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BACTERIAS Sofia Marcela Yacovich - 2021 GENERALIDADES BACTERIAS→ procariotas unicelulares que poseen vida libre y que se reproducen por fisión binaria. (forma de reproducción asexual que no otorga variabilidad genética, es rápida y barata energéticamente)à Hay excepciones, bacterias que no tienen vida libre, como Chlamydia y Rickettsia que necesitan parasitar una célula eucariota para sobrevivir. Pared celular Membrana celular Citoplasma - Ribosomas - Gránulos - Vesículas - Región nuclear/nucleoide ➔ Anexos: pueden estar presente o no, si está presente hace más patógena a la bacteria, tiene propiedades antigénicas y puede desencadenar una respuesta inmune en el huésped. - Cápsula: la resistencia de la bacteria, son más virulentas y agresiva. Antigénica y antifagocítica (Ag K) Patogenicidad, las bacterias capsuladas producen colonias LISAS de apariencia mucoide. Las NO capsuladas producen colonias RUGOSAS - Flagelos: virulencia. (Ag H) Son helicoidales, delgados y largos. Le dan movilidad, quimiotaxia LOCALIZACION Periféricos (enterobacterias): se dispone por toda la superficie bacteriana Polares (pseudomonas): se dispone sólo en los extremos bacterianos • ➢ Monótricas: 1 flagelo • ➢ Lofótricas: 1 penacho de flagelos • ➢ Anfítrica: 2 penachos de flagelos en los dos polos - Pili/fimbrias adherencia, pili somático y sexuales (apareamiento) - Slime: es un polisacárido, viscoso, formado por glicocálix. Adhesión COCOS: forma ovoide - Diplococos (de a 2) - - Estreptococos (cadena) - - Estafilococos (racimo) - - Sarcinas (tétradas de cocos) PARED CELULAR Mantiene la presión osmótica. Auto biosíntesis. Sitio de determinantes antigénicos Propiedad tintorial que le permite diferenciar bacterias Gram (+) y gram (-) Esta por fuera de la membrana citoplasmática Compuesta por peptidoglicano/mureína (excepto en micoplasmas) MEMBRANA CITOPLASMATICA o CELULAR Fosfolípidos, proteínas y enzimas Genera energía, transporte de electrones, barrera permeable selectiva, secreta exotoxinas y produce enfermedad MEMBRANA EXTERNA Solo en GRAM (-) Forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene la estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas contiene una gran cantidad de proteínas, siendo las más significativas: ➢ Porinas: se organizan en los poros o canales hidrofílicos y permiten el paso a través de la membrana exterior de las bacterias esféricas a compuestos hidrofílicos ➢ Proteínas mayores no porínicas (OMPA): participa en la fijación de la membrana externa a la capa de peptidoglucano y se comportan como receptoras del pili sexual en la conjugación bacteriana mediada por el pili F - Debido al hecho de servir como barreras a la difusión de moléculas grandes, se le atribuye en parte la gran resistencia de las bacterias Gram negativas a muchos antibióticos LIPOPOLI- SACARIDOS Es la molécula más característica de las bacterias Gram negativas - Principal endotoxina bacteriana, considerados así por su alta toxicidad que se liberan cuando las células son lisadas - Consisten en un complejo lipídico denominado lípido A - El LPS está fijado a la membrana exterior por enlaces hidrófobos - La toxicidad está ligada al lípido A y el polisacárido representa un antígeno de superficie - Estimulador de respuesta inmunes: activa células B, liberación de IL, FNT, IL6 por macrófagos - LPS -> lípido A + polisacárido - Lípido A: endotoxina RIBOSOMAS Dos subunidades de 30S y 50S que forman un ribosoma 70S ESPACIO PERIPLASMICO Espacio entre la superficie de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa - Sólo en bacterias Gram negativas p. 111 Murray BACILOS: forma de bastón - Cocobacilos (cortos) - Fusiformes (ahusados) - Filamentosos (largos) - Vibriones (curvos) - Espiroquetas (espiralada y flexible) - Espirilos ( espiralada y rígida) GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS Pared gruesa de peptidoglicano Acido teicoico y Lipoteicoico (ag de superficie) Pared delgada de peptidoglicano Espacio periplásmico Membrana externa Membrana plasmática Membrana plasmática No tiene membrana externa Si tiene membrana externa No tiene espacio periplásmico Si tiene espacio periplásmico Red de mureína extensa Red de mureína de una sola capa No tiene LPS Contiene LPS Retienen tinción azul Quedan decoloradas Conservan el complejo yodo colorante Pierden el complejo yodo colorante Esporulantes y no esporulantes Anaerobios o aerobios Tinción de GRAM 1. Fijación con calor. 2. Cristal violeta / violeta de genciana→ 1er colorante - lavado. 3. Lugol (yodo-yoduro de potasio): va a permitir la formación de complejos estables entre el colorante y la pared de peptidoglicanos. 4. Etanol-acetona: es el decolorante de Gram. Elimina los restos de colorante. 5. Safranina→2do colorante: es un contracolorante. Tiñe las células decoloradas ➯ La coloración de Gram sirve para saber: distribución, morfología y características de la pared, Gram (+): violetas (retienen 1er colorante): — Su pared celular es resistente al lavado de etanol por el contenido de ÁCIDOS TEICOICOS. Gram (-): rosadas o rojas (no retienen el 1er colorante, pero si retienen el 2do colorante): — Su delgada pared celular se desintegra con el lavado con etanol-acetona, ya que la ME está constituida por LPS. - Sale el cristal violeta y permanece la safranina. EXCEPCIONES DE LA TINCION GRAM Micobacterias: tienen estructura Gram positiva, pero no se tiñen por el alto contenido de lípidos en su pared Treponemas: tienen estructura Gram negativa, pero no se ven porque son muy delgadas (tinción argéntica) Micoplasmas: carecen de peptidoglucanos (no tienen pared celular) Ziehl-Neelsen 1. Fijación con calor. 2. Fucsina. → 1er colorante 3. Calentar hasta emisión de vapores. 4. Decolorante de Ziehl Neelsen (alcohol-HCL): como estas bacterias son resistentes al alcohol, no van a perder su coloración. 5. Azul de metileno o verde de malaquita→2do colorante le da color al fondo para que se puedan apreciar las bacterias. BAAR (+) → micobacterias - Rosadas ▪ Resisten la decoloración con ácido (son acidorresistentes), porque su pared celular tiene ácido micólico BAAR (-) - Azules ▪ No resisten la decoloración con ácido, se disuelve el carbol-fucsina y se tiñe con azul de metileno ESPORAS o ENDOSPORAS Géneros: Clostridium, Bacillus - Anaerobios - Se transforma en elemento infectante - Se utilizan como armas biológicas: Antrax Funciones: -Resistencia a ambientes hostiles -Estado vegetativo o de latencia -Diseminación Formación: 1. Se replica el cromosoma y la membrana citoplasmática se invagina 2. El ADN de la futura espora queda rodeado por una membrana 3. La futura espora pierde agua y se produce el depósito de dipicolinato de calcio y otras moléculas, formando el córtex 4. Sucesivas capaz se van depositando, formando las envolturas de la espora 5. Se lisa la pared bacteriana, la forma vegetativa de la bacteria muere y se libera la endospora. TOXINAS - Sustancias solubles que alteran el metabolismo normal de la célula huésped - Responsable de signos y síntomas de algunas enfermedades bacterianas - Exotoxinas: producidas por los ribosomas y secretadas al medio externo - Endotoxinas (Gram negativas): lípido A - Efecto citotóxico y efecto citopático - Pueden estar codificadas por fagos o plásmidos - Actúan en forma local y/o sistémica - Actúan a bajos niveles - Inactivadas se llaman toxoides (neutralizan la toxina) y se utilizan como vacunas - Ejemplos: toxina diftérica, colérica, tetánica, botulínica Fisiologia bacteriana BACTERIAS→ FERMENTADORAS Y NO FERMENTADORAS - FERMENTADORAS: utilizan azucares imples(glucosa, lactosa) y los descomponen en moléculas mas pequeñas (lactato, acetato) generando acidez (liberan protones al medio) - NO FERMENTADORAS: utilizan azucares simples y los convierten en CO2 y H2O, sin modificar la acidez del medio, utilizan aceptor de electrones (O2) Las bacterias producen superóxido dismutasa y catalasa apara protegerse de las especies reactivas del oxigeno. Aquellas que no la producen son sensibles a pequeñas concentraciones de O2 y mueren en su presencia AEROBIA ESTRICTA Aeróbico Si Solo crece en presencia de O2. No fermentan. Mycobacterium tuberculosis, Pseudomonas aureginosa ANAEROBIA ESTRICTA Anaeróbica No Solo crecen en ausencia total de O2. Si fermentan. Clostridium botulinum FACULTATIVA Aeróbico y anaeróbico Si Pueden crecer con o sin O2. Pueden fermentar u oxidar los azucares. Utilizan una u otra vía. Escherichia coli, Shigella dysenteriae. Staphylococcus aureus AEROTOLERANTE Aeróbico y anaeróbico No Pueden crecer con o sin O2. pero solo fermentan. Streptococcus progenes, Streptococcus pneumoniae MICROAEROFILICA Aeróbico (escaso) y anaeróbico Si (escaso) crecen mejor con poco O2, pero puede crecer si no hay O2. Campylobacter jejuni ESTUDIO BACTERIOLÒGICO 1) Examen en fresco/directo - Coloración de Gram (eventualmente Ziehl-Neelsen) - Determina morfología y agrupación bacteriana - Puede orientar a la primera terapéutica (en urgencias) - Establece la respuesta inflamatoria (cantidad y tipo de células en la muestra) 2) Cultivo - Repite in vitro las condiciones de desarrollo bacteriano que están sucediendo in vivo (dentro del huésped) - desarrolla a la bacteria en medios artificiales (medios de cultivo) que contengan nutrientes adecuados - Hay dos tipos principales de medios de cultivos: aislamiento (nutritivos, diferenciales, selectivos) y los de enriquecimiento - Se utiliza como agente solidificante el agar Los principales son: • Agar nutritivo (el más básico) • Agar sangre (agar nutritivo + sangre entera): Streptococcus spp. • Agar chocolate: para bacterias que requieren factor V u X de la sangre (Haemophylus) • Medios enriquecidos: para bacterias con requerimientos nutricionales complejos - ➢ Agar McConkey - ➢ Agar SS: salmonella/Shigella - ➢ Agar bilis-esculina (Enterococos) - 3) Identificación del germen/tipificación (pruebas bioquímicas) -Clasifica a las bacterias que han desarrollado en el cultivo - Se informan como positiva o negativa y se va armando un conjunto de resultados que se confrontan con tablas estandarizadas Las más comunes son: • • IMVIC: para Gram (-) • • Catalasa: para diferenciar Staphylococcus spp. de Streptococcus spp. • • Optoquina: Strep. pneuomiae de Strep. viridans 4) Antibiograma - Consiste en enfrentar a las bacterias que han crecido en el cultivo a un conjunto de antibióticos - Determina el tratamiento - Se mide el diámetro del halo - Sensible: cuando el ATB inhibe totalmente el desarrollo bacteriano - Medianamente sensible: cuando el ATB inhibe parcialmente el desarrollo bacteriano - Resistente: cuando el ATB no inhibe el desarrollo bacteriano; alrededor del ATB - Se coloca en una placa de Petri - Se debe sembrar por lo menos 8 ATB y se interpreta a todos juntos . .
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