Propagación in vitro de arándano (Vaccinium corymbosum L ) a partir de yemas axilares

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Propagación in vitro de arándano (Vaccinium 
corymbosum L.) a partir de yemas axilares.
In vitro propagation of bilberry (Vaccinium 
corymbosum L.) from axillary buds.
Sandra Liliana Lerma Bocanegra*, Darío García**, Wilson Niño Fandiño
** y Walter Díaz Escobar**
Artículo de Investigación
RESUMEN
El cultivo de arándano es relativamente nuevo en 
Colombia. Tiene un gran potencial para el mercado local 
y de exportación, lo que ha hecho que en la actualidad 
se estén expandiendo las áreas de siembras, las cuales 
se están realizando con variedades introducidas al país. 
Una de las limitantes que se tiene hoy por hoy es la falta 
de material de propagación, la cual se viene realizando 
con principalmente con la variedad conocida como 
Biloxi. La propagación in vitro es un método eficaz 
y eficiente, para proporcionar material de siembra en 
este cultivo. En este trabajo se buscó establecer la 
influencia de la concentración de la hormona zeatina 
sobre la generación de brotes en explantes de arándano 
(Vaccinium corymbosum L.). Los resultados mostraron 
que la zeatina en concentración de 1mg/L produjo el 
mayor número de brotes por estaca y en concentración 
de 2mg/L incidió en el mayor crecimiento, o elongación, 
de dichos brotes.
Palabras clave: 
Micropropagacion, arándano. zeatina.
*Bióloga - Universidad
del Tolima / Magister
en biotecnología de
plantas - Centro de
Investigación y estudios
avanzados del Instituto
Politécnico Nacional /
Instructora en el Centro
de Biotecnología
Agropecuaria (SENA)
slerma@sena.edu.co
**Aprendices del 
Tecnólogo en 
Agrobiotecnología en el 
Centro de Biotecnología 
Agropecuaria (SENA)
Fecha de recepción: 
15 de julio de 2019
Fecha de aceptación: 
14 de septiembre de 2019
10 Revista Siembra CBA / No. 2 - 2019 Artículo de Investigación
Introducción
El arándano es una planta perteneciente 
a la familia de las Ericaceas, su fruto 
es una baya de color azul que varía 
hasta diferentes tonalidades rojas, que 
por su propiedades organolépticas y 
antioxidante se ha convertido en un 
producto de alta demanda (Cabezas et al., 
2012). Pertenece a la especie Vaccinium 
corymbosun, la cual es originaria de los 
bosques de Estados Unidos y Canadá; 
inicialmente se encontraba como planta 
silvestre, y fue en 1900 cuando empezó 
a ser domesticada. Estados Unidos es 
el principal productor y consumidor de 
arándanos a nivel mundial. Por su parte, 
en América del sur fueron introducidos 
en la década de los 80 y desde entonces 
se ha cultivado mayormente en países 
como Chile, Argentina y Uruguay. 
Chile es el principal productor en Sur 
América y segundo a nivel mundial, 
mantenimiento su mayor producción 
en contraestación de los países del 
hemisferio norte (Estados Unidos y 
Canadá) a donde exporta gran cantidad 
de fruta (Pannunzio et al., 2011). En 
Colombia el arándano es un cultivo 
relativamente nuevo ya que no lleva más 
de 9 años en el país, y se ha empezado 
a implementar debido a la existencia 
de plantas con bajos requerimientos 
de frío que se pueden adaptar bien a 
las condiciones del trópico (Gantiva et 
al.,2018). 
ABSTRACT
Bilberry cultivation is relatively new in Colombia. It 
has great potential for the local and export markets, 
which has led to the expansion of planting areas, which 
are being carried out with varieties introduced to the 
country. One of the limitations that we have today is 
the shortage of propagation material, which is being 
done mainly with the variety known as Biloxi. In vitro 
propagation is an effective and efficient method to 
provide planting material in this crop. In this work we 
sought to establish the influence of the concentration 
of the zeatin hormone on the generation of shoots in 
bilberry explants (Vaccinium corymbosum L.). The 
results showed that zeatin at a concentration of 1mg / L 
produced the highest number of shoots per stake and at 
a concentration of 2mg / L, it contributed to the greater 
growth, or elongation, of these outbreaks.
Keywords:
Micropropagation, bilberry, Zeatin 
Propagacion In Vitro De Arándano (Vaccinium corymbosum l.) A Partir De Yemas Axilares 11 
En el país se vienen incrementando las 
áreas del cultivo, trayendo consigo la 
demanda de material de propagación, 
en especial las plantas in vitro por su 
demostrada calidad y homogeneidad 
(Litwinczuk et al., 2005). La 
micropropagación en arándano se 
inició hace aproximadamente 30 años 
(Cohen y Elliot, 1979; Zimmerman y 
Broome, 1980) y ha demostrado ser 
un método eficaz, acortando el ciclo 
de crecimiento del cultivo y lo mejor 
es que se ha demostrado que en esta 
especie, el proceso in vitro no genera 
variabilidad genética si se utiliza 
organogénesis directa (Gajdosova et 
al., 2006). La aplicación de esta técnica 
para la propagación a gran escala de 
material vegetal puede llegar a ser 
interesante para las diferentes especies 
de vaccinium, ya que permite obtener a 
una producción masiva de plántulas de 
alta calidad (Jaakola et al., 2002). 
Existen diferentes publicaciones donde 
han reportado las evaluaciones a nivel de 
composición de nutrientes en el medio 
de cultivo, condiciones ambientales, 
reguladores de crecimiento, densidades 
de siembra para el desarrollo óptimo 
en la propagación in vitro de diferentes 
variedades de arándano (Tetsumura et 
al., 2008; Kutas et al., 2017; Fan et al., 
2017; Toro, 2009)
En otros estudios se ha evaluado el uso 
de diferentes tipos de explantes como 
brotes adventicios, axilares, meristemos, 
para iniciar la propagación in vitro de 
diferentes variedades como Brigitta, 
Legacy, highbush, Elliot; Biloxi (Cuce,M 
y Sokm, A. 2015; Hine,A y Abdelnour, 
A. 2013). A pesar de lo anterior, en el país 
no se tienen protocolos de reproducción
in vitro que permitan la producción
masiva que garantice la disponibilidad
de material vegetal para respaldar las
demandas de siembra de cultivos que se
vienen generando.
Cabe destacar, que los genotipos más 
conocidos en el mundo no son aptos para 
el cultivo en las condiciones climáticas 
de Colombia. Biloxi es considerada una 
de las mejores variedades de arándano 
en el mundo por la calidad de sus frutos, 
tiene buena adaptación a diferentes 
ambientes climáticos debido a que sólo 
requiere de 400 horas frío, y viene siendo 
sembrada en algunas zonas del país, sin 
embargo, son pocos los estudios para su 
micropropagación en estas zonas. 
Por lo anterior, este trabajo tiene como 
objetivo el establecimiento de un 
protocolo de propagación in vitro de 
la variedad Biloxi a partir de yemas 
axilares.
2. Materiales y Métodos
2.1 Localización del sitio 
 experimental
Los ensayos se realizaron en el laboratorio 
de biotecnología vegetal, del Centro de 
Biotecnología Agropecuaria del SENA, 
el cual se encuentra ubicado en el 
municipio de Mosquera, Cundinamarca.
12 Revista Siembra CBA / No. 2 - 2019 Artículo de Investigación
2.2 Material vegetal
Como fuente de explantes se utilizaron 
plantas cultivadas en campo de la 
variedad Biloxi proporcionadas por la 
finca “Quebrada Honda” en Guasca-
Cundinamarca. 
2.2.1 Desinfección del 
 material inicial
Estacas de 15 cm de largo tomados de la 
parte basal de las plantas madre fueron 
tratados, con dos días de anterioridad a 
la siembra, con una aspersión de ridomil 
(2gr/L), el inicio de la desinfección de 
los esquejes se dio en primer lugar con 
el lavado de la totalidad del material 
con agua destilada para retirar los 
restos del fungicida. Las estacas fueron 
sumergidas en una solución de ácido 
abscorbico (150 ppm) y ácido cítrico 
(150 ppm) por 20 minutos. Luego se 
lavaron con abundante agua destilada 
estéril, a continuación fueron sometidas 
a una solución de extran al 0.1% por un 
tiempo de 30 minutos, se lavaron con 
abundante agua destilada, se sumergieron 
nuevamente en una solución de alcohol 
al 70% por 30 segundos, nuevamente se 
lavaron con abundante agua destilada, 
y se sometieron a 4 concentraciones de 
hipoclorito de sodio comercial(1%, 2%, 
3% y 4%) durante 10minutos. 
En la cabina de flujo laminar, las estacas 
se lavaron tres ves con agua destilada 
estéril, y se tomaron como explantes 
secciones de tallo con dos yemas axilares 
con un tamaño de 2cm. Se colocaron tres 
explantes por frasco de vidrio con 25 ml 
de medio de cultivo compuesto por sales 
del medio WPM (Lloyd and McCown, 
1981), suplementado con Myo-Inositol 
(100mg/L), Glicina (2mg/L) Tiamina 
(2mg/L), Acido nicotínico 1 mg/L, 
Piridoxina (1mg/L), como agente 
antioxidantes la cisteína (5 mg/L) y 
Polivinilpirrolidona (PVP) (100mg/L), 
sacarosa (15 g/L) y solidificado con 
agar-agar (8g/L). Se ajustó a un pH 4,8 
antes de ser autoclavado a 1210C, 15 lb 
de presión por 20 minutos. En este caso 
la variable a estudiar fue el porcentaje 
(%) de contaminación. 
2.2.3 Inducción de brotes 
 axilares
Para la inducción de brotes axilares se 
realizó un ensayo donde se colocaron dos 
secciones de tallo con dos yemas axilares 
por recipiente de vidrio con 15 ml de 
medio, el cual contenía una combinación 
de sales MS (1/2) (Murashige & Skoog, 
1962) y algunas sales del medio WPM 
(1/2)(Lloyd and McCown, 1981), 
suplementado con Myo-Inositol 
(50mg/L), Glicina (1mg/L), Tiamina 
(1mg/L), Acido nicotínico 0.5 mg/L, 
Piridoxina (0.5mg/L), como agente 
antioxidantes la cisteína (2,5 mg/L) y 
Polivinilpirrolidona (PVP) (50mg/L), 
sacarosa (15 g/L) y solidificado con 
agar-agar (8g/L), pero presentando 
cuatro tratamiento conformados por 
diferentes concentraciones de Zeatina 
(0, 1, 2, 3 mg/L) (Cuadro 1) cada uno 
con 40 repeticiones.
Propagacion In Vitro De Arándano (Vaccinium corymbosum l.) A Partir De Yemas Axilares 13 
Cuadro 1. Tratamientos evaluados sobre 
explantes de arándanos.
Tratamiento 
Número
Cantidad de 
Zeatina (mg/L)
T1 0
T2 1
T3 2
T4 3
Los cultivos se colocaron en área 
de incubación bajo condiciones 
controladas de laboratorio, los cuales 
fueron sometidos a fotoperiodo de 
12 horas luz y 16 horas oscuridad, 
manteniendo una temperatura entre 
18 a 22°C.
En el ensayo se evaluaron 
los parámetros porcentaje de 
contaminación, número de brotes, 
longitud de los brotes, numero 
de nudos por brotes totales por 
recipiente. Para el análisis de datos 
se llevaron a cabo las pruebas de 
ANOVA de un solo factor y test de 
rangos múltiples de Duncan, con un 
nivel de significancia de p = 0.05, 
con el uso del programa estadístico 
infostat versión 2018I.
3. Resultados y Discusión
3.1 Desinfección del 
 material inicial
Contaminaciones por hongos y 
bacterias son los mayores problemas 
durante el establecimiento de 
explantes bajo condiciones in vitro. 
Con los protocolos que se evaluaron 
en este trabajo se logró establecer 
estacas que contenían yemas 
axilares de arándano a nivel de 
laboratorio, obteniendo porcentajes 
de contaminación de 27,5%, 20%, 
15%, 27,5% para los tratamientos 
con hipoclorito al 1%, 2%, 3% y 4% 
respectivamente (figura1).
0
5
10
15
20
25
30
Desifección estacas-
HIPOCLORITO 1%
Desifección estacas-
HIPOCLORITO 2%
Desifección estacas-
HIPOCLORITO 3%
Desifección estacas-
HIPOCLORITO 4%
27,5
20
15
27,5
% contaminación
Figura 1. Porcentajes de contaminación de los 
explantes de arándano después de los tratamientos 
de desinfección.
La contaminación en los cuatro 
tratamientos se debió a la presencia de 
hongo sobre el explante; se observó poca 
contaminación por bacteria en los cuatro 
tratamientos. Los mejores resultados 
fueron obtenidos con los protocolos 
que contenían concentraciones de 
hipoclorito al 2% y 3% con porcentajes 
de contaminación del 20% y 15%, 
respectivamente. Los resultados 
obtenidos con estas dos concentraciones 
de hipoclorito evidencian que la 
combinación de hipoclorito y Etanol al 
70% presentan una gran alternativa en la 
desinfección de explantes acompañado 
de una aplicación inicial a la planta 
de madre de un fungicida unos días 
antes de extraer los esquejes ya que 
14 Revista Siembra CBA / No. 2 - 2019 Artículo de Investigación
permitieron obtener porcentajes altos 
de sobrevivencia de los explantes del 
80%y 85%. Resultados similares fueron 
obtenidos por Kaldmae et al., 2006, donde 
mencionaron que con 3% de hipoclorito 
obtuvieron 98% de sobrevivencia en 
explantes de Vaccinium angustifolium.
La contaminación fúngica en algunos 
ensayos de desinfección puede llegar 
hacer muy significativa (Hine y 
Abdelnour., 2013) y de acuerdo a 
Villegas (1990) y Razdan (2003) los 
hongos son los agentes contaminantes 
más comunes en los ensayos de cultivo 
de tejidos, sobre todo cuando se utiliza 
tejido adulto de plantas que crecen en 
campo como el material utilizado en 
este experimento, ya que este material 
maduro ha estado en contacto con el 
medio ambiente por largo tiempo y ha 
desarrollado relaciones patogénicas con 
otros organismos de manera interna, lo 
que dificulta la desinfección superficial. 
Así mismo, la manipulación de 
explantes y el tiempo de exposición 
a las soluciones utilizadas, favoreció 
la oxidación, sin que esto afectara 
significativamente la viabilidad de los 
explantes, es decir el grado de oxidación 
no fue lo suficientemente fuerte para 
causar su muerte del material vegetal. 
3.2 Inducción de brotes 
 axilares de arándano
Al evaluar el efecto de la zeatina como 
regulador de crecimiento en la brotación 
de las estacas de arándano de la variedad 
Biloxi, en concentraciones de 0 mg/L, 
1mg/L, 2mg/L y 3mg/L, de acuerdo al 
análisis de varianza, se determinó que 
el número de brotes nuevos por estaca, 
presentó diferencias significativas. En el 
tratamiento testigo (0 mg/L de zeatina) 
se obtuvo una brotación de tres (3) por 
estaca. En el tratamiento 2 (zeatina 
1mg/L) se observó el mayor número de 
brotes por estaca de todo el ensayo, con 
una media de 7.5 brotes y un coeficiente 
de variacion de 37,52 (figura2). 
 
A pesar que los tratamientos que 
contenían zeatina, superaron el número 
de brotes que tuvo en el tratamiento 
testigo, no hubo una relación directa 
entre el aumento del contenido de zeatina 
y el número de brotes. En el tratamiento 
2, con 1mg/L, hubo una media de 8 
brotes, en el tratamiento 3, con 2mg/L, 
hubo una media de 5, mientras que en 
el tratamiento 4, con 3mg/L, fue de 7 
brotes (figura 2).
TRATAMIENTOS
B
R
O
TE
S
9
7
7
5
3
8
6
4
3
1 2 3 4
Figura 2. Efecto de las diferentes concentraciones 
de Zeatina sobre el número de brotes de estacas de 
arándano de la variedad Biloxi. (1) Tratamiento 
testigo 0mg/L de zeatina, (2) Tratamiento 1mg/L 
de zeatina, (3) Tratamiento 2mg/L zeatina, (4) 
Tratamiento 3mg/L de zeatina.
Propagacion In Vitro De Arándano (Vaccinium corymbosum l.) A Partir De Yemas Axilares 15 
Con respecto a la estimulación 
favorable en la brotación de las estacas 
utilizando zeatina, varios autores como 
Ostrolucká et al. (2004) y Cuce y 
Sokmen, 2015, establecen que el uso de 
Zeatina se traduce en un mayor número 
de brotes respecto al uso de otras 
hormonas como la 2ip, tidiazurón. 
De acuerdo con George (2008), la baja 
concentración de citoquininas en el brote 
resulta insuficiente para mantener un 
crecimiento in vitro, de ahí que el cultivo 
in vitro de estas para inducción de la 
brotación de las yemas axilares requiere 
la adición de reguladores de crecimiento. 
Con respecto a la variable longitud de los 
brotes, se observó que hubo diferencia 
significativa entre los tratamientos, 
siendo el tratamiento 3 con 2 mg/L de 
zeatina el que dio la mayor altura de 
brotes con una media de 30,99 mm 
(figura 3). El menor crecimiento se dio 
en el tratamiento 1 o tratamiento testigo 
(no contiene ningún tipo de hormona en 
el medio), cuya longitud fue12,07 mm. 
Como se ve en la figura 3, la longitud 
de los brotes tiene un crecimiento 
progresivo de acuerdo a los contenidos 
de zeatina, hasta el tratamiento 3. Sin 
embargo, en el tratamiento 4 (3mg/L 
de ziteina) la longitud fue de 17,99 
presentando una reducción de cerca del 
42% con respectoa la mayor longitud 
obtenida en el tratamiento 3. 
Como se muestra en la figura 3, el 
crecimiento de los brotes en todos los 
tratamientos con contenido de zeatina 
superó la elongación presentado en el 
tratamiento testigo (sin zeatina). 
Lo anterior indicaría que la presencia de 
la hormona zeatina en el medio de cultivo 
favorece el crecimiento o la elongación 
de los brotes de estacas de arándano de 
la variedad Biloxi. 
TRATAMIENTOS
AL
TU
R
A 
D
E 
B
R
O
TE
S
35,18
28,64
12,07
19,29
30,99
17,99
22,10
25,56
9,02
1 2 3 4
Figura 3. Efecto de las diferentes concentraciones 
de zeatina sobre la brotación. Longitud de brotes 
de estacas de arándano de la variedad Biloxi. 
(1) Tratamiento testigo 0mg/L, (2) Tratamiento 
1mg/L, (3) Tratamiento 2mg/L, (4) Tratamiento 
3mg/L.
Estos resultados del uso de la zeatina como 
hormona para mejorar la multiplicación 
y longitud de brotes en cultivo in vitro 
son corroborados por trabajos como 
el de Cuce y Sokmen (2015), quienes 
evaluaron diferentes citoquininas como 
tidiazuron, 2ip y zeatina, encontrando 
que esta última fue la hormona más 
efectiva en términos de multiplicación 
de brote, numero de hojas y longitud 
de brotes en la especie Vaccinuium 
myrtillus L. (Bilberry). Igualmente, 
estos resultados fueron corroborados en 
otros trabajos y en diferentes variedades 
como lowbush blueberry, lingonberry 
16 Revista Siembra CBA / No. 2 - 2019 Artículo de Investigación
(Debnathand McRae, 2001b), highbush 
blueberry (Chandler and Draper, 1986, 
Eccher and Noe, 1989; Tetsumura et al., 
2008). No obstante a estos resultados, 
hay que tener en cuenta que el éxito en la 
micropropagación de una especie vegetal 
varía en función del genotipo con el que 
se trabaja por lo que es necesario adaptar 
las condiciones del cultivo in vitro a 
cada variedad (Castro, 2016).
En la figura 4 se muestra un registro 
fotoFigura de los brotes. En la figura 4a 
se muestra el poco desarrollo en longitud 
y el número de brotes que tuvieron las 
estacas en el tratamiento sin zeatina. 
Las plantas obtenidas en el tratamiento 
2, con una concentración de zeatina de 
1 mg/L (figura 4b) mostraron mayor 
número de brotes, pero menor longitud 
en dichos brotes; mientras que las 
plantas obtenidas en los tratamientos con 
una concentración de zeatina de 2mg/L 
(figura 4.c) mostraron menor número de 
brotes pero mayor longitud en los brotes. 
La zeatina ha mostrado ser una hormona 
eficiente en la propagación de diferentes 
genotipos de arándano, pero su alto costo 
económico restringe su uso en procesos 
productivos y de masificación in vitro 
de material vegetal (Reed y Abdelnour-
Esquivel 1991). 
A B
C D
 
Figura 4. Brotes de arándano inducidos en un medio de WPM sin regulador de crecimiento (A), WPM 
con concentración de zeatina 1mg/L (B), 2mg/L (C), 3mg/L (D).
Propagacion In Vitro De Arándano (Vaccinium corymbosum l.) A Partir De Yemas Axilares 17 
Conclusión
La zeatina es una hormona muy 
importante en la multiplicación in vitro de 
plantas de arándano. Está involucrada en 
la producción y crecimiento de los brotes 
en los procesos de micropropagación. 
Aunque el alto costo de la zeatina la 
puede excluir de un uso masivo como 
hormona de crecimiento, se recomienda 
su uso a pequeña escala, sobre todo para 
la fase de establecimiento donde sirve 
para estimular el crecimiento de los 
explantes, que es un paso clave para su 
multiplicación.
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