Enterobacterias y No Fermentadores

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA 
Facultad de Medicina 
Departamento de Microbiología 
 
PRÁCTICA VIRTUAL DE LABORATORIO 
IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS Y NO FERMENTADORES 
 
Martha Murcia Aranguren 
Profesora Titular 
 
INTRODUCCIÓN 
Las pruebas bioquímicas se basan en la determinación de la presencia o ausencia de diferentes 
enzimas codificadas por el material genético del cromosoma bacteriano. Estas enzimas 
(catalasas, coagulasas, decarboxilasas, deaminasas, ureasas, peroxidasas, etc) involucradas en 
el metabolismo bacteriano, pueden ser evidenciadas en medios de cultivo especiales que 
contienen los substratos (DNA, hidratos de carbono, aminoácidos, etc) sobre los cuales ellas 
actúan, junto con un sistema indicador que va a poner de manifiesto la degradación del substrato 
o la presencia de un metabolito específico (ácido fórmico, ácido láctico, ácido succínico, indol, etc). 
Las pruebas bioquímicas también evalúan: la capacidad de reducir ciertos iones (ferroso a férrico), 
la presencia o ausencia de flagelos (prueba de movilidad), la producción o no de hemolisinas, el 
requerimiento o no de algunos factores especiales (proteínas séricas), la producción o no de 
algunas toxinas con capacidad virulenta (toxina diftérica, toxina botulínica, etc). 
 
IMPORTANCIA CLÍNICA 
Cuando se han aislado las bacterias causantes de un proceso infeccioso, éstas deben ser 
identificadas hasta llegar a GÉNERO y ESPECIE, para lograrlo se debe evaluar su actividad 
bioquímica o metabólica. Del microorganismo aislado dependerá el tipo de tratamiento que debe 
ser administrado al paciente. Las enterobacterias son las responsables del 50% de todos los 
aislamientos clínicamente significativos, producen el 50% de los casos de septicemia, del 60 al 
70% de enteritis bacterianas, el 90% de infecciones urinarias y además son causa importante de 
infecciones adquiridas en el hospital o infecciones asociadas al cuidado de la salud (conocidas 
anteriormente como infecciones nosocomiales). Además, estas son bacterias muy resistentes a 
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los antimicrobianos, ya que tienen diferentes mecanismos de resistencia, como la producción de 
diferentes tipos de betalactamasas y carbapenemasas, lo que hace difícil su tratamiento. 
Los microorganismos Gram negativos no fermentadores constituyen el 15% de los aislados 
recuperados en los laboratorios de Microbiología y el 5% corresponde al género Pseudomonas. Al 
igual que las enterobacterias, son causa importante de infecciones asociadas al cuidado de la 
salud y también son muy resistentes a los antimicrobianos, por diferentes mecanismos de 
resistencia. 
 
MÉTODOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
OBJETIVOS 
Correlacionar las herramientas del laboratorio clínico en el diagnóstico de patologías 
causadas por enterobacterias y microorganismos no fermentadores. 
- Conocer e interpretar los agares en la caja: sangre, MacConkey, SS, XLD, Hektoen entérico 
y Sulfito de bismuto 
- Conocer e interpretar algunas pruebas bioquímicas útiles en la identificación de bacterias 
bacilares Gram negativas. 
 
Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) L 
 
Inhibidores de Gram +: eosina y azul de metileno 
CH fermentables: Lactosa y sacarosa. 
Los colorantes se combinan a pH ácido precipitando Lecturas: 
• Colonias fermentadoras: colonias negro verdoso con brillo metálico 
• Colonias no fermentadoras: transparentes 
• Colonias fermentadoras débiles: violeta 
 
 
Colonias lactosa positiva 
 
 
 
 
 
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Agar MacConkey 
 
Inhibidores de Gram +: Sales biliares y cristal violeta. CH fermentable: Lactosa 
Indicador de pH: rojo neutro 
 
Lecturas: 
Colonias lactosa positivas: fu 
Colonias lactosa negativas: incoloras 
Colonias lactosa débil: rosadas 
 
 
 Colonias lactosa positivas Colonias lactosa negativas Colonias lactosa débil Agar sin sembrar 
 
 
 
 
 
Agar Salmonella Shigella “SS” 
 
Inhibidores de Gram +: Sales biliares y citrato de Na CH fermentable: Lactosa 
Indicador de pH: rojo neutro Fuente de S: tiosulfato de Na 
Indicador de H₂S: citrato férrico 
 
Lecturas: 
Colonias lactosa positivas: rojo 
Colonias lactosa negativas: incoloras 
Colonias lactosa débil: rosadas 
Producción H₂S: colonias negras 
 
 
 Colonias lactosa negativa (Shigella sp) Colonias H2S (Salmonella sp) 
 
 
 
 
 
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Agar Xilosa Lisina Desoxicolato agar (XLD) 
 
Inhibidores de Gram +: Sales biliares 
CH fermentable: Lactosa (L), sacarosa(S), xilosa(X) 
Indicador de pH: rojo fenol 
Fuente de S: tiosulfato de Na 
Indicador de H₂S: citrato férrico amónico 
Aminoácido: lisina 
 
Lecturas: 
Colonias fermentadoras de L y S: amarillo 
Colonias no fermentadoras de L y S: transparentes 
Colonias fermentadoras de xilosa: halo tenue amarillo 
Descarboxilación de la lisina: color fucsia 
Producción H₂S: colonias negras 
 
 Colonias No Fermentadoras 
 Agar sin sembrar Colonias Fermentadoras H2S(-) (E. coli) Lisina (-) H2S (-) (Shigella sp.) 
 
 Colonias xilosa (+) H2S (+) Lisina 
 
 Colonias xilosa (+) H2S (+) Lisina (+) Colonias No Fermentadoras H2S (+) 
 (Salmonella enterica serovar typhi) Lisina (+) (Salmonella sp) 
 
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Agar Hektoen Entérico (HE) 
 
Inhibidores de Gram +: Sales biliares 
CH fermentable: Lactosa (L), sacarosa(S), salicina (Sal) 
Indicador de pH: azul de timol y fucsina ácida 
Fuente de S: tiosulfato de Na 
Indicador de H₂S: citrato férrico amónico 
 
Lecturas: 
Colonias fermentadoras de L y S: colonias naranjas brillante a rosa salmón 
Colonias no fermentadoras de L y S: azul verdoso 
Producción H₂S: colonias negras 
 
 
 Agar sin Sembrar Colonias Fermentadoras H2S (-) (Escherichia coli) 
 
 
 
Colonias no Fermentadoras H2S (-) (Shigella sp) Colonias no fermentadoras H2S (+) (Salmonella typhimurium) 
 
 
 
 
 
 
 
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Agar Sulfito de Bismuto (SB) 
 
Inhibidores de Gram +: verde brillante, sulfito de bismuto 
CH fermentable: glucosa, su fermentación produce reducción del sulfito, con formación 
de sulfuro de hierro, dando colonias negras. 
 
Lecturas: 
- Colonias de Salmonella typhi: negras con brillo metálico 
- Colonias de otras Salmonellas: negras sin brillo 
- Colonias de coliformes: son inhibidas 
 
 Agar sin sembrar Salmonella enterica serovar typhi 
 
 
 
 Bacterias diferentes a Salmonella Salmonella spp. 
 
 
 
 
 
 
 
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Procedimiento: Siembre el agar TSI haciendo una punción central hasta el fondo del tubo 
y estría en superficie. 
 
Lectura: 
 
 
Fundamento: 
 
 
 
 
 
 
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Cuando no hay cambio de color ni 
crecimiento se dice que la prueba es negativa. Si no hay cambio de color, pero sí hay 
crecimiento la prueba es dudosa. 
 
 
 (+) Dudoso (-) 
 
 
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 MR (+) (-) VP 
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Oxidadora 
 Medio OF Glucosa Fermentación No sacarolítica 
 
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REACCIONES DE ENTEROBACTERIAS EN TSI 
 
Género y especie Tendido Fondo Gas H2S 
Escherichia A (K) A + (-) - 
Shigella K A - - 
S. typhi K A - + (-) 
Otras salmonellassi K A + +++ (-) 
Arizona K (A) A + +++ 
Citrobacter K (A) A + +++ 
Edwardsiella K A + - 
Klebsiella A A ++ - 
Enterobacter A A ++ - 
Hafnia K o A A -0 + - 
Serratia K o A A - +++ 
P. vulgaris A (K) A + +++ 
P. mirabilis K (A) A + - 
Morganella K A - (+) - 
Providencia K A + 0 - - 
Yersinia pestis K A - - 
Y, K (A) A - - 
pseudotuberculosis 
Erwinia A A - - 
Pectobacterium A (K) A - (+) - 
 
K = Alcalinidad A= Acidez () = Reacciones ocasionales 
 
 
REACCIONES DE ENTEROBACTERIAS EN LIA 
 
Género y especie Tendido Fondo Gas H2S 
Escherichia K K o N - o (+) - 
Shigella K A - - 
Salmonella K K o N - + (-) 
S. typhi K K - + o - 
S. paratyphi K A + o - - o + 
Arizona K K o N _ + (-) 
Citrobacter K A - o + + o - 
Edwardsiella K K - o + + 
Klebsiella K o N K o N - o + - 
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Enterobacter cloacae K o N A + o - - 
Enterobacter 
aerogenes 
K K o N + (-) - 
Hafnia K K o N - - 
Serratia K o N K o N - - 
P. vulgaris R A - - (+) 
P. mirabilis R A - - (+) 
Morganella K o R A - - 
Providencia R A - - 
Yersinia K A - _ 
Erwinia K A _ - 
Pectobacerium K A _ _ 
 
 K= Alcalinidad A= Acidez ( ) = Reacciones ocasionales R= Deaminación oxidativa N= 
Neutro. 
 
 
BIBLIOGRAFÍA 
• Koneman Elmer W. The Enterobacteriaceae in Diagnostic Microbiology. 5ª. Edición, Washington 
Square: Lippincott – Raven Publishers, 1997: 173- 203 
• Mac Faddin J. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. 
Panamericana , 1980 
• Koneman Elmer W. Enterobacteriaceac en Diagnóstico Microbiológico. Panamerica , 1.983: 152 
– 185 
 
CUESTIONARIO 
1. ¿En qué consiste y para qué se utiliza el sistema API 20 E? ¿Cómo se hace la lectura e 
interpretación de los resultados? 
2. ¿En qué consiste y para qué se utiliza el sistema API 20 NE? ¿Cómo se hace la lectura e 
interpretación de los resultados? 
3. ¿En qué consiste el sistema VITEK y para qué se utiliza? 
4. ¿ En qué consiste el sistema MICROSCAN y para qué se utiliza? 
5. ¿En qué consiste el sistema CRISTAL y para qué se utiliza?