01 Patogenicidad microbiana en Medicina Veterinaria (108)

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Pruebas diagnósticas 
El diagnóstico de la rabia en seres humanos y animales es esencial para el tratamiento 
posterior a la exposición. Dependiendo del estado del paciente, se puede llevar a cabo un 
diagnóstico ante o post mortem (Tabla 1). Existen diferentes métodos de diagnóstico. 
 
A) Diagnóstico ante mortem 
Utilizando una muestra de biopsia de piel (nuca) puede realizarse una inmunofluorescencia 
directa (IFD). Para ella se utiliza un anticuerpo marcado con un fluorocromo que reacciona 
específicamente con el antígeno de la nucleocápside del virus. Un resultado positivo es 
indicativo de rabia pero el resultado negativo no descarta la posibilidad de infección. Si se 
emplea un panel de anticuerpos monoclonales anti nucleocápside del virus rábico, con la IFD 
puede realizarse tipificación antigénica. 
Para diagnosticar rabia también pueden utilizarse muestras obtenidas de tejidos o de 
secreciones y fluidos biológicos tales como saliva, LCR o lágrimas. Se realizan inoculaciones 
intracraneales en ratones o cultivos celular de neuroblastos y detecciones de ARN viral, 
mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR). 
El ensayo biológico es el método más sensible para detectar rabia y consta de inocular 
ratones intra-cerebralmente con las muestras obtenidas. En caso de una muestra positiva entre 
los días 7 y 15 post-inoculación los ratones se enferman. Una vez que se observan signos de 
enfermedad se puede detectar el antígeno rábico. En caso de ocurrir muertes el período de 
incubación para rabia, deben confirmarse por otras técnicas diagnósticas. 
La RT-PCR es una técnica muy sensible que se basa en la detección del ARN viral. Sin 
embargo, pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos, por lo que sólo se debe 
utilizar en combinación con otras técnicas convencionales. La RT-PCR se utiliza para clasificación 
viral. 
Existen técnicas de diagnóstico que se basan en la detección de anticuerpos específicos al 
virus. Dentro de ellas se encuentran el ensayo de neutralización, el método rápido de inhibición 
de focos fluorescentes (RIFFT) y método enzimático ELISA. 
El ensayo de neutralización en ratones para la determinación de anticuerpos presenta un 
alto grado de especificidad. Se realizan diluciones del suero a estudiar, se les añade una 
cantidad fija de virus estándar y se inoculan en ratones. Es un ensayo de serología básica, 
donde la falta de anticuerpos neutralizantes se manifiesta por la muerte o enfermedad del 
hospedador. Presenta las desventajas de la demora en el resultado y el empleo de animales. 
En el RIFFT se incuban diluciones del suero a titular y un suero de referencia de título 
conocido, con una dosis fija de virus. Se añade una suspensión de células sensibles y luego de 
la incubación se observa con microscopio de fluorescencia. Teniendo en cuenta la disminución 
del título infeccioso, se puede calcular el título del suero desconocido por comparación con el 
suero de referencia. Es una técnica que tiene una sensibilidad equivalente al test de la 
seroneutralización con la ventaja de que en un día ya se tiene el resultado.