y Sales de amonio 
*Indicador: Azul de Bromotimol 
*Enzima: Citrato Permeasa 
*Producto Final: Carbonatos y Bicarbonatos 
Producto intermedio: oxaloacetato y pirubato 
Las bacterias utilizan el citrato como única fuente de carbono por el ciclo del ácido 
tricarboxilico, esta reacción genera oxaloacetato y piruvato, que luego dan origen a ácidos 
órganicos, gracias a la formación de un Ph alcalino formado por la utilización de las sales de 
amonio que son utilizadas como fuente de nitrógeno. Estos ácidos orgánicos son utilizados 
como fuente de carbono generando carbonatos y bicarbonatos, alcalinizando aún más el 
medio. 
 
 
 
 
Urea: 
*Sustrato: Urea 
*Indicador: Rojo Fenol 
*Enzima: Ureasa 
*Producto final: Carbonato de amonio 
Permite determinar la presencia de la enzima ureasa en ciertos MO. La enzima ureasa 
hidroliza la urea para formar anhídrido carbónico, agua y dos moléculas de amoniaco; estos 
compuestos reaccionan para formar el producto final llamado Carbonato de amonio. 
*Urea de Cristens: detectar MO con baja actividad de Ureasa 
*Urea de Stuart: detectar MO con alta Actividad de Ureasa (Proteus spp) 
 
Rapido positiva, es cristens, se le agrega glucosa para acelerar la hidrolizacion de la urea 
con bacterias con baja actividad ureasa 
Positiva, stuar porque es positivo sin necesidad de agregar glucosa. 
 
LIA (agar lisina-hierro): 
*sustrato: Lisina, Glucosa, Tiosulfato de sodio 
*Indicador: Púrpura de bromocresol, citrato de hierro y amonio. 
*Enzima: Lisina desaminasa, lisina descarboxilasa 
*Producto final: Alfa.cetoácido, amina cadaverina 
Permite demostrar la presencia de las enzimas lisina descarboxilasa y lisina desaminaza. 
Contiene glucosa, que al ser fermentada, acidifica el medio, condición indispensable para 
que la enzima lisina descarboxilasa actúe sobre su sustrato; una vez descarboxilada la lisina 
se forma una diamina y anhídrido carbónico. 
Cuando ocurre desaminación de la lisina por la presencia de la enzima lisina desaminasa se 
forma el ácido alfa-ceto-carbónico que reaciiona con el citrato de amonio en presencia de 
oxigeno originando un color rojo en la superficie. Utilizan el tiosulfato de sodio como 
fuente de azufre produciendo H2S que reaciiona con el citrato férrico de amonio creando un 
compuesto insoluble. 
 
1.K/K hay descarboxilación de la lisina a través de la enzima lisina descarboxilasa, el 
producto final es amina cadaverina y una molecula de amoniaco y gas 
2. K/K hay descarboxilación de la lisina a través de la enzima lisina descarboxilasa y hay 
producción de h2s porque hay ennegresimiento del medio y gas el producto final es amina 
cadaverina, molecula de amoniaco. 
3. R/A hay desaminación de la lisina a través de la enzima lisina desaminasa, hay 
producción de gas por el circulito, el producto final es alfa aceto acido. 
 
 
 
 
Rojo de Metilo: 
*Sustrato: Glucosa 
*Indicador: Rojo de Metilo, sirve para determinar la via acido mixta 
*Enzima: Glucosidasa 
*Producto final: Ácidos mixtos (láctico, acético y fórmico) 
Permite determinar la vía acido mixta 
 
 
 
Voger Proskauer: 
*Sustrato: Glucosa 
*Indicador: Alfa naftol 5%, KOH 40% 
*Producto final: diacetil 
*Producto intermedio: Acetoina 
Se reduce en presencia de oxígeno y produce diacetilo 
El test se fundamenta en la capacidad del MO de utilizar la vía butilenglicólica y formar un 
producto final neutro. 
 
Son pruebas paralelas. 
Utiliza la via de los acidos mixtos. 
 
 
Agar Hektoen: 
*Sustrato: Lactosa, Sacarosa, salicina y tiosulfato de sodio 
*Agentes inhibidores: sales biliares (inhiben gram positivos) 
*Indicadores: azul de bromotimol, fuscina ácida y citrato de hierro 
*Colonias fermentadoras: Rosa salmon 
*Colonias no fermentadoras: Verde azuladas 
*H2S: Citrobacter (colonias naranjas con cento negro) 
Salmonella (colonias verdes azuladas con centro negro) 
 
 
 
Agar EMB: 
*Sustrato: lactosa y sacarosa 
*agentes inhibidores: eosina y azul de metileno (inhiben grampositivos) 
*indicadores: eosina y azul de metileno 
*Colonias fermentadoras: Negras, rojas, rosadas o moradas. E.coli: verde brillante. 
Colonias no fermentadoras: Transparentes 
H2S: No se observa 
 
 
 
Agar MacConkey: 
*Sustrato: Lactosa 
*Inhibidores: Slaes biliares y Cristal violeta 
*Indicadores: Rojo neutro 
C. fermentadoras: fucsias 
C. no fermentadoras: transparentes o ambar 
*H2S: no se observa 
 
MacConkey con sorbitol: permite identificar E.coli o157H7 (enterohemorragica)ya que es 
la única que no fermenta el sorbitol. 
 
 
Agar bismuto sulfito: Especifico para Salmonella typhi y parathyphi 
*Sustrato: Glucosa y tiosulfato de sodio 
*Agentes inhibidores: verde brillante y bismuto sulfito 
*Indicadores: sulfato de hierro 
Salmonella: colonias con centro negro, bordes claros. 
Shigella flexneri: verdes, pequeñas 
 
Agar SS: 
*Sustrato: Lactosa y tiosulfato de sodio 
*Agentes inhibidores: Verde brillante, sales biliares (inhiben proteus) 
*Indicadores: Rojo neutro y citrato férrico 
*C. fermentadoras: Fucsias 
*C. no fermentadoras: transparentes o ambar 
*H2S: citrobacter (fucsias con centro negro) 
Proteus y salmonella (ambar con centro negro) 
 
 
Agar CLED: 
*Sustrato: cisteína, lactosa 
*inhibidor: deficiencia de electrolitos 
*indicador: azul de bromotimol 
La cistina permite el crecimiento de colonias enanas. Se reducen fuentes de electrolitos para 
evitar la ploriferación masiva de proteus. 
Técnica espina de pescado para inocular, se multiplica el # de UFC por 1000 (por el aza 
calibrada) y todo valor inferior a 100.000 es dudoso, mayor significa bacteriuria. 
Pseudomona aeruginosa, Candida albicans, staphylococcus saprofiticus 
 
Agar XLD: 
*Sustrato: Xilosa, lisina, lactosa, sacarosa y tiosulfato de sodio. 
*Inhibidores: Sales biliares, desoxicolato de sodio 
*Indicadores: rojo fenol y citrato férrico de amonio 
*C. fermentadoras: amarillas 
*. no fermentadoras: Rojas 
*H2S: Citrobacter (amarillas, centro negro) 
Salmonella (rojas con centro negro) 
La xilosa es fermentada por enterobacterias, menos shigella. La lisina se incluye para 
aumentar la diferenciación de los MO pertenecientes al género Salmonella, ya que sin la 
lisina estos MO fermentan rápidamente la xilosa produciendo la acidificación del medio. Al 
utilizar la lisina alcalinizan el medio 
 
 
 
 
Agua peptonada Alcalina: se usa para el enriquecimiento de Vibrio a partir de alimento 
agua, heces. Las peptonas proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos 
escenciales para el crecimiento. El cloruro sódico suministra electrolitos escenciales para el 
transporte y equilibrio osmótico y estimula el crecimiento de Vibrio cholerae. La 
alcalinidad en el medio inhibe la mayor parte de la flora no deseada. 
Prueba de la cuerda: se realiza para diferenciar Vibrio de otros generos como plesiomonas y 
aeromonas. La actividad lítica del ácido desoxicolico sobre la pared de los vibrios favorece 
la liberación de ADN que al contacto con el ácido desoxicólico forma una suspensión 
mucoide 
Agar TCBS (tiosulfato,citrato,bilis,sacarosa): es un medio altamente selectivo para vibiro 
spp, por su contenido de sales biliares, inhibe el crecimiento de gram positivos y otros gram 
negativos. Tiene sacarosa como carbohidrato fermentable, el ph alcalino favorece el 
aislamiento de Vibiro cholerae. El azul de timol y de bromotimol son los indicadores de ph. 
Agar hierro de kligler: Fermentación de carbohidratos y producción de H2S. La mezcla de 
peptona proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esecnciales para el 
crecimiento. El cloruro de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte y 
equilibrio osmótico. La dextrosa y la lactosa son los carbohidratos fermentables. Rojo fenol 
es el indicador de ph. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno, el cual 
reacciona con la sal de hierro, el sulfuro de sodio y el citrato de amonio férrico son 
indicadores de ph. 
ADH: El aminoácido L-arginina se transforma por acción de una descarboxilasa en un 
producto intermedio, la agmatina, la cual, por una arginina dehidrolada (adh) pasa a 
putresina y urea. Si el MO es productor de ureasa transformará a su vez la urea en 
amoniaco y anhídrido carbonico. Tiene como indicador purpura de bromocresol. Se 
determina con el reactivo de nessler para ver el producto final que es el amoniaco. 
Gelatinasa: determina la capacidad de un MO de producir enzimas de tipoproteoliticas que 
licuan o hidrolizan la gelatina 
*Sustrato: Gelatina (proteina) 
*Enzima: Gelatinasa 
*Producto final: aminoácidos 
*indicador: carbón activado 
 
 
Hidrólisis del almidom: el almidon es producido principalmente por plantas y está 
compuesto por amilosa y amilopectina, diversas enzimas amiloliticas hidrolizan el almidon. 
*Enzima: amilasa 
*Producto: glucosa y restol de maltosa 
*revelador; lugol 
Nitratos a Nitritos: determinar la capacidad de un MO de recudir nitratos a nitritos. Este 
proceso de reducción tiene lugar generalmente en condiciones anaeróbicas en las cuales el 
MO obtiene el oxigeno del nitrato. También se puede reducir a otros productos como 
nitrógeno gaseoso u oxido nitroso a travez de la enzima nitrato reductasa. El caldo nitrito 
contiene nitrato de potacio y el color que se forma se debe a la formación de un compuesto 
llamado para-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina. 
*Reactivos: alfa naftol 0,5% y ácido sulfanilico 0,8% 
 
 
 
 
 
 
 
Algoritmo de identificación del género Vibrio 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tomar la muestra (previa inmersión de las mechas en las fuentes de aguas escogidas). 
Realizar el pre-enriquecimiento selectivo en Agua Peptonada alcalina (APW) pH 8,6 x 6 – 8 
horas a 37°C en atmósfera de aerobiosis. 
Subcultivar en los medios de Agar TCBS y MacConkey 
(Agotamiento quemando asa) Incubar a 37°C por 24 a 48 horas en aerobiosis 
Revisar los medios y escoger las colonias sospechosas de Vibrio en TCBS 
(Colonias amarillas) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Pruebas serológicas 
Identificación bioquímica 
1. Gram: (Bacilos curvos 
Gram negativos) 
2. Prueba de la oxidasa 
3. Prueba de la cuerda 
 
 
Resembrar en Agar nutritivo alcalino (aislamiento) (37°C x 24-48 horas) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MUESTRA CLÍNICA 
Hemocultivo, secreciones, Líquidos 
corporales, etc. 
 
Gram directo (no específico) 
Bacilos gramnegativos 
RPMN 
 
Cultivar en agar sangre y 
Mac Conkey a 35°C - 37°C, 
24 -48 horas en aerobiosis 
Aislar colonias sospechosas Resembrar en agar nutritivo 37°C 
x 24 horas en aerobiosis 
Coloración de Gram (Bacilos 
gramnegativos) 
Prueba de oxidasa y 
catalasa: Positivas 
Pruebas bioquímicas y 
antibiograma