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182 L O S F U N D A M E N T O S D E L A M I C R O B I O L O G Í A es deseable utilizar un filtro con poros de un tamaño medio de 0,2 μm; no obstante, incluso unos poros tan pequeños deja- rán pasar la mayoría de los virus. El tamaño de poro de los fil- tros usados normalmente para la esterilización por filtración de pequeños volúmenes como las soluciones de laboratorio es de 0,45 μm y 0,2 μm. En microbiología se usan habitualmente varios tipos de fil- tros, como los filtros de profundidad, los filtros de membrana y los filtros Nucleopore. Un filtro de profundidad es una lámina fibrosa o un tapete compuesto de matrices dispuestas al azar de fibras de papel o borosilicato (vidrio) que atrapa las partícu- las en la trama de fibras (Figura 5.36a). Los filtros de profundi- dad son importantes para las aplicaciones de bioseguridad. Por ejemplo, la manipulación de cultivos celulares o microbianos y de medios de crecimiento requiere que la contaminación del operador y del material experimental sea mínima. Estas opera- ciones se pueden llevar a cabo de manera eficaz en una cabina de seguridad con flujo de aire que entra y sale a través de un fil- tro de profundidad llamado filtro de aire particulado de alta eficacia o filtro HEPA (del inglés, high-efficiency particulate air filter; Figura 5.34). Los filtros HEPA eliminan de la corriente de aire partículas de 0,3 μm o mayores con una eficacia que supera el 99,9 %. Los filtros de membrana son el tipo más común de filtro para la esterilización de líquidos en los laboratorios de microbiología (Figura 5.36b y 5.37). Dichos filtros están compuestos por polí- meros de gran resistencia, como el acetato de celulosa, el nitrato de celulosa o la polisulfona, diseñados de manera que contienen un gran número de poros minúsculos. Un conjunto de filtros de membrana estériles para la esterilización de volúmenes relati- vamente pequeños de líquidos como medios de cultivo se usan habitualmente en los laboratorios clínicos y de investigación. La filtración se lleva a cabo usando una jeringa o una bomba para forzar al líquido a pasar por el aparato de filtración hacia un recipiente estéril en el que es recogido (Figura 5.37). Otro tipo de filtro de membrana es el de Nucleopore (Figura 5.38). Los filtros Nucleopore están hechos con una En la Tabla 5.6 se muestra la dosis necesaria para la reduc- ción decimal (D10) de una serie de microorganismos seleccio- nados. El valor D10 es análogo al tiempo de reducción decimal para la esterilización por calor, y la representación de la frac- ción de supervivientes también es similar a la obtenida para este (Figura 5.35; compárese con la Figura 5.32). Como ocurre con los tratamientos térmicos, matar las endosporas con radia- ción ionizante es más dif ícil que matar las células vegetativas, y matar los virus es más dif ícil que matar las bacterias (Tabla 5.6). Además, los microorganismos en general son mucho más resis- tentes a la radiación ionizante que los organismos pluricelula- res. Por ejemplo, la dosis de radiación mortal para humanos puede ser de solo 10 Gy si se irradia durante un período de tiempo corto. En los Estados Unidos, la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA, Food and Drug Administratrion) aprobó el uso de la radiación para esterilizar artículos diversos como dispositivos quirúrgicos, material de plástico de laboratorio, fármacos e incluso injertos de tejidos. Algunos alimentos como productos frescos, pollería, productos cárnicos y especias tam- bién se irradian habitualmente para asegurar su esterilidad o, al menos, que no tienen patógenos ni insectos. Esterilización por filtración El calor es una manera eficaz de descontaminar la mayoría de los líquidos, pero los que son sensibles al calor y los gases deben esterilizarse por otros métodos. Para ello, el líquido o el gas se pasa a través de un filtro con poros lo bastante pequeños para atrapar las células que pueda haber presentes. Para esterilizar Tabla 5.6 Sensibilidad a la radiación de algunos microorganismos representativos Tipo de microorganismo Características D10a (Gy) Bacterias Clostridium botulinum Anaerobio grampositivo; forma endosporas 3.300 Deinococcus radiodurans coco gramnegativo resistente a las radiaciones 2.200 Lactobacillus brevis Grampositivo, bacilo 1.200 Bacillus subtilis Aerobio grampositivo; forma endosporas 600 Escherichia coli Gramnegativo, bacilo 300 Salmonella typhimurium Gramnegativo, bacilo 200 Hongos Aspergillus niger Moho común 500 Saccharomyces cerevisiae Levadura de panadería y de cerveza 500 Virus Glosopeda Patógeno de animales biungulados 13.000 Coxsackie Patógeno humano 4.500 aD10 es la cantidad de radiación necesaria para reducir la población inicial o el nivel de actividad a la décima parte (una unidad logarítmica). Gy, grays. 1 Gy es equivalente a 100 rads. La dosis letal para humanos es 10 Gy. Figura 5.35 Relación entre la fracción de supervivencia y la dosis de radiación de un microorganismo. La D10, que es la dosis de reducción decimal, se puede interpolar de los datos como se muestra aquí. Radiación (Grays) F ra c c ió n d e s u p e rv iv ie n te s (e s c a la l o g a rí tm ic a ) 10 % de supervivencia 0,01 0,1 D10 1 https://booksmedicos.org booksmedicos.org Botón1:
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