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ESPECTROFOTOMETRIA
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida por la misma. 
El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula requiere la utilización de técnicas analíticas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, así como su caracterización fisicoquímica y biológica. Uno de los métodos más sencillos, accesibles, útiles y utilizados es la espectroscopía, en general, y la espectroscopía ultravioleta-visible, en particular. Se pueden identificar y cuantificar biomoléculas en solución y en muestras biológicas, con el empleo 1 de reactivos específicos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman un producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas. 
PARTES DEL ESPECTROFOTOMETRO
El espectrofotómetro es un aparato diseñado para medir el espectro de transmitancia o reflectancia de un objeto. El objetivo de estos aparatos es el de comparar la radiación para cada longitud de onda a la salida del objeto con el incidente.
Filtros: Los filtros proporcionan un alto rendimiento de radiación. Su montaje es relativamente fácil para, quizá, hasta cinco longitudes de onda, aunque en colorimetría se llega en algunos casos a 16 longitudes de onda. El paso de banda puede ser similar al que se obtiene con el montaje de redes de difracción. Los tipos de filtros más utilizados son los filtros de absorción y los filtros interferenciales.
Monocromadores: Un monocromador consiste, en general (figura 5.3), de una rendija de entrada que proporciona una imagen estrecha y casi coherente de la fuente de radiación, un colimador que hace paralela la radiación procedente de la rendija de entrada, una red o prisma para dispersar la radiación incidente, otro colimador para formar la imagen de la rendija de entrada sobre la rendija de salida y una rendija de salida para aislar la banda espectral deseada.
Dispersión. Se define como la separación de una mezcla de longitudes de onda en sus mono componentes. Esto se logra por medio de un prisma (refracción) o por medio de una red (difracción). 
Resolución. La resolución, o poder de resolución, es la capacidad que tiene el monocromador para distinguir aspectos espectrales adyacentes, como las bandas de emisión de absorción o las líneas de emisión. La resolución está determinada por el tamaño y las características dispersivas del prisma o de la red, el diseño óptico que contiene el dispositivo dispersor y la anchura de la rendija del monocromador. En los espectrofotómetros con registro, la resolución también depende del sistema de registro y de la velocidad de barrido.
Poder de captación de radiación. Cuando se trata de anchuras de banda muy estrechas, se pueden resolver algunas señales espectrales muy cercanas. Sin embargo, la razón señal-ruido resulta muy importante. Será necesario que una cantidad suficiente de radiación llegue al detector para que se pueda distinguir por encima de la señal de fondo
Rendijas. En la práctica, el módulo del monocromador no es capaz de aislar una sola longitud de onda de la radiación del espectro continúo emitido por la fuente. Por el contrario, es una banda definida de radiación la que pasa por el monocromador. La entrada o apertura de un monocromador es una rendija larga y estrecha cuya anchura es generalmente ajustable. 
Espejos y lentes. Dentro de un monocromador, la colimación y los enfoques necesarios se logran utilizando espejos de primera cara, y al no usar lentes, se eliminan las aberraciones cromáticas.
Fuentes de información:
GUÍA DE CALIBRACIÓN DE ESPECTROFOTÓMETROS UV-Vis INM/GTM-FR-E/01. (2019). RED COLOMBIANA. http://www.inm.gov.co/nueva/wp-content/uploads/2019/12/Guia_calibracion_UV-VIS2019_1.pdf
Abril Díaz, N. (2013). Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de biomoléculas. . . Espectrofometría: https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf