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Universidad Abierta y a Distancia de México División de Ciencias de la Salud, Biológicas y Ambientales Ingeniería en Biotecnología Ingeniería de biorreactores II Unidad 2 Evidencia de Aprendizaje Biorreactores enzimáticos Jessica Verónica Mendoza Prado ES202104539 Grupo BI-BIB2-2202-B1-001 8 de agosto de 2022 Síntesis del trabajo realizado Actualmente una gran cantidad de desecho relacionado con la producción de papel o la obtención de algún producto vegetal, como la extracción del jugo de la caña, han provocado que residuos de difícil biodegradación se acumulen en el medio, como la celulosa, componente esencial de la mayoría de las plantas que es además resistente a la fermentación. El uso de enzimas es una alternativa novedosa que propone la degradación de este tipo de residuos, acelerando el proceso y obteniendo algún beneficio para el humano en el proceso, como la obtención de alguna forma de combustible. La celulasa, que es la enzima tratada en el artículo, es una enzima originada en bacterias y hongos aerobios y anaerobios que es usada en la degradación de diversos materiales, con aplicaciones tanto a nivel ambiental como alimenticio y médico. Lamentablemente, la producción extracelular está limitada solo a ciertas especies, principalmente Trichoderma y Aspergillus, que, sumado a la complejidad del método de producción, provocan que se trate de un producto caro. Sus múltiples bondades y aplicaciones justifican la investigación en el campo para la producción de una enzima igual de eficiente pero más económica. El bagazo es entonces un medio idóneo para el crecimiento del hongo Aspergillus y la posible producción de la enzima, por tratarse de un medio económico, sencillo, de fácil obtención y alto en celulosa, que, bajo las condiciones ideales, según los reportes de otros sautores permite el crecimiento del hongo y la producción de la enzima. En este estudio se planteo el cultivo de Aspergillus niger en un medio de bagazo de caña de azúcar Saccharum officinarum. Se lavo el bagazo después de su recolección dos veces con agua corriente para después ser cortado en segmentos de 5x10 mm, se añadieron 200 mL de solución de NaOH 1.0 M, se calentó por 30 minutos y se enjuago con agua destilada estéril 5 veces, se seco en papel secante y después con la ayuda de una estufa por 10 horas a 60°C. Los cultivos fueron sembrados en agar para obtener una mayor cantidad, se hizo una suspensión de esporas que fueron inoculadas en el biorreactor compuesto por un frasco de vidrio de 2 L con motor de aire y 200g de bagazo dentro. Se roció un caldo de nutrientes y se incubo a temperatura ambiente 23°C Para poder cuantificar la cantidad de celulasas producidas durante el experimento, cada día se tomo una muestra de 20g de bagazo que fue lavado con un buffer y centrifugadora 3k revoluciones por 15 min. Esta solución fue probada midiendo la capacidad catalítica de la enzima, colocando en un tubo de ensayo 3.5 Ml de una solución de carboximetilcelulosa a l 1%, se agrego 0.5 mL de buffer de sodio 1.0 M y 1 Ml del extracto de las celulasas, incubándose a 50°C por 1 hora y calentado por cinco minutos a 80°C, cuantificando la glucosa liberada, Tras el anova, la significancia fue de 0.5 y el intervalo de confianza del 95%. Las unidades enzimáticas de celulasas fueron calculadas como la cantidad de enzima necesaria para liberar 1 Micro mol de glucosa por minuto. Para asegurar una buena calidad de los resultados, se repitió tres veces consecutivas el análisis. Resultados Los resultados fueron muy alentadores, demostrando que, a mayor tiempo de incubación, mayor fue la producción de celulasas en el medio, con una producción total de 0.025UE de celulasas/mL hasta los 20 días. Esto demuestra en primer lugar que el hongo creció en el medio provisto, siendo el bagazo un medio nutricional adecuado a temperatura de 25°C y pH de 6.0, demostrando una nueva propuesta tanto para la obtención de la enzima como para la degradación de residuos vegetales con celulosa. Diagrama de flujo Conclusión Los biorreactores representan para la comunidad científica, biológica y tecnológica una excelente oportunidad de desarrollo de nuevas estrategias para la resolución de problemáticas humanas, desde la salud hasta la remediación del ambiente. Afortunadamente, la solución ara muchos de los complejos problemas que aquejan al ser humano se encuentran muchas veces en microorganismos, siendo estos capaces, gracias a las diversas y adversas condiciones que tienen que enfrentar para ser capaces de sobrevivir en el medio hostil, de producir enzimas y otros productos que son de interés. Ha sido tanto el desarrollo en este ámbito, que producen incluso a nuestra demanda componentes que no producirían normalmente, como el caso de E. coli y el uso de edición genética. Por esto, los biorreactores deben continuar siendo objeto de estudio y desarrollo, con continua mejora de las características para una producción mayor y una mejor relación de costo beneficio. Para el escalado del biorreactor analizado en el artículo, será necesario en primer lugar contar con un suministro suficiente de bagazo, pudiendo experimentar con el uso de otro desecho orgánico rico en celulosa que pueda servir como medio de cultivo. Será entonces necesario, dado el mayor volumen de materia a utilizar, que el biorreactor o contenedor sea de un tamaño mayor, considerando que el empleo sea en una industria pequeña, como plantaciones locales, permitiendo a los propietarios reintegrar más rápidamente la materia a la tierra. Podría usarse entonces un contenedor metálico, apropiadamente aislado del medio, sirviendo como la parte principal del biorreactor, con una inducción continúa de aire. El inóculo deberá ser entonces también mayor, siendo conveniente la instrucción en cultivos continuos del hongo, de manera que solo tenga que ser adquirido una vez. Referencias Llenque-Díaz, L. & Muñoz, M. & Espejo, E. (2015) Producción de celulasas por Aspergillus niger a partir de bagazo de caña de azúcar en biorreactor aireado. Ciencia y Tecnología N° 4, páginas 39-49
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