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UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 1 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO: BACTERIOLOGÍA PROGRAMA: BACTERIOLOGÍA NOMBRE DEL CURSO: PARASITOLOGÍA NOMBRE DE LA PRÁCTICA: 1. OBJETIVOS ▪ Dominar conocimientos teóricos y prácticos de nematodos intestinales con el fin de aplicarlos al realizar una adecuada identificación de estos mediante técnicas utilizadas en el laboratorio. ▪ Aplicar las técnicas de montaje y lectura del examen coprológico con el fin de realizar una correcta identificación microscópica de huevos y/o larvas de nemátodos intestinales. ▪ Dominar técnicas de concentración para el recuento de huevos de nematodos intestinales e interpretar su resultado en el laboratorio. ▪ Ofrecer una excelente atención en salud y adoptar uan conducta humanitaria que permita prestar el mejor servicio, de esta manera contribuir al mejoramiento de la calidad de vida de al comunidad. ▪ Promover las buenas prácticas de laboratorio de parasitología que permitan la obtención de buenos resultados, de esta manera brindar una atención en salud humanitaria con calidad continua y oportuna. ▪ Dominar técnicas de montaje de muestras de materia fecal con el fin de identificar las diferentes estructuras de parásitos intestinales tipo nemátodos encontradas en un examen coprológico. ▪ Interpretar los diferentes resultados obtenidos de la lectura de un examen coprológico para el recuento de huevos con el fin de realizar un diagnostico adecuado y preciso de estas parasitosis. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 2 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente ▪ Dominar los conocimientos necesarios sobre las características morfológicas y estructurales de nemátodos intestinales y así realizar su correcta identificación en el laboratorio. ▪ Promover una constante actualización y desarrollo, con el fin de poder actuar con libertad y autonomía, dentro de los mejores niveles de idoneidad y competencia. ▪ Concientizar a los estudiantes de la importancia de un correcto montaje, lectura y reporte de un examen coprológico. De ello depende la obtención de resultados veraces y con calidad. ▪ Valorar el papel que juega el bacteriólogo dentro del esquema clínico y su aporte en el mejoramiento de la salud humana. 2. INTRODUCCIÓN Los nemátodos son parásitos de amplia distribución y muy frecuentes en países tropicales. Las parasitosis humanas por nematodos fueron reconocidas desde la antigüedad, lo cual puede explicarse porque muchos de estos parásitos en su estado adulto son macroscópicos. Los nemátodos son gusanos de forma cilíndrica, bilateralmente simétricos y con los extremos de menor diámetro. Poseen un sistema digestivo completo, aparato reproductor muy desarrollado y sexos separados. Los órganos internos están contenidos en una cavidad corporal o pseudocele, delimitada exteriormente por una pared que comprende cutícula, hipodermis y capa muscular. Se reproducen por medio de huevos que dan origen a larvas en su transición a nematodos intestinales y se transmiten por tierra contaminada con huevos o larvas que salen de la materia fecal. Entre los nemátodos intestinales que parasitan al hombre se encuentran: Áscaris lumbricoides Es el nemátodo intestinal de mayor tamaño que parasita al hombre, en su forma adulta es de color rosado o blanco amarilloso, los sexos se pueden diferenciar por la forma del extremo posterior, el cual en el macho es curvo y en la hembra es recto: los parásitos adultos viven en la luz del intestino delgado. Los huevos al ser eliminados no son embrionados, por lo tanto no son infectantes por vía oral, estos requieren un tiempo de maduración en el suelo por lo menos de un mes. Pueden se fértiles, infértiles, corticados o decorticados; los huevos fértiles provienen de las hembras fecundadas, tienen forma oval o redondeada y miden aproximadamente 6 micras de diámetro, poseen una cubierta con 3 membranas: una interna vitelina, una media de glucógeno y una externa albuminoide de aspecto mamelonado. Estos huevos al ser examinados en las heces se observan de color café por estar coloreados por la bilis y en su interior presentan un material granuloso que posteriormente dará origen a las larvas. Los huevos infértiles no se observan con frecuencia, provienen de hembras no fecundadas, son irregulares, alargados, con protuberancias externas grandes o ausentes y generalmente con una membrana. El materia en su interior es vacuolado, opaco y granular. Aunque no son UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 3 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente infectantes, son importantes en el diagnóstico ya que indican la presencia de Áscaris lumbricoides hembras en el intestino. Cuando los huevos tanto fértiles como infértiles carecen de la capa albuminoide reciben el nombre de huevos decorticados. La infección se da por la ingestión de tierra o alimentos contaminados que contengan huevos embrionados. Esta parasitosis es la mas frecuente y cosmopolita de todas la nematodosis humanas. Trichuris trichiura También conocido como Tricocéfalo, en su forma adulta es un gusano blanco cuya localización es a nivel de la mucosa del intestino grueso, se caracteriza por tener los dos tercios anteriores del cuerpo muy delgado y el tercio posterior mas grueso, simulando un látigo. Cuando las infecciones son muy intensas los parásitos se ubican en el colon y recto, razón por la cual, los pacientes con esta parasitosis pueden sufrir prolapso rectal. Los huevos salen en la materia fecal sin ser infectantes por vía oral, ya que no están embrionados, por lo que requieren de un período de maduración en el suelo, el cual puede durar de semanas a meses. Estos miden 25 micras de ancho por 50 micras de largo, son muy característicos y fáciles de identificar, son de color café, poseen doble membrana y tiene tapones albuminoides en sus extremos, semejando forma de balón de rugby o de limón. La infección se da por la ingestión de agua o alimentos contaminados con huevos embrionados. Uncinaria Existen dos parásitos con este nombre, el Ancylostoma duodenales y Necator americanus cuya localización es a nivel dl intestino delgado. Sus formas adultas son muy similares, de color blanco, el macho se diferencia de la hembra porque en el extremo posterior tiene un ensanchamiento radial o bursa copulatriz para sujetar a la hembra durante la ovulación, mientras que la hembra tiene el extremo posterior de forma cónica. Los huevos de uncinaria son indistinguibles entre si, tienen forma oval y miden 40 micras de ancho por 60 micras de largo, poseen una membrana delgada y en su interior presentan una masa granulosa única o con blastómeros, generalmente de 4 a 6. Cuando los huevos embrionados en el suelo eclosionan emerge una larva llamada rhabditiforme, la cual muda dos veces hasta convertirse en una larva filariforme que es la forma infectante que contaminan al huésped a través de la piel y/o mucosas. Strongiloides estercolaris Es un parásito muy pequeño que vive en el interior de la mucosa del intestino delgado, principalmente en el duodeno o yeyuno. El parásito hembra es filiforme transparente, mide 2 milímetros de largo por 50 micras de ancho. El macho no existe y se ha comprobadoque la hembra es partenogenética. Cuando las condiciones del medio le son favorables el parásito puede vivir como nemátodo libre durante algún tiempo presentando los dos sexos. Los huevos son similares a los de uncinaria, pero eclosionan en la mucosa intestinal y dan origen a larvas rhabditiformes, que se eliminan con las materias fecales y en el suelo se transforman en larvas filariformes que son las infectantes. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 4 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente Los parásitos adultos, al atravesar el intestino delgado, causan inflamación severa con cuadro de enteritis, observándose diarrea sanguinolenta, decaimiento, estados anémicos ye n casos graves la muerte. Enterobius vermicularis También conocido como Oxiuro. El parásito adulto es un gusano de color blanco amarillento, en el extremo anterior se encuentra la boca provista de tres labios y un par de aletas cefálicas. La hembra mide aproximadamente 1 centímetro de longitud y tiene el extremo posterior recto y puntiagudo, por lo que se conoce como gusano de alfiler: el macho mide la mitad de la hembra, con el extremo posterior curvo y una espícula copulatriz. Los huevos son blancos, transparentes con un lado plano y otro curvo, por lo que tiene una forma similar a la letra D. estos miden de 50 a60 micras de largo por 25 micras de ancho, tiene envoltura delicada y traslúcida, generalmente están larvados en el momento d la ovoposición por lo que puede haber autoinfección. El examen coprológico de rutina, usado para el diagnóstico de los nemátodos intestinales, no es de gran utilidad para l diagnóstico de los Oxiuros, la identificación de este parásito se hace generalmente por el hallazgo de los huevos en la región perianal, perineal o vulvar utilizando el método de Graham o por visualización de los parásitos adultos. RECUENTO EN PLACA MICROSCÓPICA Es le procedimiento mas sencillo pero poco exacto para el recuento de huevos. Consiste en estudiar uan placa microscópica que contenga mas o menos 2 mg de materia fecal. Cantidad que se consigue aproximada mente al hacer una preparación para coprológico utilizando laminillas de 22x22 mm. El recuento se hace recorriendo toda la lámina, el número de huevos se multiplica por 500 para dar el resultado en huevos por gramo de materia fecal (h.p.g.). La intensidad de la infección por nematodos se mide de acurdo a la siguiente tabla: Nemátodo Leve (h.p.g.) Moderada (h.p.g.) Intensa (h.p.g.) Áscaris lumbricoides <5000 5000-50000 >50000 Trichuris trichiura <1000 1000-10000 >10000 Uncinarias <2000 2000-4000 >4000 Oxiuros No se hace el recuento de huevos. Solo se informa como positivo o negativo Strongiloides estercolaris 3. PROCEDIMIENTO Montaje de coprológico 1. Realizar el montaje del examen coprológico en solución salina al 0.85% y lugol. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 5 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente 2. Observar el montaje en el microscopio con objetivo de 10X-40X recorriendo toda la preparación con el fin de identificar las diferentes estructuras de nemátodos intestinales. 3. Informar las estructuras encontradas (larva y/o huevo) de nematodos intestinales de acuerdo a la siguiente tabla: OBJETIVO LARVA Y/O HUEVO POR CAMPO (+) (++) (+++) (++++) 10X 1-15 16-25 26-35 >35 40X 1-5 6-10 11-15 >15 Técnica de Graham 1. Consiste en un pedazo de cinta engomada trasparente de aproximadamente 12 cm de largo por 1 cm de ancho, que se pega en un portaobjetos, dejando que salgan ambos extremos de la cinta. 2. Uno de estos extremos se dobla sobre si mismo para usarlo como cogedera, el otro se pega en un bajalengua de tal modo que la parte pegante quede hacia afuera, con ello se hacen varias aplicaciones en la región perianal. 3. Se vuelve apegar en la placa de vidrio, se alisa con una gasa para evitar las burbujas que se puedan formar y que podrían confundirse con huevos de Oxiuro. 4. Luego se desprende el portaobjetos del bajalengua y queda lista para mirarla al microscopio. La muestra debe tomarse antes de bañarse la región perianal, preferiblemente en las horas de la mañana y durante varios días. Técnicas de concentración Técnica simplificada con formol-éter 1. Tome un tubo con partes iguales de solución isotónica y formol al 10%, aproximadamente 10 ml. 2. Agregue mas o amenos un gramo de materia fecal y mezcle bien. 3. Filtre por gasa doble. 4. Agregue 3 ml de éter, tape y agite fuerte, destape cuidadosamente (el éter puede reemplazarse por gasolina). 5. Centrifugue 2 minutos a 2000 rpm. 6. Decante las 3 primeras capas (éter, restos de materia fecal y formol salino). 7. Estudie el sedimento al microscopio. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 6 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente Técnica de Ritchie modificada 1. Colocar 1gr de materia fecal en un tubo de centrifuga de 15 ml. 2. Agregar 5 ml de formol al 10% y mezclar con un palillo. 3. Dejar en reposo 30 minutos. 4. Adicionar 10 ml de solución salina al 0.85%. 5. Centrifugar durante 2 minutos a 2000 rpm. 6. Decantar. 7. Agregar 5 ml de formol. 8. Adicionar 3 ml de éter etílico. 9. Mezclar y centrifugar por 2 minutos. 10. Decantar. Mirar el sedimento al microscopio 4. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS. ▪ Muestras de materia fecal positivas para nemátodos intestinales. ▪ Portaobjetos. ▪ Cubreobjetos. ▪ Solución salina al 0.85%. ▪ Lugol parasitológico ▪ Palillos. ▪ Bajalenguas. ▪ Cinta engomada trasparente. ▪ Formol al 10%. ▪ Tubos de centrifugación de 15 ml con tapa rosca. ▪ Éter etílico. ▪ Centrífuga. ▪ Microscopios. ▪ Papel kraft ▪ Descartadores ▪ Pipetas de vidrio de 5ml y 10 ml ▪ Pipeteadores automáticos 5. EQUIPOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y/O COLECTIVA. ✓ Bata ✓ Guantes ✓ Gafas de bioseguridad UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 7 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente ✓ Tapaboca ✓ Gorro 6. MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 8 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente 7. CUESTIONARIO O ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS. ✓ Qué características permiten diferenciar Ancylostoma duodenales de Necator americanus ? ✓ A nivel de qué órgano pueden realizar migraciones cada uno de estos parásitos ? ✓ Describa las manifestaciones clínicas de cada uno de los nematodos estudiados ✓ Cuál es la forma infectante de cada uno de los nemátodos intestinales patógenos para el hombre? ✓ Qué utilidad tienen las técnicas de concentración? CASO CLÍNICO Niño de 8 años que proviene del Retiro de los Indios, llega al servicio de urgencias de la E.S.E Hospital San Jerónimo de Montería, presentando palidez, debilidad, nauseas, vómito y dolor abdominal difuso. El médico le solicita los siguientes exámenes: hemograma,gota gruesa y coprológico dirigido. Los resultados mas relevantes fueron: ▪ Gota gruesa: negativa. ▪ Hemograma: cuadro anémico marcado. Diferencial: presencia de eosinofilia. ▪ Coprológico dirigido: estudio de pH y azucares no significativos y sangre oculta positiva. Teniendo en cuanta las características del paciente y los resultados obtenidos en las pruebas de laboratorio responda: 1. ¿De qué patología sospecharía? 2. ¿Qué estructura esperaría encontrar en el examen coprológico? 3. Correlacione los resultados de los exámenes con la parasitosis. 8. BIBLIOGRAFÍA ▪ JHON BERNARD HENRY. El laboratorio en el diagnóstico clínico. ▪ BAILEY Y SCOTT. Diagnóstico microbiológico. ▪ JAWETZ. Microbiología médica. ▪ MANUAL MODERNO. Diagnóstico clínico y de laboratorio. Manual moderno. ▪ FAUSTINA RUBIO CAMPAL. Inmunología (aplicaciones prácticas en hematología y microbiología). ▪ MANUAL DE LABORATORIO CLÍNICO DIAGNÓSTICO. LANSING M. PRESCOTT Microbiología. ▪ WALLACE PETER, GEOFFREY PASVOL Atlas de medicina tropical y parasitología () ▪ BURTON JEROME BOGITSH, CLINT EARL CARTER, THOMAS N. OELTMANN Human Parasitology ▪ LYNNE SHORE GARCIA Diagnostic medial parasitology ▪ PAUL SCHMID HEMPEL Evolutionary Parasitology: The Integrated Study of Infections, Immunology, UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA CÓDIGO: FDOC-090 VERSIÓN: 01 EMISIÓN: 02/03/2020 PÁGINA 9 DE 9 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente ▪ Ecology, and Genetics ▪ GERALD D. SCHMIDT & LARRY S. ROBERTS' foundations of parasitology ▪ OLIVIER DE BRUYN Parasitology Research Trends. Advances in biology and medicine series. ▪ STEPHANE PEETERS Advances in biology and ▪ THEODOR, HIEPE, LUCIUS Parasitología general. ▪ THEODOR, HIEPE, LUCIUS Protozoologia Médica ▪ FRANCISCO BIAGI Enfermedades parasitarias ▪ Atlas de Parasitología. Laboratorio Italmex 1993. 9. RECOMENDACIONES ✓ Leer la guía y desarrollar las actividades propuestas ✓ Traer todos los elementos de bioseguridad y protección personal para el desarrollo de la práctica ✓ Revisar bibliografía referente al tema 10. ANEXOS https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30521805/ ▪ BOTERO DAVID Y RESTREPO MARCOS, Parasitosis Humanas, CIB, Tercera edición, Medellín 1998. ▪ DUQUE SOFIA Y Otros, Parasitismo Intestinales-Material de Referencia- Atlas, Instituto Nacional de ▪ Salud, Santafé de Bogotá-2000. ▪ ZAMAN VIGAR, Atlas de Parasitología Clínica, Medicina Panamericana ▪ PUMAROLA y Otros, Microbiología y Parasitología Médica, Salvat 1995. ▪ DELGADO-IRIBARREN ALBERTO, Manual de Laboratorio Clínico Básico-Microbiología, McGraw Hill. ▪ VELEZ H, Fundamentos de Medicina – Enfermedades Infecciosas. CIB, Medellín 1998. ▪ www.soton.ac.uk -ceb/diagnosis/vol 1. htm. ▪ www.tulane,edu/-dmsander/www/224/Enta.gif ▪ Clínica y Complicaciones de las Parasitosis: Iván Londoño Morales. Edit. U. De A. 1ª Edición 1993 ▪ Enfermedades Parasitarias. Clínicas de atención primaria. Interamericana. 1991. ▪ Parasitología Clínica. Beaver – Jung. Salvat. 2ª. edición 1986. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30521805/ http://www.soton.ac.uk/ http://www.tulane,edu/-dmsander/www/224/Enta.gif
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