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R E G U L A C I Ó N M E T A B Ó L I C A 227 U N ID A D 2 específicas de aminoácidos de las proteínas y grupos químicos específicos de las bases nitrogenadas y el esqueleto azúcar-fos- fato del DNA. A causa de su tamaño, el surco mayor del DNA es el sitio principal de unión de las proteínas. En la Figura 4.2 se identifican los átomos de las bases del surco mayor que se sabe que interaccionan con proteínas. Para conseguir una alta espe- cificidad, la proteína de unión debe interaccionar simultánea- mente con varios nucleótidos. Anteriormente hemos descrito una estructura del DNA lla- mada repetición invertida ( Figura 4.23a). Estas repeticiones invertidas son, frecuentemente, las secuencias a las que las proteí- nas reguladoras se unen al DNA de manera específica (Figura 7.3). Obsérvese que esta interacción no implica la formación de estruc- turas tallo-bucle en el DNA. Las proteínas de unión al DNA son típicamente homodiméricas, lo que significa que están compues- tas por dos subunidades de polipéptidos idénticos, que subdivi- didos a su vez en dominios —regiones de la proteína con una estructura y función específicas. Cada subunidad tiene un domi- nio que interacciona específicamente con una región del DNA en el surco mayor. Cuando los dímeros proteínicos interaccionan con repeticiones invertidas en el DNA, cada uno de los polipéptidos se une a una de las repeticiones invertidas. De este modo, el dímero como un todo se une a las dos cadenas del DNA (Figura 7.3). Estructura de las proteínas de unión al DNA Las proteínas de unión al DNA de los procariotas y de los eucariotas tienen varias clases de dominios proteínicos que son fundamentales para la unión correcta al DNA. Uno de los La proteína fluorescente verde (GFP, del inglés green fluores- cente protein), que emite fluorescencia verde brillante cuando es expuesta a una longitud de onda de la luz específica, se usa nor- malmente para estudiar la expresión génica. Si el marco abierto de lectura para GFP se une directamente a una región reguladora o se fusiona al final del gen que interesa, se puede establecer una correlación entre el nivel de fluorescencia y el nivel de expresión del gen. La Figura 7.2 ilustra el uso de la GFP y sus derivados para monitorizar la expresión de factores sigma alternativos necesarios para la esporulación en Bacillus (Sección 7.11). El uso de proteí- nas fluorescentes unidas al promotor de dos factores sigma dis- tintos permite determinar la localización celular de cada factor sigma. La expresión de F, marcada con fluorescencia verde, se localiza al final de la célula donde se desarrollan las endósporas. La expresión de E, que es necesaria para la transcripción génica en la célula madre, puede verse mediante fluorescencia roja por todo el resto de la célula (Figura 7.2). MINIRREVISIÓN ¿Qué etapas de la síntesis de proteínas pueden estar sujetas a regulación? ¿Qué es probablemente mucho más rápido, la regulación de la actividad o la regulación de la síntesis? ¿Por qué? ¿Qué mecanismos pueden usarse para regular la actividad de algunas proteínas? T. D o a n , R . L o s ic k , a n d D . R u d n e r Figura 7.2 Expresión génica en Bacillus durante la esporulación usando la proteína fluorescente verde (GFP). Durante la formación de la endóspora, los factores sigma alternativos se localizan en regiones específicas de la célula (Sección 7.11). El factor F unido a GFP indica la expresión y actividad de la proteína en las endósporas en desarrollo (en un extremo de cada célula). El factor E unido a una proteína reportera que emite fluorescencia roja indica la expresión y actividad de la proteína por toda le célula madre antes de la formación de la endóspora. Las regiones se corresponden con el modelo descrito en la Figura 7.25b. II Proteínas de unión al DNA y regulación de la transcripción Como hemos dicho, la cantidad de una proteína concreta pre-sente en una célula se puede controlar a nivel transcripcional, a nivel traduccional o, en ocasiones, por degradación de la pro- teína. Nuestro análisis comienza con el control a nivel transcrip- cional, ya que es el principal medio de regulación en procariotas. 7.2 Proteínas de unión al DNA Para que un gen sea transcrito, la RNA-polimerasa debe recono- cer un promotor específico en el DNA y comenzar su actividad ( Sección 4.7). A menudo, en la regulación de la transcrip- ción intervienen moléculas pequeñas. No obstante, rara vez actúan de manera directa, sino que influyen normalmente en la unión de determinadas proteínas, llamadas proteínas regulado- ras, a sitios específicos del DNA. La presencia de estas proteí- nas regula la expresión génica alternando la puesta en marcha o la suspensión de la transcripción. Interacción de las proteínas con los ácidos nucleicos Las interacciones entre proteínas y ácidos nucleicos son funda- mentales para la replicación, la transcripción y la traducción, así como para la regulación de estos procesos. Las interaccio- nes proteína-ácido nucleico pueden ser inespecíficas o especí- ficas, según si la proteína se une al ácido nucleico en cualquier lugar a lo largo de la molécula o si lo hace en un sitio específico. La mayoría de las proteínas de unión al DNA interaccionan con el DNA de manera específica a una secuencia. La especifici- dad la proporcionan las interacciones entre las cadenas laterales https://booksmedicos.org booksmedicos.org Botón1:
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