Sexage de semen

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Sexaje de semen 
historia 
Según Johnson y Welch (5), los primeros estudios realizados tratando 
 de separar las dos poblaciones de espermatozoides se remonta a la década de 1920, 
 cuando se intentó, sin éxito, la separación de los dos tipos de células utilizando la 
centrifugación de semen 
Ventajas y desventajas de usar 
semen sexado 
 Desventajas: 
 Menor Fertilidad 
 disminución de las 
tasas de concepción 
 
Ventajas 
optimizado la productividad, 
 
tiempo 
Características estructurales del semen 
sexado crioconservado 
 a. Para que un espermatozoide sea considerado cualitativamente viable y 
potencialmente fértil, 
 debe tener morfología, 
 actividad metabólica 
 membranas plasmáticas normales, 
 además de ADN intacto 
Requisitos de la técnica de semen 
sexado. 
 Todas o la mayoría de las células deben ser sexadas. 
 Con un desperdicio reducido 
 Tener una agudeza cercana al 100% 
 Simple y rápido 
 Numero de muestras en poco tiempo 
 Lo suficientemente económico para ser distribuido en el mercado. 
Metodos de Sexado de esperma. 
 Existe la posibilidad de medir el contenido de ADN de cada 
espermatozoide, diferenciándolos en X e Y. 
 Centrifugación en gradiente de concentración. 
 Citometria de flujo 
 
 
Métodos de sexado en espermatozoides, 
basado en diferencias físicas. 
Centrifugación en gradiente de 
densidad. 
 Summer y Robinson utilizaron la Tecnica de microinterferometria. 
 Gradiente de densidad lineal 
 Gradiente de densidad discontinuos. 
 Gradiante de ficoll (shastry) 
 Gradiante de percoll (schwiderski) 
 
 
 
 
Gradiente de densidad lineal 
 
 cuando se produce un aumento paulatino de la densidad desde la parte 
superior del gradiente hacia la parte inferior, sin delimitación entre las 
capas previamente formadas, formando un gradiente lineal 
Gradiente de densidad discontinuos 
 
 
 también hay un aumento gradual de la densidad de arriba hacia abajo, 
sin embargo, este tipo tiene capas definidas, y dependiendo de las 
concentraciones utilizadas, es posible visualizar estas capas 
Gradiente de Ficoll 
 
 Shastry, al utilizar el gradiente de Ficoll, observaron que de los 
espermatozoides encontrados en el sedimento, 73% a 77% tenían un 
cromosoma sexual Y y 75 a 80% de los espermatozoides que permanecían 
en la interfase tenían un cromosoma sexual X. Schwiderski , al utilizar el 
gradiente de Percoll, considerado con un mayor nivel de resolución de 
densidad, observaron que las células con mayor masa (espermatozoides 
X) sedimentaban más rápidamente. 
Gradiante de percoll 
 
 Schwiderski , uso el gradiente de Percoll para separar espermatozoides 
bovinos portadores de los cromosomas X e Y. Con esto obtuvieron una 
separación de cuatro fracciones en la suspensión de espermatozoides, la 
primera y la última de las cuales fueron removidas, mezcladas y puestas a 
centrifugar nuevamente. Después de eso, hubo un enriquecimiento de 
más del 75% de espermatozoides X o Y en las fracciones superior e inferior. 
Además, en las inseminaciones realizadas se obtuvo un 75% y un 92% de 
embriones masculinos y femeninos, respectivamente 
citometría de flujo 
 
 El uso del método permitió medir la cantidad individual de ADN en cada 
espermatozoide por la fluorescencia emitida por un tinte 
 que se une al ADN. Debido a una diferencia en la cantidad de ADN, los 
espermatozoides X después de haber sido expuestos a este tinte 
fluorescente son más brillantes que los espermatozoides Y 
 Posteriormente, los espermatozoides pasan por una fila única que contiene 
un separador con campo eléctrico y son dirigidos a un tubo colector en 
función de la diferencia de cargas eléctricas positivas o negativas 
 
citometría de flujo 
 1. Un cristal piezoeléctrico ondula y quiebra la corriente en gotículas -
90,000/segundo. 
 2. Un rayo láser proyecta luz azul sobre los espermatozoides. 
 3. Los espermatozoides "X" fluorescen con 4 % más de intensidad qué los "Y". 
 4. La computadora procesa la fluorescencia detectada y categoriza los 
espermatozoides como: 
 5. "X," "Y" o dudosos. 
 6. Se aplica una carga negativa, positiva o ninguna a las gotículas. 
 7. Las gotículas cargadas son desviadas cuando pasan frente a placas 
continuamente cargadas 
 8. Las muestras son recogidas en tres recipientes. 
citometría de flujo 
 
Gracias.