MANUAL DE PRÁCTICAS TOXICOLOGÍA_EQUIPO 4

Esta es una vista previa del archivo. Inicie sesión para ver el archivo original

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
EXPERIENCIA EDUCATIVA
TOXICOLOGÍA
MANUAL DE PRÁCTICAS
EQUIPO 4
· HERNÁNDEZ BAUTISTA DAYRA ELIZABETH
· LABOURDETTE CALDERÓN ARACELI
· ZAMUDIO SÁNCHEZ ALICIA DE LOS ANGELES
ACADÉMICO
ISELA SANTIAGO ROQUE
INDICE
PRÁCTICA # 1. MANEJO DE ANIMALES EN EL LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA.	3
PRÁCTICA # 2. TOMA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS.	6
PRÁCTICA # 3. VÍAS DE ADMINISTRACIÓN.	11
PRÁCTICA # 4. SINERGISMO.	14
PRÁCTICA # 5. VALIDAR UN MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ACETILSALICÍLICO EN ORINA.	16
PRÁCTICA # 6. DETERMINACIÓN DE ETANOL EN ORINA.	21
PRÁCTICA # 1. MANEJO DE ANIMALES EN EL LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA.
Resultados
Hoja de control
	
	Talla
	Edad
	Género
	Especie
	Peso
	Rata 5
	14
	1 mes
	Macho
	Wistar
	184.7 g
	Rata 6
	12
	1 mes
	Macho
	Wistar
	157.1 g
Discusión
El manejo de los roedores en todo el proceso de la practica fue sujeto a mucha responsabilidad con previo conocimiento de las herramientas a utilizar, como la balanza analítica. Se hizo uso de dos pedazos de tela, uno para sujetarlos y otro para cubrir sus ojos, evitando así que se estresaran de más y previniendo posibles mordidas. 
Evaluación
1. ¿A qué se refiere el término Knockout?
Un ratón knockout es modificado por ingeniería genética para que uno o más de sus genes estén inactivados mediante una técnica llamada bloqueo de genes. Su propósito es comprender el papel de un gen que ha sido secuenciado, pero del que se desconoce su función o se conoce de forma incompleta.
2. ¿Qué aspectos de la NOM-062-ZOO-1999 se aplican en el Bioterio?
El que al ser una institución que utiliza animales de laboratorios con fines de investigación científica, pruebas de laboratorio y enseñanza debe dar aviso de funcionamiento a la secretaria a través de la CONASAG, además de que cuente con personal capacitado y certificado para cumplir con las necesidades del bioterio.
También que todas las técnicas de manipulación e inmovilización que se realicen estén acordes con los principios humanitarios internacionales aceptados. En general, en todo el bioterio se cuenta con sectores básicos que aseguran el alojamiento del animal de manera óptima. 
3. ¿Cuáles son las practicas utilizadas en el bioterio de la facultad que garantizan el bienestar animal?
Se practican los aspectos que mencionan sobre la designación de personas a cargo de garantizar la salud y bienestar de los animales, ya que se encuentran alumnos o maestros siempre supervisando el bioterio.
En lo observado, también se cumple el hecho de que se mantengan sus jaulas limpias, con sistemas de aislamiento y además cuentan con un horario estricto de luz y comida.
Referencias
1. Lilia I. NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos. -Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-062-ZOO-1999, ESPECIFICACIONES TECNICAS PARA LA PRODUCCION, CUIDADO Y USO DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO [Internet]. Unam.mx. [citado el 27 de noviembre de 2022]. Disponible en: https://www.fmvz.unam.mx/fmvz/principal/archivos/062ZOO.PDF
2. Lozano Márquez H, La evolución de la reproducción animal. Revista de la Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia [Internet]. 2022;69(2):119-120. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=407672259001
3. Tillería Aqueveque L. Animales Cínicos. Griot [Internet]. 2021;21(1):341–53. Disponible en: http://dx.doi.org/10.31977/grirfi.v21i1.2155
4. Castro Moreno JA. El estatus ontológico, epistemológico y ético de los animales de laboratorio. Del especismo a la biofilia y la bioética. Tabula rasa [Internet]. 2019;(32):39–56. Disponible en: http://dx.doi.org/10.25058/20112742.n32.03
5. 
PRÁCTICA # 2. TOMA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS.
Resultados
	
	Peso
	Rata 7
	184.7 g
	Rata 8
	157.1 g
	Rata 7
	Rata 8
	Ketamina
	100 mg – 1000g
X – 184.7g
X= 18.47 mg
100 mg - 1ml
18.47 mg – x
X= 0.18 ml
	100 mg- 1000 g
X – 157.1g
X= 15.72 mg
100 mg- 1ml
15.72mg – x
X= 0.15 ml
	Xilacina
	8 mg - 1000 g
X -184.7 g
X= 1.47 mg
20 mg - 1ml
1.47 mg – x
X= 0.07 ml
	20 mg – 1 ml
1.47 mg – x
X= 0.07 ml
20 mg – 1 ml
1.25 mg – X
X= 0.06 ml
Ketamina y Xilacina: Rata 7= 0.25ml Rata 8= 0.21 ml
Discusión
Primeramente, se sedaron a las ratas bajo supervisión del docente, con las dosis adecuadas y material previamente preparado para generar la inconsciencia en las ratas y evitar el dolor que les provocaría la intervención.
Posteriormente, se hizo la toma de muestra sanguínea en las venas laterales de la cola, desinfectando la zona y usando un pedazo de tela que fue calentado (a una temperatura tolerable) con antelación para generar vasodilatación y se nos permitiera una mejor visualización de las venas.
Evaluación
1. ¿Cuáles son los parámetros que incluyen el perfil de lípidos, examen general de orina, glucosa sanguínea, citología acorde al ciclo hormonal de los roedores?
Fotomicrografías ópticas representativas de las fases y los estados de transición del ciclo estral que pueden observarse en la citología vaginal directa de ratas 
A: proestro. 
B: transición proestro-estro.
C: estro.
D: metestro.
E: diestro.
F: transición diestro-proestro.
CN: célula epitelial nucleada.
CQ: célula epitelial anucleada queratinizada.
L: leucocito. 
Aumento 100x.
2. ¿Qué criterios aplican para considerar a una muestra de calidad analítica?
Las mediciones analíticas deben hacerse utilizando métodos y equipo que han sido probados para asegurar que son adecuados para el propósito buscado. Entre los atributos a considerar en la calidad de un método se deben mencionar aquellas características que son básicas: confiabilidad, aplicabilidad, especificad, exactitud, precisión, detectabilidad y sensibilidad.
Referencias
· Fernández Romero T, Suárez Román G, Clapés Hernández S. Protocolo para la citología vaginal directa de ratas de laboratorio. Rev haban cienc méd [Internet]. 2021 [citado 26 Nov 2022]; 20(3): [aprox. 0 p.]. Disponible en: http://www.revhabanera.sld.cu/index.php/rhab/article/view/4086
· Lozano Márquez H, La evolución de la reproducción animal. Revista de la Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia [Internet]. 2022;69(2):119-120. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=407672259001
· Cajigas-Rotundo J. C, Montenegro Martínez L, Martínez Medina S. Zoo antropologías: la cuestión del animal. Tabula Rasa [Internet]. 2019; (31):11-22. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=39660441001
· Guidance on the Operation of the Animals (Scientific Procedures) Act 2021. (2000). Disponible en http://www.archive.officiaI-documents.co.uk/document/hoc/321/321.html
PRÁCTICA # 3. VÍAS DE ADMINISTRACIÓN.
Resultados
	
	Peso
	Rata 7
	184.7 g
	Rata 8
	157.1 g
Dosis cálculos.
	Rata 7
	Rata 8
	Ketamina
	100 mg – 1000g
X – 184.7g
X= 18.47 mg
100 mg - 1ml
18.47 mg – x
X= 0.18 ml
	100 mg- 1000 g
X – 157.1g
X= 15.72 mg
100 mg- 1ml
15.72mg – x
X= 0.15 ml
	Xilacina
	8 mg - 1000 g
X -184.7 g
X= 1.47 mg
20 mg - 1ml
1.47 mg – x
X= 0.07 ml
	20 mg – 1 ml
1.47 mg – x
X= 0.07 ml
20 mg – 1 ml
1.25 mg – X
X= 0.06 ml
Ketamina y Xilacina: Rata 7= 0.25ml Rata 8= 0.21 ml
Discusión
Los dos roedores fueron administrados con la preparación de Ketamina y Xilacina por vía intraperitoneal, que de igual manera que la practica anterior, fueron con el propósito de que el animal sufriera lo menos posible.
Los dos roedores fueron sedados con éxito. 
Evaluación
1. ¿Cuáles son los procedimientos utilizados para mantener vivo a un roedor al que se le requiere mantener vivo y obtener muestras sanguíneas cada 15 días por tres meses?
Debe contar con un microambiente con condiciones estandarizadas y básicas según la Norma Oficial Mexicana-062-Z00-1999. Con jaulas diseñadas para facilitar su bienestar, con un espacio adecuado, con ventilación, seguro
y protegido de amenazas externas.
Además, los roedores deben ser correctamente alimentados para que puedan renovar sus tejidos y estructuras corporales, pues serán dañados constantemente durante las tomas de muestra. 
Referencias
· Botero L, Gómez R. M. USO DE ANIMALES DE LABORATORIO EN COLOMBIA: REFLEXIONES SOBRE ASPECTOS NORMATIVOS Y ÉTICOS. Revista de la Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia [Internet]. 2019;60(III):213-219. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=407639237006
· Branco J. C, Batista N. A,, Thomaz S. M. Saúde Socioambiental na Atenção Básica: conhecimento, formação e prática. Saúde em Debate [Internet]. 2022;46(134):734-749. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=406372559011
· Lopera-Medina M, Retos éticos para los administradores en salud en la época contemporánea. Revista Facultad Nacional de Salud Pública [Internet]. 2022;40(1):1-12. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=12072240008
· Lilia I. NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos. -Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-062-ZOO-1999, ESPECIFICACIONES TECNICAS PARA LA PRODUCCION, CUIDADO Y USO DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO [Internet]. Unam.mx. [citado el 27 de noviembre de 2022]. Disponible en: https://www.fmvz.unam.mx/fmvz/principal/archivos/062ZOO.PDF
· Russell, W. M. y Burch, R. L. (2019). The Principles of Humane Experimental Technique. London: Methuen Plubishing.
PRÁCTICA # 4. SINERGISMO.
Resultados
	
	Peso
	Rata 7
	184.7 g
	Rata 8
	157.1 g
Dosis cálculos.
	Rata 7
	Rata 8
	Ketamina
	100 mg – 1000g
X – 184.7g
X= 18.47 mg
100 mg - 1ml
18.47 mg – x
X= 0.18 ml
	100 mg- 1000 g
X – 157.1g
X= 15.72 mg
100 mg- 1ml
15.72mg – x
X= 0.15 ml
	Xilacina
	8 mg - 1000 g
X -184.7 g
X= 1.47 mg
20 mg - 1ml
1.47 mg – x
X= 0.07 ml
	20 mg – 1 ml
1.47 mg – x
X= 0.07 ml
20 mg – 1 ml
1.25 mg – X
X= 0.06 ml
Ketamina y Xilacina: Rata 7= 0.25ml Rata 8= 0.21 ml
Discusión
Se hizo el conteo de las veces que el roedor dio vueltas antes de caer sedado: el roedor número 7 recorrió 22 cuadros y realizó 4 levantamientos, mientras que el roedor número 8 recorrió 48 cuadros y realizó 8 levantamientos.
Con dicho conteo se pudo observar los efectos sinérgicos entre ambos fármacos, se comprobó su tiempo de y efecto anestésico de ambos fármacos y así mismo se apreció como la administración simultanea que se realizó en distintos mecanismos dieron la variación de tiempo de anestesia en dichos roedores.
Evaluación
1. Explica que tipo de conducta presenta el roedor cuando interaccionan las sustancias administradas.
En el momento de administrar los medicamentos, casi instantáneamente se comenzó a observar los cambios, de estar inquieto e intranquilo, se volvió calmado, nervioso, respiración agitada, pero mareado o con movimientos lentos y erráticos hasta el punto de estar completamente inmóvil pero aun palpablemente despierto.
Referencias
· Rodríguez Reyes O, Noack T. K, Patejdl R, García Rodríguez R. E, Fajardo Puig M. E,, Ambruster Sánchez N. L. Efecto del 4-Clorofenol sobre el músculo liso vascular de aorta abdominal de ratas Wistar. Revista Habanera de Ciencias Médicas [Internet]. 2021;20(4): Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=180468227013
· Rojas-Valverde D, Sánchez-Ureña B, Ugalde-Ramírez A, Gómez-Carmona C. D, Pino-Ortega J, Gutiérrez-Vargas R. Speed and heart rate variation during marathon running in a hot environment. PENSAR EN MOVIMIENTO: Revista de Ciencias del Ejercicio y la Salud [Internet]. 2020;18(1):1-15. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=442061637006
· Tobar J, Ramos-Sarmiento D, Tayupanta D, Rodríguez M, , Aguilar F. Microscopic and molecular evaluation of Strongyloides venezuelensis in an experimental life cycle using Wistar rats. Biomédica [Internet]. 2021;41(1):35-46. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=84368105005
· Morrison, A. (2019). Ethical Principles Guiding the Use of Animals in Research. The American Biology Teacher, 65(2), 105-108.
PRÁCTICA # 5. VALIDAR UN MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ACETILSALICÍLICO EN ORINA.
Resultados
	Rango
	Sensibilidad
	Especificidad
	Linealidad
	2 – 80 mg/dl
	2 mg/dl
	No específico
	--
Linealidad:
10 mediciones. 500 mg/dl
	8 mg/dl
	16 mg/dl
	24 mg/dl
	32 mg/dl
	40 mg/dl
	48 mg/dl
	56 mg/dl
	64 mg/dl
	72 mg/dl
	80 mg/dl
300 ul*3 disolución + 300 ul trinder = 600 ul
900 ul disolución
2. 80 mg/dl 2:10 1ml 
Concentración 16 mg/dl
300 ul*3 disolución + 300 ul trinder = 600 ul
900 ul disolución
1. 40 mg/dl 2:10 1ml 
Concentración 8 mg/dl
	
	Stock
	
	Agua destilada
	1
	16 ul
	+
	984 ul
	2
	32 ul
	+
	968 ul
	3
	48 ul
	+
	952 ul
	4
	64 ul
	+
	936 ul
	5
	80 ul
	+
	920 ul
	6
	96 ul
	+
	904 ul
	7
	112 ul
	+
	888 ul
	8
	128 ul
	+
	872 ul
	9
	144 ul
	+
	856 ul
	10
	160 ul
	+
	840 ul
Repetibilidad (Concentración).
Estándar, 2500
60 mg/dl
Problema= 0.168[] Pb= Hbs Pb/Abs St 40 mg/dl*40 mg/dl
 * 60 mg/dl = 4.032 mg/dl
	
	Espectro 1
	Espectro 2
	1
	1.770
	1.839
	2
	1.830
	1.893
	3
	1.817
	1.781
	4
	1.815
	1.777
	5
	1.815
	1.782
	6
	1.826
	1.794
	7
	1.790
	1.756
	8
	1.822
	1.780
	9
	1.818
	1.791
	10
	1.830
	1.805
	11
	1.850
	1.811
	12
	2.020
	2.055
	13
	1.830
	1.786
	14
	1.844
	1.781
	15
	1.832
	1.790
	16
	1.837
	1.792
	17
	1.851
	1.785
	18
	1.822
	1.770
	19
	1.841
	1.792
	20
	1.823
	1.776
Discusión
En dicha práctica se usaron diferentes parámetros como la linealidad, la reproducibilidad, precisión y especificidad para la evaluación del método analítico en la cuantificación de Ácido acetilsalicílico, hoy en día es un reto para las industrias farmacéuticas lograr que su producto sea efectivo y que a la vez sus propiedades se mantengan a través del tiempo. 
Como resultado se vio que en el método de especificidad que el método de Trinder no es especifico a ácido acetilsalicílico, siendo que en la práctica se tomó la misma concentración de salicilato de sodio y de ácido acetilsalicílico, pero sin embargo se observó una coloración en el salicilato mientras que en el ac. Acetilsalicílico casi no hubo coloración. 
Referencias
· Gutiérrez-Camacho J. R, Aguilera-Galavíz L. A, Sánchez-Balderas G, Palestino G, Zavala-Alonso N. V, , Gaitán-Fonseca C. In-Vitro Silanization of Dental Enamel to Prevent Demineralization. Odovtos - International Journal of Dental Sciences [Internet]. 2022;24(1):76-86. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=499570300009
· Ramírez González W, Mateo Morejón M, Cruz Jiménez R, Macías Ochoa E. B, García Freijó A, Torralba Averoff D, , Labrada Rosado A. Validación interlaboratorio del método de SDS-PAGE para la determinación de la composición de proteínas en extractos alergénicos de ácaros. Revista CENIC. Ciencias Biológicas [Internet]. 2022;53(1):1-13. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=181270748001
· Ortega Ruipérez B, The Role of Metacognitive Strategies in Blended Learning: Study Habits and Reading Comprehension. RIED. Revista Iberoamericana de Educación a Distancia [Internet]. 2022;25(2):219-234. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=331470794011
· Witeck C. D, Schmitz A. C, Oliveira J. M, Porporatti A. L, Canto G. D, , Pires M. M. Lysosomal acid lipase deficiency in pediatric patients: a scoping review. Jornal de Pediatria. 2022;98(1):04-14. 
PRÁCTICA # 6. DETERMINACIÓN DE ETANOL EN ORINA.
Resultados
	Absorbancia
	Absorbancia para medir la actividad enzimática
	0.028
	0.035
	0.142
	0.045
	
	0.094
	
	0.120
	
	0.138 (Último)
Actividad alcohol-deshidrogenasa:
	Presencia de etanol en orina
	Problema 1= + (Positivo)
La muestra de orina positiva en presencia de etanol, viró a un color azul verdoso.
Discusión
En esta práctica se utilizó
la orina de una persona que consumió alcohol recientemente en bebidas alcohólicas. Teniendo en cuenta los datos de la muestra se pudo determinar la presencia de etanol en la muestra y así mismo calcular mediante un método cuantitativo la concentración del etanol en la muestra.
Evaluación
1. Explica a qué se debe la presencia de un color verde azul en la prueba presuntiva positiva.
Esto es porque los alcoholes primarios, tal como el etanol, frente al dicromato de potasio, generan aldehídos. Entonces, se observa la reacción mediante el cambio de color a verde debido a la reducción del cromo.
Referencias
· Pérez M. M, Martínez Torres M. D, Pérez Cruz N, Díaz Matos I, , Alfonso Hidalgo A. Intoxicación por barbitúricos, una mirada toxicológica. Horizonte Sanitario [Internet]. 2019;18(2):111-118. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=457868615003
· San Martín C, Diaz F, Cañete A, Laborda M. A, , Miguez G. Readquisición de la tolerancia asociativa al etanol: el efecto de la extinción masiva. Avances en Psicología Latinoamericana [Internet]. 2019;36(2):419-429. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=79955443014
· Ghalehkhondabi I, , Suer G. Production line performance analysis within a MTS/MTO manufacturing framework: a queueing theory approach. Production [Internet]. 
· Puttini M. A, Vuarant C. M, Fournier J, Lesa C, Huter C, Ruíz Díaz J, , Romero A. Determinación de ácidos oleico y linoleico del suero sanguíneo humano por HPLC de fase inversa. Ciencia, Docencia y Tecnología [Internet]. 2019;XVI(30):179-192. 
· Ramírez González W, Mateo Morejón M, Cruz Jiménez R, Macías Ochoa E. B, García Freijó A, Torralba Averoff D, , Labrada Rosado A. Validación interlaboratorio del método de SDS-PAGE para la determinación de la composición de proteínas en extractos alergénicos de ácaros. Revista CENIC. Ciencias Biológicas [Internet]. 2022;53(1):1-13. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=181270748001
LINEALIDAD
Valores Y	8	16	24	32	40	48	56	64	72	80	8.6E-3	3.2000000000000001E-2	4.2999999999999997E-2	4.8000000000000001E-2	5.8000000000000003E-2	5.5E-2	2.1000000000000001E-2	0.113	0.13500000000000001	0.13800000000000001