Biologia de los microorganismos-1068 (85)

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32 L O S F U N D A M E N T O S D E L A M I C R O B I O L O G Í A
MINIRREVISIÓN
 ¿Qué estructura de las células eucariotas es más fácil de 
ver por DIC que por microscopía de campo claro? (Ayuda: 
Compare las Figuras 2.5a y 2.7).
 ¿Por qué con el CSLM se pueden ver distintas capas de una 
preparación gruesa y en la microscopía de campo claro no?
2.4 Análisis de la estructura celular: 
la microscopía electrónica
Los microscopios electrónicos utilizan electrones en lugar de 
luz visible (fotones) para generar imágenes de células y estructu-
ras celulares. En el microscopio electrónico las lentes son elec-
tromagnéticas y todo el equipo trabaja en un sistema de vacío 
(Figura 2.9). Los microscopios electrónicos están equipados con 
cámaras para poder tomar fotograf ías, llamadas micrograf ías 
electrónicas. Normalmente, en microbiología se usan dos tipos 
de microscopio electrónico: el de transmisión y el de barrido.
prácticamente invisibles en campo claro (compárese la Figura 
2.5a con la Figura 2.7).
Microscopio confocal de barrido con láser
Un microscopio confocal de barrido con láser (CSLM, del 
inglés «confocal scanning laser microscope») es un micros-
copio controlado por ordenador en el que se acopla un láser 
a un microscopio de fluorescencia. El láser genera una ima-
gen tridimensional brillante y permite al observador acce-
der a la muestra desde diversos planos de enfoque (Figura 2.8). 
Para ello, el rayo láser se ajusta de manera precisa para que 
haya solo una capa concreta de muestra enfocada completa-
mente. Mediante la iluminación exacta de un solo plano, el 
CSLM elimina la luz parásita de otros planos focales. Así, 
cuando se observa una muestra relativamente gruesa como 
un biofilm bacteriano (Figura 2.8a), no solo se pueden obser-
var las células de la superficie, como ocurre con el microsco-
pio óptico convencional, sino que, ajustando el plano del foco 
del rayo láser, también son visibles las células de las distintas 
capas. Con el CSLM se ha mejorado el límite de resolución 
del microscopio óptico compuesto, de 0,2 μm hasta 0,1 μm, 
aproximadamente.
En las preparaciones para CSLM las células se pueden teñir 
con colorantes fluorescentes para facilitar su visualización 
(Figura 2.8a). Alternativamente, se puede añadir color falso a 
preparaciones sin teñir, de manera que diferentes capas de la 
muestra tengan colores distintos (Figura 2.8b). Un CLSM utiliza 
un ordenador para ensamblar imágenes digitales para el con-
siguiente procesado. Las imágenes obtenidas de las diferentes 
capas pueden reconstruirse digitalmente para obtener una ima-
gen tridimensional de la muestra completa.
El CSLM se utiliza mucho en ecología microbiana, sobre todo 
para identificar poblaciones específicas de células en un hábi-
tat microbiano o para distinguir los diferentes componentes 
de una comunidad microbiana estructurada, como un biofilm 
(Figura 2.8a) o un tapete microbiano. El CSLM es especial-
mente útil cuando se necesita examinar en profundidad el con-
tenido microbiano de una muestra gruesa.
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Figura 2.7 Microscopía de contraste por interferencia diferencial. Con
este tipo de microscopía, las células de la levadura Saccharomyces cerevisiae 
adquieren un efecto tridimensional. Las células de levadura tienen un ancho 
aproximado de 8 μm. Obsérvese el núcleo bien visible y compárese con la 
imagen de células de levadura por microscopía de campo claro de la Figura 2.5a.
Figura 2.8 Microscopía confocal de barrido con láser. (a) Imagen
confocal de la comunidad microbiana en un biofilm. Las células verdes con forma 
de bacilo son Pseudomonas aeruginosa introducidas de manera experimental 
en el biofilm. Las células de diferentes colores se encuentran a profundidades 
distintas en el biofilm. (b) Imagen confocal de una cianobacteria filamentosa en 
un lago alcalino. Las células tienen un ancho aproximado de 5 μm.
(a)
(b)
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