conservacion hongos filamentosos

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PRACTICA No 9 
CONSERVACIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS 
Docente Catedrático: Marcela Quintero. Mic.Industrial 
 
9.1. INTRODUCCIÓN 
Otro grupo de gran importancia en producción agroindustrial son los hongos 
filamentosos, organismos que se caracterizan por producir gran cantidad de 
enzimas, saborizantes, antibióticos y algunos de ellos ejercen control biológico 
sobre organismos patógenos para el hombre, animales y plantas, razón por la cual 
su conservación es fundamental para garantizar estabilidad, viabilidad y actividad. 
(Monroy, 2005) 
La conservación se puede realizar por: 
- Métodos a corto plazo: Subcultivo en medios específicos 
- Métodos a mediano plazo: Aceite mineral, agua , suelo y arena 
- Métodos a largo plazo: Liofilización, criopreservación y secado 
De acuerdo al crecimiento que tienen estos microorganismos se puede conservar: 
Micelio o esporas, sin embargo las últimas son más utilizadas por la facilidad de 
manejo y mayor resistencia por su composición celular 
De la misma forma que en las bacterias y levaduras se debe conocer la población 
inicial, se realiza por medio de recuento en cámara (conidios) y técnica de dilución 
decimal y siembra en placa, para estimar las UFC/ml. 
Con respecto al muestreo, seguimiento y evaluación en función del tiempo se 
deben tener las mismas consideraciones que los bancos para bacterias y 
levaduras. 
 
9.2. OBJETIVOS 
Objetivo general 
Elaborar y evaluar un banco de cepas de trabajo a base de conidios de hongos 
utilizando métodos a corto y mediano plazo 
Objetivos específicos 
- Realizar conservación de Trichoderma harzianum utilizando aceite mineral 
- Determinar la función de la técnica de desprendimiento de conidios por 
medio de perlas de vidrio. 
- Determinar la concentración inicial del banco de células o el No de la 
población, mediante recuento de conidios/ml 
- Evaluar el método de conservación, de acuerdo al recuento de conidios 
obtenido. 
 
9.3. REACTIVOS Y MEDIOS 
- Agar PDA 
- Aceite mineral 
- Azul de lactofenol 
- Solución salina 0.85% p/v 
- Tween 0.1% v/v 
 
9.4. MATERIALES POR GRUPO DE TRABAJO 
9.4.1. Conservación en aceite mineral 
- Tubo eppendorf de 1.5 ml con 1 ml de aceite mineral (1) 
- Tubo eppendorf estéril vacio (1) 
- Caja de petri con Trichoderma sp crecido y esporulado (2 por grupo de 
trabajo). 
- Pipeta Pasteur vidrio estéril (1) 
- Caja de petri con medio PDA (1) 
- Laminas y laminillas 
- Agujas de disección 
- Agar Saboureaud (2) 
9.4.2 Obtención de conidios por desprendimiento con perlas de vidrio 
- Caja de petri con Trichoderma harzianum esporulado (1) 
- 2 perlas de vidrio estériles . 
- Tubo de 12 x 75 mm con 5 ml de solución salina con tween al 0.1% v/v 
estéril (1) 
- Tubo para tomar porciones del medio de cultivo 
- Tubo de 12 x 75 mm estéril solo.(1) 
- Tubos de 13 x 100 mm con 4.5 ml con agua destilada estéril (4) 
- Pipetas pasteur estéril (2) 
- Cámara de Neubawer 
 
9.5.EQUIPOS 
- Nevera de 7oC 
- Microscopio 
- Autoclave 
 
9.6.MICROORGANISMO A EVALUAR 
- Trichoderma sp 
 
9.7. METODOLOGÍA 
9.7.1.Pruebas de pureza: Realice preparación de azul de lactofenol para verificar 
pureza del microorganismo 
9.7.2. Conservación en aceite mineral: Para esta parte a cada lado de mesa se 
le entregará una caja con un cultivo de Trichoderma harzianum, a partir de esta 
caja obtenga una muestra utilizando la pipeta pasteur invertida, de tal manera que 
se obtenga un disco de 5mm de diámetro que contiene un fragmento de agar y el 
microorganismo. (figura1). Bajo condiciones de esterilidad, destape el tubo 
eppendorf y deposite dentro, el disco de agar , tápelo y guárdelo en refrigeración. 
Repita el mismo procedimiento para el tubo eppendorf vacio. 
 
 
 
 
 
 
 
Figura Conservación de hongos 
Cultivo de Trichoderma 
harzianum esporulado 
Disco sumergido en 
aceite mineral 
 
Al termino de 5 días conservación, coloque los discos que se que se encuentran 
dentro de los tubos eppendorf en agar saboureaud. Mida desde el dia 1 con una 
regla el diámetro del crecimiento del micelio y realice una curva de crecimiento. 
 
9.7.3. Desprendimiento de conidios con perlas de vidrio 
Tome el cultivo de Trichoderma que se le entregó y bajo condiciones asépticas 
destape la caja y adicione los 5 ml de solución salina al 0.85% p/v con Tween al 
0.1% v/v, posteriormente coloque las tres perlas de vidrio y empiece a moverlas 
con movimientos de rotación para favorecer es desprendimiento de conidios. 
Con la pipeta pasteur tome la totalidad de muestra y transfiérala al tubo de 12x 
754 mm solo. 
A partir de este tubo prepare diluciones decimales 10–1 y 10–2 y realice el recuento 
en cámara utilizando las dos diluciones. Conserve esta suspensión a temperatura 
de refrigeración. 
 
9.8.RESULTADOS 
9.8.1.Determinación de pureza : 
Tabla . Prueba de pureza 
Microorganismo 
evaluado 
Características 
macroscópicas 
Características 
microscopicas 
 
 
 
 
 
9.8.2. Recuento de conidios/ml en cámara 
Tabla. Recuento de conidios/ml 
Microorganismo Conidios/ml 
Dilución 10–2 
 
 
9.8.3 Evaluación de la conservación 
Después de 8 días en congelación, coloque cada uno de los discos pertenecientes 
a cada vial en medio de cultivo PDA, realice lecturas diarias de crecimiento radial 
del micelio. Estas mediciones deben hacerse hasta que el hongo alcance el borde 
de la caja. 
Día Crecimiento 
micelial (mm) 
1 
2 
3 
4 
5 
 
 
9.9.REVISIÓN TEORICA DE COMPLEMENTACION 
 .¿Cúal es el fundamento de la técnica de conservación por liofilización, 
nitrógeno líquido, leche descremada, sensidiscos y papel para esporas de 
hongos? 
 ¿Cómo se realiza la prueba de viabilidad para hongos según la norma 
expedida por CENICAFE? 
 .¿Cómo se conservan células eucariotas? 
 Realice la búsqueda de un artículo de los últimos cuatro años, donde se 
establezca la importancia de la conservación de microorganismos filamentosos 
en producción industrial. Anexar artículo.